高效液相色譜法測(cè)定鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸櫞酸鈉含量

彭 力，肖中元，程永剛，唐佳麗，郭 偉，王永紅

（西南藥業(yè)股份有限公司，重慶 400038）

鹽酸莫西沙星為廣譜、高效、低毒性的第4 代氟喹諾酮類抗菌藥物，通過抑制細(xì)菌的DNA 螺旋酶A 亞單位和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ的活性，阻斷DNA 的復(fù)制，發(fā)揮殺菌作用，對(duì)社區(qū)獲得性肺炎、慢性支氣管炎的急性發(fā)作、急性鼻竇炎、泌尿系統(tǒng)感染、皮膚及軟組織感染均有較好療效［1-4］。其上市產(chǎn)品有片劑、滴眼液、氯化鈉注射液等，在研劑型有泡騰片、栓劑、微囊等［5-8］。目前，其大容量注射液僅有鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液上市銷售，該產(chǎn)品在低溫條件下易結(jié)晶析出。為解決低溫析出問題，前期試驗(yàn)中進(jìn)行了鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液的研究。通過處方優(yōu)化在樣品中加入一定比例的枸櫞酸鈉作為穩(wěn)定劑，有效解決了主藥低溫結(jié)晶析出問題。穩(wěn)定劑枸櫞酸鈉的含量超標(biāo)會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量，其含量測(cè)定方法包括滴定法、離子交換色譜法、高效液相色譜（HPLC）法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、紫外-可見分光光度法等［9-15］，但尚未查詢到鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸櫞酸鈉的含量測(cè)定方法。為此，本研究中建立了測(cè)定其中枸櫞酸鈉含量的HPLC 法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Arium 611UF型超純水制備儀（德國Sartorius公司）；WATERS2695-2996型高效液相色譜儀（配有Millenium32液相色譜數(shù)據(jù)工作站）。PL203型電子天平（精度為千分之一），XS205 型電子分析天平（精度為十萬分之一），S210型pH計(jì)，均購自瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 試藥

枸櫞酸對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100396-200301，含量為100%）；鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液（西南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)分別為20110901，20110902，20110903）；磷酸二氫鉀、磷酸（重慶川東化工<集團(tuán)>有限公司）；甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技公司）；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：安捷倫Zorbax-SB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：A 為甲醇，B 為 50 mmol/L 磷酸二氫鉀水溶液（用磷酸調(diào)pH至2.2），梯度洗脫［12］（洗脫程序見表1）；流速：0.9 mL/ min；檢測(cè)波長：210 nm；進(jìn)樣量：20μL。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序（%）Tab.1 Procedure of gradient elution of mobile phase（%）

2.2 溶液制備

直接取鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液樣品作為供試品溶液。取枸櫞酸對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每1 mL 含0.64 mg 的對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液適量，加水定量稀釋成每1 mL 含枸櫞酸0.07 mg 的對(duì)照品溶液。按處方工藝配制不含枸櫞酸鈉的溶液，作為空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

破壞性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下供試品溶液適量，分別用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、強(qiáng)光、強(qiáng)氧極端條件破壞。取破壞后的和未破壞的供試品溶液及空白溶液各適量，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液在高溫和強(qiáng)堿條件下會(huì)被破壞而產(chǎn)生雜質(zhì)，枸櫞酸鈉含量波動(dòng)在2%～3%范圍內(nèi)，其他條件下較穩(wěn)定。各破壞條件下枸櫞酸主峰與其他物質(zhì)峰的基線分離較好，空白溶液無干擾，表明方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，加水稀釋成6 個(gè)濃度梯度，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X，mg/mL）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=8.47 × 105X+379.91（r=0.998，n=6）。結(jié)果表明，枸櫞酸鈉質(zhì)量濃度在0.078 34～0.141 98 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

中間精密度試驗(yàn)：由2個(gè)操作員在不同時(shí)間各取供試品溶液6 份，分別按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果12 份供試品溶液的平均質(zhì)量濃度為0.102 mg/mL，RSD為1.59%（n=12），表明儀器中間精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下供試品溶液6 份，分別按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果6份供試品溶液的平均質(zhì)量濃度為0.103 mg/ mL，RSD為1.71%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為1.18%（n= 7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品貯備液和空白溶液各適量，混勻，配制成高、中、低濃度的溶液，平行3份，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.2 Results of the recovery test（n=9）

2.3.4 樣品含量測(cè)定

取3批（批號(hào)分別為20110901，20110902，20110903）樣品，依法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定3次，以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算得枸櫞酸鈉的含量分別為0.103，0.102，0.104 mg/mL（n=3）。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長選擇

配制質(zhì)量濃度為0.2 mg/ mL 的枸櫞酸對(duì)照品溶液，于190～400 nm 波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在210 nm 波長處有較大吸收，故選擇210 nm作為檢測(cè)波長。

3.2 洗脫程序選擇

參考文獻(xiàn)［12］，枸櫞酸峰與相鄰峰分離度小于1.5，且樣品中其他成分在低比例甲醇中不能完全洗脫，故對(duì)流動(dòng)相比例、流速、pH等進(jìn)行優(yōu)化。在枸櫞酸測(cè)定完成后提高甲醇比例，采用梯度洗脫方法洗出其他成分，防止因長時(shí)間滯留色譜柱中與填料發(fā)生不可逆結(jié)合，保護(hù)色譜柱，提高其使用壽命。

3.3 含量計(jì)算

處方中以枸櫞酸鈉作為穩(wěn)定劑。枸櫞酸鈉溶液解離的枸櫞酸根產(chǎn)生紫外吸收，鈉離子無紫外吸收，且枸櫞酸根在低pH 條件下會(huì)形成枸櫞酸。因此，通過測(cè)定溶液中枸櫞酸的含量，再通過枸櫞酸鈉與枸櫞酸分子量之比（1.53∶1）計(jì)算枸櫞酸鈉的含量。

3.4 方法評(píng)價(jià)

本研究中建立的方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，可用于鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸櫞酸鈉的含量測(cè)定。