擁擠脅迫對銀鯧幼魚生長及消化酶活性的影響

孔煜夫，張曉東，周 彬，王丹麗，王亞軍,2，徐善良,2

(1.寧波大學(xué) 海洋學(xué)院，浙江 寧波 315211； 2.水產(chǎn)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(寧波大學(xué))，浙江 寧波 315211)

銀鯧(Pampusargenteus)隸屬于鱸形目(Perciformes)，鯧科(Stromateidae)，鯧屬(Pampus)，屬暖水性中上層集群性經(jīng)濟(jì)魚類。主要分布于中國、日本等亞洲海域，科威特、伊拉克海域的阿拉伯灣及印度孟加拉灣等印度洋和西太平洋[1]。但是近20年來，由于過度捕撈以及海洋環(huán)境的污染，使銀鯧的野生資源受到了極大的破壞，其野生資源量日漸減少。為保護(hù)銀鯧的種質(zhì)資源，國內(nèi)外學(xué)者對銀鯧的人工繁育、養(yǎng)殖進(jìn)行了諸多研究[2-6]。

隨著銀鯧人工育苗、養(yǎng)殖等一系列技術(shù)的突破，銀鯧已成功實(shí)現(xiàn)人工養(yǎng)殖并逐步走向規(guī)?；B(yǎng)殖。養(yǎng)殖密度是決定養(yǎng)殖魚類生長速度、產(chǎn)量和效益的主要因素之一，在大規(guī)模的集約化生產(chǎn)中往往通過增加養(yǎng)殖密度的方式來增加單位面積產(chǎn)量。然而，高密度的養(yǎng)殖會引起殘餌和代謝廢物的增加，導(dǎo)致水質(zhì)惡化、水中有害物質(zhì)含量增加等現(xiàn)象，這將對魚類產(chǎn)生擁擠脅迫，常表現(xiàn)為魚類對飼料的利用率降低、生長發(fā)育遲緩、免疫力降低等。高密度的養(yǎng)殖在帶來較高經(jīng)濟(jì)效益的同時往往也增加了風(fēng)險[7-10]。近年來，關(guān)于擁擠脅迫對魚類生理與生長影響的報道較少，大多集中在饑餓、溫度、鹽度等方面[11-15]。消化酶作為動物體內(nèi)的重要酶類，其活性的高低除反映動物消化能力的強(qiáng)弱外，還可以直接或間接地影響著魚類的生長[16]。喬瑋等[17]在進(jìn)行大菱鲆(Scophthalmusmaximus)密度養(yǎng)殖試驗(yàn)時發(fā)現(xiàn)，飼養(yǎng)密度對大菱鲆的消化酶活性有著顯著的影響，高密度飼養(yǎng)產(chǎn)生的擁擠脅迫抑制了大菱鲆的生長，使得高密度組的大菱鲆增重率和特定生長率顯著低于中、低兩個密度組。鄧超準(zhǔn)[18]在研究擁擠脅迫對星洲紅魚的影響時也同樣發(fā)現(xiàn)，過高的飼養(yǎng)密度對其消化酶及生長性能有著顯著影響。

因此，為探究不同密度下銀鯧生長性能及消化酶活性的變化，本試驗(yàn)設(shè)置了3個密度梯度組(30、60 ind/m3和90 ind/m3)，測定分析不同密度下銀鯧腸、胃組織中的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶活性的時空變化，從酶活性角度分析不同養(yǎng)殖密度對銀鯧產(chǎn)生的脅迫影響；同時，測定不同密度條件下40 d后銀鯧的特定生長率和增重率，分析不同密度對銀鯧生長的影響。試驗(yàn)結(jié)果將作為優(yōu)化銀鯧幼魚養(yǎng)殖密度的指標(biāo)，為大規(guī)模養(yǎng)殖銀鯧提供理論參考，提高養(yǎng)殖整體經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)在寧波大學(xué)梅山校區(qū)中試基地銀鯧養(yǎng)殖中心進(jìn)行，試驗(yàn)用魚為人工培育的銀鯧幼魚，養(yǎng)殖密度為20 ind/m3。從同一池中選取健康活潑、同一批次培育的大小規(guī)格相近的個體810尾，平均體質(zhì)量3.88±0.72 g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計

采用有效水體1 m3的PVC圓桶進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)分成3個密度處理組，分別為低密度組(30 ind/m3)、中密度組(60 ind/m3)、高密度組(90 ind/m3)，每組三個平行。試驗(yàn)周期為40 d，試驗(yàn)期間連續(xù)充氣，避光養(yǎng)殖，對三個密度組的水質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，盡量使水質(zhì)保持一致。所選用的飼料為自制的黏性團(tuán)狀飼料(日本產(chǎn)“魚寶”牌飼料+新鮮魚肉糜+海蜇的混合料)，置于水中間的餌料臺內(nèi)。為保證營養(yǎng)不溶失，每隔2～3 h更換飼料。海水鹽度24‰～26‰，pH值為7.9～8.1，水溫(28±1)℃，溶解氧(DO)含量>7 mg·L-1。

1.3 樣品采集及保存辦法

在試驗(yàn)開始后的第0、5、10、20 d和40 d分別進(jìn)行取樣。取大小相近，活力較好，健康的幼魚進(jìn)行試驗(yàn)，每次每個處理組各取6尾(每個平行取2尾)，取樣后及時減少桶內(nèi)水體積，以保持相應(yīng)的密度。將取出的活魚立即用MS-222麻醉，分別稱量體質(zhì)量和體長并記錄，然后將魚置于冰盤上快速解剖，取部分腸、胃置于-80 ℃冷凍保存。

1.4 測定方法

1.4.1 生長指標(biāo)計算

增重率(WG, 單位: %)和特定生長率(SGR, 單位: %)計算公式如下:

WG=100×(mt-m0)/m0

(1)

SGR=100×(lnmt-lnm0)/t

(2)

式中:m0為試驗(yàn)開始時試驗(yàn)魚的初始平均體質(zhì)量，g；mt為結(jié)束時試驗(yàn)魚的初始平均體質(zhì)量， g；t為試驗(yàn)天數(shù)，d。

1.4.2 蛋白濃度的測定-BCA法 采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的總蛋白定量測定試劑盒，組織中蛋白濃度采用BCA法測定，將20 μL待測液加入樣品孔，再加入200 μL BCA工作液，37 ℃恒溫箱保溫20～30 min，用分光光度計在562 nm波長下測定各孔吸光值。

1.4.3 銀鯧胃組織中胃蛋白酶酶活性的測定

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10 %的勻漿。將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測定。酶活力測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的胃蛋白酶測定試劑盒，依次添加試劑，最終在室溫下用紫外分光光度計在660 nm處測量吸光度。胃蛋白酶酶活力定義：每毫克組織蛋白在37 ℃條件下每分鐘分解蛋白質(zhì)生成1 μg氨基酸相當(dāng)于1個酶活力單位。

計算公式：胃蛋白酶活力(U/mg)=(測定管OD值-對照管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD 值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(50 μg/mL)/反應(yīng)時間(10 min)×反應(yīng)液總體積(0.64 mL)/取樣量(0.04 mL)/待測樣本蛋白濃度(mg/mL)。

1.4.4 銀鯧胰臟組織中胰蛋白酶活性的測定

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10 %的組織勻漿，將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測定。酶活力測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的胰蛋白酶測定試劑盒，將0.015 mL待測樣品和1.5 mL胰蛋白酶底物應(yīng)用液快速混勻，室溫下用紫外分光光度計在253 nm處測量吸光度。胰蛋白酶酶活力定義：在pH值為8.0，溫度為37 ℃條件下，每毫克蛋白質(zhì)中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為一個酶活力單位。

計算公式：胰蛋白酶活性(U/mg)=[(測定管A2-測定管A1)-(空白管A2-空白管A1)]/20 min/0.003×反應(yīng)液總體積(1.5 mL+0.015 mL)/樣本取樣量(0.015 mL)/[樣本中蛋白濃度(mg/mL)×樣本取樣量(0.015 mL)]。

1.4.5 淀粉酶活力的測定

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10 %的組織勻漿，將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測定。酶活力測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的α-淀粉酶(AMS)測試盒，將0.5 mL底物緩沖液和0.1 mL待測樣品混合，之后依次加入碘應(yīng)用液和雙蒸水，室溫下用酶標(biāo)儀在660 nm處測量吸光度。淀粉酶酶活力定義：組織中每毫克蛋白質(zhì)在37 ℃條件下與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個淀粉酶活力單位。

計算公式：淀粉酶活力(U/mg)=(空白管OD值-測定管OD值)/空白OD值×0.4×0.5/10×30 min/7.5 min/[取樣量(0.1 mL)×待測樣本蛋白濃度(mg/mL)。

1.4.6 脂肪酶活性的測定 準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶4的比例加入4倍體積的生理鹽水(自配)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成20 %的組織勻漿，將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測定。酶活力測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的脂肪酶(LPS)測定試劑盒，將2 mL底物緩沖液和25 μL 20 %組織勻漿混合，加入25 μL試劑四，室溫下用酶標(biāo)儀在420 nm處測量吸光度。脂肪酶酶活力定義：在溫度為37 ℃下，每克組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為一個酶活力單位。

計算公式：脂肪酶活力(U/g)=(A1-A2)/AS×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(454 μmol/L)×反應(yīng)液總體積(2.05 mL)/取樣量(0.025 mL)/反應(yīng)時間(10 min)/待測樣本蛋白濃度(g/L)。

式中：A1為樣本待測溶液在石英比色皿中，波長為420 nm下，準(zhǔn)確計時30 s時讀取的吸光值；A2為樣本待測溶液在37 ℃水浴鍋中水浴10 min后倒回比色皿中，波長420 nm處，計時30 s時讀取的吸光值；As為2 mL底物緩沖液和50 μL生理鹽水充分混合后，在波長為420 nm處測量吸光值。

1.4.7 數(shù)據(jù)的處理與統(tǒng)計分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。所測數(shù)據(jù)采用“SPSS version 19.0”軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)；統(tǒng)計間若有顯著差異，再用Duncan法進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 養(yǎng)殖密度對銀鯧生長的影響

3個密度組銀鯧幼魚的增重率、特定生長率如圖1、圖2所示。中密度組(60 ind/m3)銀鯧幼魚的增重率與特定生長率分別為(235.19±10.23)%、(4.03±0.10)%，顯著高于低密度組(P<0.05)，高密度組(90 ind/m3)幼魚的增重率與特定生長率分別為(196.00±24.25)%、(3.61±0.27)%，均略低于中密度組，但無顯著性差異(P>0.05)，從增重率和特定生長率這兩個指標(biāo)來看，中密度組>高密度組>低密度組。

注：不同字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。圖1 養(yǎng)殖密度對銀鯧增重率的影響

圖2 養(yǎng)殖密度對銀鯧特定生長率的影響

在養(yǎng)殖周期內(nèi)，不同密度組下銀鯧幼魚的生長方程曲線如圖3所示。其中低密度組生長方程為W=-0.007 2t2+0.478 3t+6.242，R2=0.826;中密度組生長方程為W=-0.002 8t2+0.364 9t+5.362 1，R2=0.938;高密度組生長方程為W=-0.004 6t2+0.397 1t+4.903 6，R2=0.939。在0～5 d時，銀鯧幼魚的增長幅度最大，其中低密度組增長率為132.6%，為同時期中密度組的1.09倍，高密度組的1.36倍。之后，不同密度組的增重率均有所放緩。至5～10 d時，低密度組的增重率為16.0%仍高于中密度組。而在10～20 d、20～30 d、30～40 d這幾個周期內(nèi)，中密度組的增長率分別為21.2%、15.4%和26.3%，均高于同時期的低密度組和高密度組。根據(jù)生長方程預(yù)測，三個密度組在0～5 d時都處于快速增長時期，20 d后低密度組增重變得緩慢，高密度組的增重較中密度組有所下降，而中密度組仍保持相對穩(wěn)定的增長。

圖3 不同養(yǎng)殖密度下銀鯧幼魚的生長方程曲線

2.2 養(yǎng)殖密度對銀鯧四種消化酶活性的影響

2.2.1 胃蛋白酶 如圖4，隨著養(yǎng)殖時間的變化，低密度組的胃蛋白酶活性整體呈現(xiàn)升高的趨勢，且變化顯著(P<0.05)； 40 d后，低密度組的胃蛋白酶活性顯著高于中密度組和高密度組(P<0.05)。高密度組隨著時間的變化呈現(xiàn)出先上升后下降的變化，在5 d時，胃蛋白酶活性達(dá)到峰值，為11.69 U/mg，為40 d時胃蛋白酶活的2.75倍；之后一直呈現(xiàn)下降的趨勢，在40 d時達(dá)到最低值，為4.89 U/mg。中密度的酶活變化趨勢與高密度組相一致，同為先上升后下降的變化，于5 d時達(dá)到峰值為9.36 U/mg，顯著低于高密度組(P<0.05)；于40 d時達(dá)到最低值，與高密度組差異不顯著(P>0.05)。10 d前，高密度組銀鯧幼魚的胃蛋白酶活性最高；10 d后，低密度組銀鯧幼魚的胃蛋白酶活性最高。

注：不同字母表示組間差異顯著(P<0.05)，下同。圖4 養(yǎng)殖密度對銀鯧胃蛋白酶活性的影響

2.2.2 胰蛋白酶 如圖5，剛出生的幼魚在3個密度組中都表現(xiàn)出較高的胰蛋白酶活性。5 d后，胰蛋白酶在高密度組與低密度組中變化相一致，均呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化，且變化顯著(P<0.05)；其中，低密度組胰蛋白酶活性在10 d時達(dá)到高峰值，為287.55 U/mg；而高密度組在20 d時達(dá)到高峰值，為281.00 U/mg，峰值比低密度組更晚到來。在0 h～10 d時，低密度組胰蛋白酶活性始終高于中密度組和高密度組；20～30 d時高密度組胰蛋白酶活性顯著高于中密度組和低密度組，但低于初始水平(P<0.05)。

圖5 養(yǎng)殖密度對銀鯧胰蛋白酶活性的影響

2.2.3 淀粉酶 如圖6，在養(yǎng)殖過程中，低密度組淀粉酶活性呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化，在20 d時達(dá)到最大值，為1032 U/mg。中密度組淀粉酶的活性呈現(xiàn)先上升后下降的變化，其在5 d時達(dá)到最大值，為1 074 U/mg，10 d后，淀粉酶活性處于較低水平，且較初始水平有所下降。0～20 d高密度組酶的活性呈現(xiàn)先上升后下降再上升的變化，40 d后，淀粉酶活力顯著高于中密度和低密度組(P<0.05)。

2.2.4 脂肪酶 如圖7，剛出生的幼魚在3個密度組中都表現(xiàn)出較高的脂肪酶活性。此后，低密度組呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化，且變化差異顯著(P<0.05)，在5 d時達(dá)到最小值，為26.37 U/mg；在20 d時達(dá)最大值，為66.55 U/mg。中密度組的脂肪酶活性變化趨勢與低密度相一致，在10 d時降至最小值，為33.00 U/mg；在20 d時升至最大值，達(dá)到60.55 U/mg。高密度組脂肪酶活性在0 h～10 d無顯著變化(P>0.05)，10～20 d酶活急劇下降，降至16.05 U/mg，20 d后酶活無顯著變化。40 d后高密度組的脂肪酶活性低于中密度和低密度組，且差異極其顯著(P<0.01)。

圖7 養(yǎng)殖密度對銀鯧脂肪酶活性的影響

3 討論

3.1 擁擠脅迫對魚類生長的影響

一般認(rèn)為，除了餌料、遺傳、環(huán)境條件等因素之外，養(yǎng)殖密度被認(rèn)為是影響野生或養(yǎng)殖魚類生長和性成熟最重要的因素之一。在一般情況下，隨著養(yǎng)殖密度的增大,魚類由于競爭關(guān)系的加劇會產(chǎn)生更多的活動耗能，具體表現(xiàn)為高密度養(yǎng)殖條件下易出現(xiàn)食物資源不足的現(xiàn)象，此時，個體間爭食和攻擊行為會明顯增強(qiáng)，這會使攝入的能量更多地被用于這類非生長因素，生長速率自然隨著養(yǎng)殖密度的增加而出現(xiàn)降低，兩者之間往往存在著負(fù)相關(guān)的關(guān)系。此外，高密度的養(yǎng)殖環(huán)境會對魚類產(chǎn)生一種脅迫作用,迫使魚體長期處于一種生理應(yīng)激狀態(tài)，使得其生理功能發(fā)生紊亂，從而影響其個體的生長。一般情況下，魚類應(yīng)對環(huán)境脅迫時的應(yīng)激反應(yīng)主要有：警惕性提高、活動增強(qiáng)、喜歡集群游動進(jìn)而表現(xiàn)為無休止游動等。因此，可以看出高密度養(yǎng)殖引起的生理應(yīng)激行為往往具有抑制作用。曹陽等[7]為研究俄羅斯鱘(Acipensergueldenstaedtii)在不同密度下的生存狀態(tài)，設(shè)計了低(0.8 kg/m3)、中(1.6 kg/m3)和高(3.2 kg/m3)三個不同密度組。研究結(jié)果顯示，經(jīng)過56 d的飼養(yǎng)，不同密度對幼魚的成活率未造成顯著的影響(P>0.05)。隨著養(yǎng)殖密度的升高，中密度組俄羅斯鱘的增重率和肥滿度顯著高于高密度組，但與低密度組無顯著差異。Li[19]研究史氏鱘(Amursturgeon)時發(fā)現(xiàn)，在高密度條件養(yǎng)殖下，魚體的生長率與增重率往往和養(yǎng)殖密度呈負(fù)相關(guān)，高密度組的生長率和增重率顯著低于低密度組。黃寧宇等[20]研究瓦氏黃顙魚(Pelteobagrusvachelli)時，分別設(shè)置5個養(yǎng)殖密度(80 、160、240、320 ind/m3和400 ind/m3)。經(jīng)過30 d的試驗(yàn)，結(jié)果顯示，養(yǎng)殖密度和溫度的確會對瓦氏黃顙魚幼魚的生長產(chǎn)生顯著影響。瓦氏黃顙魚幼魚的日增重、特定增長率、生長效率均隨密度的增大而減小，凈增重240 ind/m3和160 ind/m3兩密度組最高，與本試驗(yàn)結(jié)果相近。江仁黨[21]研究虹鱒(Oncorhynchusmykiss)時也得出了類似結(jié)果，試驗(yàn)設(shè)4個密度組， 初始密度分別為250、200、150尾和100尾，分別放入4個網(wǎng)箱中，分別于7月22日、8月14日、9月15日和10月15日對其進(jìn)行生長測定，每次測量30尾。結(jié)果得出，在高密度條件養(yǎng)殖下，魚體的生長率與增重率往往和養(yǎng)殖密度呈負(fù)相關(guān)，高密度組的生長率和增重率顯著低于低密度組，與上述學(xué)者研究結(jié)果相一致。

也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，過低的養(yǎng)殖密度也會對魚類產(chǎn)生明顯的抑制作用。例如鄒雄等[22]對點(diǎn)籃子魚(Siganusguttatus)的研究發(fā)現(xiàn)，密度為4.95 kg/m3組的點(diǎn)籃子魚生長要優(yōu)于密度為2.48 kg/m3組，且顯著高于7.80 kg/m3組和10.20 kg/m3組。逯尚尉等[23]研究也認(rèn)為，密度為2.1 kg/m3組的增重率最大，過高或過低的養(yǎng)殖密度都會對點(diǎn)帶石斑魚(Epinephelusmalabaricus)生長產(chǎn)生抑制。本試驗(yàn)中高密度組(90 ind/m3)的增重率與特定生長率均低于中密度組(60 ind/m3)，說明高密度的養(yǎng)殖條件確實(shí)對銀鯧產(chǎn)生一定的脅迫作用；但本試驗(yàn)中中密度組(90 ind/m3)的增重率與特定生長率高于高、低密度組，與鄒雄、逯尚尉等的研究結(jié)果相一致。分析認(rèn)為可能是因?yàn)辄c(diǎn)籃子魚、點(diǎn)帶石斑魚、銀鯧這類魚屬于群居魚類，具有集群行為，過低的養(yǎng)殖密度對其產(chǎn)生了抑制作用。李大鵬等[24]也研究證實(shí)，過低的養(yǎng)殖密度往往會導(dǎo)致群居魚類出現(xiàn)食欲下降、生長減緩、行為異常等現(xiàn)象，而當(dāng)其集群生活時，則會恢復(fù)為行為活潑、積極進(jìn)食、生長加快的狀態(tài)。這一點(diǎn)上從試驗(yàn)中體重生長方程中也可看出，試驗(yàn)中低密度組銀鯧幼魚在發(fā)育到20 d后，增重幅度顯著下降，明顯低于中密度組。高密度組的銀鯧幼魚增重幅度相較于中密度組也呈現(xiàn)一定程度的下降。

3.2 擁擠脅迫對銀鯧消化酶活性的影響

魚類受到外界不良環(huán)境因素刺激時，面臨生存壓力，其體內(nèi)會發(fā)生一系列的生理改變，導(dǎo)致其體內(nèi)消化酶活性、激素水平等內(nèi)分泌系統(tǒng)的活性發(fā)生變化，這一般稱為適應(yīng)性綜合征，又稱為應(yīng)激反應(yīng)。生理學(xué)家Selye H等[25]于1936年首先提出了應(yīng)激的概念，并將其分為警告期、抵抗期和疲憊期三個階段。學(xué)者Pickering[26]研究報告表明，魚類對外界脅迫確實(shí)存在一定的適應(yīng)性反應(yīng)，大致分為以下三個階段，即最初的機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌活動的變化到由此引發(fā)的生理、生化及免疫的系列反應(yīng)變化，最終反映在行為上的改變。

高密度養(yǎng)殖往往會導(dǎo)致水產(chǎn)動物生活空間的減小，進(jìn)而加劇水產(chǎn)動物對空間和餌料的競爭，導(dǎo)致水產(chǎn)動物機(jī)體能量消耗增多，具體表現(xiàn)為各類酶活性的變化[27]。消化酶是動物體內(nèi)一大重要的酶類，其活力的高低可以直接反映動物體內(nèi)消化能力的強(qiáng)弱。同時，消化酶作為魚類消化系統(tǒng)中極其重要的一類功能性物質(zhì)，在魚類生長發(fā)育的過程中，對其適應(yīng)食物變化的能力和攝取營養(yǎng)物質(zhì)的能力具有顯著影響[16]。

在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)的研究中，喬瑋等[17]對大菱鲆進(jìn)行3個密度組養(yǎng)殖處理。研究發(fā)現(xiàn)，隨著養(yǎng)殖密度的增加，大菱鲆的總蛋白酶(TMP)和淀粉酶(AMS)活力整體呈下降趨勢；且隨著時間的變化，每個密度組的TMP和AMS活力也呈現(xiàn)出下降趨勢，120 d后，低密度組和中密度組的TMP和AMS活力表現(xiàn)均顯著低于高密度組。本試驗(yàn)中，養(yǎng)殖進(jìn)行到40 d時，高密度組中銀鯧胃蛋白酶、胰蛋白酶顯著低于0 h時水平，說明高密度養(yǎng)殖使得銀鯧的胃蛋白酶、胰蛋白酶下降，蛋白質(zhì)消化吸收能力下降，這將是導(dǎo)致高密度下銀鯧生長緩慢的重要因素之一，這與喬瑋等人的研究結(jié)果相一致。且本試驗(yàn)中低密度組和高密度組中的胰蛋白酶活性在0 h～40 d之間發(fā)生了一致且顯著的先下降后上升再下降的變化，且低密度組的高峰期比高密度組更快到來，Bolasina等[28]研究牙鲆(Paralichthysolivaceus)時也發(fā)現(xiàn)了相同現(xiàn)象，牙鲆的高低密度組胰蛋白酶活性出現(xiàn)顯著的升降變化，且低密度組的高峰期也出現(xiàn)在高密度組之前。鄧超準(zhǔn)等[18]在研究星洲紅魚時，對星洲紅魚進(jìn)行5個密度組處理(M1、M2、M3、M4、M5)，養(yǎng)殖30 d后測定其肝胰腺、腸、胃中的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶活力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在M3、M4這樣的較高密度組中，三種組織中的四種消化酶的活力均顯著高于M1組。Liang等[29]有關(guān)鰱(Hypophthalmichthysmolitrix)的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，高密度組鰱的AMS活力顯著高于低密度組鰱。本試驗(yàn)中，在對銀鯧幼魚進(jìn)行為期40 d的養(yǎng)殖后，高密度組銀鯧幼魚的淀粉酶、胰蛋白酶活力均顯著高于低密度組，低密度組銀鯧幼魚的胃蛋白酶活性明顯(P<0.05)高于中、高密度組，可見擁擠脅迫對胃蛋白酶的活性影響較大，養(yǎng)殖密度增大，酶的活性甚至低于初始的酶的活性水平。此外，養(yǎng)殖40 d后的高密度組中脂肪酶活性卻顯著低于中密度組和低密度組，這可能是擁擠脅迫使得銀鯧的脂肪的消化能力大大下降，這也是本試驗(yàn)中高密度組銀鯧生長率和增重率顯著低于中密度組和高密度組的重要原因。研究表明，在高密度條件下，魚類為了獲取食物和協(xié)調(diào)種間關(guān)系，需要消耗更多的能量來對抗這些因素影響，這不僅會導(dǎo)致耗能活動增加，還會導(dǎo)致代謝水平的提高[30]。這可能是本試驗(yàn)中高密度組淀粉酶活力、胰蛋白酶活力顯著高于低密度組的原因。

4 結(jié)論

綜上所述，養(yǎng)殖密度對銀鯧幼魚的生長存在影響。試驗(yàn)中養(yǎng)殖密度為60 ind/m3的銀鯧幼魚的生長狀況最好，而過高或過低的養(yǎng)殖密度都會對銀鯧的生長造成不利影響。銀鯧的體重生長方程表明20 d后，低密度組的生長速率明顯下降，而高密度組也表現(xiàn)出低于中密度組的增重速率。關(guān)于消化酶水平的研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖進(jìn)行到40 d時，高密度組銀鯧幼魚淀粉酶和胰蛋白酶活力均顯著高于低密度組，而胃蛋白酶和脂肪酶活力相較于中、低密度組明顯下降。其中，胃蛋白酶和脂肪酶活性水平的下降可能揭示了高密度養(yǎng)殖環(huán)境下銀鯧幼魚因?qū)κ澄镏械鞍缀椭镜睦寐瘦^低而導(dǎo)致的增重率和特定生長率較低的問題。而另一方面，淀粉酶和胰蛋白酶活力的提高反映出銀鯧幼魚在高密度養(yǎng)殖條件下代謝水平的提高，這也會進(jìn)一步加劇能量消耗，導(dǎo)致體重的增加減少及生長受到一定抑制。