HCCR-1、Bcl-2的表達與結(jié)直腸癌的相關(guān)性分析

張淑華 張勇

（確山縣人民醫(yī)院病理科，河南 確山 463200）

約95%的結(jié)直腸癌是由結(jié)腸和直腸內(nèi)壁的腺細胞發(fā)展而來，癌癥通常開始于內(nèi)壁最內(nèi)層，并緩慢生長到外層。結(jié)直腸癌（Colorectal Cancer，CRC）早期癥狀包括排便習慣改變（如便秘或者腹瀉）、大便細窄、糞便中含有鮮紅或韓紅色血液、骨盆或下腹持續(xù)疼痛（如脹氣、腫脹或疼痛）、不明原因的體重減輕、惡心或偶遇及精神不振等表現(xiàn)，隨著疾病發(fā)展，其腫瘤增大導致腸腔狹窄，從而造成機械性腸梗阻，還可能發(fā)生腸穿孔和出血等并發(fā)癥，對患者生命造成嚴重的威脅。

近年來，結(jié)直腸癌發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)呈現(xiàn)上升趨勢。通過mRNA差異展示、雜合性丟失等研究方法，發(fā)現(xiàn)了100多種抑癌基因，通過對這些抑癌基因的研究，可以闡述腫瘤形成機制，為未來抗腫瘤治療新方法提供理論依據(jù)[1]。人宮頸癌癌基因（Human Cervical Cancer Oncogene，HCCR）定位于人染色體12q，包括HCCR-1與HCCR-2。國內(nèi)有研究報道，HCCR在肝癌內(nèi)中過表達，逐漸成為肝癌診斷線索[2]。B淋巴細胞瘤-2（B-cell Lymphoma-2，Bcl-2）可抑制多種原因引起的細胞凋亡，其過表達可使細胞抵抗正常凋亡。

因此，為了進一步探究其在CRC組織中的作用機制，本文對其CRC組織和癌旁正常組織中的HCCR-1、Bcl-2蛋白表達情況進行檢測，揭露HCCR-1、Bcl-2蛋白表達之間的關(guān)系，評價其表達在診斷、治療CRC中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年3月至2022年3月本院收治的CRC患者的臨床資料。其中女60例，男53例，年齡35-78歲，平均年齡55.76±3.88歲。以距癌組織邊緣5 cm以上無癌浸潤的癌旁正常組織作為正常對照。

納入標準：臨床資料完整；均經(jīng)病理學確診；符合《NCCN結(jié)直腸癌診治指南（2017）》中CRC診斷標準[3]；排除標準：有嚴重造血系統(tǒng)疾病和傳染病者；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發(fā)癥者；合并惡性腫瘤和全身感染者；存在認知功能障礙和心理問題者。本研究經(jīng)本院倫理委員會同意，且患者及家屬知情簽署《知情同意書》。

1.2 方法

1.2.1 HCCR-1、Bcl-2表達的檢測方法

均采用免疫組化法對HCCR-1、Bcl-2表達進行檢測。選取手術(shù)后癌旁正常組織和CRC組織的石蠟塊（本院病理科提供）。4μm連續(xù)切片，60℃烤片1 h，切片脫蠟和水化，加0.01 mol·L-1枸櫞酸緩沖液（pH6.4）于高壓鍋中，加熱至噴氣，持續(xù)2 min。冷卻后，蒸餾水沖洗，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，用新鮮配置的3%雙氧水處理15 min，PBS浸洗3次，每次5 min，室溫封閉0.5 h。吸干液體，滴加鼠抗人HCCR-1、Bcl-2多克隆抗體，覆蓋標本，將切片放入濕盒中孵育，PBS浸洗3次，每次5 min，滴加Envision試劑，覆蓋標本，37℃保溫箱內(nèi)孵育1 h，PBS浸洗3次，每次5 min。室溫下顯色，復染，充分水洗，脫水透明，重型快干膠封片，在高倍顯微鏡下觀察。PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照采用試劑公司提供的陽性切片（試劑盒均購自上海通蔚試劑有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進行）。

1.2.2 HCCR-1、Bcl-2陽性表達的判定

陽性表達定位于細胞核和細胞質(zhì)，在腫瘤細胞胞質(zhì)、胞膜上可見棕黃或棕褐色顆粒。100×光鏡下取腫瘤實質(zhì)區(qū)，400×光鏡下隨機選擇5個視野。根據(jù)染色強度評分：陰性=0，弱陽性=1，中等陽性=2，強陽性=3。染色陽性細胞數(shù)分為：≤10%（陰性=0），11%-30%（弱陽性=1），31%-50%（中等陽性=2），＞50% （強陽性=3）。當兩者分數(shù)之和≥3時判定HCCR-1、Bcl-2為陽性。

1.3 觀察指標

（1）對比CRC組織和癌旁正常組織間HCCR-1、Bcl-2蛋白表達水平；（2）對比不同臨床特征CRC組織的HCCR-1、Bcl-2蛋白表達情況；（3）分析CRC組織中HCCR-1、Bcl-2表達的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，n（%）表示，χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearnan相關(guān)性分析；以α=0.05為檢驗水準。

2 結(jié)果

2.1 CRC組織與癌旁正常組織間HCCR-1、Bcl-2蛋白表達水平對比

HCCR-1在癌旁正常組織中無陽性表達，在113例CRC組織中有83例陽性表達，表達率為73.45%。

Bcl-2在113例CRC組織中有62例陽性表達，表達率為54.87%；且CRC組織HCCR-1、Bcl-2蛋白陽性率均顯著高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見圖1。

圖1 Bcl-2、HCCR-1免疫組化代表圖（×100）

2.2 不同臨床特征CRC組織的HCCR-1、Bcl-2蛋白表達情況

CRC組織中HCCR-1、Bcl-2的表達均與Dukes分期相關(guān)（P＜0.05）；均與患者年齡、性別、腫瘤大小、組織類型、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

表1 不同臨床特征CRC組織的HCCR-1、Bcl-2蛋白表達情況比較（例(%)）

2.3 CRC組織中HCCR-1、Bcl-2蛋白表達的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示在CRC組織中，HCCR-1蛋白表達與Bcl-2蛋白表達相關(guān)性呈負相關(guān)（r=-0.298，P＜0.05）。見表2。

表2 CRC組織中HCCR-1、Bcl-2蛋白表達相關(guān)性

3 討論

CRC是胃腸道中常見的惡性腫瘤，其具體病因目前尚未完全明確，有專家認為，可能是遺傳、環(huán)境、飲食習慣及消化道疾病等多種因素共同作用的結(jié)果，且我國CRC近幾年病死率呈明顯上升。

HCCR是近年來發(fā)現(xiàn)的致癌基因，與人類多種腫瘤密切相關(guān)，可作為診斷肝癌、乳腺癌的標志物。有研究表明，HCCR-1編碼的細胞膜外蛋白可造成線粒體功能障礙，以抵抗和抑制短波紫外線（Ultra Violet C，UVC）誘導的細胞凋亡[4]。有學者認為，HCCR-1通過與人宮頸癌癌基因結(jié)合蛋白-1（Human Cervical Cancer Oncogene Binding Protein -1，HCCRBP-1）相互作用來誘導腫瘤發(fā)生[5]。陳粉合等發(fā)現(xiàn)卵巢漿液性惡性腫瘤組患者的HCCR陽性表達率為70.00%，高于對照組的8.00%，臨床分期III、IV期、組織學分級為中、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢漿液性惡性腫瘤患者HCCR蛋白陽性表達水平較高，且通過單因素分析得出，組織學分級是影響卵巢漿液性惡性腫瘤患者HCCR蛋白水平的因素[6]。

潘云翠等學者采用免疫組化法檢測HCCR-1在乳腺浸潤性導管癌中的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HCCR-1在乳腺浸潤性導管癌中呈現(xiàn)高表達（66.9%，107/160），且HCCR-1表達與臨床分期，組織學分級，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，雌激素受體表達，孕激素受體表達相關(guān)[7]。

Bcl-2基因是近年來發(fā)現(xiàn)的細胞凋亡調(diào)控基因，通過抑制細胞凋亡來延長細胞壽命[8]。熊見等發(fā)現(xiàn)胃癌中細胞凋亡率及Bcl-2表達率在胃黏膜癌變進展中呈上升趨勢，且Bcl-2的過度表達使細胞凋亡受抑，從而促進胃癌的發(fā)生和發(fā)展[9]。本研究結(jié)果中HCCR-1蛋白在正常結(jié)腸粘膜組織中無表達，在CRC組織中陽性表達率為73.45%，這一結(jié)果與陳粉合、潘云翠等研究結(jié)果基本一致，提示HCCR-1蛋白過量表達與CRC早期發(fā)生及病程進展有關(guān)。另一方面，HCCR-1、Bcl-2的表達均與Dukes分期有關(guān)，且CRC組織HCCR-1、Bcl-2蛋白陽性率均顯著高于癌旁正常組織，說明HCCR-1、Bcl-2與腫瘤侵襲有關(guān)。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示在CRC組織中，HCCR-1與Bcl-2蛋白表達呈負相關(guān)，原因可能是Bcl-2的抑制作用導致HCCR-1過表達，與熊見等研究結(jié)果類似。另外，HCCR-1、Bcl-2的表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、組織類型、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與陳粉合、潘云翠等研究結(jié)果不一致，可能是因為本研究的樣本量太小。

綜上，HCCR-1、Bcl-2蛋白在CRC組織中存在過表達狀態(tài)，與其臨床病理特征顯著相關(guān)，并能作為一種新的預后判斷指標和治療靶點，為疾病診斷、預后判斷提供參考價值。