不同煙草普通花葉病毒OD比值煙苗的大田移栽試驗

鄧征宇 敬禮恒 丁建冰 周向平

湖南省煙草公司永州市公司，湖南 永州 425000

0 引言

煙草花葉病毒為RNA 病毒，是煙草花葉病的病原體，在全國各大煙葉產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生［1］。目前，煙草花葉病毒在煙草上共分為普通株系、番茄株系、黃色花葉株系和壞死株系。除煙草外，煙草花葉病毒還可寄生茄科、豆科、車前科等科的多種植物［2］。煙草花葉病從新葉開始發(fā)病，沿葉脈組織變成淡綠色，以后形成局部斑點、枯死或失綠的環(huán)斑，幾天后形成花葉，嚴(yán)重影響煙草正常生長發(fā)育，給煙農(nóng)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失［3］。

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測法是將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌一次后加待測抗原，若兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，再加入與待測抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使一單位的抗原同時結(jié)合兩單位的抗體形成“夾心”；之后加入該酶的底物，根據(jù)產(chǎn)生的有色酶解產(chǎn)物顏色的深淺來判斷待測抗原的含量。雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測法是當(dāng)前煙草花葉病毒的主要檢測方法之一［4-6］。筆者將使用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測法檢測出與陰性對照不同吸光度（Optical Density，OD）比值的煙苗進(jìn)行大田移栽，跟蹤煙苗移栽30 d后的發(fā)病情況，調(diào)查不同OD比值下煙苗的發(fā)病率和病情指數(shù)，探索與陰性對照不同OD比值煙苗大田普通花葉病的發(fā)病規(guī)律，為煙葉生產(chǎn)中育苗環(huán)節(jié)實現(xiàn)精準(zhǔn)消毒提供理論支撐，避免帶毒煙苗移栽進(jìn)入大田帶來經(jīng)濟(jì)損失。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗地點

試驗于2023 年在湖南省永州市江華瑤族自治縣濤圩鎮(zhèn)開展。試驗田塊為歷年煙草普通花葉病發(fā)生較輕或不發(fā)生的煙稻輪作水田，前茬作物為水稻，土壤肥力均勻、中等，土地平整，排灌方便。

1.2 試驗品種

試驗所用的烤煙品種為云煙87。

1.3 試驗處理

各處理煙苗均為2023 年集約化育苗、煙草普通花葉病檢測呈陽性的育苗池?zé)熋?。對與陰性對照OD 值不同比值的煙苗按照以下5 個處理設(shè)計移栽到大田。T1，煙苗普通花葉病檢出OD 值∶陰性對照OD 值<1.2，設(shè)為空白對照；T2，煙苗普通花葉病檢出OD 值∶陰性對照OD 值為（1.5，2.0］；T3，煙苗普通花葉病檢出OD值∶陰性對照OD 值為（2.0，4.0］；T4，煙苗普通花葉病檢出OD 值∶陰性對照OD 值為（4.0，6.0］；T5，煙苗普通花葉病檢出OD值∶陰性對照OD值>6.0。

每個處理設(shè)3 次重復(fù)，每處理種煙35 株。整個生育期不使用藥劑防治煙草普通花葉病。整個試驗過程中農(nóng)事操作注意先健株后病株（含空白對照處理），避免農(nóng)事操作傳毒造成誤差。

1.4 調(diào)查方法

參考《煙草病蟲害分級及調(diào)查方法》（GB/T 23222—2008），分別于移栽后10、20、30 d調(diào)查各小區(qū)煙草普通花葉病的發(fā)生情況，并統(tǒng)計發(fā)病率及病情指數(shù)。

按照病害嚴(yán)重度分級，以株為單位分級調(diào)查。具體調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)如下：0 級，全株無??；1 級，心葉脈明或輕微花葉，病株無明顯矮化；3 級，1/3 葉片花葉但不變形，或病株矮化為正常株高的3/4 以上；5 級，1/3～1/2葉片花葉，或少數(shù)葉片變形，或主脈變黑，或病株矮化為正常株高的2/3～3/4；7級，1/2～2/3葉片花葉或變形或主側(cè)脈壞死，或病株矮化為正常株高的1/2～2/3；9級，全株葉片花葉，嚴(yán)重變形或壞死，或病株矮化為正常株高的1/2以上。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 不同處理移栽后10 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

不同處理移栽后10 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況如表1 所示。由表1 可知，移栽后10 d，各處理均沒有表現(xiàn)出較重的發(fā)病癥狀，T1、T2、T3處理均未出現(xiàn)5、7、9病級煙苗，除T5（OD 比值大于6）外，各組發(fā)病率均低于40%。其原因可能是移栽后受低溫、干燥等因素影響，煙苗生長緩慢，普通花葉病毒侵染率較低。

表1 不同處理移栽后10 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

2.2 不同處理移栽后20 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

不同處理移栽后20 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況如表2所示。由表2可知，移栽后20 d，各處理組出現(xiàn)較為明顯區(qū)別，其中處理組T5發(fā)病率最高（平均85.71%），是對照處理T1的15倍，病情指數(shù)高達(dá)47.20。T1、T2、T3均未出現(xiàn)9級病株，T4、T5已經(jīng)出現(xiàn)較為嚴(yán)重的普通花葉病癥狀，葉脈部分葉肉顏色變黃，出現(xiàn)明脈，葉片開始皺縮扭曲。

表2 不同處理移栽后20 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

2.3 不同處理移栽后30 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

隨著氣溫上升及雨水增多，病毒侵染更為迅速，不同處理移栽后30 d 煙苗普通花葉病發(fā)生情況如表3 所示。由表3 可知，移栽后30 d，各處理組表現(xiàn)出明顯差異，隨著OD比值的增大，煙苗普通花葉病發(fā)病率及發(fā)病指數(shù)均大幅增長，T5的發(fā)病率高達(dá)94.29%，發(fā)病指數(shù)為93.44，已經(jīng)沒有正常煙株，感染煙株生長停滯、矮小、葉片黃綠相間，且出現(xiàn)較多壞死斑點。而T1對照處理的發(fā)病率僅為8.57%。

表3 不同處理移栽后30 d煙苗普通花葉病發(fā)生情況

3 討論與結(jié)論

筆者利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測法，對檢測樣品OD 值與陰性對照OD 值不同比值的煙苗進(jìn)行大田移栽試驗，通過跟蹤煙苗的發(fā)病情況，探究待測煙苗和陰性對照不同OD 比值與煙苗大田普通花葉病發(fā)病率的關(guān)系。結(jié)果表明，隨著OD 比值增大，煙苗攜帶的花葉病毒越多，移栽后病毒侵染速度越快，煙苗普通花葉病發(fā)病率越高。OD 比值為（1.5，2.0］的煙苗，最終平均發(fā)病率為22.86%，需要在育苗期間加強(qiáng)消毒處理，有效降低帶毒量，檢測合格后方可移栽；對于OD比值大于2.0 的煙苗，建議直接進(jìn)行無害銷毀，以避免交叉感染，同時加強(qiáng)對于育苗薄膜、育苗池、剪葉機(jī)等相關(guān)物資及場地的消毒，避免健康煙苗被感染，從源頭降低大田普通花葉病發(fā)病率。

目前，育苗期間煙苗攜帶普通花葉病毒的途徑主要有3條。一是基質(zhì)攜帶病毒。在育苗過程中當(dāng)基質(zhì)攜帶普通花葉病毒時，易導(dǎo)致大規(guī)模感染。二是煙草種子攜帶病毒。在煙草種子包衣加工過程中如果消毒不到位，極可能導(dǎo)致部分包衣種子本身攜帶普通花葉病毒。三是育苗期間人為操作感染。育苗期間人員頻繁出入育苗棚，通過手觸摸感染或是在田里攜帶泥土進(jìn)入育苗棚，均有可能將普通花葉病病毒傳染給煙苗。因此，為保證煙葉生產(chǎn)安全，建議加強(qiáng)基質(zhì)及種子消殺，避免出現(xiàn)大規(guī)模感染；及時取樣進(jìn)行檢測，對于OD比值為（1.5，2.0］的煙苗進(jìn)行消毒，待OD比值小于1.2后方可移栽；加強(qiáng)苗期人員管理，進(jìn)入育苗棚前用消毒液對鞋進(jìn)行浸泡消毒處理，進(jìn)入大棚后減少用手觸碰煙苗，相應(yīng)農(nóng)事操作遵循先健株后病株的原則，對剪葉機(jī)等機(jī)器在每次使用前用消毒液充分浸泡。