泡核桃青皮的化學(xué)成分研究

馬明芳 李冬梅

大理大學(xué)藥學(xué)院，云南 大理 671000

泡核桃(JuglanssigillateDode.)系胡桃科胡桃屬植物，又名茶核桃(云南)、鐵核桃。泡核桃青皮即為泡核桃的外表果皮，未成熟時(shí)包裹在果實(shí)核外，果實(shí)成熟后自然脫落[1-3]。胡桃屬植物具有悠久的用藥歷史，具有補(bǔ)腎固精、溫肺定喘、清熱燥濕、清腸明目等功效[4]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道泡核桃青皮中含有黃酮類、萘醌類、二芳基庚烷類、萜類、鞣質(zhì)類等多種化學(xué)成分[5-8]。目前對(duì)于泡核桃青皮的研究較少，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，泡核桃青皮70%甲醇提取物具有抗腫瘤活性，為了充分利用好當(dāng)?shù)氐闹参镔Y源，促進(jìn)泡核桃青皮藥用價(jià)值的開發(fā)與利用，本文對(duì)產(chǎn)自大理州漾濞縣的泡核桃青皮化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位分離得到了8個(gè)化合物，分別鑒定為：β-谷甾醇 (1)、熊果酸 (2)、白樺酸 (3)、2α-羥基齊墩果酸 (4)、齊墩果酸 (5)、核桃酮(6)、4,5-二羥基-α-四氫萘醌 (7)、柚皮素 (8)。其中，化合物2～5首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (BUCHI Rotavapor R210)；低溫冷卻循環(huán)泵 (鞏義市予華儀器有限公司)；梅特勒萬分之一電子分析天平；400MHz全數(shù)字化超導(dǎo)核磁共振譜儀 (AvanceIII400MHZ，瑞士BRUKER公司)；UV-2101紫外分光光度計(jì) (日本島津公司)；柱層析用硅膠 (80～100目，300～400目，硅膠H，青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠 (25～100μm, Pharmacia公司)；GF254薄層層析硅膠板 (青島海洋化工廠)。實(shí)驗(yàn)所用試劑石油醚、丙酮、氯仿、甲醇、乙酸乙酯均為工業(yè)純，經(jīng)重蒸后使用。泡核桃青皮2019年9月采自大理州漾濞縣，經(jīng)大理大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室張德全教授鑒定為胡桃科胡桃屬植物泡核桃 (JuglanssigillataDode.)的青果皮，泡核桃青皮采集后經(jīng)低溫干燥供實(shí)驗(yàn)所用。

2 提取與分離

取干燥后的泡核桃青皮，粉碎，共3.8 kg，采用浸漬法進(jìn)行提取(70% 甲醇浸泡提取3次，每次24 h)，提取液經(jīng)減壓濃縮后得到浸膏101.1g。浸膏用甲醇溶解，干法拌樣，經(jīng)硅膠柱層析 (80～100目)，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和甲醇洗脫并分別回收溶劑，其中氯仿萃取部位浸膏為18.5g。氯仿部位浸膏經(jīng)硅膠 (80～100目)柱層析，石油醚-丙酮 (15∶1～1∶1)梯度洗脫，洗脫液經(jīng)硅膠TLC檢測(cè)后合并相似部分，得A～I(xiàn)共9個(gè)組分。其中B組分 (0.6 g)，經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析 (石油醚:乙酸乙酯 = 15∶1～12∶1)，分離得到化合物1 (39.1 mg)。C組分(1.0 g)，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯 = 12∶1～10∶1)， Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分離得到化合物2 (93.0 mg)。D組分(1.4g)，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯=12∶1，10∶1)，Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇 = 1∶1)，分離得到化合物3 (73.0 mg)和化合物4 (28.1 mg)。E組分(0.8 g)，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯=10∶1～5∶1)、Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇= 1∶1)，分離得到化合物5 (16.0 mg)和化合物6 (40.2mg)。F組分(1.8 g)，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯=8∶1～5∶1)、Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分離得到化合物6 (160.5 mg)和化合物7 (24.0 mg)。G組分(1.5 g)，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析 (氯仿∶甲醇 = 100∶1～40∶1)、Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分離得到化合物8 (24.3 mg)。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1.1 化合物1 白色針狀結(jié)晶(石油醚-乙酸乙酯)。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.29 (1H, d,J=4.2 Hz, H-6), 3.55 (H, m, H-3), 0.92 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.86 (3H, s, H-29), 0.84 (3H, s, H-27), 0.82 (3H, s, H-26), 0.77 (3H, s, H-20);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 29.8 (C-1), 31.6 (C-2), 71.8 (C-3), 40.3 (C-4), 140.7 (C-5), 121.7 (C-6), 29.4 (C-7), 31.9 (C-8), 50.1 (C-9), 36.2 (C-10), 22.7 (C-11), 37.2 (C-12), 42.3 (C-13), 56.7 (C-14), 24.3 (C-15), 28.5 (C-16), 56.0 (C-17), 11.9 (C-18), 19.1 (C-19), 36.2 (C-20), 19.8 (C-21), 33.9 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.4 (C-26), 21.2 (C-27), 23.1 (C-28), 11.9 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為β-谷甾醇。

3.1.2 化合物2 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.10 (1H, brs, H-12), 3.32 (1H, m, H-3), 0.89 (3H, d,J=7.6 Hz, H-29), 0.80 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-30), 1.01 (3H, s), 0.90 (3H, s), 0.87 (3H, s), 0.82 (3H, s), 0.66 (3H, s);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 38.3 (C-1), 26.8 (C-2), 76.9 (C-3), 38.4 (C-4), 54.6 (C-5), 17.9 (C-6), 32.7 (C-7), 41.3 (C-8), 47.0 (C-9), 36.2 (C-10), 22.8 (C-11), 124.3 (C-12), 138.1 (C-13), 41.6 (C-14), 28.3 (C-15), 23.7 (C-16), 47.3 (C-17), 52.3 (C-18), 38.9 (C-19), 38.2 (C-20), 30.1 (C-21), 36.6 (C-22), 27.4 (C-23), 15.3 (C-24), 16.0 (C-25), 16.9 (C-26), 23.3 (C-27), 178.0 (C-28), 16.8 (C-29), 21.1 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為熊果酸。

3.1.3 化合物3 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ:12.1 (1H, s, 28-COOH), 4.69 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-29β), 4.56 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-29α), 3.37 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-3), 1.64 (3H, s, H-30), 0.93 (3H, s, H-27), 0.87 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-23), 0.65 (3H, s, H-24);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 177.7 (C-28), 150.7 (C-20), 110.1 (C-29), 77.2 (C-3), 55.9 (C-5), 55.3 (C-17), 50.4 (C-9), 49.0 (C-19), 47.1 (C-18), 42.4 (C-14), 40.7 (C-4), 39.8 (C-8), 39.0 (C-1), 38.7 (C-13), 38.0 (C-10), 37.2 (C-22), 34.4 (C-7), 32.2 (C-16), 30.5 (C-21), 29.7 (C-15), 28.6 (C-23), 27.6 (C-2), 25.5 (C-12), 20.9 (C-11), 19.4 (C-30), 18.4 (C-6), 16.4 (C-26), 16.3 (C-24), 16.2 (C-25), 14.9 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為白樺酸。

3.1.4 化合物4 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, C5D5N)δ: 5.44 (1H, t,J= 3.0 Hz, H-12), 4.12 (1H, m, H-2), 3.45 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-3), 3.33 (1H, dd,J= 13.5, 4.2 Hz, H-18), 1.18 (3H, s, H-23), 1.12 (3H, s, H-27), 1.00 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-24), 0.91 (3H, s, H-30), 0.90 (3H, s, H-29), 0.77 (3H, s, H-26);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 46.9 (C-1), 68.0 (C-2), 81.6 (C-3), 39.7 (C-4), 54.8 (C-5), 18.4 (C-6), 33.3 (C-7), 39.5 (C-8), 37.8 (C-9), 39.0 (C-10), 24.2 (C-11), 122.0 (C-12), 145.3 (C-13), 42.5 (C-14), 27.9 (C-15), 24.3 (C-16), 48.2 (C-17), 42.3 (C-18), 45.8 (C-19), 30.4 (C-20), 33.7 (C-21), 32.8 (C-22), 28.9 (C-23), 17.2 (C-24), 16.9 (C-25), 18.1 (C-26), 25.5 (C-27), 180.0 (C-28), 32.8 (C-29), 24.2 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為2α-羥基齊墩果酸。

3.1.5 化合物5 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 12.0 (1H, s, 28-COOH), 5.24 (1H, brs, H-12), 3.20 (1H, dd,J= 7.6, 3.2 Hz, H-3), 2.80 (1H, dd,J= 8.8, 2.4 Hz, H-18), 1.26 (3H, s, H-27), 1.13 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, s, H-29), 0.93 (3H, s, H-30), 0.92 (3H, s, H-24), 0.78 (3H, s, H-23), 0.76 (3H, s, H-26);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 182.9 (C-28), 143.5 (C-13), 122.3 (C-12), 79.1 (C-3), 55.3 (C-5), 47.6 (C-9), 46.5 (C-17), 45.9 (C-19), 41.6 (C-14), 41.0 (C-18), 39.2 (C-8), 38.7 (C-4), 38.4 (C-1), 37.2 (C-10), 33.9 (C-29), 33.1 (C-7), 32.5 (C-21), 32.4 (C-22), 30.7 (C-20), 28.0 (C-23), 27.7 (C-15), 27.2 (C-2), 25.9 (C-27), 23.6 (C-16), 23.4 (C-30), 22.8 (C-11), 18.2 (C-6), 17.2 (C-26), 15.5 (C-24), 15.2 (C-25)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為齊墩果酸。

3.1.6 化合物6 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 12.34 (1H, s, 8-OH), 7.44 (1H, t,J= 8.8 Hz, H-6), 6.99 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-5), 6.89 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-7), 4.88 (1H, dd,J= 7.6, 4.0 Hz, H-4), 2.95 (1H, m, H-2a), 2.61 (1H, m, H-2β), 2.30 (1H, m, H-3a), 2.14 (1H, m, H-3β);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 204.4 (C-1), 162.4 (C-8), 145.9 (C-5a), 137.1 (C-6), 117.5(C-5), 117.6 (C-7), 115.1 (C-8a), 67.6 (C-4), 34.5 (C-2), 31.1 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為核桃酮。

3.1.7 化合物7 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.44 (1H, dd,J= 7.6, 1.2 Hz, H-8), 7.26 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-7), 7.05 (1H, dd,J= 7.6, 1.2 Hz, H-6), 5.32 (1H, dd,J= 12.0, 4.4 Hz, H-4), 2.76 (1H, m, H-2), 2.50 (1H, m, H-2), 2.36 (1H, m, H-3), 2.21 (1H, m, H-3);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 196.8 (C-1), 156.6 (C-5), 133.1 (C-8a), 130.5 (C-5a), 129.1 (C-7), 121.4 (C-6), 118.3 (C-8), 65.5 (C-4), 35.2 (C-2), 31.8 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為4, 5-二羥基-α-四氫萘醌。

3.1.8 化合物8 淺黃色粉末。1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3)δ: 7.41 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-2′, H-6′), 6.91 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-3′, H-5′), 5.98 (2H, s, H-6, H-8), 5.45 (1H, dd,J= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 3.20 (1H, dd,J= 17.0, 12.8 Hz, H-3), 2.72 (1H, dd,J= 17.0, 3.2 Hz, H-3);13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3)δ: 197.3 (C-4), 167.1 (C-7), 164.5 (C-5), 165.2 (C-8a), 158.7 (C-4′), 130.6 (C-1′), 129.0 (C-6′, C-2′), 116.0 (C-3′, C-5′), 103.0 (C-5a), 96.7 (C-6), 95.9 (C-8), 79.8 (C-2), 43.6 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物8為柚皮素。

4 討論

胡桃屬植物具有悠久的藥用歷史，現(xiàn)代藥理研究[8]表明胡桃屬植物具有較好的抗腫瘤、抗氧化、抗菌、殺蟲、降血糖等作用。目前胡桃屬植物中研究報(bào)道最多的是胡桃楸 (Juglansmandshurica Maxim. )青皮，而關(guān)于泡核桃青皮的研究相對(duì)比較少。本研究對(duì)泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，共分離鑒定了8個(gè)化合物，其中4個(gè)三萜類化合物為首次從該植物中分離得到，三萜類化合物結(jié)構(gòu)類型涉及烏蘇烷型五環(huán)三萜 (2)、羽扇豆烷型五環(huán)三萜 (3)以及齊墩果烷型五環(huán)三萜 (4、5)，從而進(jìn)一步豐富了泡核桃青皮的化學(xué)成分類型。另外，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)泡核桃青皮70%甲醇提取物具有抗腫瘤活性，而本研究分離得到的三萜類化合物文獻(xiàn)報(bào)到均具有抗腫瘤作用[16-18]；同時(shí)，萘醌類化合物也是胡桃屬植物中的抗腫瘤活性成分之一[19]，本研究從泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位中分離得到1個(gè)萘醌類化合物 (7)，從而為泡核桃青皮抗腫瘤活性的研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。