林興生, 林占熺, 林冬梅, 林 輝, 羅海凌, 王澤輝, 馬運龍, 鐘思欽

(福建農(nóng)林大學(xué)國家菌草工程技術(shù)研究中心，福建 福州 350002)

銀耳(TremellafuciformisBerk)又名白木耳、雪耳、白耳子，是一種著名的食用菌和藥用菌[1].我國是銀耳生產(chǎn)大國[2]，銀耳產(chǎn)量約占世界銀耳總產(chǎn)量的90%，銀耳是福建省食用菌的特色產(chǎn)品，世界銀耳看中國，中國銀耳看福建[3].銀耳栽培包括段木栽培和代料栽培，段木栽培以闊葉樹木材為主，代料栽培以木屑、農(nóng)作物下腳料(棉籽殼、甘蔗渣、玉米芯)等原料為主[1,4].林木再生能力弱、生長周期長，菌業(yè)的快速發(fā)展導(dǎo)致菌業(yè)生產(chǎn)與森林保護之間的“菌林矛盾”日益突出，隨著各項保護森林資源和生態(tài)環(huán)境政策的出臺，各地政府紛紛采取相應(yīng)措施，限制以林木為原料的食藥用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展規(guī)模，以林木為原料發(fā)展菌業(yè)已難以為繼[5-6].目前，農(nóng)作物下腳料，如玉米秸稈、棉籽殼等成為替代林木的主要原料來源，但我國被農(nóng)藥污染的農(nóng)業(yè)環(huán)境面積達2 000多萬hm2，受農(nóng)藥等污染的農(nóng)林產(chǎn)品下腳料就有2 000多億kg，以這些農(nóng)林產(chǎn)品下腳料為主要原料生產(chǎn)的食用菌可能存在農(nóng)藥殘留風(fēng)險；棉籽殼中含有棉酚，可導(dǎo)致不孕不育，以其為原料栽培的食用菌產(chǎn)品也可能存在安全隱患[7-8].有關(guān)部門規(guī)定以棉籽殼代料栽培的食用菌不能申報綠色食品.

不同原料、不同配方栽培的銀耳，其生物學(xué)效率，蛋白質(zhì)、氨基酸、總糖、粗多糖等營養(yǎng)成分的含量及重金屬含量、農(nóng)藥殘留、棉酚等含量不同，品質(zhì)具有一定的差異[9-14].福建農(nóng)林大學(xué)林占熺研究員發(fā)明的“以草代木”菌草栽培食用菌技術(shù)，可有效解決“菌林矛盾”，特別是用鮮菌草栽培食用菌，破解了鮮活材料不能直接栽培腐生型食用菌的難題，減少菌草干燥環(huán)節(jié)，降低了成本[15-17].本研究以當(dāng)前廣泛推廣種植的‘綠洲1號’(Arundodonaxcv. ‘Lvzhou No.1’)鮮菌草為原料替代木屑或棉籽殼等農(nóng)作物下腳料工廠化周年瓶栽銀耳，對鮮菌草栽培的銀耳進行質(zhì)量和安全性評價，旨在為實現(xiàn)鮮菌草綠色栽培銀耳提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 菌株來源

供試菌株為經(jīng)篩選的適宜鮮菌草工廠化栽培的銀耳菌株Tr6.

1.2 培養(yǎng)料配方的設(shè)置

以木屑、棉籽殼原料為對照，‘綠洲1號’鮮菌草為主要原料工廠化周年瓶栽銀耳，培養(yǎng)料配方設(shè)置6個處理(表1).其中，F(xiàn)1為鮮菌草配方栽培組，F(xiàn)2為鮮菌草+木屑配方栽培組，F(xiàn)3為鮮菌草+棉籽殼配方栽培組，CK1為木屑配方栽培組，CK2、CK3為棉籽殼配方栽培組.‘綠洲1號’鮮菌草采收后及時粉碎成3～7 mm的顆粒，測定其含水量，將鮮菌草折算為干物質(zhì)，按配方配制培養(yǎng)料.CK1、CK2、CK3每瓶濕料質(zhì)量560 g，含水量58%，干料質(zhì)量235.2 g;其他配方栽培組每瓶濕料質(zhì)量520 g，含水量60%，干料質(zhì)量208 g.

表1 工廠化周年瓶栽銀耳培養(yǎng)料配方的設(shè)置1)Table 1 Different formulas for industrial annual cultivation of bottled T. fuciformis ω/(g·kg-1)

1.3 栽培方法

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 營養(yǎng)成分的測定 蛋白質(zhì)、粗纖維、脂肪、灰分、總糖、氨基酸等營養(yǎng)成分由福州海關(guān)技術(shù)中心檢測.蛋白質(zhì)含量采用GB 5009.5—2016[18]的方法測定；粗纖維含量采用GB/T 5009.10—2003[19]的方法測定；脂肪含量采用GB 5009.6—2016[20]的方法測定；灰分含量采用GB 5009.4—2016[21]的方法測定；總糖(以葡萄糖計)含量采用GB/T 15672—2009[22]的方法測定；氨基酸含量采用GB 5009.124—2016[23]的方法測定.粗多糖含量由福建省分析測試中心檢測，采用NY/T 1676—2008[24]的方法測定.多糖肽采用DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析和Sephadex G-200分子篩凝膠層析法分離純化.

1.4.2 重金屬含量的測定 重金屬含量由福州海關(guān)技術(shù)中心檢測.鎘(以Cd計)含量采用GB 5009.15—2014[25]的方法測定；鉛(以Pb計)含量采用GB 5009.12—2017[26]的方法測定；總汞(以Hg計)含量采用GB 5009.17—2014[27]的方法測定；總砷(以As計)含量采用GB 5009.11—2014[28]的方法測定.

1.4.3 農(nóng)藥殘留的測定 農(nóng)藥殘留由福州海關(guān)技術(shù)中心檢測.吡蟲啉、咪鮮胺、多菌靈的含量采用GB/T 20769—2008[29]的方法測定；敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、百菌清、六六六、滴滴涕、溴氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和高效氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯和高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯和高效氯氰菊酯的含量采用NY/T 761—2008[30]的方法測定.

1.4.4 棉酚含量的測定 將每組樣品混合均勻后用液氮研磨，精確稱取3份5 mg粉末樣品置于15 mL棕色離心管中，加入5 mL丙酮提取液，振蕩混勻 30 min，再于5 000 r·min-1離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液于另一棕色離心管中，重復(fù)提取2次，合并3次上清液.上清液于室溫下用氮氣減壓至干燥，用0.500 0 mL色譜級丙酮溶解定容，混勻過0.22 μm濾膜后上機測定.按以下條件，采用TSKgel ODS-80Ts色譜柱(4.6 mm×250 mm,安捷倫科技有限公司)進行檢測.柱溫：室溫；流速：1 mL·min-1；進樣量：10 μL；波長：235 nm；流動相：甲醇與0.55%乙酸水的體積比為20∶80.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配方栽培組銀耳子實體的質(zhì)量評價

表2 不同配方栽培組銀耳子實體的主要營養(yǎng)成分1)Table 2 Main nutrients of T. fuciformis fruiting body cultivated with different formulas ω/(g·kg-1)

2.1.1 主要營養(yǎng)成分 蛋白質(zhì)、粗纖維、脂肪、總糖等組成食物的主要營養(yǎng)成分，其含量可顯示食物營養(yǎng)豐富程度.菌草營養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量高于木屑，纖維素、木質(zhì)素等含量介于木屑和棉籽殼之間，碳氮比與棉籽殼相當(dāng)，顯著高于木屑,更易降解并為菌絲所吸收[15]，這是以菌草為原料栽培的銀耳子實體中的主要營養(yǎng)成分優(yōu)于木屑或棉籽殼栽培的主要原因.表2顯示，各配方栽培組銀耳子實體蛋白質(zhì)含量的大小表現(xiàn)為：F1>CK1>F2>F3>CK2>CK3.其中，F(xiàn)1的蛋白質(zhì)含量最高(137.0 g·kg-1)，其次為CK1(126.0 g·kg-1)；F1的蛋白質(zhì)含量分別比CK1、CK2高8.7%、53.2%，差異顯著；F3的蛋白質(zhì)含量顯著高于CK2、CK3，表明在棉籽殼栽培料中加入鮮菌草能夠提高銀耳子實體的蛋白質(zhì)含量.各配方栽培組銀耳子實體粗纖維含量的大小表現(xiàn)為：F1

2.1.2 氨基酸含量 表3顯示，各配方栽培組銀耳子實體氨基酸總量的大小表現(xiàn)為：F1>CK1>F2>F3>CK3>CK2.其中，F(xiàn)1的氨基酸總量最高(93.8 g·kg-1)，其次為CK1(87.9 g·kg-1)，F(xiàn)1比CK1高6.7%，差異顯著；CK2、CK3的氨基酸總量顯著低于F1，CK2的氨基酸總量最低(64.2 g·kg-1)，F(xiàn)1比CK2高46.1%.可見，在棉籽殼栽培料中加入鮮菌草能夠提高銀耳子實體氨基酸總量.

表3 不同配方栽培組銀耳子實體氨基酸的含量1)Table 3 Amino acid content of T. fuciformis fruiting body cultivated with different formula ω/(g·kg-1)

2.1.3 呈鮮味氨基酸含量 表4顯示，各配方栽培組銀耳子實體呈鮮味氨基酸總量的大小表現(xiàn)為：F1>CK1>F2>F3>CK3>CK2.其中，F(xiàn)1的呈鮮味氨基酸總量最高(35.9 g·kg-1)，分別比CK1、CK2高8.8%、49.6%.可見，在棉籽殼培養(yǎng)料中加入鮮菌草能夠提高銀耳子實體的鮮味.

2.1.4 主要活性成分 銀耳含有多糖、多糖肽等活性物質(zhì)，這些物質(zhì)具有藥用價值.其中，多糖有抗氧化、抗腫瘤等作用.表4顯示，各配方栽培組銀耳子實體粗多糖含量的大小表現(xiàn)為：F1、F3>CK3>CK1>CK2.其中，F(xiàn)1、F3的粗多糖含量最高(63.0 g·kg-1)，分別比CK1、CK2高5.0%、6.8%.各配方栽培組銀耳子實體多糖肽含量的大小表現(xiàn)為：F1>CK2>CK1.其中，F(xiàn)1的多糖肽含量比CK1高18.8%，差異顯著.

表4 不同配方栽培組銀耳子實體呈鮮味氨基酸和活性成分的含量1)Table 4 Flavor amino acid and active ingredient content of T. fuciformis fruiting body cultivated with different formula ω/(g·kg-1)

2.2 不同配方栽培組銀耳子實體的安全性評價

2.2.1 重金屬含量 表5顯示，不同配方栽培組銀耳子實體的重金屬含量符合綠色食品農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 749—2003[31].其中，F(xiàn)1的鎘、砷含量均低于CK1、CK2，汞含量則介于CK1、CK2之間，總體上F1的重金屬含量優(yōu)于CK1、CK2.

表5 不同配方栽培組銀耳子實體(干品)重金屬的含量Table 5 Heavy metal content of T. fuciformis fruiting body (dry basis) cultivated with different formula ω/(mg·kg-1)

2.2.2 農(nóng)藥殘留 表6顯示，F(xiàn)1銀耳子實體的農(nóng)殘含量均低于綠色食品農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 749—2003[31]規(guī)定的限量值，即達到綠色食品標(biāo)準(zhǔn).

表6 不同配方栽培組銀耳子實體的農(nóng)藥殘留1)Table 6 Pesticide residues of T. fuciformis fruiting body cultivated with different formula ω/(mg·kg-1)

2.2.3 棉酚含量 在F1、CK1銀耳子實體中未檢測出棉酚，CK2檢測出棉酚含量為16.76 mg·kg-1，但未超過我國食用油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 2716—2005[32]和農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 751—2007[33]規(guī)定的限量值.F1、F2、CK1因培養(yǎng)料中沒有加入棉籽殼，故不含棉酚.

3 討論

為獲得高產(chǎn)，銀耳栽培多以棉籽殼為主要原料.棉籽殼含有棉酚，棉酚急性中毒時會出現(xiàn)皮膚和胃灼燒、惡心、嘔吐、腹瀉、頭痛等癥狀；危急時出現(xiàn)下肢麻痹、昏迷、抽搐、便血等癥狀；嚴(yán)重時因呼吸、循環(huán)系統(tǒng)衰竭而死亡.因此，以棉籽殼為原料栽培銀耳，增加了銀耳的質(zhì)量風(fēng)險，國家有關(guān)部門規(guī)定以棉籽殼代料栽培的食用菌不能申報綠色食品[7-8].此外，隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，棉籽殼價格上漲，栽培成本提高.為此，需要尋找能安全生產(chǎn)、提高質(zhì)量、成本較低的銀耳培養(yǎng)料，從而提高銀耳品質(zhì)、價格和市場競爭力.規(guī)模種植的鮮菌草成本與木屑相當(dāng)，顯著低于棉籽殼；用鮮菌草栽培的銀耳產(chǎn)量高于木屑，略低于棉籽殼，且可生產(chǎn)符合綠色食品標(biāo)準(zhǔn)的銀耳，其售價是棉籽殼栽培的2倍.因此，用鮮菌草栽培的銀耳，其質(zhì)量和經(jīng)濟效益均高于用木屑或棉籽殼栽培.

菌草營養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)，碳氮比與棉籽殼相當(dāng)；且菌草生長快、生物量大、適應(yīng)性和抗病力強，生產(chǎn)過程基本無需使用農(nóng)藥，無農(nóng)藥殘留等問題，是無公害、無污染、安全、優(yōu)質(zhì)的食用菌栽培原料.但菌草作為食藥用菌栽培料時需要干燥，菌草直接曬干，需要較大場所和較長時間；且新鮮菌草遇到雨季容易腐爛變質(zhì)，尤其是我國南方雨季持續(xù)時間長，不利于菌草晾曬；若用烘干設(shè)備處理，則會增加成本.我國南方雨水多，高溫高濕同季，菌草干燥困難，極大限制了菌草栽培食用菌的發(fā)展.近年來采用新鮮菌草栽培香菇、平菇等食用菌，省去了繁瑣的菌草干燥過程，節(jié)約了培養(yǎng)基配制用水，縮短了食用菌生長周期，有效緩解南方菌草干燥難題，節(jié)約了生產(chǎn)成本.傳統(tǒng)食用菌理論認為，腐生菌類所需的營養(yǎng)物質(zhì)來自于已經(jīng)死亡的及無生活力的有機物，只能從枯死的木本和草本植物中吸收營養(yǎng)并形成子實體，人工栽培及商業(yè)性栽培的菇類幾乎都是腐生性菌類.活性植物細胞具有抗性，且含水量高達90%以上，菌絲無法生長，原料干燥的目的是殺死植物細胞，使其生理含水量降低.鮮菌草栽培打破了食用菌栽培傳統(tǒng)理論，可提升傳統(tǒng)菌業(yè)發(fā)展水平，促進產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展[15-17].

福建農(nóng)林大學(xué)國家菌草工程技術(shù)研究中心于2018—2020年利用鮮菌草開展了多批次的工廠化瓶栽銀耳試驗，篩選出了最適宜的配方，明確了栽培工藝，并用于規(guī)?；a(chǎn)，栽培的銀耳表現(xiàn)出了較強的穩(wěn)定性.本研究基于規(guī)模栽培的結(jié)果表明，采用‘綠洲1號’鮮菌草配方(F1)工廠化瓶栽銀耳，其蛋白質(zhì)含量分別比木屑配方(CK1)、棉籽殼配方(CK2)高8.7%、53.2%，其總糖含量與CK1相同，其氨基酸含量分別比CK1、CK2高6.7%、46.1%，其粗多糖含量分別比CK1、CK2高5.0%、6.8%，其重金屬含量、農(nóng)殘含量均符合綠色食品標(biāo)準(zhǔn)，且不含棉酚.此結(jié)果與前人用類蘆等菌草栽培銀耳[34]，用干、鮮類蘆，木屑和棉籽殼溫室栽培銀耳[35-36]，用鮮菌草工廠化栽培銀耳[37-38]的結(jié)果相符.此外，本研究結(jié)果還表明，在棉籽殼栽培料中加入鮮菌草可提高銀耳子實體蛋白質(zhì)和氨基酸的含量.利用‘綠洲1號’鮮菌草工廠化瓶栽銀耳可實現(xiàn)周年栽培，生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)、安全的銀耳產(chǎn)品，有利于促進符合綠色標(biāo)準(zhǔn)的銀耳栽培.