蘭州市寵物犬腸道寄生蟲感染情況調(diào)查及分析

李 斌，委 磊，葉得河，馬永華

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070)

近年來，隨著我國經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，寵物飼養(yǎng)數(shù)量急劇增加。據(jù)《2019年中國寵物行業(yè)白皮書》統(tǒng)計(jì)，2019年全國城鎮(zhèn)養(yǎng)犬人數(shù)為3 669×104人。如此龐大的飼養(yǎng)量更容易造成人獸共患病在人群中的傳播。寄生蟲是一種感染性病原體，感染人數(shù)超過全球總?cè)丝诘乃姆种?，可?dǎo)致各種慢性疾病，危害人類健康[1-3]。犬作為多種寄生蟲的宿主，主要感染蜱蟲、螨蟲、虱子、跳蚤等體表寄生蟲以及以吸蟲、絳蟲、線蟲為主的體內(nèi)寄生蟲。犬的寄生蟲病是危害犬類健康的一大類疾病[4-7]。有資料報(bào)道的犬蠕蟲約有120余種，人畜共患的犬蠕蟲病約54種[8]，如犬蛔蟲、絳蟲、華支睪吸蟲等，這些寄生蟲常常引起犬消瘦，營養(yǎng)不良，嚴(yán)重的可引起犬的死亡[9]。在養(yǎng)犬規(guī)模逐漸擴(kuò)大的同時(shí)，犬類攜帶的某些人獸共患寄生蟲病也成為威脅人類健康的一大隱患[10]。為了有效防治寵物犬傳播寄生蟲病，全球各地進(jìn)行了大量流行病學(xué)調(diào)查，根據(jù)資料統(tǒng)計(jì)顯示[8]，全球有很多個(gè)國家或地區(qū)進(jìn)行了犬類寄生蟲感染情況的調(diào)查，平均感染率為65.3%。我國的平均感染率在21.14%～67.2%之間，感染率最高的是華南地區(qū)67.2%，最低的是華東地區(qū)21.4%。

掌握一個(gè)地區(qū)犬的寄生蟲感染情況，不僅可以為犬寄生蟲的臨床診斷和防治提供理論依據(jù)，同時(shí)對防治人獸共患寄生蟲病具有重要意義。然而，近十年以來，沒有蘭州市犬腸道寄生蟲感染情況的有關(guān)報(bào)道，本研究通過蟲卵檢查法和ELISA方法對蘭州市寵物犬寄生蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查，分析蘭州市寵物犬腸道寄生蟲感染情況和優(yōu)勢蟲種，為蘭州市的犬類腸道寄生蟲感染性疾病的防治提供一定的數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 樣本來源于蘭州市4個(gè)區(qū)的8家寵物醫(yī)院、11家寵物店和4家寵物犬繁育中心，采集糞便并記錄犬只年齡、驅(qū)蟲史、飼養(yǎng)條件等相關(guān)信息，具體分組見表1。

表1 調(diào)查地點(diǎn)及樣本數(shù)量

1.1.2 試劑及器材 飽和氯化鈉；鑷子；10 mL糞便采樣管；托盤天平；沉淀管；100目篩子；McMaster蟲卵計(jì)數(shù)板；蒸餾水；錐形瓶；載玻片；蓋玻片；移液槍(吉爾森公司)；瑞士-姬姆薩染色液(珠海貝索生物計(jì)數(shù)有限公司)；離心機(jī)(TL80-2型，姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司)；光學(xué)顯微鏡(LEICA DM500，德國徠卡顯微系統(tǒng)有限公司)，ELISA蛔蟲檢測試劑盒(上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 漂浮法 在50 mL飽和氯化鈉中加入5 g糞便樣本，搖勻，然后用100目的篩子過濾，靜置40 min；接著用吸管在液面蘸取一滴于載玻片，蓋上蓋玻片后鏡檢。

1.2.2 沉淀法 在100 mL清水中加入5 g的糞便樣本，搖勻后用100目的篩子過濾，濾液靜置沉淀30 min，倒掉上清，再加水搖勻，再沉淀，反復(fù)操作直至上清透明后，用吸管吸取沉渣于顯微鏡下觀察。

1.2.3 蟲卵計(jì)數(shù)法 采用MacMaster法[11]。

1.2.4 瑞士-姬姆薩染色 滴加A液于涂片上，染色1分鐘；再將B液滴加于A液上，以洗耳球吹打，使兩液充分混合，計(jì)時(shí)5 min后水洗，烘干，鏡檢。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 不同地區(qū)，不同年齡，不同場所組間數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著。

1.2.6 犬蛔蟲抗原酶聯(lián)免疫試驗(yàn) 糞便的處理和具體操作過程按試劑盒說明書進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)品按梯度稀釋(表2)。本試驗(yàn)分A、B兩組進(jìn)行，A組樣本為48份糞檢蛔蟲陽性和42份糞檢陰性樣本，B組樣本隨機(jī)抽取90份糞檢陰性樣本。在酶標(biāo)包被板最后分別設(shè)1號、2號、3號、4號、5號標(biāo)準(zhǔn)品和空白對照。最后測得各個(gè)樣本的OD值。

表2 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋

以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式。根據(jù)樣本OD值和直線回歸方程計(jì)算樣本蛔蟲抗原的實(shí)際濃度。

2 結(jié) 果

2.1 蟲卵形態(tài)觀察

2.1.1 犬弓首蛔蟲 蟲卵呈深黃色，亞球形，具有較厚的呈麻點(diǎn)狀的卵殼，卵殼外表面粗糙，大小為(68～85)μm×(60～75)μm(圖1A)。

2.1.2 獅弓蛔蟲 蟲卵近似圓形，卵殼厚而光滑，有時(shí)可見核體分化，蟲卵大小為(49～61)μm×(74～86)μm(圖1B)。

2.1.3 犬復(fù)孔絳蟲 蟲卵具有兩層薄的卵殼，呈亞球形，直徑35～50 μm，內(nèi)含1個(gè)六鉤蚴，蟲卵前期一般以儲卵囊的形式存在，囊壁較薄(圖1C)。

2.1.4 泡狀帶絳蟲 卵殼很薄，多已脫落；胚膜呈輻射狀，內(nèi)含六鉤蚴(圖1D)。

2.1.5 犬鉤蟲 蟲卵淺褐色，呈卵圓形，卵殼較薄，卵殼與卵細(xì)胞之間有明顯空隙，大小為(56～75)μm×(34～47)μm(圖1E)。

2.1.6 狐毛首線蟲 蟲卵呈棕黃色，兩端有卵蓋，殼厚光滑，大小為(52～61)μm×(27～30)μm(圖1F)。

2.1.7 球蟲 鏡下可見淡黃色的卵囊，形狀似球形或橢圓形，呈淡黃色，囊壁薄而光滑。卵囊平均大小為(22.5×19.3)μm(圖1G)。

2.1.8 犬滴蟲 形狀為梨形、紡錘形(圖1H)。在顯微鏡下可觀察到犬滴蟲呈“S”形前進(jìn)，糞便放置時(shí)間越久，蟲體的活動性越低，放置時(shí)間過長時(shí)，蟲體死亡。

圖1 寄生蟲蟲卵形態(tài)鑒定

2.2 寵物犬腸道寄生蟲感染情況

由表3可知，蘭州市寵物犬感染的寄生蟲有犬弓首蛔蟲，獅弓蛔蟲，復(fù)孔絳蟲，泡狀帶絳蟲、鉤蟲、狐毛首線蟲、球蟲、滴蟲等，消化道寄生蟲的總感染率為20.11%，優(yōu)勢蟲種有犬蛔蟲和球蟲，感染率分別為9.20%和4.21%，感染最低的是犬鉤蟲和狐毛首線蟲，感染率分別為0.96%、0.57%。城關(guān)區(qū)感染率最低，感染率為16.91%，西固區(qū)感染率最高，可達(dá)23.85%，兩地區(qū)感染率差異顯著(P<0.05)。

表3 蘭州市寵物犬腸道寄生蟲感染情況

2.3 混合感染情況

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，蘭州市感染2種腸道寄生蟲的寵物犬占總感染數(shù)的8.79%，以蛔蟲和球蟲混合感染為主，以絳蟲和球蟲為次，偶見弓首蛔蟲和獅弓蛔蟲混合感染。在本次調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)2例感染3種腸道寄生蟲的犬，占總感染數(shù)的2.20%，1例為蛔蟲、鉤蟲、球蟲混合感染，另1例為弓首蛔蟲、獅弓蛔蟲、球蟲混合感染。未發(fā)現(xiàn)感染3種以上腸道寄生蟲的寵物犬(表4)。

表4 混合感染情況

2.4 犬腸道寄生蟲感染強(qiáng)度

球蟲感染強(qiáng)度最高，最大EPG可達(dá)28 000，平均EPG為5 500，狐毛首線蟲感染強(qiáng)度最低，最小EPG小于50(表5)。

表5 犬腸道寄生蟲感染強(qiáng)度

2.5 不同年齡段的寄生蟲感染情況

本調(diào)查顯示(表6)，在蘭州市，犬獅弓蛔蟲的感染率要高于犬弓首蛔蟲。犬蛔蟲在犬的各年齡段都易感，主要感染幼犬，其中小于5月齡的犬感染率最高，為13.71%，其次為5～12月齡的幼犬，大于12月齡的成犬感染率最低，為5.74%。犬絳蟲感染中，犬泡狀帶絳蟲為優(yōu)勢蟲種。其中，以大于12月齡的成犬感染最多，感染率為5.74%，5～12月齡幼犬感染率最低，為2.67%。各年齡段犬都可感染犬鉤蟲，

表6 不同年齡段寄生蟲的感染情況

其中以小于5月齡的犬感染最多，感染率為1.14%，大于5月齡和5～12月齡的幼犬感染率較低，分別為0.82%和0.89%。狐毛首線蟲對5～12月齡犬感染率最高，為0.89%，小于5月齡也易感，感染率為0.57%，大于12月齡的犬感染率為0。犬球蟲的感染以小于5月齡的幼犬最為嚴(yán)重，感染率為6.29%， 12月齡以上的犬對球蟲有一定的抵抗力，感染率為1.64%。犬滴蟲的感染中，以小于5月齡的幼犬感染率最高，為2.29%，大于12月齡的成犬感染率最低，為0.82%。綜上，小于5月齡寵物犬的感染率最高，為27.42%，其次為5～12月齡寵物犬，感染率為17.33%，大于12月的成犬感染率最低，為14.75%。小于5月齡的幼犬感染率顯著高于大于12月齡的成犬(P<0.05)。

2.6 不同飼養(yǎng)環(huán)境對犬寄生蟲感染的影響

寵物犬繁殖場的寄生蟲感染率最高，為26.92%，寵物店犬寄生蟲感染率次之，寵物醫(yī)院犬感染率最低，為14.59%(表7)。寵物犬繁殖場感染率顯著高于寵物醫(yī)院門診犬(P<0.05)。

表7 不同飼養(yǎng)環(huán)境的感染情況

2.7 犬蛔蟲抗原酶聯(lián)免疫試驗(yàn)

經(jīng)計(jì)算，A組樣本的回歸方程為y=0.0486x-0.0171，R2=0.9981，可信度較高(圖2)；B組樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.0535x+0.1，R2=0.9924，可信度較高(圖3)。

將測得的OD值代入回歸方程，計(jì)算出樣品濃度，然后乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。實(shí)際濃度≥27 pg/mL，判定為陽性。檢測結(jié)果如下：

A組陽性數(shù)為50份，其中48份糞檢陽性樣本ELISA檢測全部陽性，2份糞檢陰性樣本顯示ELISA陽性；B組陽性數(shù)為4份，其余全為陰性，與糞檢結(jié)果吻合率為92.31%(48/52)。

圖2 A組樣本直線回歸曲線

圖3 B組樣本回歸曲線

3 討 論

3.1 檢查方法對糞檢結(jié)果的影響

在本次調(diào)查的過程中，糞檢主要采用飽和鹽水漂浮法和水洗沉淀法，2種方法任何1種檢測出蟲卵或蟲體，認(rèn)定其為陽性。在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)飽和鹽水漂浮法能夠漂浮大多數(shù)蟲卵，包括蛔蟲、絳蟲、鉤蟲、狐毛首線蟲、球蟲，黃占欣等[12]、楊建發(fā)等[13]也運(yùn)用飽和鹽水漂浮法檢查蟲卵取得了不錯(cuò)的效果。水洗沉淀法主要檢查糞便中比飽和鹽水比重大的蟲卵和蟲體。犬滴蟲較難發(fā)現(xiàn)，與犬滴蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)有關(guān)，檢查時(shí)需要將新鮮的糞便用生理鹽水或蒸餾水稀釋后觀察，不可用飽和鹽水漂浮法進(jìn)行檢測，可能因?yàn)轱柡望}水能使蟲體脫水失活，喪失運(yùn)動型，從而容易漏檢[14]。本調(diào)查中每份糞便樣品都采用3種方法檢測，提高了檢出率，降低了試驗(yàn)誤差，使調(diào)查結(jié)果更有可靠性。

由于市面上蛔蟲ELISA檢測試劑盒較成熟，即對180份樣本進(jìn)行蛔蟲快速ELISA試劑盒檢測。根據(jù)A組樣本檢測結(jié)果，47份糞檢陽性樣本在ELISA檢測中顯示全部陽性，說明本試劑盒可信度較高，對犬蛔蟲的診斷具有一定的價(jià)值；而在A組和B組的糞檢陰性樣本中出現(xiàn)ELISA檢測陽性，顯示在糞檢過程中由于各種因素影響而存在漏檢現(xiàn)象[15]。犬蛔蟲抗原ELISA試劑盒操作簡便、準(zhǔn)確率較高，在臨床診斷中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

3.2 不同地區(qū)寵物犬腸道寄生蟲感染情況的差異

通過對蘭州市寵物犬腸道寄生蟲感染情況的調(diào)查，結(jié)果顯示其優(yōu)勢蟲種為犬蛔蟲，感染率為9.20%，犬鉤蟲和狐毛首線蟲感染率較低。主要感染的原蟲有球蟲和滴蟲，其中以球蟲感染為主，犬滴蟲感染率較低，可能與犬滴蟲漏檢率高有關(guān)[16]。據(jù)盧旺銀等[17]于2008年6月-2009年5月調(diào)查顯示，蘭州市寵物犬消化道蠕蟲感染率為18.75%，優(yōu)勢蟲種為犬蛔蟲，感染率13.81%。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)蘭州市的優(yōu)勢蟲種與之相符，但感染率有所降低，可能與近年來加強(qiáng)了對寵物犬寄生蟲的防治有關(guān)。在蘭州市4個(gè)區(qū)中，城關(guān)區(qū)的寄生蟲感染率最低，可能與近幾年城關(guān)區(qū)實(shí)施的文明養(yǎng)犬的政策有關(guān)；七里河區(qū)和安寧區(qū)的感染率相近，西固區(qū)寵物犬的感染率最高，達(dá)到23.85%，可能與西固區(qū)的飼養(yǎng)環(huán)境[18]及寵主的驅(qū)蟲意識差有一定的關(guān)系。

3.3 不同年齡對寄生蟲感染的影響

在本次調(diào)查中，5月以下的幼犬感染率最高，大于12月齡的成犬感染率較低，可能因?yàn)橛兹牡挚沽Φ拖?，容易被寄生蟲侵襲[19]，而成犬抵抗力強(qiáng)，寄生蟲感染后呈體內(nèi)帶蟲或隱性感染的現(xiàn)象[20]。有些寄生蟲，如蛔蟲，鉤蟲等可經(jīng)垂直傳播傳染給幼犬[11]，從而大大增加了幼犬的感染率。犬絳蟲在成犬的感染率較高，為6.56%，有資料顯示，寵主飼喂被絳蟲感染的生肉[21]，或在被蟲卵、孕節(jié)污染的環(huán)境中牽遛更容易導(dǎo)致愛寵感染絳蟲[22]。綜上，在同樣的生活條件下幼犬的感染率要明顯高于成犬，所以應(yīng)該逐漸完善寵物犬驅(qū)蟲體系，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理及宣傳，降低幼犬的感染率。

3.4 不同飼養(yǎng)條件對寄生蟲感染的影響

在本次調(diào)查中，共采集寵物犬繁殖場、寵物店、寵物醫(yī)院(主要為家養(yǎng)寵物犬)等3個(gè)場所的樣本，通過寄生蟲的感染率來研究犬消化道寄生蟲與飼養(yǎng)環(huán)境的關(guān)系。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，寵物繁殖場的設(shè)施設(shè)備差，飼養(yǎng)群體密集，沒有基本免疫程序，為降低成本，用最廉價(jià)的食物飼養(yǎng)狗，這樣的條件更容易感染寄生蟲，所以寵物繁殖場的寄生蟲感染率居高不下。寵物店的蛔蟲感染率較家養(yǎng)寵物高，可能是寵物店飼養(yǎng)密度較高，存在交叉?zhèn)魅?，且?qū)蟲不科學(xué)所致；而家養(yǎng)寵物犬的絳蟲，及狐毛首線蟲感染率較寵物店高，可能與寵物主人給寵物犬喂食生肉有關(guān)[23]，或?qū)欀鲝木W(wǎng)上訂購寵物犬，使寄生蟲高感染地區(qū)的犬只流通到蘭州市。調(diào)查結(jié)果說明，寵物犬寄生蟲的感染情況和飼養(yǎng)環(huán)境有很大的聯(lián)系，干凈、衛(wèi)生、科學(xué)的飼養(yǎng)環(huán)境能夠更有效降低寄生蟲的感染率，所以寵物犬飼養(yǎng)過程中應(yīng)該重點(diǎn)加強(qiáng)飼養(yǎng)環(huán)境管理。

4 防治建議

人畜共患寄生蟲不僅會影響犬只的健康，而且會對人類產(chǎn)生危害，如犬蛔蟲和華支睪吸蟲等[24]。如今，寵物犬和人類的關(guān)系越來越密切，人感染人獸共患寄生蟲病的風(fēng)險(xiǎn)也越來越高。在本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的人獸共患寄生蟲有犬蛔蟲(弓首蛔蟲、獅弓蛔蟲)、復(fù)孔絳蟲、鉤蟲，滴蟲等。犬蛔蟲在蘭州市感染率最高，所以在寄生蟲的防治過程中，應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)犬蛔蟲的驅(qū)蟲次數(shù)及強(qiáng)度，目前，市場上對犬蛔蟲作用較好的獸藥有拜寵清、伊維菌素[25]、奧芬達(dá)唑干混懸劑[26]等。犬類主要通過消化道感染絳蟲，因此，在定期驅(qū)蟲的同時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)衛(wèi)生管理，對犬舍、食具定期消毒，注意對其進(jìn)行科學(xué)、合理的飼喂，忌吃生肉，不干凈的食物，降低愛犬從消化道感染的風(fēng)險(xiǎn)。寵物犬感染寄生蟲之后，要迅速帶去寵物醫(yī)院進(jìn)行治療，并對犬舍環(huán)境徹底消毒，將犬糞、污染物進(jìn)行無害化處理，防止二次感染。