半夏瀉心湯及其拆方改善炎癥性腸病腸道免疫的潛在靶點(diǎn)及作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析*

霍敏峰，岳 娟，董秋梅，劉喜平，劉 君，張媛媛，李明成

(1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院)

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)分為潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn’s disease,CD)[1]。IBD的發(fā)病率和流行率全世界都在增加，但在西化地區(qū)最高[2]。最近流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，近年來(lái)國(guó)內(nèi)IBD的發(fā)病率在過(guò)去20年里急劇上升[3]。研究認(rèn)為，環(huán)境[4]、飲食[5]、衛(wèi)生、壓力和生活方式等因素與國(guó)內(nèi)IBD發(fā)病率的增加有關(guān)。家族史[6-7]和使用抗生素[8]等被認(rèn)為是一些誘因。遺傳學(xué)研究表明，宿主-微生物相互作用在IBD的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，涉及調(diào)節(jié)微生物防御和腸道炎癥的基因組區(qū)域[9]。本病發(fā)病機(jī)制目前尚不明確[10]，西醫(yī)多采用免疫抑制劑和抗炎藥或生物制劑，其目標(biāo)是減輕疾病的進(jìn)展和并發(fā)癥，提高患者生活質(zhì)量，但目前治療方案仍難以滿足臨床需要。

IBD 屬中醫(yī)學(xué) “泄瀉”、“痢疾”、“腹痛”以及 “腸癰”等范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，其病因多與先天不足、飲食、七情以及外邪等有關(guān)。病位主要在腸，并與肝、脾、腎和肺等臟腑相關(guān)。半夏瀉心湯出自東漢著名醫(yī)家張仲景之《傷寒論》，為辛開(kāi)苦降、寒溫互用、補(bǔ)瀉兼施的代表方劑，且在《金匱要略》已有本方治療類(lèi)似疾病的經(jīng)驗(yàn)記載，如《金匱要略·嘔吐噦下利病脈證治》說(shuō)“嘔而腸鳴，心下痞者，半夏瀉心湯主之。……下利，寸脈反浮數(shù)，尺中自澀者，必清膿血”。鑒于IBD涉及多方面的致病因素，不能通過(guò)干預(yù)單一靶點(diǎn)奏效，而方劑具有多靶點(diǎn)、多成分、多途徑的特性，遵從“君、臣、佐、使”的配伍原則。已有研究表明，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)強(qiáng)調(diào)對(duì)信號(hào)通路的多途徑調(diào)節(jié)，具有提高藥物的治療效果、節(jié)省藥物研發(fā)費(fèi)用等優(yōu)勢(shì)，注重多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的協(xié)同作用關(guān)系，有助于全面、深入闡釋其作用機(jī)制，故本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的相關(guān)原理及方法，分析半夏瀉心湯及其拆方的藥物有效成分及對(duì)IBD的疾病靶點(diǎn)，對(duì)篩選出來(lái)的主要靶點(diǎn)及通路進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，從而探討半夏瀉心湯及其拆方改善炎癥性腸病腸道免疫的作用機(jī)制，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)、臨床研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1數(shù)據(jù)庫(kù)及軟件 運(yùn)用 TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)(https://tcmspw.com/tcmsp.php)分別收集各味中藥的有效成分；應(yīng)用 GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.omim.org/)收集疾病基因靶點(diǎn)；利用Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.uniprot.org/)、R 4.0.2 軟件及Perl語(yǔ)言對(duì)靶點(diǎn)蛋白標(biāo)準(zhǔn)化；再應(yīng)用Venny 2.1(http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)軟件繪制韋恩圖；利用Cytoscape 3.7.0軟件構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖；利用STRING 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)(string-db.org/cgi/input.pl)進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的分析；最后運(yùn)用 R 4.0.2 軟件及 Perl 語(yǔ)言進(jìn)行GO與KEGG富集分析。

1.2半夏瀉心湯及其拆方中藥有效成分篩選及相關(guān)靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 應(yīng)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)分別檢索半夏、干姜、黃芩、黃連、人參、大棗、甘草7味中藥的全部有效化學(xué)成分，并根據(jù)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中成分毒藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(ADME)，以口服生物利用度(oral bioavailability,OB) ≥ 30 %、類(lèi)藥性指數(shù)(drug-like index,DL) ≥ 0.18 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，以確定半夏瀉心湯及其拆方中所有中藥的有效活性成分。利用Uni Prot(http://www.uniprot.org)數(shù)據(jù)庫(kù)得到所有對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)信息的official gene symbol，用于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析。

1.3IBD疾病相關(guān)靶點(diǎn)獲取 以“Inflammatory bowel disease”為關(guān)鍵詞于Gene Cards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索并收集IBD疾病相關(guān)的靶點(diǎn)基因，對(duì)二者收集的結(jié)果進(jìn)行整理，刪除多余重復(fù)的靶點(diǎn)即為IBD疾病相關(guān)靶點(diǎn)。

1.4藥物-疾病交互靶點(diǎn)的篩選 利用Venny 2.1在線工具，導(dǎo)入藥物潛在作用靶點(diǎn)、IBD疾病靶點(diǎn)后繪制半夏瀉心湯原方及其拆方與IBD疾病靶點(diǎn)的韋恩圖，并得到方藥與疾病交互靶點(diǎn)的蛋白名稱。

1.5構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò) 整理交互靶點(diǎn)并分別標(biāo)識(shí)疾病、藥物、成分、靶點(diǎn)等對(duì)應(yīng)屬性，將所有數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.0軟件，繪制“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò) 將篩選得到的交互靶點(diǎn)蛋白導(dǎo)入到STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)，限定研究物種選擇“Homo sapiens”，隱藏游離點(diǎn)后分析蛋白與蛋白的相互作用，并繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.7GO與KEGG通路富集分析 應(yīng)用 R語(yǔ)言將得到的核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO與KEGG 富集分析。GO功能分析主要用于分析基因靶點(diǎn)的功能，KEGG富集分析可以得到半夏瀉心湯及其拆方與IBD共同靶點(diǎn)所富集的信號(hào)通路。GO和 KEGG分析選擇P<0.01為篩選標(biāo)準(zhǔn)，表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1藥物、疾病靶標(biāo)預(yù)測(cè)結(jié)果 通過(guò) TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)收集、篩選半夏瀉心湯原方符合標(biāo)準(zhǔn)的有效成分共有129個(gè)，辛開(kāi)組(半夏+干姜)的有效活性成分43個(gè)，苦降組(黃芩+黃連) 的有效活性成分104個(gè)，甘補(bǔ)組(人參+甘草+大棗)的有效活性成分121個(gè)。通過(guò)Gene Card、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到6 161個(gè)IBD相關(guān)靶點(diǎn)基因。見(jiàn)表1。運(yùn)用Venny軟件對(duì)方藥及疾病取交集并繪制韋恩圖(圖1)，得到藥物-疾病交互靶點(diǎn)。

表1 藥物-疾病交互靶點(diǎn)

圖1 藥物-疾病交互靶點(diǎn)Venn圖

2.2構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò) 利用Cytoscape 3.7.0軟件，導(dǎo)入相應(yīng)文件后構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)(圖 2)。網(wǎng)絡(luò)中綠色表示IBD疾病靶點(diǎn)，粉色表示化合物成分靶點(diǎn)，每條連線則表示每組藥物與其活性成分、活性成分與作用靶點(diǎn)、作用靶點(diǎn)與IBD之間的相互作用關(guān)系。從圖2可知，半夏瀉心湯組中Quercetin、Beta-sitosterol、Kaemoferol、Stigmasterol、Baicalein等藥物活性成分與PTGS1、AR、ESR1、PRSS1、PPARG等IBD疾病靶點(diǎn)關(guān)系較為密切；辛開(kāi)組中Beta-sitosterol、Baicalein、Stigmasterol、Cavidine、coniferin等藥物活性成分與PTGS1、CHRM1、CHRM3、PGR、AR等IBD疾病靶點(diǎn)關(guān)系較為密切；苦降組中Quercetin、Baicalein、Wogonin、Beta-sitosterol、acacetin等藥物活性成分與PTGS1、AR、PRSS1、ESR1、CHEK1等IBD疾病靶點(diǎn)關(guān)系較為密切；甘補(bǔ)組中Quercetin、Kaemoferol、Beta-sitosterol、Stigmasterol、Isorhamnetin等藥物活性成分與ESR1、PPARG、AR、PTGS1、PRSS1等IBD疾病靶點(diǎn)關(guān)系較為密切。

圖2 藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病相互作用網(wǎng)絡(luò)

2.3PPI 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及其關(guān)鍵靶點(diǎn)的篩選 將每組映射得到交互靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析，得到核心蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖(圖 3)。每一個(gè)節(jié)點(diǎn)代表蛋白及其結(jié)構(gòu)，蛋白與蛋白之間的連線代表二者之間的相互作用，不同顏色的線條代表不同的意義，如藍(lán)色表示蛋白同源性，黑色表示二者共表達(dá)，黃色表示挖掘文獻(xiàn)的證據(jù)等。運(yùn)用R語(yǔ)言進(jìn)一步分析核心蛋白相互作用的頻次，繪制前30位核心靶蛋白相互作用頻次的柱狀圖，橫坐標(biāo)數(shù)值表示蛋白的相互作用頻次，數(shù)值越大則說(shuō)明靶標(biāo)蛋白重要性越大，并由此推測(cè)這些靶點(diǎn)很可能是各中藥組治療IBD的關(guān)鍵靶點(diǎn)。見(jiàn)圖 4。

圖3 藥物—疾病交集作用靶蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖

圖4 核心靶蛋白相互作用頻次的柱狀圖

將數(shù)據(jù)導(dǎo)入 Cytoscape 3.7.0軟件中，使用“Network Analyzer”插件對(duì) PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析。圖中節(jié)點(diǎn)的大小表示度值的大小，節(jié)點(diǎn)越大，對(duì)應(yīng)的 Degree 值越大；線條的粗細(xì)表示 Combine score，線條越粗Combine score值越大，表示該節(jié)點(diǎn)蛋白與其他節(jié)點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)越廣泛。見(jiàn)圖 5。

圖5 靶點(diǎn)相互關(guān)系圖

2.4GO功能富集分析 運(yùn)用 R 軟件將作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，得到柱狀圖。柱狀圖的顏色表示對(duì)應(yīng)基因的P值顯著性，顏色越紅則表示富集程度越多(圖6)。通過(guò)圖的結(jié)果可以看出GO富集后，半夏瀉心湯原方中交互靶點(diǎn)主要參與DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活活性、RNA聚合酶II-specific、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、RNA聚合酶II-specific dna結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子綁定等過(guò)程；辛開(kāi)組中交互靶點(diǎn)主要參與DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活活性,RNA聚合酶II-specific、核受體活性、ligand-activated轉(zhuǎn)錄因子的活動(dòng)等過(guò)程；苦降組中交互靶點(diǎn)主要參與DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活活性、RNA聚合酶II-specific、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、ubiquitin-like蛋白連接酶結(jié)合等過(guò)程；甘補(bǔ)組中交互靶點(diǎn)主要參與DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活活性、RNA聚合酶II-specific、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、RNA聚合酶II-specific DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子綁定等過(guò)程。

圖6 各組藥物對(duì)IBD作用靶點(diǎn)的GO富集分析圖(條狀圖)

2.5KEGG 富集結(jié)果分析 進(jìn)行KEGG通路富集分析，以P<0.01為篩選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，得到各組信號(hào)通路：半夏瀉心湯組122條，辛開(kāi)組68條，苦降組104條，甘補(bǔ)組120條。按照顯著性程度P值由小到大選取前10條通路進(jìn)行部分展示(表2-表5)。根據(jù)結(jié)果可以看出 ，在半夏瀉心湯組中，RELA 、BCL2、CASP9、CCND1、FOS等基因相關(guān)通路顯著性較高；辛開(kāi)組中，RELA 、BCL2、FOS、CASP3、CYCS等基因相關(guān)通路顯著性較高；苦降組中，RELA 、EGFR、CCND1、VEGFA、CASP9等基因相關(guān)通路顯著性較高；甘補(bǔ)組中，MAPK10、GSK3B、RELA 、IKBKB、BCL2等基因相關(guān)通路顯著性較高。

表2 半夏瀉心湯組KEGG通路富集條形圖潛在靶點(diǎn)信息表

表3 辛開(kāi)組KEGG 通路富集條形圖潛在靶點(diǎn)信息表

表4 苦降組KEGG 通路富集條形圖潛在靶點(diǎn)信息表

表5 甘補(bǔ)組KEGG 通路富集條形圖潛在靶點(diǎn)信息表

半夏瀉心湯組在治療IBD所涉及到的通路中，Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection、Hepatitis B信號(hào)通路顯著性、富集數(shù)目均較高，關(guān)鍵靶點(diǎn)中的大部分基因富集于這條通路上。Human immunodeficiency virus 1 infection、Hepatitis B信號(hào)通路在辛開(kāi)組治療IBD所涉及到的通路中顯著性、富集數(shù)目較高；苦降組中，PI3K-Akt 、Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection信號(hào)通路顯著性、富集數(shù)目較高；甘補(bǔ)組中，Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection、Fluid shear stress and atherosclerosis信號(hào)通路顯著性、富集數(shù)目較高，關(guān)鍵靶點(diǎn)中的大部分基因富集于這條通路上，表明這兩條信號(hào)通路極有可能是甘補(bǔ)組治療IBD的關(guān)鍵信號(hào)通路。見(jiàn)圖 7。

圖7 各組藥物對(duì)IBD作用靶點(diǎn)的KEGG富集分析圖(氣泡圖)

3 討論

半夏瀉心湯由半夏、黃芩、黃連、炙甘草、干姜、人參、大棗七味藥組成，方中以辛溫之半夏為君，散結(jié)除痞，又善降逆止嘔；干姜溫中散寒，黃芩、黃連苦寒泄熱為臣藥；佐以人參、大棗甘溫益氣、補(bǔ)脾虛；使以炙甘草補(bǔ)脾和中，調(diào)和諸藥，全方共奏寒熱平調(diào)，散結(jié)除痞之功效，配伍具有寒熱并用、辛開(kāi)苦降、補(bǔ)瀉兼施特點(diǎn)。相關(guān)研究表明，半夏瀉心湯可通過(guò)減少p38MAPK/NF-κB表達(dá)減輕炎癥反應(yīng)從而發(fā)揮對(duì)重癥急性胰腺炎(SAP)腸黏膜屏障損傷的保護(hù)作用[11]。另對(duì)緩解期UC患者使用半夏瀉心湯加減內(nèi)服結(jié)合中藥保留灌腸治療，能有效調(diào)節(jié)患者腸道內(nèi)菌群平衡，促進(jìn)黏膜恢復(fù)，改善癥狀[12]?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)具有系統(tǒng)性、整體性的特征，與中醫(yī)藥整體觀相吻合，本實(shí)驗(yàn)采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，研究半夏瀉心湯及其拆方對(duì)炎癥性腸病腸道免疫的潛在靶點(diǎn)及作用機(jī)制，系統(tǒng)分析半夏瀉心湯及其拆方的有效成分，預(yù)測(cè)治療IBD的相關(guān)靶點(diǎn)，構(gòu)建了藥物-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

通過(guò)對(duì)藥物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)分析得出半夏瀉心湯治療IBD的主要成分是Quercetin(槲皮素)、Beta-sitosterol(β-谷甾醇)、Kaemoferol(山柰酚)、Stigmasterol(豆甾醇)、Baicalein(黃芩素)；辛開(kāi)組治療IBD的主要成分是Beta-sitosterol(β-谷甾醇)、Baicalein(黃芩素)、Stigmasterol(豆甾醇)、Cavidine(卡文定堿)、Coniferin(松柏苷)；苦降組治療IBD的主要成分是Quercetin(槲皮素)、Baicalein(黃芩素)、Wogonin(漢黃芩素)、Beta-sitosterol(β-谷甾醇)、Acacetin(金合歡素)；甘補(bǔ)組治療IBD的主要成分是Quercetin(槲皮素)、Kaemoferol(山柰酚)、Beta-Sitosterol(Β-谷甾醇)、Stigmasterol(豆甾醇)、Isorhamnetin(異鼠李素)等。有研究表明槲皮素具有抗氧化、抗炎以及抗癌等生物活性[13]，可通過(guò)降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛含量和提高超氧化物歧化酶活性，減少氧化誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[14]；另有研究證實(shí)槲皮素可增加抗凋亡BCL2蛋白表達(dá)、降低促凋亡BAX 蛋白表達(dá)及CASP3活性，減少經(jīng)線粒體途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[15]。山柰酚是人參的重要成分，是一種有抗炎、抗氧化等作用的黃酮類(lèi)化合物，已有研究證實(shí)山柰酚具有很好的抗炎特性，能夠抑制促炎因子腫瘤壞死因子α(TNF-α)釋放，增加抑炎因子白介素10(IL-10)的表達(dá)和分泌[16]；豆甾醇能顯著抑制結(jié)腸縮短，降低結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度，顯著降低炎癥因子IL-1β、IL-6、MCP-1和相關(guān)環(huán)氧合酶COX-2。β-谷甾醇對(duì)環(huán)氧合酶中的COX-2的表達(dá)亦有抑制作用，這對(duì)炎癥性腸病具有十分重要的治療價(jià)值[17]。IBD的炎癥反應(yīng)之所以會(huì)產(chǎn)生和持續(xù)，與一些關(guān)鍵細(xì)胞因子的表達(dá)密切相關(guān)，在炎癥過(guò)程中IL-1β、IL-6、COX-2和MCP-1的表達(dá)會(huì)隨著嚴(yán)重程度的增加而上升。黃芩苷和漢黃芩素則已被證實(shí)具有抗病毒、抗炎、抗補(bǔ)體作用。

KEGG富集分析后發(fā)現(xiàn)半夏瀉心湯組中RELA 、BCL2、CASP9、CCND1、FOS等基因相關(guān)通路顯著性較高，辛開(kāi)組中RELA 、BCL2、FOS、CASP3、CYCS等基因相關(guān)通路顯著性較高；苦降組中RELA 、EGFR、CCND1、VEGFA、CASP9等基因相關(guān)通路顯著性較高；甘補(bǔ)組中MAPK10、GSK3B、RELA 、IKBKB、BCL2等基因相關(guān)通路顯著性較高。RelA(p65,NF-κB3)是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，存在于NF-кB蛋白家族中[18]，NF-κB 在細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、炎癥反應(yīng)中均起著重要作用。NF-κB表達(dá)上調(diào)會(huì)導(dǎo)致 TGF-β、趨化因子等細(xì)胞因子的釋放[19]，BCL2家族蛋白在細(xì)胞凋亡中的作用根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能分為兩類(lèi)：一類(lèi)是以BCL2為代表的抗凋亡蛋白；一類(lèi)是以BAX為代表的促凋亡蛋白。BAX 與 BCL2具有同源性，是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的主要基因[20]。BCL2與 BAX可互相結(jié)合形成異源二體，阻斷細(xì)胞色素C釋放抑制CASP3蛋白的活化最終抑制細(xì)胞凋亡[21-22]。細(xì)胞凋亡是通過(guò)對(duì)體內(nèi)和體外多種因素的刺激，從而激活細(xì)胞的死亡過(guò)程。上皮細(xì)胞凋亡的增加可能會(huì)增大發(fā)生腸道損傷的風(fēng)險(xiǎn)[23]。BAX 蛋白是BCL2家族中研究最廣泛的促凋亡蛋白。BAX /BCL2比率增加，線粒體釋放細(xì)胞色素C增多，誘導(dǎo)腸壁損傷[24]，腸黏膜BCL2表達(dá)會(huì)增加[25]。CASP3、CASP9 皆屬于天冬氨酸特異酶切的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinases，Caspases)蛋白家族，而Caspases家族是細(xì)胞程序性死亡過(guò)程中的關(guān)鍵元件，因此又稱死亡蛋白酶。細(xì)胞凋亡主要由凋亡相關(guān)胱天蛋白酶(如CASP3 /8 /9) 介導(dǎo)，細(xì)胞發(fā)生非炎癥性壞死[26]。其中CASP3位于凋亡有序級(jí)聯(lián)反應(yīng)的下游，是細(xì)胞凋亡的重要執(zhí)行者，是凋亡刺激信號(hào)傳遞的匯聚點(diǎn)，它的活化標(biāo)志著細(xì)胞凋亡進(jìn)入不可逆階段[27]。大多數(shù)觸發(fā)細(xì)胞凋亡的因素，最終都要通過(guò)CASP3介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑致使細(xì)胞凋亡。

KEGG通路富集分析結(jié)果顯示半夏瀉心湯組可能通過(guò)AGE-RAGE、TNF等信號(hào)通路起到治療IBD的作用；辛開(kāi)組中P53信號(hào)通路、苦降組中P13K-Akt、AGE-RAGE、P53、TNF信號(hào)通路以及甘補(bǔ)組中AGE-RAGE、TNF信號(hào)通路顯著性、富集數(shù)目均較高。每組中關(guān)鍵靶點(diǎn)中的大部分基因富集于這些通路上，表明這些信號(hào)通路極有可能是各組中藥治療IBD的關(guān)鍵信號(hào)通路。此外，Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection(卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染)信號(hào)通路和Hepatitis B(乙型肝炎)、Human immunodeficiency virus 1 infection(人類(lèi)免疫缺陷病毒1感染)信號(hào)通路、Fluid shear stress and atherosclerosis(流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化)信號(hào)通路顯著性、富集數(shù)目均較高。AGE-RAGE通路全稱為晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycosylation end products,AGEs)-糖基化終末產(chǎn)物受體(receptor of AGEs，RAGE)信號(hào)通路。有研究表明，AGEs多由大分子物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等) 在非酶催化條件下與還原性單糖反應(yīng)所生成的一種穩(wěn)定的不可逆聚合物。AGEs可在內(nèi)皮細(xì)胞、毛細(xì)血管基底膜沉積，降低血管通透性，誘發(fā)視網(wǎng)膜屏障損傷[28]。卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)是一種新興的病原體，是Kaposi肉瘤和兩種B細(xì)胞源性惡性腫瘤的病原體，迄今為止還沒(méi)有獲得許可的KSHV疫苗[29]。KSHV病毒天然宿主是人的內(nèi)皮細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。在體內(nèi)，KSHV已在B細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞和副內(nèi)皮梭形細(xì)胞中檢測(cè)到69例[30-31]。在體外，它廣泛感染人類(lèi)71和非人類(lèi)起源的B細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞系[32,33]。KSHV感染內(nèi)皮細(xì)胞可誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子Ang - 2的產(chǎn)生和分泌，Ang - 2可促進(jìn)單核細(xì)胞向KS腫瘤中遷移和募集[34]。KSHV感染內(nèi)皮細(xì)胞后，除了IL-6、IL-10、IL-13和vIL-6外，還會(huì)誘導(dǎo)干擾素的表達(dá)[35]。P13K-AKT通路是經(jīng)典的細(xì)胞周期控制通路之一，主要參與滑膜炎癥中白細(xì)胞趨化、吞噬過(guò)程，以及炎性因子分泌及NF-κb的活化[36-37]。TNF信號(hào)通路與機(jī)體內(nèi)炎癥因子分泌密切相關(guān)，通過(guò)與TNFR1受體結(jié)合，引起NF-κB、p38α及其下游效應(yīng)激酶MK2的激活，從而促進(jìn)靶基因的轉(zhuǎn)錄，mRNA的穩(wěn)定和翻譯[38]。

綜上所述，結(jié)合IBD目前的病理機(jī)制、臨床診療相關(guān)的研究分析，從系統(tǒng)層面闡明該半夏瀉心湯及其拆方可能在改善腸道黏膜屏障、抗炎等方面發(fā)揮重要作用，從而揭示其潛在的作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路，這與復(fù)方治療疾病的多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)有關(guān)，為進(jìn)一步闡明半夏瀉心湯及其拆方治療IBD的可能理論機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。