2016年-2020年云南省部分豬場(chǎng)豬瘟免疫抗體檢測(cè)與分析

張振興，王 斌，朱麗華，宋建領(lǐng)*

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院/云南省熱帶亞熱帶動(dòng)物病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南昆明 650224;2.威信縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南威信 657900；3.玉龍縣龍?bào)脆l(xiāng)畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心,云南玉龍 674100)

豬瘟(Cassical swine fever,CSF)是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(WOAH)規(guī)定的必須通報(bào)的豬的重要傳染疫病之一[1]，也是我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的《國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查(2021-2025年)》中要求的重點(diǎn)防治動(dòng)物疫病之一[2]。CSF是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一，不同日齡和不同品種的豬均容易被感染，其發(fā)病主要特征為體溫持續(xù)升高、皮膚和黏膜發(fā)紺、走路不穩(wěn)等[3-4]。2007年-2016年國(guó)家要求各生豬養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)CSF采取強(qiáng)制免疫措施，2017年以后國(guó)家免疫計(jì)劃中不再對(duì)豬瘟采取強(qiáng)制免疫，而是通過對(duì)符合條件的各生豬養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)行“先打后補(bǔ)”的財(cái)政策略[5]。為了掌握豬瘟疫苗退出強(qiáng)制免疫之后，云南省生豬豬瘟疫苗免疫情況，通過對(duì)2016年-2020年云南省生豬豬瘟疫苗免疫情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)化監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)云南省CSF風(fēng)險(xiǎn)防控薄弱環(huán)節(jié)，以期為云南省CSF防控提供科學(xué)依據(jù)，從而為云南省生豬養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展提供保障。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2016年1月-2020年12月，以非概率抽樣為原則為采集策略，隨機(jī)采集包括規(guī)模場(chǎng)、小型場(chǎng)和散養(yǎng)戶的198個(gè)健康豬場(chǎng)共計(jì)4 622份血清樣品進(jìn)行豬瘟病毒抗體檢測(cè)。血清樣品采集時(shí)間為經(jīng)過疫苗免疫后的14 d～21 d內(nèi)血清，仔豬一般為15 d～30 d內(nèi)進(jìn)行首次免疫，70 d～80 d內(nèi)進(jìn)行第二次免疫；母豬、公豬一般為每4個(gè)月進(jìn)行一次疫苗免疫。小型場(chǎng)和散養(yǎng)戶的198個(gè)豬場(chǎng)共計(jì)4 622份血清樣品進(jìn)行CSFV抗體檢測(cè)。用普通采血管采集血液后在室溫下放置4 h～6 h，待血液完全凝固后放置在4 ℃冰箱2 h，2 h后分離血清保存在-20 ℃冰箱待檢。

1.1.2 檢測(cè)試劑盒 豬瘟病毒(CSFV)抗體檢測(cè)試劑盒(阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒)，美國(guó)Idexx公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀(型號(hào)HTX)，美國(guó)伯騰儀器有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)(型號(hào)X-15R)，美國(guó)貝克曼庫爾特有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 按照CSFV抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作，操作過程基本如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽性血清孵育→洗滌→加入酶標(biāo)抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→OD 450 nm值測(cè)定與分析。

1.2.2 結(jié)果判定 CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按說明書進(jìn)行(表1)。阻斷率=(陰性對(duì)照OD 450 nm值-被檢樣品OD 450 nm值)×100/陰性對(duì)照OD 450 nm值。

表1 CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 樣品檢測(cè)結(jié)果運(yùn)用Excel 2013進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與分析。

2 結(jié)果

2.1 2016年-2020年云南省豬瘟病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

2016年-2020年，采集的云南省保山、楚雄、大理、德宏、紅河、昆明、普洱、曲靖、文山、西雙版納、玉溪等11個(gè)地州(市)4 622份血清樣品，豬瘟病毒抗體陽性樣品4 078份，豬瘟病毒抗體陰性樣品544份，云南省2016年-2020年豬場(chǎng)豬瘟病毒抗體陽性率為88.23%。

2.2 不同年份豬場(chǎng)CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果

不同年份CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果(表2)顯示，從整體情況來看， CSFV抗體陽性率在2016年-2020年呈現(xiàn)波浪形變化，其中2017年度豬瘟病毒抗體陽性率最高，全年度共檢測(cè)血清樣品1 156份，陽性樣品數(shù)量為1 054份，豬瘟病毒抗體陽性率為91.18%；2018年度豬瘟病毒抗體陽性率最低，全年度共檢測(cè)血清樣品數(shù)量為845份，陽性樣品數(shù)量為720份，豬瘟病毒抗體陽性率為85.21%。

2.3 不同地區(qū)豬場(chǎng)CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)11個(gè)州(市)豬場(chǎng)進(jìn)行CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(表3)，結(jié)果顯示，11個(gè)州(市)CSFV抗體陽性率存在差異，其中保山市豬瘟病毒抗體陽性率最高，351份血清樣品中陽性樣品344份，陽性率為98%；其次為大理州和西雙版納州，分別檢測(cè)203份和380份，陽性樣品數(shù)量為194份和362份，陽性率分別為95.57%和95.26%；豬瘟病毒抗體陽性率最低的為德宏州，296份血清樣品中陽性樣品數(shù)量為180份，陽性率為60.81%。

3 討論

豬瘟疫苗免疫是生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)最重要的疫苗免疫之一，CSF預(yù)防控制的好壞直接影響整個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的生豬健康。本文對(duì)2016年-2020年云南省豬場(chǎng)CSFV抗體陽性情況進(jìn)行大范圍檢測(cè)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以期為云南省全省CSF防控措施提供參考，保障云南省生豬養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。Idexx公司的豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒暫無法區(qū)分豬瘟病毒野毒感染抗體和疫苗免疫抗體，但本次調(diào)查所有豬場(chǎng)全部為健康豬場(chǎng)，均按照豬瘟疫苗免疫程序進(jìn)行了免疫且豬瘟防控能力較好，近幾年也未出現(xiàn)過豬瘟疫情暴發(fā)，因此可將所有抽檢豬場(chǎng)檢測(cè)抗體視為免疫抗體[6]。

2016年-2020年連續(xù)5年豬瘟病毒抗體檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)豬瘟免疫抗體陽性率呈現(xiàn)波浪形變化。CSF疫情比較平穩(wěn)的時(shí)候，豬場(chǎng)降低了對(duì)CSF防控的警惕性，在省內(nèi)疫情又開始出現(xiàn)時(shí)豬場(chǎng)又開始重視CSF的防控，可能是導(dǎo)致豬瘟免疫抗體陽性率呈現(xiàn)波浪形變化的主要原因。2016年-2017年CSFV抗體免疫水平較高，說明在豬瘟疫苗強(qiáng)制免疫的背景下，中小豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶能夠配合政府進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，有效地保障了豬瘟疫苗免疫密度。2018年CSFV抗體陽性率降低，可能是由于2017年我國(guó)CSF退出了強(qiáng)制免疫計(jì)劃，中小場(chǎng)和散養(yǎng)戶弱化了豬瘟疫苗免疫，減少或未免疫接種豬瘟疫苗，使云南豬瘟疫苗免疫密度降低而致。2019年豬瘟病毒抗體陽性率升高可能是非洲豬瘟疫情暴發(fā)后[7-8]，各個(gè)豬場(chǎng)加大了常規(guī)疫苗的免疫預(yù)防力度和綜合防控措施[9]，進(jìn)而抗體陽性率有所提升。2020年CSFV抗體陽性率下降，可能是由于非洲豬瘟疫情平緩，加上豬肉價(jià)格又持續(xù)下降，大批中小規(guī)模豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶急于收回成本減少損失開始賣豬，減少或者取消了豬瘟疫苗免疫。

通過對(duì)比近幾年的相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)王世玉等[10]報(bào)道紅河州CSFV總體陽性率95.25%與此次調(diào)查中紅河州CSFV總體陽性率95.18%相近，楚雄州CSFV總體陽性率99.63%與此次調(diào)查中楚雄州CSFV抗體總體陽性率77.40%相差頗大，但是與王艷芬等[11]報(bào)道2015年-2019年楚雄州CSFV抗體陽性率80.86%相近；吳孟潔等[12]報(bào)道的2016年-2020年文山州CSFV抗體總陽性率80.91%，與此次調(diào)查中，文山州CSFV總體陽性率77.78%相近。不同時(shí)間不同州(市)豬瘟病毒抗體陽性率存在差異，可能與以下幾方面原因相關(guān)：一是調(diào)查對(duì)象不一樣，云南省不同州(市)或者同一州(市)不同規(guī)模豬場(chǎng)對(duì)CSFV防控理念有所差異；二是各州(市)對(duì)CSF的相關(guān)政策了解有所差異，對(duì)豬瘟疫苗免疫重視程度存在偏差；三是目前市場(chǎng)上CSFV疫苗品牌、種類繁多，各自選擇有所差異；四是可能由于對(duì)各州(市)采集血清樣品代表性存在差異。

綜上所述，云南省2016年-2020年每年的整體豬瘟疫苗免疫效果較好[6]，但是不同州(市)仍然存在一定的差異性，部分州(市)的部分豬場(chǎng)存在豬瘟病毒抗體陽性率較低的現(xiàn)象，應(yīng)加強(qiáng)豬瘟疫苗免疫效果監(jiān)測(cè)，對(duì)豬瘟病毒抗體陽性率較低豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟疫苗加強(qiáng)免疫和優(yōu)化疫苗免疫程序。