灰樹花醇提物對α-葡萄糖苷酶和EV71的抑制作用及其活性成分分析

何君強(qiáng), 熊雯宇, 黃 瑩, 劉 斌,2

(1.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院；2.福建農(nóng)林大學(xué)國家菌草工程技術(shù)研究中心，福建 福州 350002)

糖尿病和手足口病發(fā)病率高，已成為重大公共衛(wèi)生問題，給患者健康和社會經(jīng)濟(jì)帶來沉重負(fù)擔(dān).腸道病毒71型(enterovirus 71, EV71)是小核糖核酸病毒科腸道病毒屬的一種嗜神經(jīng)性病毒，也是嬰幼兒手足口病的主要病原體[1].目前，關(guān)于高效抗EV71感染藥物的研究多處于基礎(chǔ)試驗階段.市面上用于治療糖尿病的藥物雖然可以有效控制血糖水平，但對患者腸道功能的副作用不容忽視.食藥用菌是一類珍貴的佳肴與藥材，除了含有豐富的礦物質(zhì)、氨基酸和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)外，還富含多種具有降血糖、血脂，增強(qiáng)機(jī)體免疫，抗病毒和腫瘤等藥理作用的活性物質(zhì)[2].蔡超等[3]研究結(jié)果顯示皺蓋假芝和棗翹鱗肉齒菌的水提物對HSV-1、EV71-CSFI4和EV71-PTPS病毒均具有較好的抑制效果.張雪松等[4]發(fā)現(xiàn)羊肚菌、桑黃、靈芝、蟬花、蟲草水提取物對4種糖苷酶均有不同程度的抑制作用.灰樹花(Grifolafrondosa)隸屬多孔菌科樹花菌屬，是一種大型藥食兩用真菌[5]，含有多種生物活性物質(zhì)，如可抑制EV71復(fù)制的新型多糖GFP1[6]和具有降血糖作用的多糖GFP-W[7].目前關(guān)于灰樹花其他活性成分的相關(guān)研究較少.Chen et al[8]僅發(fā)現(xiàn)灰樹花醇提物中的吡咯生物堿對α-葡萄糖苷酶表現(xiàn)出抑制作用.

本研究擬以70%乙醇作為提取溶劑，按照極性從低到高依次萃取，得到不同極性萃取物，研究各萃取物對α-葡萄糖苷酶和EV71的抑制作用；同時利用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry, UPLC-MS)和分子對接技術(shù)，分析萃取物中發(fā)揮活性作用的潛在活性物質(zhì)及其相互作用模式，以期發(fā)現(xiàn)灰樹花中具有降血糖和抗病毒作用的活性物質(zhì)，為以灰樹花作為功能性食品進(jìn)行開發(fā)和利用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 供試材料

灰樹花子實(shí)體購于浙江省龍泉市建松土特產(chǎn)經(jīng)營部，經(jīng)福建農(nóng)林大學(xué)國家菌草工程技術(shù)研究中心鑒定；人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞(RD細(xì)胞)由中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫提供；EV71由南京大學(xué)提供；無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇(分析純)購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸鹽緩沖液、阿卡波糖、α-葡萄糖苷酶、對硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷(PNPG)、甲醇、乙腈(色譜純)購于上海麥克林生化科技有限公司；CCK-8試劑盒購于北京蘭博利德生物技術(shù)有限公司；DMEM高糖液體培養(yǎng)基、血清、青霉素、鏈霉素、胰酶購于Biosharp公司.

1.2 儀器與設(shè)備

DHG-9240A電熱恒溫干燥箱由上海一恒科技有限公司提供；HH-3A數(shù)顯三用水浴鍋由金壇市精達(dá)儀器制造廠提供；KH20R-Ⅱ高速離心機(jī)由湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司提供；MCO-5M型三氣培養(yǎng)箱由日本PHCbi公司提供；FD-3冷凍干燥機(jī)由上海五久自動化設(shè)備有限公司提供；MK3型酶標(biāo)儀、Vanquish液相色譜儀、QE-HF-X質(zhì)譜儀均由美國Thermo公司提供.

1.3 方法

1.3.1 灰樹花醇提物不同極性萃取物的制備 取灰樹花子實(shí)體烘干，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎至粗粉，以70%乙醇作為溶劑，在50 ℃下超聲提取2次，每次1 h，合并提取液，減壓濃縮得到灰樹花70%乙醇提取物.將70%乙醇提取物用適量蒸餾水充分溶解后，采用液液萃取法依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取至有機(jī)層無色，合并各萃取液，濃縮干燥得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物.

1.3.2α-葡萄糖苷酶抑制率的測定 參照文獻(xiàn)[9]，并稍作修改.利用磷酸鹽緩沖液(0.1 mmol·L-1，pH=6.8)配制1 000.0、500.0、250.0、125.0、62.5 μg·mL-1的萃取物.取30 μL樣品置于孔板中，加入30 μLα-葡萄糖苷酶(0.2 U·mL-1)于37 ℃下靜置10 min；加入30 μL的底物P-NPG (5 mmol·L-1)，37 ℃下孵育15 min；加入90 μL Na2CO3溶液(0.1 mol·L-1)終止反應(yīng)，測定光密度(D405 nm).以相同濃度的阿卡波糖作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液替代樣品作為對照組，用磷酸鹽緩沖液替代α-葡萄糖苷酶作為背景組.計算公式表示如下：

式中：D1為試驗組的D405 nm；D2為試驗背景組的D405 nm；D3為對照組的D405 nm；D4為對照背景組的D405 nm.

1.3.3 物質(zhì)毒性的測定 取處于對數(shù)生長期的RD細(xì)胞，用胰蛋白酶消化2 min后用10% DMEM培養(yǎng)基制成每孔含有5 000個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，鋪入孔板中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(37 ℃,5%CO2).待細(xì)胞生長至60%～70%時，棄去上清液，加入800、400、200、100、50、25 μg·mL-1萃取物，在2%DMEM培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每個濃度設(shè)置6個重復(fù)，同時設(shè)置陰性對照組和不加細(xì)胞的空白組.培養(yǎng)48 h后，每孔加入10 μL CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)2 h后測定D450 nm.計算細(xì)胞活力：

式中：D0為不加細(xì)胞和不加樣品的D450 nm；D1為加細(xì)胞和樣品的D450 nm；D2為加細(xì)胞和不加樣品的D450 nm.

1.3.4 抗EV71活性測定 取RD細(xì)胞懸液鋪于孔板中培養(yǎng)24 h，然后每孔加入10 μL的EV71病毒溶液；繼續(xù)培養(yǎng)2 h后，加入400、200、100、50、25 μg·mL-1萃取物與利巴韋林，每個濃度設(shè)置6個重復(fù).同時設(shè)置模型組、陰性對照組和陽性對照組.24 h后，利用CCK-8試劑盒測定D450 nm.計算病毒抑制率：

式中：D0為加病毒、不加樣品的D450 nm；D1為加病毒和樣品的D450 nm；D2為不加病毒和樣品的D450 nm.

1.3.5 化學(xué)成分分析 色譜條件：ACQUITY UPLC?HSS T3(1.8 μm，2.1 mm×150 mm)，流速0.25 mL·min-1，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量2 μL.流動相(負(fù)離子模式)：5 mmol·L-1甲酸銨水(A)+乙腈溶液(B).流動相(正離子模式)：0.1%甲酸水(C)+0.1%甲酸乙腈(D).洗脫程序：0～1 min，2%B/D；1～9 min，2%～50%B/D；9～12 min，50%～98%B/D；12.5～13.5 min，98%B/D；13.5～14.5 min，2%～98%B/D.

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源(ESI)，正負(fù)離子電離模式，以分辨率70 000進(jìn)行全掃描，其中毛細(xì)管溫度為325 ℃，碰撞電壓為30 eV.

1.3.6 蛋白靶點(diǎn)分子對接 化合物結(jié)構(gòu)式來自PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)，之后導(dǎo)入Chem3D軟件，利用MM2模塊進(jìn)行優(yōu)化以及能量最小化，保存為sdf格式文件,作為分子對接的配體分子.利用RCSB數(shù)據(jù)庫(https://www.rcsb.org/)尋找a-glucosidase與EV71病毒衣殼蛋白VP1[6]的結(jié)構(gòu)，之后利用Schr?dinger軟件包對蛋白進(jìn)行能量最小化,以及幾何結(jié)構(gòu)的優(yōu)化.在Autodock中導(dǎo)入化合物與蛋白分子，根據(jù)蛋白結(jié)構(gòu)的預(yù)測信息確定其結(jié)合位點(diǎn)，盒子大小設(shè)置為20 ?×20 ?×20 ?，格點(diǎn)距離為0.375 ?.最后通過標(biāo)準(zhǔn)精度對接方法進(jìn)行分子對接及篩選.將對接后化合物與蛋白形成的復(fù)合物利用Pymol 2.1軟件進(jìn)行可視化，得到化合物與蛋白的結(jié)合模式.

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗重復(fù)3次，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示.采用GraphPad Prism 7.0等軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理、分析和繪圖.

2 結(jié)果與分析

2.1 灰樹花醇提物不同極性萃取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用

α-葡萄糖苷酶參與將淀粉分解為葡萄糖的過程，導(dǎo)致血糖水平升高.因此，α-葡萄糖苷酶是2型糖尿病治療的重要靶點(diǎn).α-葡萄糖苷酶抑制劑不僅能延緩葡萄糖的水解和吸收，有效控制餐后血糖水平，還能保護(hù)胰島細(xì)胞，緩解糖尿病并發(fā)癥[10].由圖1可知，62.5～1 000.0 μg·mL-1萃取物對α-葡萄糖苷酶均具有抑制作用，對α-葡萄糖苷酶的抑制率隨著萃取物濃度的增大而增大，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系.1 000 μg·mL-1正丁醇萃取物對α-葡萄糖苷酶的抑制率達(dá)到95%以上(抑制作用顯著).通過計算IC50可知不同含量萃取物和阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制能力由大到小依次為：(174.12±10.67) μg·mL-1正丁醇萃取物>(216.41±13.21) μg·mL-1阿卡波糖>(322.49±7.31) μg·mL-1石油醚萃取物>(378.74±20.01) μg·mL-1水溶物>(596.55±18.14) μg·mL-1乙酸乙酯萃取物.結(jié)果顯示正丁醇萃取物對α-葡萄糖苷酶的抑制效果強(qiáng)于其他萃取物及阿卡波糖.黃余燕等[11]研究結(jié)果也表明正丁醇萃取物對α-葡萄糖苷酶具有較好的抑制作用，但是萃取物中發(fā)揮作用的活性成分還有待進(jìn)一步研究.

2.2 灰樹花醇提物不同極性萃取物對RD細(xì)胞增殖能力的影響

由圖2可知，當(dāng)各萃取物濃度低于400 μg·mL-1時，各萃取物作用后的細(xì)胞活力與正常模型組相比無顯著差異(P>0.05)，表明在此濃度范圍內(nèi)RD細(xì)胞能正常生長.與正常組相比，800 μg·mL-1石油醚萃取物和水溶物作用后的細(xì)胞活力存在明顯差異(P<0.05).為了不影響樣品抗病毒效果的評估，選取25～400 μg·mL-1萃取物進(jìn)行抗EV71活性研究.

*表示與陽性對照組(阿卡波糖)相比差異顯著(P<0.05).圖1 灰樹花醇提物不同極性萃取物對α-葡萄糖苷酶的抑制效果Fig.1 Inhibitory effect of different solvent extracts from G. frondosa ethanal extract on α-glucosidase

*表示與正常組相比差異顯著(P<0.05).圖2 灰樹花醇提物不同極性溶劑萃取物對RD細(xì)胞的的毒性作用Fig.2 Toxic effect of different solvent extracts from G. frondosa ethanal extract on RD cells

2.3 灰樹花醇提物不同極性萃取物的抗EV71活性

EV71屬于小RNA病毒科A型腸道病毒屬，感染后可能引起神經(jīng)系統(tǒng)癥狀或心肌炎性心臟病等并發(fā)癥，接種疫苗是預(yù)防EV71感染的有效方法[12].為降低利巴韋林的毒副作用，選擇100 μg·mL-1利巴韋林作為陽性對照[13].由圖3可知，各萃取物對EV71的抑制作用與質(zhì)量濃度呈正比，當(dāng)質(zhì)量濃度低于50 μg·mL-1時，各萃取物對EV71的抑制率低于50%.石油醚萃取物與乙酸乙酯萃取物對EV71的抑制作用較弱，當(dāng)質(zhì)量濃度為400 μg·mL-1時，抑制率為50%左右.100 μg·mL-1正丁醇萃取物的抑制率達(dá)55%以上，200 μg·mL-1正丁醇萃取物對EV71的抑制作用顯著高于利巴韋林(P<0.05).400 μg·mL-1水溶物的抗病毒效果明顯強(qiáng)于利巴韋林(P<0.05).通過計算IC50可知，不同極性萃取物對EV71的抑制能力由大到小依次為：(84.41±5.12) μg·mL-1正丁醇萃取物>(121.56±12.35) μg·mL-1水溶物>(289.48±14.41) μg·mL-1石油醚萃取物>(393.37±30.93) μg·mL-1乙酸乙酯萃取物.水溶物的抗病毒作用可能源于含有的多糖成分[6]，而正丁醇萃取物的抗EV71效果強(qiáng)于水溶物，但是發(fā)揮作用的活性成分尚不明確.

2.4 正丁醇萃取物的化學(xué)成分分析

與其他萃取物相比，正丁醇萃取物對α-葡萄糖苷酶和EV71的抑制效果較好.通過峰面積列出正丁醇萃取物中相對含量較高的10個化合物，表1顯示正丁醇萃取物主要含有氨基酸、甾醇、酯類和核苷類物質(zhì)，其中，含量最高的4-氨基丁酸是一種重要的中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，具有改善機(jī)體睡眠質(zhì)量的生理功效[14]，L-色氨酸常用作食品強(qiáng)化劑、抗氧劑[15].研究[16]表明氨基酸能促進(jìn)胰高血糖素的分泌，從而使血糖水平升高.植物鞘氨醇和麥角甾醇對腫瘤細(xì)胞活性具有顯著的抑制作用，但是Chen et al[8]發(fā)現(xiàn)麥角甾醇及其衍生物不是灰樹花發(fā)揮降血糖作用的相關(guān)成分.5-甲基硫代腺苷能誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡[17]，尿苷具有促進(jìn)心肌細(xì)胞代謝，加速蛋白質(zhì)、核酸的生物合成和能量產(chǎn)生等作用[18].糖醇和酚類化合物能夠為機(jī)體清除自由基[19]，庚二酸常被用作生物素合成的前體[20].

*表示與陽性對照組(利巴韋林)相比差異顯著(P<0.05).圖3 灰樹花醇提物不同極性溶劑萃取物對EV71的抑制作用Fig.3 Inhibitory effect of different solvents extracts from G. frondosa ethanal extract on EV71

表1 正丁醇萃取物的UPLC-MS分析Table 1 UPLC-MS analysis of n-butanol extract

周麗琬等[21]發(fā)現(xiàn)薏苡仁中的順式-亞油酸甲酯對α-葡萄糖苷酶有較強(qiáng)的抑制作用；Su et al[22]的試驗結(jié)果顯示灰樹花正己烷提取物中的亞油酸可能是其發(fā)揮α-葡萄糖苷酶抑制作用的活性物質(zhì).此外，廣泛存在于自然界中的酯類化合物對人體健康也有積極的作用[23-24].

2.5 分子對接

通過分子對接研究亞油酸甲酯、α-葡萄糖苷酶和VP1蛋白之間的結(jié)合活性與結(jié)合模式.分子對接結(jié)果顯示亞油酸甲酯與α-葡萄糖苷酶的得分為-28.82 kJ·mol-1，而VP1的得分為-26.36 kJ·mol-1.一般認(rèn)為得分值<-20.92 kJ·mol-1則表示化合物與靶點(diǎn)之間有較好的結(jié)合活性[25]，表明亞油酸甲酯、α-葡萄糖苷酶和VP1之間均存在良好的結(jié)合活性.

根據(jù)結(jié)合模式可以看到亞油酸甲酯與α-葡萄糖苷酶相結(jié)合的氨基酸殘基(圖4).亞油酸甲酯可與ASN-258形成氫鍵，且氫鍵較短(平均長度為2.6 ?)，遠(yuǎn)小于傳統(tǒng)氫鍵的長度(3.5 ?)，結(jié)合能力強(qiáng).另外，該化合物具有很強(qiáng)的疏水性，能夠與PHE-282、 PRO-223、PHE-225、ILE-143、PHE-144、TYR-388、MET-385、PHE-163、ALA-200氨基酸形成π-π共軛相互作用，對穩(wěn)定小分子有重要作用.

A.3D結(jié)合模式圖;B.2D結(jié)合模式圖;C.詳細(xì)結(jié)合模式圖.圖4 亞油酸甲酯與α-葡萄糖苷酶的結(jié)合模式圖Fig.4 Binding mode of methyl linoleate with α-glucosidase

如圖5所示，亞油酸甲酯結(jié)合在VP1蛋白口袋深處，與VP1蛋白存在氫鍵及疏水的相互作用.亞油酸甲酯通過氫鍵與ASN-228、CYS-225氨基酸結(jié)合，并與MET-230、MET-229、PRO-226、ALA-224、ALA-275、ILE-113、ILE-111、PHE-204、TRP-203氨基酸存在很強(qiáng)的疏水作用，可有效促使亞油酸甲酯與VP1蛋白形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而阻止病毒進(jìn)入細(xì)胞.

綜上，亞油酸甲酯、α-葡萄糖苷酶和EV71的靶點(diǎn)蛋白在對接打分以及結(jié)合模式方面均存在較好表現(xiàn)，與蛋白關(guān)聯(lián)性較強(qiáng).表明亞油酸甲酯具有與α-葡萄糖苷酶和EV71結(jié)合的能力，從而發(fā)揮α-葡萄糖苷酶競爭抑制和阻止病毒入侵細(xì)胞的作用.

3 結(jié)論

本研究比較了灰樹花醇提物不同極性溶劑萃取物對α-葡萄糖苷酶和EV71的抑制作用，結(jié)果顯示正丁醇萃取物對EV71的抑制作用較強(qiáng)；同時對α-葡萄糖苷酶的抑制效果強(qiáng)于阿卡波糖.UPLC-MS與分子對接結(jié)果表明亞油酸甲酯在正丁醇萃取物中的含量較高，且可利用α-葡萄糖苷酶與EV71表面活性位點(diǎn)相結(jié)合而發(fā)揮活性作用.本研究發(fā)現(xiàn)灰樹花正丁醇萃取物對α-葡萄糖苷酶和EV71病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，亞油酸甲酯可作為治療糖尿病和手足口病的潛在活性成分.

A.3D結(jié)合模式圖;B.2D結(jié)合模式圖;C.詳細(xì)結(jié)合模式圖.圖5 亞油酸甲酯與VP1蛋白的結(jié)合模式圖Fig.5 Binding mode of methyl linoleate with VP1 protein

[1] WEN W H, QI Z X, WANG J. The function and mechanism of enterovirus 71 (EV71) 3C protease[J]. Current Microbiology, 2020,77(9):1968-1975.

[2] 熊雯宇,何君強(qiáng),黃梓芮,等.食藥用菌活性成分對酒精性肝損傷防護(hù)作用研究進(jìn)展[J].食品工業(yè),2022,43(4):221-225.

[3] 蔡超,雷蘇煒,陳少丹,等.十七種食藥用菌提取物抗病毒活性篩選[J].食用菌學(xué)報,2020,27(1):75-84.

[4] 張雪松,劉煥潁,謝春芹,等.珍稀食藥用菌水提取物對糖苷酶的抑制[J].北方園藝,2020(6):126-133.

[5] XIAO C, WU Q P, XIE Y Z, et al. Hypoglycemic effects ofGrifolafrondosa(Maitake) polysaccharides F2 and F3 through improvement of insulin resistance in diabetic rats[J]. Food & Function, 2015,6(11):3567-3575.

[6] ZHAO C, GAO L Y, WANG C Y, et al. Structural characterization and antiviral activity of a novel heteropolysaccharide isolated fromGrifolafrondosaagainst enterovirus 71[J]. Carbohydrate Polymers, 2016,144:382-389.

[7] CHEN Y, LIU Y, SARKER M M R, et al. Structural characterization and antidiabetic potential of a novel heteropolysaccharide fromGrifolafrondosavia IRS1/PI3K-JNK signaling pathways[J]. Carbohydrate Polymers, 2018,198:452-461.

[8] CHEN S D, YONG T Q, XIAO C, et al. Pyrrole alkaloids and ergosterols fromGrifolafrondosaexert anti-α-glucosidase and anti-proliferative activities[J]. Journal of Functional Foods, 2018,43:196-205.

[9] 湯宇青,呂峰,林海蘭,等.石莼水溶性膳食纖維的理化性質(zhì)及體外降血糖的活性[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2017,46(6):702-707.

[10] DJEUJO F M, FRANCESCONI V, GONELLA M, et al. Anti-α-glucosidase and antiglycation activities ofα-mangostin and new xanthenone derivatives: enzymatic kinetics and mechanistic insights throughinvitrostudies[J]. Molecules, 2022,27(2):547.

[11] 黃余燕,羅寶平,李淑敏,等.山莓果實(shí)不同極性萃取物降血糖作用研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2022,18(10):87-90.

[12] 林錦霞,于娟,陳志亮,等.片仔癀抗EV71型腸道病毒的研究[J].中國中藥雜志,2022,47(5):1343-1349.

[13] 董娜,康永平.匹多莫德聯(lián)合利巴韋林治療對手足口病患兒療效及對D-二聚體含量的影響[J].血栓與止血學(xué),2022,28(3):663-664.

[14] 莫小葉,駱鵬飛,俞蘭秀,等.富含γ-氨基丁酸酸奶對小鼠睡眠的促進(jìn)作用[J].現(xiàn)代食品科技,2020,36(11):29-35.

[15] 蘇建民.大腸桿菌發(fā)酵液中L-色氨酸的分離純化[D].福州:福建師范大學(xué),2021:2-3.

[16] 余愛勇,趙迎春,趙玉武,等.血糖升高速度對糖尿病模型大鼠低血糖性腦損傷的影響[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2018,31(2):126-129.

[17] 張青松.5′-甲基硫代腺苷對結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的影響及其相關(guān)機(jī)制的研究[D].天津:天津醫(yī)科大學(xué),2008:23-24.

[18] 劉怡琳.尿苷對肥胖和高脂飲食小鼠肝臟代謝的影響及其調(diào)控機(jī)制研究[D].南昌:南昌大學(xué),2021:15.

[19] 李小奇,金漢宏,吳繼炎,等.不同劑量低濃度甘露醇對重度燒傷氧自由基清除效果的影響[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育,2018,16(2):190-192.

[20] 朱平華.1,7-庚二酸的合成研究[J].化學(xué)世界,2006(4):222-224.

[21] 周麗琬,李穎,陳惠琴,等.薏苡仁脂肪酸的α-葡萄糖苷酶抑制活性[J].食品工業(yè),2022,43(6):216-220.

[22] SU C H, LU T M, LAI M N, et al. Inhibitory potential ofGrifolafrondosabioactive fractions onα-amylase andα-glucosidase for management of hyperglycemia[J]. Biotechnol Appl Biochem, 2013,60(4):446-452.

[23] 肖冬光.白酒釀造過程中酯類物質(zhì)形成機(jī)理探討[J].釀酒科技,2022(9):17-24.

[24] 秦慧真,林思,鄧玲玉,等.穿心蓮內(nèi)酯藥理作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志,2022,28(6):272-282.

[25] 梁建文,王晉平,謝榮鑫,等.淫羊藿治療阿爾茨海默病作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接研究[J].湖北民族大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2022,39(1):6-11.