陸地棉GhCSN6A基因克隆及低磷脅迫下的表達(dá)

卿桂霞，耿翡翡，梁穎穎，周俊江，張富厚，孟超敏*

(1 河南科技大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，河南洛陽(yáng) 471000；2 洛陽(yáng)市作物遺傳改良與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南洛陽(yáng) 471000)

COP9信號(hào)復(fù)合體(constitutively photomorphogennic signalosome，CSN)是一種進(jìn)化上保守的多亞基蛋白復(fù)合體，參與動(dòng)植物的許多生理過程，包括蛋白質(zhì)降解、DNA損傷反應(yīng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[1]。主要在泛素蛋白酶體通路(ubiquitin proteasome system，UPS)中發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用[2]，UPS是蛋白質(zhì)進(jìn)行高效特異性降解的主要途徑，其過程為目標(biāo)蛋白首先被泛素三酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)，然后對(duì)靶蛋白進(jìn)行泛素化修飾，最后由26S蛋白酶體催化將其降解[3-4]。在高等真核生物中典型的CSN蛋白由8個(gè)不同亞基構(gòu)成，它們被命名為CSN1-CSN8，通常包含2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，分別是MPN和PCI[5]。其中CSN5和CSN6包含MPN結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是由3條α螺旋和9條β線纏繞成β片層組成，具有識(shí)別信號(hào)因子，激活下游活動(dòng)，調(diào)控生物學(xué)等主要功能[6-7]。COP9信號(hào)復(fù)合體亞基已從多種生物中克隆并分析，而且發(fā)現(xiàn)CSN在植物抵御逆境中具有重要作用。通過研究部分功能喪失突變體VTC1-1的CSN5B雙突變擬南芥，發(fā)現(xiàn)CSN5B通過26S蛋白酶體途徑降解GDP-甘露糖焦磷酸化酶(VTC1)，使植物抵抗非生物脅迫的關(guān)鍵因子抗壞血酸(AsA)含量升高，從而增強(qiáng)植物對(duì)環(huán)境脅迫的耐受性[8]；利用基因芯片技術(shù)篩選出缺鐵條件下的基因，并對(duì)水稻CSN6基因進(jìn)行缺鐵脅迫表達(dá)模式分析，發(fā)現(xiàn)水稻CSN6基因能夠應(yīng)答缺鐵脅迫[9]。

棉花是中國(guó)當(dāng)今最主要發(fā)展的經(jīng)濟(jì)作物之一，其種植產(chǎn)業(yè)在整個(gè)世界上始終處于領(lǐng)先地位，創(chuàng)造的經(jīng)濟(jì)效益在中國(guó)國(guó)民人均生產(chǎn)要素總值中具有重要意義[10-11]。但是由于棉花吸收利用的磷素在土壤中主要以磷酸根的形式存在，土壤中的磷酸根極其容易被金屬陽(yáng)離子和礦物質(zhì)吸附固定或轉(zhuǎn)化成有機(jī)磷而不能成為有效磷，因此土壤有效磷的供應(yīng)情況和棉花吸收磷素的能力是使棉花免遭受低磷脅迫危害，降低低磷脅迫給棉花生長(zhǎng)、纖維品質(zhì)和產(chǎn)量造成影響的關(guān)鍵因素[12-13]。在低磷環(huán)境下，植物經(jīng)過長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中會(huì)形成一系列的應(yīng)答機(jī)制來調(diào)節(jié)其生理生化反應(yīng)來應(yīng)對(duì)低磷脅迫[14-16],從而減少缺磷對(duì)自身的傷害。因此，可以通過克隆棉花應(yīng)答低磷脅迫過程中的關(guān)鍵基因，解析其脅迫響應(yīng)及作用機(jī)制，從而來提高棉花對(duì)磷的利用效率。

本研究在前期利用基因芯片技術(shù)篩選出適磷與低磷脅迫下的高差異表達(dá)序列ES816317和陸地棉基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，以磷高效棉花品種陸地棉‘新陸早19’(Gossypiumhirsutum‘Xinluzao 19’)為材料進(jìn)行基因克隆，并對(duì)該基因在不同組織及根系低磷脅迫下的相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行分析，為深入研究棉花GhCSN6A的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)，以期為棉花磷高效基因工程育種提供基因資源。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料及處理

選取自交留種中籽粒飽滿的‘新陸早19’種子用 70%酒精殺菌 30 min，沖洗干凈后泡種 24 h 至棉花露白，分別播種于沙土中和河南科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗(yàn)田。沙土中的棉花在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)至四葉期左右用以植株總RNA的提取。在試驗(yàn)田棉花花鈴期取根、莖、葉、花等4個(gè)組織迅速放入液氮中備用。

將棉花種子播種于含干凈濕潤(rùn)細(xì)沙的塑料盆內(nèi)，28 ℃恒溫培養(yǎng)箱(光照14 h、黑暗10 h)培養(yǎng)至棉苗三葉期，選擇長(zhǎng)勢(shì)良好且一致的幼苗移至水培盆中，用 1/2 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)1周后分為2個(gè)處理水平，即適磷處理(SP，1.0 mmol/L)和低磷處理(LP，0.01 mmol/L)，磷源采用KH2PO4，為保證K+的濃度一致，以1.0 mmol/L為標(biāo)準(zhǔn)，低磷營(yíng)養(yǎng)液中以KCl補(bǔ)齊K+，其他營(yíng)養(yǎng)成分含有2 mmol/L Ca(NO3)2·4H2O、2.5 mmol/L KNO3、0.5 mmol/L NH4NO3、1.4 mmol/L MgSO4·7H2O、1 μmol/L ZnSO4·7H2O、1 μmol/L MnSO4·H2O、0.1 μmol/L CuSO4·5H2O、0.01 mmol/L H3BO3、0.005 μmol/L (NH4)6Mo7O24·4H2O、0.1 mmol/L EDTA-FeNa[17]。分別處理0、4、12、24和72 h后，選取3株生長(zhǎng)一致的棉花植株，并混合取其根部組織，然后迅速置于液氮中，-80 ℃保存?zhèn)溆?。每日調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)液 pH，使其保持在 6.5 左右，每3 d更換1次營(yíng)養(yǎng)液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 低磷脅迫差異表達(dá)序列延伸利用基因芯片技術(shù)篩選得到‘新陸早19’在低磷和適磷2種不同處理下差異表達(dá)序列ES816317，以ES816317為探針在NCBI網(wǎng)站的EST數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索其相似序列，并利用DNASTAR的Seqman將所得到的相似序列(覆蓋率>50%，相似度>85%)進(jìn)行拼接得到其重疊群，后續(xù)以所得拼接序列為探針繼續(xù)檢索與拼接，直至沒有新的相似序列出現(xiàn)，其所得才為結(jié)果序列，利用ORFfinder在線平臺(tái)查找開放閱讀框，并對(duì)目的基因進(jìn)行克隆與分析。

1.2.2 陸地棉基因組DNA的提取取液氮速凍‘新陸早19’完整植株，迅速將其研磨成粉末轉(zhuǎn)移至離心管，然后利用CTAB法提取陸地棉‘新陸早19’的基因組DNA，并以1%的瓊脂糖凝膠對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，最后-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 總RNA提取及cDNA合成按照天根RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒說明書提取棉株總RNA，然后利用超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度，并用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性。若RNA的質(zhì)量符合要求，則根據(jù)HiScript?Ⅱ1st Strand cDNA Synthesis Kit cDNA第一鏈合成試劑盒說明書將所提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 基因克隆與測(cè)序根據(jù)拼接所得到的GhCSN6A基因序列信息，利用軟件Primer 5.0設(shè)計(jì)其ORF上、下游引物(表1)，并分別以陸地棉‘新陸早19’的DNA及cDNA為擴(kuò)增模板，進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增，再以1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)。將目的條帶的PCR產(chǎn)物與TOPO-T載體進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化、菌液PCR檢測(cè)，然后目標(biāo)條帶的菌液送至上海生工生物有限公司測(cè)序，并保留一些菌液。

1.2.5 生物信息學(xué)分析采用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的blastn和blastp分析GhCSN6A基因的核苷酸序列及編碼氨基酸序列的同源性，并使用DNAMAN對(duì)GhCSN6A與同源蛋白序列多重比對(duì)，使用在線工具ProtParam預(yù)測(cè)GhCSN6A蛋白的各種理化性質(zhì)[18]；利用SOPMA對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)。利用SWISS-MODEL和CD-Search分別對(duì)GhCSN6A蛋白進(jìn)行三維結(jié)構(gòu)同源建模和功能結(jié)構(gòu)域的分析。使用SingalP 3.0和TMHMM 2.0分別預(yù)測(cè)其信號(hào)肽和跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域；其磷化位點(diǎn)和亞細(xì)胞定位分別由NetPhos3.1 Server和Plant-mPLoc進(jìn)行預(yù)測(cè)。利用MEGA 5.0的鄰接法(neighbor-joining method)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

1.2.6GhCSN6A表達(dá)的qRT-PCR基于GhCSN6A基因全長(zhǎng)序列及保守域的分析，使用 Primer5.0設(shè)計(jì)熒光定量 PCR 引物(表1)，GhActin作為內(nèi)參基因。反應(yīng)體系按照SYBR?Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit試劑盒說明配制，使用熒光定量PCR儀型號(hào)為CFX96，采用2-ΔΔCt算法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量，利用Origin 9.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并作圖。

表1 實(shí)驗(yàn)所用引物Table 1 Application of primers in the experiment

2 結(jié)果與分析

2.1 低磷脅迫差異表達(dá)序列延伸

通過BLAST檢索陸地棉EST數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得ES816317相似的陸地棉ESTs，采用電子延伸的方法進(jìn)行最大程度的序列延伸。然后利用NCBI上的ORF finder進(jìn)行查找，發(fā)現(xiàn)拼接得到的序列全長(zhǎng)為1 814 bp，開放閱讀框?yàn)?8～1 035共948 bp，編碼315 個(gè)氨基酸。通過blastn及blastp檢索全長(zhǎng)序列，將該基因命名為GhCSN6A。

2.2 基因克隆與序列分析

以‘新陸早19’的基因組DNA為模板，GhCSN6A-1F和GhCSN6A-1R及GhCSN6A-2F和GhCSN6A-2R兩對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到的擴(kuò)增產(chǎn)物如圖1的第1、2條帶，分別約為1 650 bp和1 780 bp，以‘新陸早19’總RNA反轉(zhuǎn)得到的cDNA為模板，GhCSN6A-F和GhCSN6A-R為引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到的產(chǎn)物如圖1的第3條帶，約1 190 bp。利用在線工具GSDS對(duì)分別以DNA和cDNA為模板擴(kuò)增得到的已拼接的序列進(jìn)行分析，可發(fā)現(xiàn)該基因含有9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子(圖2)。

圖2 GhCSN6A基因結(jié)構(gòu)分析Fig.2 Analysis of GhCSN6A gene structure

2.3 GhCSN6A蛋白理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)分析

陸地棉GhCSN6A蛋白分子式為C1582H2491N435O471S11，相對(duì)分子量為35.49 kD，含32個(gè)酸性氨基酸(Asp+Glu)、30個(gè)堿性氨基酸(Arg+Lys)，理論等電點(diǎn)為6.70，疏水性總平均值為-0.217，不穩(wěn)定系數(shù)為46.49，屬于親水性不穩(wěn)定蛋白。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)表明，其二級(jí)結(jié)構(gòu)由α-螺旋(alpha helix，44.13%)、無規(guī)則卷曲 (random coil，38.10%)、延伸鏈(extended strand，15.87%)和β-折疊(Beta turn，1.90%)組成。GhCSN6A蛋白三維結(jié)構(gòu)同源建模顯示，該蛋白包含COP9 信號(hào)體復(fù)合亞基 6，即COP9 信號(hào)體的晶體結(jié)構(gòu)。利用CD-Search對(duì)GhCSN6A蛋白功能結(jié)構(gòu)域進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)GhCSN6A蛋白屬于MPN或MOV34超家族，具有MPN_CSN6結(jié)構(gòu)域，是 COP9 信號(hào)體的 8 個(gè)亞基之一，與三級(jí)結(jié)構(gòu)得到的結(jié)果一致。TMHMM 2.0預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，GhCSN6A蛋白無跨膜螺旋結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽。SignalP 3.0信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果與TMHMM預(yù)測(cè)結(jié)果相同，即該蛋白無信號(hào)肽。NetPhos 3.1 Server預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，GhCSN6A蛋白含有36個(gè)能被磷酸化的位點(diǎn)(超過閾值線)，其中包括Ser位點(diǎn)20個(gè)、Thr位點(diǎn)11個(gè)和Tyr位點(diǎn)5個(gè)，主要被unsp、PKC和cdc2等蛋白激酶磷酸化。GhCSN6A蛋白亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)，該蛋白定位于細(xì)胞核。

M.DL2000；1-2.DNA；3.cDNA圖1 GhCSN6A的PCR擴(kuò)增Fig.1 PCR amplification of GhCSN6A

2.4 GhCSN6A蛋白的同源比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

以GhCSN6A蛋白與擬南芥的10個(gè)AtCSN蛋白構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，結(jié)果(圖3)顯示，GhCSN6A蛋白與擬南芥CSN6家族聚為一類，其中，與AtCSN6A蛋白相似性最高。從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)下載CSN6A的同源蛋白氨基酸序列，并利用DNAMAN 對(duì)陸地棉與擬南芥(Arabidopsisthaliana)、煙草(Nicotianaattenuata)、木槿(Hibiscussyriacus)的CSN6A蛋白序列進(jìn)行多重序列比對(duì)，結(jié)果(圖4)顯示，蛋白序列的一致性達(dá)到90.93%，由此可得MPN_CSN6結(jié)構(gòu)域有一定的保守性。用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中BLASTp對(duì)GhCSN6A基因進(jìn)行同源比對(duì)，結(jié)果顯示該基因與木槿CSN6A基因的相似性最高，達(dá)95.87%，與哥倫比亞錦葵(Herraniaumbratica)CSN6A基因和榴蓮(Duriozibethinus)CSN6A基因的相似性均達(dá)93%。利用MEGA5對(duì)GhCSN6A和其他植物的CSN6A蛋白進(jìn)行構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，結(jié)果(圖5)表明，不同物種的GhCSN6A蛋白分為2大分支，其中陸地棉GhCSN6A與在同一分支上的澳洲棉CSN6A、木槿CSN6A、榴蓮CSN6A和哥倫比亞錦葵CSN6A親緣關(guān)系較近。

圖3 基于GhCSN6A與擬南芥AtCSN蛋白氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.3 Phylogenetic tree constructed based on amino acid sequences of GhCSN6A and Arabidopsis thaliana AtCSN protein

AtCSN6A.擬南芥；NaCSN6A.煙草；HsCSN6A.木槿；GhCSN6A.陸地棉圖4 GhCSN6A蛋白與同源蛋白氨基酸序列的多重比對(duì)結(jié)果AtCSN6A.Arabidopsis thaliana；NaCSN6A.Nicotiana attenuata；HsCSN6A.Hibiscus syriacus；GhCSN6A.Gossypium hirsutum L.Fig.4 Multiple alignment results of amino acid sequences between GhCSN6A protein and homologous proteins

圖5 基于GhCSN6A與其他植物的CSN6A蛋白氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.5 Phylogenetic tree constructed based on amino acid sequences of GhCSN6A and CSN6A proteins in other plants

2.5 GhCSN6A基因在不同組織及根部低磷脅迫處理的表達(dá)模式分析

以棉花的GhActin為內(nèi)參基因，利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)GhCSN6A基因在根、莖、葉和花等4個(gè)組織中的表達(dá)情況，結(jié)果(圖6)顯示，GhCSN6A基因在根、莖、葉和花中均有表達(dá)，在葉中的表達(dá)量最高，顯著高于花與莖中的表達(dá)量，其次是在根中的表達(dá)量較高，與莖中的表達(dá)量無顯著差異，在花中的表達(dá)量最低(P<0.05)。對(duì)陸地棉整株植物進(jìn)行低磷脅迫，以不同處理時(shí)間的陸地棉根部組織為材料進(jìn)行qRT-PCR，分析GhCSN6A基因響應(yīng)低磷脅迫的情況。結(jié)果(圖7)表明，低磷處理0、4、12和24 h該基因的表達(dá)量比同期適磷處理的表達(dá)量低，低磷處理72 h時(shí)其表達(dá)量比適磷處理72 h的表達(dá)量高，是適磷處理的2倍。GhCSN6A基因在低磷脅迫0～72 h的總體變化趨勢(shì)為：相對(duì)表達(dá)量在0～4 h內(nèi)上調(diào)，在4～24 h從一個(gè)較高的水平(4 h)降落到一個(gè)最低水平(24 h)，然后在72 h時(shí)又上升到最高水平。

不同字母表示在0.05水平差異顯著(P<0.05)圖6 GhCSN6A基因在不同組織的相對(duì)表達(dá)分析Different letters indicate significant differences at 0.05 level (P<0.05)Fig.6 The relative expression of GhCSN6A gene in different tissues

3 討 論

COP9復(fù)合信號(hào)體在進(jìn)化過程中是一種高度保守的蛋白復(fù)合物[19]。其中擬南芥COP9信號(hào)體的亞基6由一個(gè)家族的2個(gè)基因CSN6A和CSN6B編碼，其蛋白具有87%的氨基酸相似，并在N端區(qū)域包含MPR1p和PAD1p N端(MPN)結(jié)構(gòu)域。CSN6蛋白與CSN5具有相似性，均屬于Mov34蛋白超家族[20-22]。本研究克隆的GhCSN6A基因編碼的蛋白含有MPN結(jié)構(gòu)域，屬于Mov34蛋白超家族，與擬南芥、煙草、木槿的CSN6A蛋白序列相似性達(dá)90.93%，說明其在進(jìn)化過程中具有一定的保守性。Gusmaroli等[23]發(fā)現(xiàn)，在擬南芥中，MPN結(jié)構(gòu)域控制著CSN復(fù)臺(tái)體的組裝、復(fù)合體的穩(wěn)定性及活性，并且還調(diào)控著一種泛素連接酶的穩(wěn)定性。陸地棉GhCSN6A和擬南芥AtCSN6A蛋白具有相似的結(jié)構(gòu)域，可能具有相似的功能。

*表示同期適磷與低磷處理間存在顯著差異(P<0.05)圖7 GhCSN6A基因在根部低磷脅迫不同時(shí)間的表達(dá)模式* indicates significant difference between suitable and low phosphorus treatment at 0.05 level.Fig.7 The relative expression analysis of GhCSN6A gene with low phosphorus treatment at different time points in roots

COP9信號(hào)復(fù)合體亞基已從多種生物中被克隆分析，其功能也被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，主要參與植物激素信號(hào)傳導(dǎo)、逆境脅迫應(yīng)答、次生代謝活動(dòng)等[24]。黃瓜綠斑駁花葉病毒CGMMV侵染黃瓜苗后，CsCSN5b基因表達(dá)量逐漸上升，說明該基因參與了病毒脅迫的應(yīng)答機(jī)制響應(yīng)CGMMV感染脅迫[25]；CSN6參與水稻缺鐵的早期反應(yīng)，在缺鐵的早期，由于CSN6和CSN活性的下調(diào)，IDEF1在水稻中積累。IDEF1蛋白的積累有助于通過增加水稻中鐵吸收/利用相關(guān)基因的表達(dá)水平來克服缺鐵脅迫[26]。本研究發(fā)現(xiàn)該基因在‘新陸早19’葉中的表達(dá)量最高，根、莖次之，在花中表達(dá)量最低。王彥平等[27]發(fā)現(xiàn)低磷脅迫下棉花的生長(zhǎng)素在根、莖、葉的含量變化明顯，尤其是葉中的含量變化最大。Stuttmann和Schwechheimer等[28-29]發(fā)現(xiàn)CSN與SCFTIRI互作參與植物生長(zhǎng)素信號(hào)途徑。本研究低磷脅迫處理下的表達(dá)模式結(jié)果表明，在4～24 h這個(gè)時(shí)間段里，該基因的表達(dá)量從一個(gè)較高的水平(4 h)到一個(gè)最低水平(24 h)，然后又上升到最高水平(72 h)，其趨勢(shì)符合植物響應(yīng)低磷脅迫反應(yīng)的典型過程[9]。因?yàn)镃OP9復(fù)合體是作為一個(gè)整體的形式發(fā)揮作用的，通過與泛素系統(tǒng)相互作用來調(diào)控一系列的生物學(xué)功能。也就是說，生物體內(nèi)的許多功能與泛素及COP9復(fù)合體有關(guān)。所以可以推測(cè)：在低磷脅迫的早期，生物體的功能會(huì)呈現(xiàn)出一種紊亂的狀態(tài)，導(dǎo)致很多功能被抑制，所以與這些功能相關(guān)的分子，如泛素、COP9復(fù)合體，也會(huì)受到相應(yīng)的影響，因此表達(dá)量會(huì)明顯下降；但是當(dāng)植物開始啟動(dòng)低磷脅迫響應(yīng)時(shí)，相應(yīng)的基因就會(huì)得到表達(dá)，從而要啟動(dòng)特殊的轉(zhuǎn)錄與調(diào)控機(jī)制，其中就包括COP9復(fù)合體在內(nèi)的一些具有重要調(diào)控功能的基因就會(huì)加強(qiáng)表達(dá)，這個(gè)加強(qiáng)表達(dá)的時(shí)間就可能在72 h左右。因此，根據(jù)低磷脅迫表達(dá)模式的結(jié)果可推測(cè)：在72 h以后，COP9復(fù)合體的表達(dá)量明顯大于4～24 h，說明植物在72 h左右的時(shí)候已經(jīng)進(jìn)入一種響應(yīng)低磷脅迫且相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。在這個(gè)狀態(tài)之中，有很多基因需要受到特異性的轉(zhuǎn)錄或表達(dá)調(diào)控，從而應(yīng)答低磷脅迫。

依據(jù)該基因的組織表達(dá)分析及根部低磷處理不同時(shí)間的表達(dá)模式分析結(jié)果，推測(cè)陸地棉GhCSN6A基因在調(diào)控低磷脅迫方面具有重要作用。但是GhCSN6A基因作為COP9信號(hào)復(fù)合體亞基之一，其具體的生物學(xué)功能及在植物應(yīng)答低磷脅迫的調(diào)控機(jī)制仍需深入研究。后續(xù)將通過酵母雜交、VIGS和轉(zhuǎn)基因等功能驗(yàn)證手段分析GhCSN6A基因如何在低磷脅迫中發(fā)揮作用，并觀察植株在低磷脅迫下的表現(xiàn)，從而揭示GhCSN6A基因在植物應(yīng)答低磷脅迫的調(diào)控機(jī)制。