豬傳染性腹瀉的診斷

陸 曉

昆山市第四動物防疫站,江蘇 昆山 215300

0 引言

生豬腹瀉是由于不同原因?qū)е碌南佬螒B(tài)及機能紊亂、營養(yǎng)物質(zhì)吸收不良、聚集大量水分或電解質(zhì)而導(dǎo)致糞便松軟或呈液態(tài)的一類疾病,臨床上主要以生豬嘔吐、腹瀉為主要癥狀。根據(jù)病因不同可以分為豬傳染性腹瀉和非傳染性腹瀉,前者是由細菌、病毒、寄生蟲等病原微生物引發(fā)的腹瀉,后者則是由于環(huán)境、飼養(yǎng)管理等因素導(dǎo)致的腹瀉。豬傳染性腹瀉的傳播范圍廣、發(fā)病率高、危害大,嚴重阻礙了我國生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,但由于其病原較為復(fù)雜,且臨床表現(xiàn)相似,在實際生產(chǎn)中對其進行準(zhǔn)確診斷成了難題,若診斷不準(zhǔn)確,極易造成疾病的傳播和擴散,因此,應(yīng)注重該病的診斷,為該病的有效治療和科學(xué)防控提供依據(jù)。

1 豬傳染性腹瀉的病因

豬傳染性腹瀉可根據(jù)病原不同分為細菌性腹瀉、病毒性腹瀉和寄生蟲性腹瀉。在臨床中,較為常見的導(dǎo)致生豬腹瀉的細菌包括大腸桿菌、沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等;常見的病毒包括豬流行性腹瀉病毒、傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒,有學(xué)者認為豬德爾塔冠狀病毒也是造成生豬傳染性腹瀉的主要病毒性病原體[1];常見的寄生蟲主要為球蟲。

在傳染性腹瀉中,病毒引起的腹瀉發(fā)病率最高,通常為10%～100%,死亡率可達30%～100%,以10日齡內(nèi)的仔豬最易發(fā)生死亡。其次為大腸桿菌造成的仔豬黃白痢,發(fā)病率為20%～90%,仔豬黃痢的發(fā)病率略高于仔豬白痢,仔豬黃痢死亡率可達70%。而球蟲的發(fā)病率為50%～70%,產(chǎn)氣莢膜梭菌、沙門氏菌的發(fā)病率最低,但其也是導(dǎo)致豬傳染性腹瀉的主要病原體。

2 豬傳染性腹瀉的鑒別診斷

2.1 豬流行性腹瀉

豬流行性腹瀉的潛伏期約1周,通常是個別生豬發(fā)病后在1周內(nèi)波及全群。該病的臨床表現(xiàn)與年齡有較大關(guān)系,年齡越小的生豬癥狀表現(xiàn)越明顯。仔豬常出現(xiàn)水樣腹瀉,排出灰黃色有腥臭氣味以及伴有黏膜、血液的糞便,在哺乳、采食后極易出現(xiàn)嘔吐(不同于傳染性胃腸炎的嘔吐時間無規(guī)律),嘔吐物內(nèi)有未消化的凝乳塊。由于腹瀉和嘔吐,仔豬常出現(xiàn)脫水或代謝性酸中毒,嚴重時可造成死亡。

剖檢病死豬,可見小腸內(nèi)有大量淡黃色液體,腸壁變薄,小腸黏膜部分出現(xiàn)點狀出血,小腸的絨毛萎縮,腸系膜淋巴結(jié)腫脹。

2.2 豬傳染性胃腸炎

豬傳染性胃腸炎病毒會造成哺乳仔豬出現(xiàn)嘔吐和腹瀉,排出黃色、綠色、白色有惡臭氣味的糞便,糞便中有未消化的凝乳塊,嚴重時,可呈噴射狀水樣便。當(dāng)腹瀉和嘔吐持續(xù)時間較長,可引發(fā)脫水,仔豬眼球凹陷,糞便轉(zhuǎn)為黏稠,體溫升高,14 d內(nèi)的仔豬致死率可達100%;成年豬患病后的癥狀比仔豬輕,僅有個別生豬表現(xiàn)為嘔吐、腹瀉的癥狀,但病死率較低,治療后可痊愈;母豬患病后表現(xiàn)為乳房萎縮、泌乳量減少的癥狀,妊娠期母豬可出現(xiàn)流產(chǎn)現(xiàn)象,經(jīng)治療后大多可以恢復(fù),死亡率較低。

剖檢病死豬,可見胃和小腸處有明顯病變(不同于流行性腹瀉,僅在腸段有明顯病變),胃底黏膜充血、出血,內(nèi)容物呈鮮黃色,仔豬的胃內(nèi)容物中有大量乳白色的凝乳塊,小腸有氣性膨脹,腸壁彈性降低,嚴重時可破裂,小腸絨毛變短。脾臟、淋巴結(jié)腫脹,腎臟包膜下出血,心肌呈灰白色。

2.3 輪狀病毒

豬輪狀病毒多發(fā)生于8周齡內(nèi)的仔豬,患病后表現(xiàn)為食欲減退、精神沉郁、嘔吐、腹瀉等癥狀,排出黃白色、黑色的水樣或白色糊狀糞便,隨著病程延長,臨床癥狀加重。

剖檢患病豬發(fā)現(xiàn)主要病變發(fā)生在小腸段,小腸后段腸壁變薄、膨脹,內(nèi)有水樣、絮狀、黃色或灰白色的液體,小腸后段無食物,腸系膜淋巴結(jié)為棕褐色。

2.4 大腸桿菌

大腸桿菌可造成仔豬黃白痢。仔豬黃痢多侵害7日齡內(nèi)的仔豬,1～3日齡仔豬發(fā)病率最高。急性病例可在出生后12 h內(nèi)呈現(xiàn)無征兆、突然死亡的癥狀;亞急性病例則表現(xiàn)為排便頻繁,可在1 h內(nèi)排數(shù)次黃色、黃白色的糊狀糞便,糞便內(nèi)有未消化的凝乳塊?；疾∽胸i精神不振、飲欲增強但食欲減退、機體消瘦,最終因脫水或全身衰竭而亡。仔豬白痢則多侵害14～28日齡的仔豬,通常呈窩發(fā),當(dāng)養(yǎng)殖場出現(xiàn)仔豬白痢時,可迅速波及全群。仔豬白痢的突出癥狀是下痢,排出乳白色、灰白色、淡黃綠色的稀糞,內(nèi)含黏液,呈粥狀,有時伴有氣泡,有腥臭氣味?；疾∽胸i體溫?zé)o明顯變化,食欲通常不受影響,但精神不振,喜趴臥,皮膚和可視黏膜蒼白,飲欲增加,大多數(shù)患病豬可治愈,但當(dāng)繼發(fā)肺炎時會造成死亡[2]。

剖檢仔豬黃痢病死豬,可看到胃腸道內(nèi)有未消化的凝乳塊,且有大量黃色液體和氣體,十二指腸黏膜有急性卡他性炎癥,腸系膜淋巴結(jié)腫大,為紅黃色或紅色,切開后有液體滲出,呈彌漫性出血,腎臟皮質(zhì)有大量針尖大小的出血點,肝臟、腎臟中有凝固型壞死灶。而仔豬白痢的病死豬表現(xiàn)為結(jié)腸內(nèi)有乳白色、灰白色的糊狀、膏狀內(nèi)容物,腸系膜淋巴結(jié)略微腫脹,腸黏膜有卡他性炎癥。

2.5 沙門氏菌

當(dāng)沙門氏菌侵入生豬機體后,引發(fā)豬霍亂或仔豬副傷寒,仔豬副傷寒主要發(fā)生于20～120日齡的仔豬,急性病例多表現(xiàn)為敗血癥,而亞急性、慢性的病例表現(xiàn)為大腸壞死性腸炎(較常見),最典型的癥狀為下痢,排出惡臭、混有血液的糞便,仔豬日漸消瘦,食欲不振,體溫升高。部分患病豬在患病后期出現(xiàn)彌漫性濕疹,腹部可見綠豆大小的漿性覆蓋物,將覆蓋物移除后可見潰瘍灶。

剖檢可見腹腔內(nèi)有積液,有彌漫性、壞死性結(jié)腸炎,腸系膜淋巴結(jié)腫脹,心臟內(nèi)膜有出血斑,心包積液,胃底充血,胃腸道有廣泛的點狀出血。腸系膜淋巴結(jié)呈索狀腫脹,腸道黏膜脫落,盲腸、結(jié)腸段腸壁增厚,黏膜上有不同程度的陳舊潰瘍灶。

2.6 球蟲

當(dāng)球蟲感染生豬時,可出現(xiàn)腹瀉,排出的糞便呈白色、黃色水樣,感染較為嚴重時,可在糞便中看到血液或糞便呈棕色。豬球蟲病的發(fā)病率較高,但死亡率有較大差異,這主要是因為生豬誤食的球蟲孢子化卵囊的數(shù)量不同,當(dāng)誤食的卵囊較多時癥狀較為嚴重,較少時可癥狀輕微。此外,癥狀輕重還與有無其他感染有著密切關(guān)聯(lián)。

3 豬傳染性腹瀉的實驗室診斷

3.1 豬流行性腹瀉

病毒分離鑒定是診斷病毒性疾病的金標(biāo)準(zhǔn),無菌采集患病豬的腸內(nèi)容物,接種于Vero細胞中,對豬流行性腹瀉病毒進行分離和增殖,37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)3～4 d,觀察細胞有無明顯病變、融合、脫落或合胞體形成,當(dāng)細胞病與豬流行性腹瀉病毒特征一致時,通過免疫熒光、RT-PCR技術(shù)進行進一步鑒定。也可使用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測患病豬血清樣本或糞便樣本中豬流行性腹瀉病毒的抗原,或抗體水平,該方法雖準(zhǔn)確度高、特異性強,但診斷成本較高,不適用于基層大批量檢測。在臨床中較為常用的實驗室診斷技術(shù)為膠體金免疫層析技術(shù),這一技術(shù)是以熒光微球作為表計載體,檢測豬流行性腹瀉病毒的免疫熒光層析,該方法操作簡單、成本低廉,檢測時間短、易于觀察。此外,熒光免疫層析技術(shù)、均相光激化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、納米RT-PCR等[3]多種方法都可以作為豬流行性腹瀉病的實驗室診斷方法,為確診該病提供依據(jù)。

3.2 豬傳染性胃腸炎

無菌采集病死豬的小腸、肛拭子或常內(nèi)容物制成懸濁液,加入青鏈霉素進行觀察,使用ELISA、RT-PCR試驗進行輔助?；?qū)⒉∷镭i的脾臟、腸道等病料制成涂片后,經(jīng)過負染色,觀察到串珠狀排列的病毒,可判定為豬傳染性胃腸炎。ELISA法是豬傳染性胃腸炎早期診斷的重要方法,但想要確定病毒源,仍需要經(jīng)過擴增、測序才能最終確定。此外,免疫熒光抗體試驗也是診斷豬傳染性胃腸炎的常用方法,對病死豬的空腸進行冷凍切片,經(jīng)免疫熒光抗體染色后在顯微鏡下觀察,可以看到細胞質(zhì)中有亮綠色的熒光物質(zhì),可確診為豬傳染性胃腸炎。

3.3 輪狀病毒

豬輪狀病毒的實驗室診斷可使用病毒分離鑒定、電鏡觀察、免疫熒光檢測、酶聯(lián)免疫吸附試驗、膠體金免疫層析技術(shù)、RT-PCR、實時熒光定量RT-PCR技術(shù)、逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)等方法進行診斷。其中,逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的檢測時間段,結(jié)果判讀方便,最低檢出限較低,且無需特殊儀器,適用于養(yǎng)殖場。該方法需要無菌采集糞拭子、腸及腸內(nèi)容物或其他病料,提取病毒的RNA,合成cDNA,進行LAMP反應(yīng),最終獲得擴增結(jié)果,依據(jù)結(jié)果判定是否為豬輪狀病毒感染。

3.4 大腸桿菌

根據(jù)臨床癥狀和剖檢特征初步確定為大腸桿菌病后,應(yīng)進一步進行實驗室診斷,在無菌條件下采集病死豬的肝、脾、腸系膜淋巴結(jié),制成涂片,經(jīng)革蘭氏染色后進行鏡檢,當(dāng)發(fā)現(xiàn)有散布的革蘭氏陰性桿菌,無莢膜、無芽孢時可懷疑為大腸桿菌感染。進一步將病料接種于麥康凱培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基內(nèi),在37 ℃下培養(yǎng)24 h,當(dāng)麥康凱培養(yǎng)基上出現(xiàn)紅色菌落且鮮血瓊脂培養(yǎng)基上有中等大小、邊緣整齊、無溶血、表面光滑、輕微隆起的白色菌落時,再次經(jīng)革蘭氏染色鏡檢,仍可看到大腸桿菌特征性細菌形態(tài),則可認定為大腸桿菌感染。

3.5 沙門氏菌

無菌條件下采集病死生豬的心臟、腎臟、脾臟等器官,勻漿、搗碎后進行革蘭氏染色,鏡檢可見革蘭氏陰性小桿菌,且兩端鈍圓。進一步將勻漿、搗碎后的組織接種于普通瓊脂培養(yǎng)基內(nèi),37 ℃下培養(yǎng)1～2 d,可看到少量菌落,挑取單一菌落后再進行革蘭氏染色,若看到沙門氏菌特征則可認為是沙門氏菌感染。也可進一步將組織研磨后用生理鹽水稀釋再接種于實驗小白鼠,觀察小白鼠的病變和死亡特點,如果符合沙門氏菌特征則可確診為沙門氏菌感染。在臨床上,也可以使用玻板凝集法進行檢測,即在清潔的玻片上滴上沙門氏菌多價O血清,將沙門氏菌培養(yǎng)物與玻片上的血清混勻后,震蕩2 min,當(dāng)出現(xiàn)陽性凝集現(xiàn)象時可確診為豬沙門氏菌。

3.6 球蟲

在臨床上較為常用的方法是采集糞便后使用漂浮法檢查糞便內(nèi)有無球蟲的卵囊,但更為準(zhǔn)確的診斷方法是在小腸內(nèi)發(fā)現(xiàn)處于發(fā)育階段的球蟲蟲體,即無菌采集患病豬的空腸、回腸段進行涂片和壓片,經(jīng)染色后鏡檢,當(dāng)看到球蟲時可確診為豬球蟲病。也可使用血液涂片,涂片后經(jīng)瑞士染色,可看到紫藍色的新月形裂殖子[5],則證明生豬正在受球蟲的侵襲。

4 結(jié)束語

我國作為豬肉生產(chǎn)大國,生豬的存欄、出欄量、豬肉生產(chǎn)量均居世界前列,在生豬產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展的同時,頻繁的轉(zhuǎn)運、交易也造成了生豬疫病的發(fā)生,結(jié)合我國發(fā)生的非洲豬瘟疫情帶來的警示,生豬疫病應(yīng)以預(yù)防為主。目前我國豬傳染性腹瀉病的危害范圍越來越廣,且有逐步加重的趨勢,因此,應(yīng)當(dāng)做好這類疾病的預(yù)防工作。對于有疫苗可供使用的疾病,如大腸桿菌病等,各地區(qū)應(yīng)結(jié)合實際情況,制定科學(xué)合理的免疫程序并嚴格執(zhí)行,對于無疫苗可用于預(yù)防的疫病,則要從提升飼養(yǎng)管理的角度出發(fā),做好生豬的營養(yǎng)調(diào)控,均衡配制日糧,注重維生素和微量元素的添加,提升生豬的抗病能力,合理規(guī)劃轉(zhuǎn)運時間,控制圈舍內(nèi)溫濕度,注重通風(fēng),減少生豬應(yīng)激反應(yīng),保障生豬的健康安全。對于已經(jīng)發(fā)生豬傳染性腹瀉的養(yǎng)殖場,應(yīng)當(dāng)先對患病豬進行隔離觀察,根據(jù)臨床癥狀,利用鑒別診斷和實驗室診斷技術(shù)相結(jié)合的方法作出準(zhǔn)確診斷,避免疫病進一步擴散的同時給予針對性治療,盡量將損失降到最低,促進生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。