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    基于RGB顏色空間評價馬鈴薯塊莖綠化程度

    2023-02-27 02:02:16鮑天旸劉建剛段紹光簡銀巧李廣存金黎平徐建飛
    作物學(xué)報 2023年4期
    關(guān)鍵詞:中薯色差塊莖

    王 碩 鮑天旸 劉建剛 段紹光 簡銀巧 李廣存 金黎平 徐建飛

    基于RGB顏色空間評價馬鈴薯塊莖綠化程度

    王 碩 鮑天旸 劉建剛 段紹光 簡銀巧 李廣存 金黎平 徐建飛*

    中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所 / 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部薯類作物生物學(xué)和遺傳育種重點實驗室, 北京 100081

    馬鈴薯是世界上最重要的作物之一, 塊莖作為馬鈴薯的商品器官, 塊莖綠化嚴(yán)重影響馬鈴薯商品品質(zhì), 造成大量的資源浪費。建立一種方便快捷的塊莖綠化評價方法, 對于馬鈴薯種質(zhì)資源鑒定和塊莖品質(zhì)評價具有重要意義。本研究基于提取塊莖顏色空間特征, 結(jié)合RGB顏色空間色差分析, 對15個馬鈴薯四倍體和二倍體品種(系)材料的綠化趨勢和綠化程度進行了系統(tǒng)評價。供試材料塊莖在25℃條件下, 125 μmol m–2s–1光照強度下, 中薯2號、中薯18號、中薯19號、Atlantic、Favorita和Kondor的綠化速度較快, HS66的綠化速度較慢。在光照處理9 d后, 塊莖色差值趨于穩(wěn)定, 在光照處理13 d后, 不同品種綠化程度差異明顯, 其中Favorita的綠化程度最大, 中薯28號的綠化程度最小。本研究建立的基于RGB顏色空間的馬鈴薯塊莖綠化評價方法能夠準(zhǔn)確區(qū)分不同品種(系)的綠化速度和綠化程度, 該方法簡便、高效, 結(jié)果可靠, 為精準(zhǔn)評價塊莖綠化程度并進行相關(guān)分析提供了技術(shù)方法參考。

    馬鈴薯; 塊莖; 綠化; RGB顏色特征; 色差分析

    馬鈴薯(L)是世界上僅次于水稻和小麥的第三大糧食作物, 其富含碳水化合物、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和多種維生素, 是世界上10多億人口的主要食物[1-2]。馬鈴薯塊莖見光綠化, 會嚴(yán)重降低塊莖的品質(zhì)并且造成潛在的健康威脅。塊莖見光綠化與葉綠素的積累和糖苷生物堿的合成有關(guān)。當(dāng)暴露在光下時, 塊莖周皮下方薄壁組織中大量淀粉體發(fā)育成葉綠體, 造成葉綠素的積累使塊莖變綠[3-4], 因此大部分馬鈴薯品種見光后會變綠, 但是麻皮和色素沉著的塊莖表皮會掩蓋葉綠素的存在,光照后表皮色素強度增加, 最后顏色變暗[5]; 塊莖綠化的同時, 也會伴隨有毒物質(zhì)糖苷生物堿的增加, 糖苷生物堿的合成和積累與葉綠素產(chǎn)生是相互獨立的[4]。光照時間和強度會影響塊莖綠化速度, 一般情況下, 延長暴露在光下的時間或者增加光照強度, 綠化速度加快[6]。塊莖綠化降低了其商品品質(zhì), 造成了大量的資源浪費, 在美國塊莖綠化每年造成14%~17%的馬鈴薯損失[7], 在南非農(nóng)產(chǎn)品市場, 被收購商拒收的馬鈴薯中, 塊莖綠化馬鈴薯占比達17%[4], 因此塊莖綠化程度已經(jīng)成為了馬鈴薯品質(zhì)重要評價指標(biāo)。

    通過對塊莖顏色進行分析, 可以評價塊莖綠化程度。在馬鈴薯塊莖綠化遺傳分析時, 有研究者通過目測進行綠化分級[5,8], 但目測分級方法存在主觀性或測試人個體顏色視覺敏感度差別。顏色是物體的重要特征之一, 顏色模型或者顏色空間可以描述色差現(xiàn)象, 其中, RGB模型是面向硬件的簡單直觀模型, 許多圖像的處理都是此模型開發(fā)的[9], 在農(nóng)業(yè)研究領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。RGB模型是通過對紅、綠、藍(lán)3個顏色通道的變化及疊加來得到各種顏色, 其中每個通道有8位共256個級別, 3個顏色的組合可以得到1600萬種顏色, 幾乎涵蓋了所有能感知到的顏色[10]??赏ㄟ^RGB模型進行蘋果重量和糖度預(yù)測并進行分級[11], 對脫絨棉種質(zhì)量與表面顏色特征的關(guān)系進行分析[12]。還可運用RGB顏色空間進行豬肉儲藏時間的判定[13], 分析葉片顏色特征參數(shù)和葉綠素的相關(guān)性, 構(gòu)建葉綠素SPAD估算模型并進行大豆葉片葉綠素含量預(yù)測[14]。在馬鈴薯塊莖綠化研究中, 常通過測定不同處理條件下塊莖的葉綠素含量, 進而分析塊莖表皮綠化速度和程度[15], 或是對馬鈴薯表皮綠化進行簡單肉眼顏色觀察分級[16], 這2種方法雖然能夠直觀地評價塊莖綠化, 但在具體評價過程中的取樣、測定等操作中會產(chǎn)生較大誤差, 加之工作量較大, 肉眼對于顏色相近的塊莖難以精確辨別。有研究者以顏色特征分析為基礎(chǔ), 結(jié)合BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò), 測定綠化區(qū)域的百分比[17], 基于飽和度灰度化的閾值分割方法對自然光下的馬鈴薯塊莖進行檢測分析[18], 同時, 利用計算機視覺系統(tǒng)對單個塊莖樣本圖像進行研究, 提出了一種基于色度域劃分的馬鈴薯綠化檢測方法[19], 雖然這些方法能夠精確地識別并區(qū)分塊莖綠化, 但均使用了較復(fù)雜的儀器設(shè)備及算法, 難以在實際研究和生產(chǎn)中廣泛運用。建立一個更加簡便、高效、準(zhǔn)確的塊莖綠化測定方法, 對于馬鈴薯種質(zhì)資源和塊莖商品品質(zhì)評價具有重要的應(yīng)用價值。

    基于視覺觀察來判斷馬鈴薯塊莖的綠化速度和綠化程度并不精準(zhǔn), 而利用RGB模型來評價馬鈴薯綠化速度和綠化程度的研究尚未見報道。本研究通過RGB顏色空間距離分析, 分析了不同馬鈴薯材料塊莖在恒定的光照條件下各時段塊莖表皮顏色變化,建立了一個定量化、可操作性強和高效的馬鈴薯塊莖綠化評價方法, 為精準(zhǔn)鑒定評價馬鈴薯塊莖綠化表型提供了方法基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料與儀器

    供試材料為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所保存的15個馬鈴薯品種(系), 其中包括中薯2號、中薯3號、中薯5號、中薯18號、中薯19號、中薯21號、中薯27號、中薯28號、Atlantic、Favorita、Kondor和Shepody等12個四倍體栽培品種(), HS66、CE125和RH89-039-16 (RH) 等 3個二倍體材料()。供試材料收獲后遮光保存, 選取大小一致、無損傷和無病蟲害的2個塊莖進行光照處理和分析。同樣方法, 各選取中薯2號、中薯3號、中薯5號、中薯18號、中薯19號、中薯21號、中薯27號、中薯28號、Atlantic、Favorita和Shepody等11個品種(系)的2個塊莖用錫紙包裹進行同樣條件下黑暗處理, 考察溫度和貯藏時間對塊莖綠化的影響。

    使用的儀器設(shè)備為照度計(HIOKI)、智能光照培養(yǎng)箱(寧波江南儀器廠, GXZ型)、照相機(Canon Power Shot G10)、攝影棚(小丑魚)和灰色背景板(深圳市金佳誠攝影器材有限公司, GC-1II)。

    1.2 光照處理和圖像采集

    供試品種(系)塊莖光照和黑暗處理之前, 將收獲后一直遮光保存的塊莖置于攝影棚背景板上進行照相, 背景板平均光照強度37.5 μmol m–2s–1左右, 將供試塊莖均勻放置于培養(yǎng)箱的一層培養(yǎng)架上, 培養(yǎng)架4個角落和中心位置平均光照強度125 μmol m–2s–1左右, 光照培養(yǎng)箱24 h持續(xù)光照, 溫度設(shè)置為25℃。供試塊莖光照和黑暗處理24 h后, 進行攝影棚內(nèi)照相, 之后原位返回光照箱, 每隔48 h進行照相, 塊莖攝影棚背景板和光照箱培養(yǎng)架放置位置和方向保持不變, 共進行8次照相, 持續(xù)13 d。

    1.3 顏色特征參數(shù)的提取及分析方法

    運用軟件Adobe Photoshop CC 2018進行塊莖顏色特征值的提取[12,20]。塊莖顏色特征參數(shù)的取值: 將照相機拍攝的照片導(dǎo)入電腦, 用Adobe Photoshop CC 2018打開塊莖圖像, 首先在工具欄中選擇“快速選擇工具”, 分別選擇背景上的每一個塊莖, 然后在菜單欄中打開“窗口”一欄中的直方圖(Histogram), 分別選擇紅(R)、綠(G)、藍(lán)(B)通道, 分別讀取其特征值作為每個塊莖的R、G、B值。背景板顏色特征參數(shù)的取值: 首先在工具欄中選擇“矩形選框工具”, 設(shè)置為(寬度300像素和高度300像素)固定大小, 分別選擇背景板上無陰影的4角, 然后在菜單欄中的“窗口”一欄直方圖中讀取相應(yīng)的R、G、B值, 最后將背景板上4角R、G、B的均值作為該圖像的背景R、G、B值。

    應(yīng)用RGB色差公式[21-22], 利用Microsoft Excel 2019和IBM SPSS Statistics 22對每幅圖像中的2個塊莖的綠化色差值相關(guān)性、每個品種(系)各時期的綠化色差值以及不同品種(系)之間的綠化程度進行統(tǒng)計分析。

    RGB色差值計算公式:

    式中, 2個空間顏色(x表示塊莖, x表示背景), 坐標(biāo)分別為(r,g,b), (r,g,b)。

    式中, GE為綠化程度, Db為光照處理前色差值, Da為光照處理后色差值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 重復(fù)塊莖間色差相關(guān)性

    在整個光照處理時期內(nèi), 選取供試品種(系)光照處理1、7和13 d后圖像, 進行同一品種(系) 2個塊莖間色差相關(guān)性分析(表1)。1、7和13 d后2個塊莖的相關(guān)性系數(shù)均達到極顯著水平(<0.01), 表明在不同的光照處理周期, 同一品種(系)的2個塊莖的色差重復(fù)性好, 光照處理和選取塊莖誤差較小。

    表1 2個塊莖之間的相關(guān)性分析

    **表示在0.01概率水平相關(guān)顯著。**indicates a significant correlation at the 0.01 probability level.

    2.2 塊莖色差變化趨勢

    以塊莖光照處理之前的狀態(tài)作為對照, 對不同時期不同品種(系)塊莖色差進行分析(圖1)。結(jié)果表明, 雖有個別品種(系)在整個階段中會出現(xiàn)某個時期色差的微小波動, 隨著光照處理時間延長, 供試品種(系)的塊莖色差值整體上都呈現(xiàn)出逐漸降低并且趨于穩(wěn)定的趨勢。供試品種(系)塊莖在黑暗處理下,各品種(系)的2個塊莖的色差值變化趨于一致, 重復(fù)性好, 且各供試品種(系)的塊莖色差值從黑暗處理開始到結(jié)束變化較小, 同時各品種(系)在不同黑暗處理時期的塊莖圖像在顏色上變化較小, 與色差值變化趨勢一致(數(shù)據(jù)未列出)。

    對供試品種(系)在不同光照處理時間的色差值進行差異顯著性分析(表2)發(fā)現(xiàn), 不同品種(系)在不同階段色差值差異程度不同, 其中, 中薯2號、中薯18號、中薯19號、Atlantic、Favorita和Kondor在光照1 d后, 色差出現(xiàn)了顯著降低; 中薯3號、中薯5號、中薯21號、中薯27號、中薯28號、CE125、RH和Shepody在光照3 d后, 色差值顯著降低; HS66在光照11 d后, 色差顯著降低。光照后不同品種(系)色差值趨于穩(wěn)定的時間不同, 其中, 中薯3號、中薯18號、中薯21號、Atlantic、RH和Shepody在光照處理3 d后色差值趨于穩(wěn)定; 中薯2號、中薯5號、中薯27號、CE125、Favorita和Kondor在光照處理5 d后色差趨于穩(wěn)定; 中薯19號在光照處理7 d后色差趨于穩(wěn)定; 中薯28號在光照處理9 d后色差趨于穩(wěn)定。

    圖1 不同品種(系)的色差變化趨勢

    表2 供試品種(系)不同光照處理時間的塊莖色差

    DAL: 光照處理天數(shù); Duncan’s檢測, 不同小寫字母表示在0.05概率水平差異顯著。

    DAL: days after light treatment. Duncan’s test. Different lowercase letters indicate significant differences at the 0.05 probability level.

    2.3 品種(系)綠化程度

    對供試品種(系)光照處理前和光照處理13 d后的塊莖綠化程度進行分析(圖2)發(fā)現(xiàn), 15個供試品種(系)中, Favorita的綠化程度最高, 顯著高于其他品種(系), 中薯28號的綠化程度最小, 顯著低于其他品種(系); 中薯27號、中薯18號、CE125、RH、中薯2號、中薯21號、中薯19號的綠化程度相對于Favorita顯著減小, 但這7個品種(系)之間的顏色變化程度無顯著差異; Kondor的綠化程度顯著低于中薯27號, 但與Shepody、中薯5號、中薯3號、Atlantic、HS66綠化程度無顯著差異。以塊莖色差值計算的各品種(系)塊莖綠化程度與肉眼觀察的塊莖綠化程度保持一致(圖3)。

    圖2 不同品種(系)間的綠化程度差異

    采用Duncan’s檢驗, 圖中誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)誤, 不同小寫字母表示在0.05概率水平差異顯著。

    Duncan’s test is used for data analysis and error bars in the figure indicate standard error. Different lowercase letters indicate significant differences at the 0.05 probability level.

    3 討論

    馬鈴薯塊莖的綠化程度和速度會受到光照和溫度等環(huán)境條件的影響, 因此, 塊莖的綠化在塊莖發(fā)育期間及收獲、運輸、貯藏、加工等產(chǎn)業(yè)鏈階段均可能發(fā)生。馬鈴薯在全球的貿(mào)易中具有相當(dāng)大的份額, 中國又是世界上最大的馬鈴薯生產(chǎn)國, 建立一種可操作性強的塊莖綠化鑒定評價方法對于品種的鑒定評價具有重要意義。本試驗利用光照培養(yǎng)箱在25℃和125 μmol m–2s–1連續(xù)光照條件下對15個品種(系)塊莖進行綠化處理, 應(yīng)用RGB顏色空間計算塊莖色差值發(fā)現(xiàn), 重復(fù)塊莖間色差值具有顯著的相關(guān)性, 供試品種(系)在光照處理9 d后, 塊莖綠化程度趨于穩(wěn)定, 在光照處理13 d后, Favorita的綠化程度最大并顯著高于其他品種(系), 中薯28號的綠化程度最小并顯著低于其他品種(系), 基于RGB顏色空間的塊莖綠化評價能客觀反映肉眼綠化觀測結(jié)果。

    圖3 供試品種(系)塊莖綠化程度變化

    DAL: 光照處理天數(shù)。DAL: days after light treatment.

    光照強度、持續(xù)時間以及溫度和薯皮顏色都會對塊莖綠化的過程產(chǎn)生影響。本研究結(jié)果顯示, 在相同的光照處理下, 不同品種(系)的2個重復(fù)塊莖之間RGB色差值顯著相關(guān), 表明同一基因型的不同塊莖之間的綠化趨勢及程度是一致的, 具有良好的生物學(xué)重復(fù)。黑暗處理下的各供試品種(系)的2個塊莖色差值具有一致的變化趨勢, 各品種(系)在黑暗處理前后各個時期的色差值和顏色有微小波動, 推測造成微小波動的原因是試驗期間照相操作引起了色差值和塊莖顏色的微小變化。前人在不同的條件下, 進行過綠化程度和穩(wěn)定時間評價, Olsen等[23]在22℃、17.38 μmol m–2s–1和16.25 μmol m–2s–1條件下每天光照22 h, 在第0天到第9天時評價了不同光源對塊莖綠化的影響, 董田田等[24]在20℃、7.5 μmol m–2s–1條件下24 h持續(xù)光照, 從光照0 d至8 d研究了NaCl處理后對塊莖綠化的影響, 也有研究者通過對葉綠素含量的測定來研究塊莖綠化速度和程度, 發(fā)現(xiàn)塊莖綠化速度和程度會隨著光照時間的延長而增加, 但最終逐漸趨于平穩(wěn)[15]。本研究對光照0~13 d的塊莖綠化評價后發(fā)現(xiàn), 在25℃和125 μmol m-2s-1光照9 d后, 不同品種(系)的塊莖的綠化程度都趨于穩(wěn)定, 這可為評價塊莖綠化的光照處理時間提供參考和依據(jù)。馬鈴薯薯皮顏色類型對塊莖綠化的程度具有一定的影響, Reeves[5]在塊莖綠化的品種差異比較中顯示, 部分品種見光會變成棕色或者紫色, 紅皮塊莖的綠化程度較小, 本研究中薯28和Kondor薯皮為紅色, 其余品種(系)的薯皮顏色為黃色或淺黃色, 表明中薯28號的綠化程度最小, HS66和Kondor相對其他黃皮品種(系)綠化程度也較小, HS66薯皮顏色為黃褐色。

    基于RGB顏色空間進行馬鈴薯塊莖綠化分析, 方法簡便, 易于操作, 結(jié)果可靠。有研究者將塊莖綠化程度分為5個等級, 進行人為肉眼評定[24], 也有人根據(jù)目測挑選各個光照處理時期典型塊莖, 劃分綠化程度等級, 并使用色度儀測量塊莖顏色[25], Olsen等[23]使用Grunenfelder等[25]的方法, 對馬鈴薯去皮薯肉進行了綠化程度評級。目測評價塊莖綠化程度雖然操作簡便, 但人為主觀影響較大, 研究者也嘗試使用儀器設(shè)備進行綠化評價, 如利用計算機視覺與感知機器學(xué)習(xí)算法區(qū)分正常塊莖與綠化塊莖[26], 運用了計算機視覺結(jié)合相關(guān)算法來檢測塊莖表皮的綠化缺陷[17,19], 這些方法都是光學(xué)儀器設(shè)備結(jié)合計算機算法進行綠化塊莖區(qū)分和篩選, 并不能夠?qū)⒕G化速度與綠化程度都鑒別出來, 且應(yīng)用簡易設(shè)備對塊莖綠化程度的評價方法較少。本研究利用簡易儀器設(shè)備通過提取塊莖與背景板的RGB特征值, 轉(zhuǎn)化為色差值和綠化程度數(shù)值量化評價塊莖綠化, 可將不同品種(系)的綠化程度進行有效區(qū)分, 且與肉眼觀察到的結(jié)果保持一致, 相比于人為肉眼鑒定更為準(zhǔn)確可靠。對不同時期的塊莖進行圖像的采集, 可以將處理時間縮短, 同時也可以省略葉綠素含量測定, 減少試驗誤差與工作量, 提高鑒定精度和效率。結(jié)合RGB顏色空間對塊莖圖像進行色差分析, 不需要復(fù)雜的算法及儀器設(shè)備, 將塊莖綠化程度數(shù)值量化, 方法簡單, 可操作性強, 可在實際研究和生產(chǎn)中廣泛運用, 為精準(zhǔn)評價馬鈴薯塊莖綠化表型提供了方法參考。

    本研究中, 隨著光照處理時間延長, 不同品種(系)的色差值都呈逐漸減小的趨勢, 但在某個階段會出現(xiàn)微小色差波動, 試驗操作中一些因素可能會對RGB特征值產(chǎn)生影響。首先, 供試的塊莖須清洗干凈, 表皮的泥土雜質(zhì)會影響圖像色差值; 其次, 不同時期光照處理和照相時, 塊莖放置在光照箱培養(yǎng)架和攝影棚背景板上的位置應(yīng)盡可能保持一致, 由于供試品種(系)不同, 塊莖的形狀大小各異, 加之光照箱和攝影棚內(nèi)各位置光照強度難以保持絕對一致, 會造成塊莖色差值偏差。

    4 結(jié)論

    供試材料塊莖在25℃和125 μmol m–2s–1光照強度下進行處理, 同一品種(系)的不同塊莖色差值重復(fù)性好, 在處理9 d后, 塊莖色差值趨于穩(wěn)定。不同品種(系)綠化程度具有明顯差異, 其中Favorita的綠化程度最大, 中薯28號的綠化程度最小, 利用色差值計算的塊莖綠化程度與肉眼觀察的綠化程度相一致。本文建立了一種基于RGB顏色空間的簡便、高效、可靠的馬鈴薯塊莖綠化評價方法。

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    Potato tuber greening evaluation based on RGB color space

    WANG Shuo, BAO Tian-Yang, LIU Jian-Gang, DUAN Shao-Guang, JIAN Yin-Qiao, LI Guang-Cun, JIN Li-Ping, and XU Jian-Fei*

    Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences / Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Tuber and Root Crops, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Beijing 100081, China

    Potato is one of the most important crops in the world. Tuber is the commercial product of potato, whereas tuber greening seriously affects product quality and results in a large amount of potatoes waste. It is very necessary to establish a convenient evaluation method of tuber greening for the identification of potato germplasm resources and the analysis of tuber quality. In this study, we systematically evaluated the greening trend and greening degree of 15 potato tetraploid and diploid varieties (lines) base on the extraction of tuber color space characteristics and RGB color space color difference. Zhongshu 2, Zhongshu 18, Zhongshu 19, Atlantic, Favorita, and Kondor appeared faster greening speed, but HS66 appeared slower greening speed under 25℃ and 125 μmol m-2s-1. Color difference value of tubers of all potato varieties (lines) tended to the stability after 9 days lighting treatment. There was an obvious greening extent differences among potato varieties (lines). Among them, the afforestation degree of Favorita was the highest, whereas Zhongshu 28 was the lowest after 13 days lighting treatment. The method established in this study can accurately distinguish the greening speed and the extent of different varieties (lines), which provided a convenient and reliable technical reference for tuber greening evaluation.

    potato; tuber; greening; RGB color features; color difference analysis

    10.3724/SP.J.1006.2023.24078

    本研究由寧夏回族自治區(qū)農(nóng)業(yè)育種專項(2019NYYZ01-1)和財政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(CARS-09)資助。

    This study was supported by the Agricultural Breeding Project of Ningxia Hui Autonomous Region, China (2019NYYZ01-1) and the China Agriculture Research System of MOF and MARA (CARS-09).

    徐建飛, E-mail: xujianfei@caas.cn

    E-mail: wangshuo202099@163.com

    2022-04-02;

    2022-09-05;

    2022-09-15.

    URL: https://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1809.S.20220915.0854.004.html

    This is an open access article under the CC BY-NC-ND license (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

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