不同澄清劑對調(diào)臟舒秘合劑澄清度的影響*

范潤勇，徐 偉，蒲立立，張 明，鐘佰明，周 茜

（四川省南充市中醫(yī)醫(yī)院，四川 南充 637000）

合劑作為醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑常用劑型，臨床療效確切，使用人數(shù)多，服用方便，但合劑中常含有鞣質(zhì)、淀粉、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，沉淀多、溶液渾濁，其澄清度不佳［1］，同時(shí)鞣質(zhì)常與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖形成氫鍵生成不溶于水的沉淀，導(dǎo)致藥液渾濁［2］。據(jù)報(bào)道，殼聚糖［3-6］，101 果汁澄清劑、ZTC1 + 1 天然澄清劑及殼聚糖［7］，明膠和殼聚糖復(fù)配絮凝劑［8］，KBT - ZTC 澄清劑［9］均可作為合劑的澄清劑。調(diào)臟舒秘合劑為我院肛腸科范藝?yán)_主任基于五臟同調(diào)法治療慢傳輸型便秘的臨床經(jīng)驗(yàn)方，臨床療效較好，由柏子仁、白術(shù)、白芍、肉蓯蓉、瓜蔞皮、瓜蔞子、枳實(shí)、當(dāng)歸、甘草等藥味組方［10］。為改善調(diào)臟舒秘合劑的澄清度，提高產(chǎn)品質(zhì)量，增強(qiáng)治療依從性，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定調(diào)臟舒秘合劑中松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸的含量，采用紫外-可見分光光度（UV-Vis）法測定透光率，以表示澄清度，以熵權(quán)法確定松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸、透光率和固體總量的權(quán)重，根據(jù)權(quán)重對上述指標(biāo)進(jìn)行綜合評分；查閱相關(guān)文獻(xiàn)，篩選調(diào)臟舒秘合劑最佳的澄清劑，比較吐溫80、海藻酸鈉、活性炭、明膠、殼聚糖、無水硫酸鈉、硅藻土、101 果汁澄清劑、ZTC1 + 1 天然澄清劑、瓊脂等澄清劑的澄清度，為解決醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑合劑澄清度問題提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate 3000型高效液相色譜儀（美國賽默飛世爾科技公司），配有WPS - 3000TSL 型進(jìn)樣器，LPG -34000SDN 型四元泵，TCC - 3000SD 型柱溫箱，VWD -3100 型檢測器；AUW220D 型分析天平（日本島津公司，精度為十萬分之一）；FA2004 型分析天平（上海力辰科技儀器有限公司，精度為萬分之一）；TU-1901 型雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；G-100S型超聲波清洗器（深圳市歌能清洗設(shè)備有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；RE-1102 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海嘉鵬科技有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水真空泵（上海力辰科技儀器有限公司）；SYG-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州朗越儀器廠）；WGL-45B型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；LCK2000型煎藥機(jī)（天津三延精密機(jī)械有限公司）。

1.2 試藥

松果菊苷對照品（批號為111670-201907，純度為91.8%），芍藥苷對照品（批號為110736-202044，純度為96.8%），阿魏酸對照品（批號為110773-201915，純度為99.4%），均購自中國食品藥品檢定研究院；柏子仁（批號為200401），白術(shù)（批號為200501），白芍（批號為200501），枳實(shí)（批號為200101），瓜蔞子（批號為191201），瓜蔞皮（批號為200201），肉蓯蓉（批號為200201），當(dāng)歸（批號為200501），甘草（批號為200401），均購自成都吉安康藥業(yè)有限公司，經(jīng)南充市中醫(yī)醫(yī)院張德明中藥師鑒定均為正品；海藻酸鈉（上海埃彼化學(xué)試劑有限公司，批號為F20180515）；活性炭（批號為20210705），瓊脂粉（批號為20211027），均購自福晨（天津）化學(xué)試劑有限公司；明膠（天津市登峰化學(xué)試劑廠，批號為20211001）；無水硫酸鈉（批號為2015011201），硅藻土（批號為2016110801），均購自成都市科龍化工試劑廠；無水乙醇（成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號為2021093002）；殼聚糖（恒鑫生物科技有限公司，批號為 20211112）；ZTC1 + 1 天 然 澄 清 劑（批 號 為20210820），101果汁澄清劑（批號為20210820），均購自四川世紀(jì)之星生物科技有限公司；乙腈為色譜純，水為怡寶純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 - 0.2%磷酸溶液（20∶80，V/V）；檢測波長：230 nm；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5μL。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)應(yīng)不低于5 000，分離度應(yīng)不小于1.5，拖尾因子應(yīng)在0.95～1.05 間，含量測定中靈敏度的信噪比應(yīng)不低于43。

2.2 溶液制備

將調(diào)臟舒秘合劑每付處方加8 倍量水，提取2 次，每次1 h，最終將藥液濃縮至1 000 mL，精密量取調(diào)臟舒秘合劑樣品溶液1.0 mL，置5 mL容量瓶中，加水稀釋并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

取松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸對照品各適量，精密稱定，加50%甲醇溶液超聲使溶解，分別制成每1 mL含496.1，105.6，100.2 μg的對照品溶液。

分別精密量取上述松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸對照品溶液，按 1∶10∶1（m/m/m）混合，即得混合對照品溶液。

按處方工藝稱取缺肉蓯蓉、白芍、當(dāng)歸的調(diào)臟舒秘合劑，制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備缺肉蓯蓉、白芍、當(dāng)歸的陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別取2.2 項(xiàng)下供試品溶液，松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸混合對照品溶液和陰性對照品溶液各5μL，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，供試品溶液色譜中相同保留時(shí)間處與混合對照品溶液有對應(yīng)峰，且陰性對照無干擾，表明方法專屬性強(qiáng)。色譜圖見圖1。

圖1 專屬性試驗(yàn)高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of the specific test

線性關(guān)系考察：分別精密量取系列質(zhì)量濃度的松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果Tab.1 Results of the linear relation test

精密度試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下混合對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6 次。結(jié)果松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸色譜峰峰面積的RSD分別為1.45%，1.01%，0.88%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，12，24 h 時(shí)按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸色譜峰峰面積的RSD分別為2.56%，1.08%，0.57%（n=6），表明供試品溶液24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：按處方稱取藥材，按供試品溶液制備方法平行制備供試品溶液6 份，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸色譜峰峰面積的RSD分別為3.00%，1.94%，2.91%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品6 份，每份1 mL，依法制備供試品溶液，精密加入混合對照品溶液1 mL，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸的平均加樣回收率分 別 為 97.56%，99.52%，101.30%，RSD分 別 為1.54%，2.03%，1.40%（n=6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.4 固體總量測定

按2020 年版《中國藥典（四部）》通則3101 固體總量測定法［11］測定調(diào)臟舒秘合劑的固體總量。

2.5 澄清方式選擇

根據(jù)前期預(yù)試驗(yàn)，對比靜置、離心和加入澄清劑3種方式調(diào)臟舒秘合劑的澄清效果，以芍藥苷、固體總量和澄清度為指標(biāo)。結(jié)果最佳澄清方式為加入澄清劑。

2.6 澄清度測定［12-13］

透光率表示光透過透明或半透明的光通量與其入射光通量的百分率。影響透光率的主要原因?yàn)槿芤褐腥苜|(zhì)對光的吸收作用和溶液中懸浮顆粒對光的折射作用。當(dāng)保證溶液中溶質(zhì)濃度相同情況下，相同溫度的透光率反映溶液中懸浮顆粒的多少，透光率越低，懸浮顆粒越多，澄清度越低。因此，通過紫外可見分光光度計(jì)測定透光率可間接反映溶液的澄清度，本研究中于190～900 nm 全波長范圍掃描，最終確定透光率的檢測波長為850 nm。相對透光率計(jì)算公式見式（1）。

稀釋X倍后，相對透光率計(jì)算公式見式（2）。

式中，T相對表示相對透光率，T供試表示供試品溶液的透光率，T樣品對照表示供試品對照溶液（供試品溶液經(jīng)澄清處理后）的透光率。

2.7 熵權(quán)法確定權(quán)重［14-22］

信息熵是系統(tǒng)不確定性和無序程度的度量，除度量數(shù)據(jù)包含的信息量，還可用于在多指標(biāo)評價(jià)系統(tǒng)中確定各指標(biāo)權(quán)重。將每個(gè)評價(jià)指標(biāo)作為1 個(gè)隨機(jī)變量，計(jì)算該指標(biāo)的熵權(quán)系數(shù)。取值變異程度越大越無序，提供的信息量越多，該指標(biāo)越重要；反之則越不重要。計(jì)算步驟如下。

1）原始數(shù)據(jù)矩陣歸一化，建立原始評價(jià)指標(biāo)矩陣

設(shè)m個(gè)評價(jià)指標(biāo)、n個(gè)評價(jià)對象的原始數(shù)據(jù)矩陣為A=（aij）mn，對其歸一化后得到R=（Xij）mn，

對于大者為優(yōu)的指標(biāo)，按式（3）進(jìn)行歸一化。

式中，Xij表示第i次試驗(yàn)時(shí)在第j個(gè)評價(jià)指標(biāo)的取值，i=1，2，3，…，m；j=1，2，3，…，n。

2）將原始數(shù)據(jù)矩陣（Xij）mn轉(zhuǎn)換為概率矩陣（Pij）mn

信息熵公式中，Pi為某個(gè)信息的概率，滿足0 ≤Pi≤ 1，必須先對矩陣（Xij）mn做歸一化處理，經(jīng)處理后的矩陣可視為指標(biāo)的概率矩陣。計(jì)算公式見式（4）。

式中，Pij表示第j次試驗(yàn)在第i個(gè)評價(jià)指標(biāo)下的概率。

松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸、固體總量、透光率的P矩陣如下。

3）計(jì)算信息熵（Hi）

按式（5）確定第i個(gè)評價(jià)指標(biāo)的Hi，結(jié)果見表2。

表2 相關(guān)評價(jià)指標(biāo)信息熵和熵權(quán)系數(shù)計(jì)算結(jié)果Tab.2 Results of information entropy and entropy-weight coefficient calculation of relevant evaluation indicators

4）計(jì)算熵權(quán)系數(shù)（Wj）

按式（6）計(jì)算Wj，結(jié)果見表2。

可知，當(dāng)Hi越小，Wj越大，即當(dāng)Xij相差越大，傳遞的信息量越多，作用越大，權(quán)重越大。

2.8 澄清工藝考察

將調(diào)臟舒秘合劑每付處方加8 倍量水，提取2 次，每次1 h，最終將藥液濃縮至1 000 mL。按調(diào)臟舒秘合劑煎煮方法，煎煮13 付，備用。澄清工藝考察方法有13種，考察結(jié)果見表3?？芍?，加入澄清劑后，不會影響藥液的有效成分含量，只是對澄清度有一定影響。采用熵權(quán)法確定了松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸成分含量和固體總量、澄清度等5 個(gè)指標(biāo)的權(quán)重，并進(jìn)行綜合評分。ZTC1+1天然澄清劑澄清效果最佳，其次是海藻酸鈉和瓊脂。根據(jù)篩選出的最佳澄清劑，按ZTC1+1 天然澄清劑方法進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)。結(jié)果ZTC1 + 1 天然澄清劑的效果較好，表明穩(wěn)定性較好。

表3 澄清工藝考察結(jié)果（n=4）Tab.3 Results of investigation on the clarifying process（n=4）

3 討論

醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑合劑多采用煎煮方法進(jìn)行提取，但藥液體積大、雜質(zhì)多、沉淀多。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，水提醇沉技術(shù)［23］、微濾［24］、超濾［25］、納濾、反滲透等膜分離技術(shù)［26-27］、高速離心技術(shù)、超臨界流體萃取技術(shù)、大孔樹脂吸附技術(shù)［28］等常用于中藥水提液的精制工藝中。但水提醇沉法成本高、乙醇回收難、耗醇量大、生產(chǎn)周期長，故不作為大批量生產(chǎn)除去沉淀的方法。同時(shí)，膜分離技術(shù)、高速離心技術(shù)、超臨界流體萃取技術(shù)、大孔樹脂吸附技術(shù)等耗材成本高或?qū)υO(shè)備要求高，不適宜用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑的純化。澄清劑改善醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑澄清度效果較好，成本較低，工藝簡單、穩(wěn)定，且可工業(yè)化用于生產(chǎn)。

中藥提取液中加入吸附澄清劑，利用絮凝和凝聚的作用，除去中藥提取液中的雜質(zhì)，使提取液變得澄清［29］。本研究中所用吸附澄清劑主要為有機(jī)絮凝劑和無機(jī)凝聚劑，常用于藥物與食品的澄清。參考文獻(xiàn)［30-34］，選用了吐溫80、海藻酸鈉、活性炭、明膠、殼聚糖、無水硫酸鈉（無機(jī)凝聚劑）、硅藻土（無機(jī)凝聚劑）、101 果汁澄清劑、ZTC1+1天然澄清劑、瓊脂10種澄清劑。由表3可知，加入天然澄清劑的澄清效果優(yōu)于靜置法、離心法和水提醇沉法，有機(jī)絮凝劑的澄清效果總體比無機(jī)凝聚劑好，并篩選出調(diào)臟舒秘合劑的最佳澄清劑為ZTC1+1天然澄清劑。

本研究中采用HPLC 法、UV-Vis 法結(jié)合熵權(quán)法篩選ZTC1 + 1 天然澄清劑為調(diào)臟舒秘合劑的最佳澄清劑，不影響藥液有效成分含量，且操作簡單可重復(fù)，可作為解決醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑合劑澄清度的方法。采用單因素法對比了不同澄清劑對調(diào)臟舒秘合劑澄清度的影響，參考文獻(xiàn)確定澄清度的用量，后續(xù)試驗(yàn)將考察ZTC1 + 1 天然澄清劑最佳加入濃度，或采用正交試驗(yàn)法、響應(yīng)面法對比多種澄清劑或每種澄清劑的使用濃度對澄清度的影響。