注意缺陷多動障礙兒童血清miR-137的表達(dá)及其臨床意義*

梁 格，王雨晴，石寶蓮，劉國棟，王 瑤，劉德華

(1.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬徐州市兒童醫(yī)院，江蘇徐州 221000；2.江蘇省中醫(yī)院，南京 210004)

注意缺陷多動障礙(ADHD)又稱多動癥，是一種較為常見的神經(jīng)發(fā)育障礙，主要發(fā)生在兒童期及青少年時期，會對患兒的學(xué)業(yè)學(xué)習(xí)、生活健康、社會認(rèn)知功能等構(gòu)成嚴(yán)重危害。近年來，我國ADHA患病率不斷升高，學(xué)齡前兒童的患病率中已高達(dá)8%[1-2]。因此，積極探尋影響ADHD疾病病情進(jìn)展的相關(guān)因素，找到早期準(zhǔn)確診斷的便捷指標(biāo)很有必要。雖然目前對于ADHD病因的研究各有不同，ADHD的發(fā)病機(jī)制也尚未明確，但一般認(rèn)為其與遺傳及環(huán)境等因素密切相關(guān)[3]。miRNA是真核生物中的一類具有調(diào)控功能的非編碼RNA，可通過堿基互補(bǔ)配對指導(dǎo)合成蛋白質(zhì)而參與發(fā)育、細(xì)胞增殖和凋亡等多種調(diào)節(jié)途徑[4]。有研究報道，miRNA能夠通過調(diào)控靶基因而影響ADHD的病情發(fā)展，如miR-30d-5p、miR-4655-3p等在ADHD患兒中低表達(dá)，參與了ADHD的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程[5]。有研究指出，miR-137與神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化、神經(jīng)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)及神經(jīng)元的成熟過程密切相關(guān)[6]，但血清miR-137表達(dá)水平在ADHD兒童中的變化情況及其臨床意義尚不明確。鑒于此，本研究特對此進(jìn)行分析探索，以期為臨床診斷與防治ADHD提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取徐州醫(yī)科大學(xué)附屬徐州市兒童醫(yī)院2017年9月至2021年9月收治的135例ADHD兒童納入觀察組，另選取同期體檢的121例健康兒童納入對照組。觀察組男81例，女54例；年齡4～12歲，平均(7.05±1.15)歲；病程1～3年，平均(1.34±0.78)年。對照組男72例，女39例；年齡3～12歲，平均(6.89±1.08)歲。2組年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒均符合國際疾病分類第10版中ADHD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，均為首診；患兒韋氏兒童智力量表測得智商≥80分；家長均知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：情感障礙者；患有精神發(fā)育遲緩、品行障礙、精神分裂及其他精神疾病者；合并心、肝、腎等器官功能障礙者；患有軀體及神經(jīng)系統(tǒng)等器質(zhì)性疾病者；近期已接受精神藥物治療者。本研究已在醫(yī)院倫理委員會審批備案。

1.2 方法

1.2.1治療方法

所有患兒均給予鹽酸托莫西汀(江蘇正大豐海制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20133346)進(jìn)行治療，起始劑量為每次服用0.5 mg/kg，2次/天，3 d后劑量增加至0.6 mg/kg，治療2個月。同時，配合進(jìn)行感覺綜合訓(xùn)練，包括聽語、視覺及感覺運(yùn)動能力訓(xùn)練，每天1 h，每周4次，訓(xùn)練2個月。

1.2.2樣品制備

抽取受試兒童空腹靜脈血液5 mL(觀察組于門診收治當(dāng)天或病房收治24 h內(nèi)，對照組于體檢當(dāng)天)，保存在無抗菌劑的采血管中。取其中2 mL血液靜置30 min，離心10 min(4 000 r/min，半徑13.5 cm)，取離心后的上清液分裝在EP管內(nèi)，做好標(biāo)記保存在-80 ℃?zhèn)溆谩ＪＳ? mL血液放置在乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管內(nèi)，靜置離心取其血漿分裝在EP管內(nèi)，做好標(biāo)記保存在-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3miR-137檢測

采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測miR-137表達(dá)水平。使用RNA提取試劑盒(上海海方生物技術(shù)有限公司提供)提取血清總RNA，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄得到cRNA。使用定量PCR分析儀(杭州博日科技股份有限公司，型號FQD-16A)對miR-137進(jìn)行擴(kuò)增。qRT-PCR反應(yīng)使用20 μL體系：cDNA(50 ng/μL)2 μL、Green Mix 10 μL、上下游引物(10 μmol/L)各1 μL、雙蒸水6 μL。擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，40個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。引物由上海生工生物公司合成，miR-137上游引物為GAAATCCGACAGCTTAAGGAGGTTTGA，下游引物為CATTGCACAGATAGGATTTGATTTACT；以U6為內(nèi)參，上游引物為ATTGCAGATACACTCGCTTCGGCACAA，下游引物為GGAACGCTTCACAAAATATGGAACGCT。采用2-△△ct計算基因表達(dá)相對定量結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

比較2組注意缺陷多動障礙父母評定表(ADHDRS)評分及血清miR-137表達(dá)水平。其中，ADHDRS分為注意力缺陷、多動和沖動兩個分量表，各分量表均包含9個條目，共18個條目，每個條目3分，評分越高表示程度越嚴(yán)重。研究ADHD兒童血清miR-137表達(dá)水平與ADHDRS評分的相關(guān)性。評價血清miR-17表達(dá)水平對ADHD患兒的診斷價值，記錄最佳截斷點(Cut-off值)、敏感度、特異度、曲線下面積和95%置信區(qū)間(95%CI)。比較觀察組治療后ADHDRS評分和血清miR-137表達(dá)水平的變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 兩組ADHDRS評分和血清miR-137表達(dá)水平比較

觀察組ADHDRS兩個分量表評分、總分均高于對照組(P<0.05)，血清miR-137表達(dá)水平低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組ADHDRS評分和血清miR-137表達(dá)水平對比

2.2 ADHD兒童血清miR-137表達(dá)水平與ADHDRS評分的相關(guān)性

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，ADHD患兒血清miR-137表達(dá)水平與ADHDRS分量表評分及總分均呈正相關(guān)(P<0.05)，見表2、圖1～3。

表2 患兒血清miR-137表達(dá)水平與ADHDRS評分相關(guān)性

圖1 ADHD患兒血清miR-137表達(dá)水平與注意力缺陷分量表評分的相關(guān)性

圖2 ADHD患兒血清miR-137表達(dá)水平與多動和沖動分量表評分的相關(guān)性

圖3 ADHD患兒血清miR-137表達(dá)水平與ADHDRS量表評分的相關(guān)性

2.3 血清miR-137診斷ADHD患者的價值

血清miR-137表達(dá)水平診斷ADHD的曲線下面積、敏感度、特異度分別為0.815(95%CI=0.763～0.860)、81.48%、83.97%，見圖4。

圖4 血清miR-137表達(dá)水平診斷ADHD的ROC曲線分析

2.4 治療前后ADHDRS評分和血清miR-137表達(dá)水平變化

治療2個月后，患兒ADHDRS兩個分量表評分、總分均較治療前下降(P<0.05)，血清miR-137表達(dá)水平較治療前升高(P<0.05)，見表3。

表3 治療前后ADHDRS評分和血清miR-137表達(dá)水平變化

3 討 論

ADHD是兒童時期常見的精神類疾病之一，且近年來的發(fā)病率不斷升高[8]。有研究報道，ADHD患兒的癥狀能夠持續(xù)至成年，甚至終身，不僅其認(rèn)知功能遭受損傷，而且物質(zhì)依賴及犯罪發(fā)生率是正常人群的5～10倍[9]。因此，積極探討影響ADHD發(fā)病的相關(guān)因素，并盡可能及早地對其進(jìn)行準(zhǔn)確診斷以指導(dǎo)臨床制定合理的干預(yù)方案對控制ADHD兒童病情進(jìn)展與促進(jìn)其預(yù)后改善具有非常重要的臨床意義。

本研究結(jié)果顯示，觀察組ADHDRS兩個分量表評分、總分均高于對照組，而血清miR-137表達(dá)水平明顯低于對照組，說明血清miR-137表達(dá)水平可能與ADHD發(fā)生、發(fā)展存在一定的關(guān)系。miRNA是一種保守的非編碼單鏈小RNA，通過轉(zhuǎn)錄后的水平調(diào)節(jié)來影響人類基因表達(dá)，從而參與DNA甲基化、組蛋白修飾及RNA編輯等多種生物學(xué)過程，影響精神類疾病的發(fā)生、發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-26b-5p、miR-185-5p和miR-191-5p在ADHD患兒中高表達(dá)，通過改變肌醇信號通路來誘導(dǎo)ADHD發(fā)病[10]。miR-137是一個重要的節(jié)點分子，可參與蛋白質(zhì)的形成過程，調(diào)控生物學(xué)功能，能夠通過調(diào)控信號通路及下游分子來影響神經(jīng)發(fā)育，并可以通過影響神經(jīng)功能和結(jié)構(gòu)來影響大腦發(fā)育及功能[11]。研究指出，miR-137表達(dá)失調(diào)能夠引起一系列功能基因失調(diào)，進(jìn)而造成神經(jīng)功能和結(jié)構(gòu)異常，導(dǎo)致神經(jīng)發(fā)育過程出現(xiàn)障礙而引發(fā)精神性疾病[12]。有研究表明，miR-137在阿爾茨海默病患者血清中的表達(dá)水平較低，參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，并且能夠影響阿爾茨海默病患者的病情嚴(yán)重程度，是診斷阿爾茨海默病的標(biāo)志物[13-14]。另有研究報道，miR-137能夠調(diào)節(jié)腦部神經(jīng)的發(fā)育過程，破壞激素平衡，增加精神分裂癥的發(fā)病風(fēng)險，其表達(dá)水平改變可能與精神類疾病的發(fā)生相關(guān)聯(lián)[15]。此外，有研究指出，miR-137在轉(zhuǎn)錄后可調(diào)控多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)及多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)，從而參與多動癥等多巴胺穩(wěn)態(tài)異常相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展，可作為此類疾病治療的靶點。這進(jìn)一步證實了血清miR-137表達(dá)與ADHD發(fā)生具有相關(guān)性[16]。

本研究結(jié)果顯示，血清miR-137表達(dá)水平與ADHDRS兩個分量表評分、總分均呈負(fù)相關(guān)，說明血清miR-137表達(dá)水平與ADHD患兒病情嚴(yán)重程度具有相關(guān)性。血清miR-17表達(dá)水平診斷ADHD的敏感度、特異度分別為81.48%、83.97%，說明miR-137水平對于ADHD具有較好的診斷效能。治療2個月后，患兒ADHDRS量表評分下降，而miR-137水平升高，說明miR-137可能與ADHD患兒的臨床療效存在一定關(guān)系，可作為臨床上評判ADHD治療效果的有效指標(biāo)之一。相關(guān)研究報道，調(diào)節(jié)血漿miR-137表達(dá)水平可提高帕金森病患者臨床療效，改善其非運(yùn)動癥狀[17]。結(jié)合本研究結(jié)果，臨床中，可通過檢測血清miR-137表達(dá)水平，早期對ADHD患兒做出較為準(zhǔn)確的診斷，評估患兒病情的嚴(yán)重性，從而為盡早制定合適的病情干預(yù)措施提供指導(dǎo)，以促進(jìn)預(yù)后改善。

綜上所述，血清miR-137表達(dá)水平可能參與了ADHD疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，可作為診斷ADHD的生物標(biāo)志物，對于診斷和治療ADHD疾病具有一定的指導(dǎo)意義。但本研究具有一定的局限性，例如未對患兒進(jìn)行長期隨訪，未進(jìn)一步深入探討血清miR-137對ADHD患兒預(yù)后的評估作用等，有待后期進(jìn)一步進(jìn)行研究。