殼聚糖?羅倫隱球酵母涂膜處理對(duì)葡萄柚貯藏品質(zhì)的影響

黃二賓，杜嶸宇，楊清，吳化雨，李賢忠，王芳,2，鄧佳,3

殼聚糖?羅倫隱球酵母涂膜處理對(duì)葡萄柚貯藏品質(zhì)的影響

黃二賓1，杜嶸宇1，楊清1，吳化雨1，李賢忠1，王芳1,2，鄧佳1,3

（1.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，昆明 650224；2.西南地區(qū)生物多樣性保育國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650224；3.西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650224）

研究殼聚糖?羅倫隱球酵母生物活性膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)抗病保鮮及貯藏品質(zhì)的影響。以“里約紅”葡萄柚為實(shí)驗(yàn)材料，采用殼聚糖（10 g/L）、羅倫隱球酵母發(fā)酵液（1×107CFU/mL）、殼聚糖?羅倫隱球酵母復(fù)合液對(duì)采后葡萄柚果實(shí)進(jìn)行浸泡3 min處理，并設(shè)置CK組，在室溫條件（溫度為20 ℃±2 ℃，相對(duì)濕度為85%～90%）下貯藏。測(cè)定貯藏期間葡萄柚的果實(shí)發(fā)病率、果皮幾丁質(zhì)酶活性、β?1, 3?葡聚糖酶活性、質(zhì)量損失率、果實(shí)外觀色澤、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、貯藏品質(zhì)等指標(biāo)。通過(guò)主成分綜合評(píng)分法分析最佳的抗病保鮮方式。在室溫貯藏過(guò)程中，與CK組相比，殼聚糖、羅倫隱球酵母發(fā)酵液和殼聚糖?羅倫隱球酵母復(fù)合液處理組均能有效降低葡萄柚果實(shí)青霉病的發(fā)病率和病斑直徑，在一定程度上誘導(dǎo)提高果皮抗病防御酶活性；抑制葡萄柚果實(shí)失水，增強(qiáng)果實(shí)的鮮亮度；延緩營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失。其中，殼聚糖?羅倫隱球酵母復(fù)合液處理對(duì)保持采后葡萄柚果實(shí)的貯藏品質(zhì)最好。主成分分析結(jié)果表明，葡萄柚貯藏品質(zhì)的綜合得分順序?yàn)闅ぞ厶?羅倫隱球酵母復(fù)合膜>CTS膜>膜>CK。采用殼聚糖?羅倫隱球酵母生物活性膜處理對(duì)采后葡萄柚果實(shí)青霉病的抗病保鮮效果最好，能夠明顯降低果實(shí)的發(fā)病率，保持更好的貯藏品質(zhì)。

生物活性膜；葡萄柚；抗病；貯藏品質(zhì)

葡萄柚（）又稱西柚，系蕓香科柑橘屬常綠喬木果樹，是世界上柑橘四大類群之一[1]。柑橘類果實(shí)在采后貯藏過(guò)程中易感染綠霉、青霉等病害[2]。以擴(kuò)展青霉（,）引起的青霉病是最為嚴(yán)重、發(fā)病率最高的病害[3]。當(dāng)前，柑橘類果實(shí)的貯藏保鮮方法以化學(xué)殺菌劑和低溫貯藏為主[4]。大部分貯藏設(shè)備存在投資成本較高、操作要求較高等缺點(diǎn)，甚至存在食品安全隱患。近年來(lái)，涂膜保鮮技術(shù)在果品采后保鮮產(chǎn)業(yè)迅猛興起，探尋綠色環(huán)保的復(fù)合涂膜保鮮技術(shù)是柑橘類果品未來(lái)保鮮技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展趨勢(shì)。

殼聚糖（Chitosan, CTS）主要來(lái)源于甲殼素，具有可降解、抗菌性和成膜性，在食品包裝方面的應(yīng)用較多[5]，且它具有較好的附著性，將該膜涂于果實(shí)表面，可阻止氧氣的侵入和二氧化碳的排出，有效降低果實(shí)的呼吸作用，延緩組織細(xì)胞的衰老，阻止病原菌的侵入，延長(zhǎng)采后果品的貯藏時(shí)間[6]。單一殼聚糖涂膜的效果不及化學(xué)殺菌劑的效果，為了改善膜的抗菌性，進(jìn)一步提高殼聚糖涂膜的保鮮效果，可將一些抗菌物質(zhì)加入殼聚糖膜中，制成生物活性膜液。有研究表明，在殼聚糖中添加聚環(huán)氧乙烷可以提高膜的物理性質(zhì)[7]，向殼聚糖溶液中添加果皮提取物、植物精油、維生素C等可以提高其殺菌性能和抑菌性能[8]。生防菌——羅倫隱球酵母（,）具有較強(qiáng)的拮抗抑菌效力，還能誘導(dǎo)果品抗病防御系統(tǒng)的形成，既可單獨(dú)用于多種果品的采后病害防治，又能與物理方法、化學(xué)物質(zhì)和生物源物質(zhì)在采前、采后配合使用，故被認(rèn)為是一種具有良好應(yīng)用前景的生防酵母菌。有研究表明，在羅倫隱球酵母中添加藻朊酸鹽可以有效地抑制草莓的灰霉病[9]，在羅倫隱球酵母中添加氯化鈣可以有效地抑制梨的青霉病和灰霉病[10]。

有研究表明，海藻酸鈉?羅倫隱球酵母生物活性膜可降低藍(lán)莓的采后發(fā)病率[11]，顯著降低果實(shí)的質(zhì)量損失率和腐爛率，維持果實(shí)的糖、酸和花青素等含量，保持果實(shí)中SOD、CAT和POD酶的活性，減小超氧自由基對(duì)細(xì)胞的損害，維持采后藍(lán)莓的品質(zhì)[12]。前期研究發(fā)現(xiàn)，采用羧甲基纖維素與羅倫隱球酵母復(fù)合處理可抑制葡萄柚果實(shí)采后綠霉病的發(fā)生，有效防止貯藏期間果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的下降，表現(xiàn)出較好的保鮮效果[13]。目前，關(guān)于殼聚糖與羅倫隱球酵母復(fù)合膜處理對(duì)果實(shí)貯藏期外觀品質(zhì)的影響鮮有報(bào)道。鑒于此，文中將殼聚糖與羅倫隱球酵母（CTS?）發(fā)酵液制備成生物活性膜，研究其對(duì)葡萄柚果實(shí)貯藏期間抗病保鮮效果的影響。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料

主要材料：“里約紅” 葡萄柚，購(gòu)于云南省玉溪市嘎灑鎮(zhèn)葡萄柚果園；羅倫隱球酵母（.由筆者課題組前期分離自葡萄柚果實(shí)表面，并保存；擴(kuò)展青霉（.），分離自葡萄柚發(fā)病果實(shí)表面，并保存。

1.1.1 培養(yǎng)基配制

YM液體培養(yǎng)基、PDA固體培養(yǎng)基的配制參照馬電通等[2]的方法。

1.1.2 擴(kuò)展青霉、羅倫隱球酵母的活化

1）擴(kuò)展青霉（.）活化。將保存在甘油管的.進(jìn)行三級(jí)畫線，接種在PDA固體培養(yǎng)基上，并置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的溫度調(diào)至28 ℃。在3 d后采用顯微鏡觀察其形態(tài)，重復(fù)3次活化實(shí)驗(yàn)，以確保.成活，培養(yǎng)至1×105CFU/mL，備用。

2）羅倫隱球酵母（）活化。將保存好的接種在YM液體培養(yǎng)基中，并在28 ℃、120 r/min的搖床上培養(yǎng)至1×107CFU/mL，備用。

1.2 試劑及設(shè)備

主要試劑：殼聚糖（CTS），河南萬(wàn)邦實(shí)業(yè)有限公司；蛋白胨、麥芽浸粉、葡萄糖、酵母粉、瓊脂、3,5?二硝基水楊酸、酚酞、草酸、氫氧化鈉、甲醇、鹽酸，上海滬試實(shí)驗(yàn)器材股份有限公司；2,6?二氯酚靛酚鈉、3,5?二硝基水楊酸、冰乙酸、氫氧化鈉，國(guó)藥集團(tuán)；無(wú)水氯化鈣，昆明華森實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

主要設(shè)備：HH?B11?BS?Ⅱ恒溫培養(yǎng)箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；SW?CJ?2FD 超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；MIKRO 220R冷凍型臺(tái)式高速離心機(jī)、Nikon YS100型電子顯微鏡，廣州頤騰貿(mào)易有限公司。

1.3 方法

1.3.1 不同膜溶液的配制

配制20 g/L的殼聚糖溶液，用磁力機(jī)攪拌1 min，再加入7 mol/L的冰乙酸15 mL，繼續(xù)攪拌2 min，至殼聚糖完全溶解，再用40 g/L 氫氧化鈉調(diào)至殼聚糖溶液pH值為5.5～5.8。將20 g/L 殼聚糖溶液用蒸餾水稀釋為10 g/L 殼聚糖溶液。在 YM液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，至1×107CFU/mL, 待用。

1.3.2 不同膜的制備

將1.3.1節(jié)配制的CTS（20 g/L）與（1×107CFU/mL）按體積比1∶1均勻混合，得到CTS?膜液。將7 mL的CTS（10 g/L）、（1×107CFU/mL）和CTS?膜液分別倒入60 mm的培養(yǎng)皿，置于室溫條件干燥成膜后，在培養(yǎng)皿中加入30 g/L的氯化鈣溶液浸泡5 min，隨后將膜從培養(yǎng)皿上剝離下來(lái)，并置于室溫條件下晾干。

1.3.3 試樣處理

從購(gòu)買的果實(shí)中挑選色澤、大小、成熟度基本一致，無(wú)病害，無(wú)損傷的果實(shí)。用蒸餾水將果實(shí)洗浄后，再使用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦拭果實(shí)表面，以消毒，并置于框中在室溫下貯藏備用。將葡萄柚分為4組，每組有6個(gè)果實(shí)，共24個(gè)果實(shí)，分別置于蒸餾水（對(duì)照組，CK）、CTS（10 g/L）、、CTS?等4組液體中浸泡3 min，取出后晾干備用。

1.3.4 不同涂膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)抗青霉病的效果

1.3.5 生物活性膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)抗病防御酶活性的影響

果實(shí)浸泡涂膜處理方法同1.3.2節(jié)的操作方法，每個(gè)處理組有18個(gè)果實(shí)，共需72個(gè)果實(shí)。將處理后的果實(shí)置于室溫條件下晾干，采用塑料保鮮袋包裝果實(shí)，在室溫條件下貯藏。分別在處理后的0（處理后2 h）、5、10、15、20、25 d時(shí)對(duì)果肉、果皮進(jìn)行取樣，并做標(biāo)記，置于?80 ℃低溫冰箱中保存，待用。防御酶指標(biāo)的測(cè)定采用蘇州夢(mèng)犀生物科技股份有限公司試劑盒，防御酶包括幾丁質(zhì)酶（Chitinase, CHI）和β?1,3?葡聚糖酶（β?1, 3?glucanase, GLU）。

1.3.6 色差的測(cè)定

1.3.7 果實(shí)質(zhì)量損失率的測(cè)定

1.3.8 生物活性膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)貯藏品質(zhì)的影響

這里的處理?xiàng)l件和取樣時(shí)間同1.3.5節(jié)操作方法，測(cè)定指標(biāo)包括可滴定酸（Titrate acid, TA）、還原糖（Reducing sugar，RS）、抗壞血酸（Ascorbic acid，ASA）、可溶性固形物（Soluble solid content，SSC）等含量，參考曹建康等[16]的實(shí)驗(yàn)操作方法進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，共4個(gè)處理組，每組重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)2遍。采用Excel 2010、Origin 2019、SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、制圖、單因素方差分析和鄧肯氏多重比較，0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同膜材料的形態(tài)

從圖1可知，不同膜的顏色、形態(tài)和韌性也不同。顏色：膜呈現(xiàn)淡黃色半透明狀；CTS膜為無(wú)色透明；CTS?復(fù)合膜呈現(xiàn)淺黃色半透明狀，其顏色略比膜的顏色淺。表面光滑程度：CTS膜的表面粗糙；膜的表面光滑；CTS?復(fù)合膜的表面粗糙程度略低于CTS膜。柔韌性：CTS?復(fù)合膜的韌性較好，取出后膜的形態(tài)完整；CTS膜較脆、易折，取出后膜呈碎片狀；膜黏附在培養(yǎng)皿上，取膜較困難。結(jié)果表明，CTS?可以更好地在果實(shí)表面形成一層生物活性膜，提高了在果皮上的定殖能力，對(duì)果實(shí)的抑菌效果更好。

2.2 不同涂膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)青霉病的抑制效果

由圖2a可知，接種病原菌在2 d后使所有果實(shí)都開始發(fā)病，3個(gè)處理組與CK組相比，均顯著（<0.05）抑制了葡萄柚的果實(shí)發(fā)病率。其中，經(jīng)CTS?處理后果實(shí)的發(fā)病率最低。如圖2b所示，果實(shí)病斑的變化趨勢(shì)與發(fā)病率趨勢(shì)相似，各處理組果實(shí)的病斑直徑均呈上升趨勢(shì)。在接種后6～7 d，和CTS?處理組果實(shí)的病斑直徑顯著小于其他處理組果實(shí)的病斑直徑（<0.05）。在接種后8～11 d，CTS?處理組果實(shí)的病斑直徑最?。?0.05）。綜合來(lái)看，在整個(gè)貯藏期，CTS?對(duì)葡萄柚果實(shí)青霉?。ǎ┑囊种菩Ч铒@著（<0.05）。

段主任接過(guò)化驗(yàn)單便笑了，說(shuō)：他不是有醫(yī)保嗎？王姐趕緊解釋說(shuō)：我妹夫是有醫(yī)保，就是沒(méi)醫(yī)保，得了病，也不能治。主要不是我妹夫喘得歷害嗎？尋思能不折騰就盡量不折騰他了嗎。段主任便找來(lái)護(hù)士，抽出幾張化驗(yàn)單說(shuō)：廣雨辰這個(gè)病人我了解，除了肺功和心電外，其余的化驗(yàn)就不用給他做了。

圖1 不同生物活性膜材料

圖2 不同生物活性膜處理對(duì)貯藏期葡萄柚果實(shí)青霉病的影響

注：同一時(shí)間不同小寫字母表示在<0.05的水平差異性顯著，下同。

2.3 不同涂膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)抗病防御酶活性的影響

GLU和CHI在植物抵御病原菌侵染過(guò)程中起著重要作用[17]。由圖3a可知，整個(gè)貯藏期間葡萄柚果皮GLU酶活性總體呈先下降再上升再下降的趨勢(shì)，.處理組在第20天、第25 天與CK組無(wú)顯著性差異，其他處理組均有差異。CTS?.處理組果皮GLU酶活性顯著（<0.05）高于CK組。在貯藏期間，所有處理組中CTS?.的GLU酶活性最高。由圖3b可知，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，葡萄柚果皮CHI酶活性總體呈先上升后下降的趨勢(shì)。除貯藏第15天和25天外，在貯藏期間3組處理組與CK組相比，對(duì)果皮的CHI酶活性都有顯著性提高（<0.05）。在貯藏第10天，各處理組的CHI酶活性達(dá)到最高值，CTS?.、CTS和.處理組果實(shí)的酶活性分別比CK組果實(shí)的酶活性高1.45、1.45和1.32倍。

圖3 不同生物活性膜處理對(duì)貯藏期葡萄柚果皮酶活性的影響

2.4 不同涂膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)質(zhì)量損失率的影響

在貯藏期間，果實(shí)的呼吸作用會(huì)影響水分含量，導(dǎo)致水分逐漸流失，從而影響果實(shí)的商品價(jià)值。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理組果實(shí)的質(zhì)量損失率不斷上升，見圖4。在貯藏期間，3組涂膜處理組果實(shí)的質(zhì)量損失率均低于CK組果實(shí)的質(zhì)量損失率，且差異顯著（<0.05），除第15天.處理組外。在貯藏25 d時(shí)，CTS?.、CTS和.組果實(shí)的質(zhì)量損失率比CK組果實(shí)的質(zhì)量損失率分別降低了1.37%、4.12%、6.53%。

圖4 不同生物活性膜處理對(duì)貯藏期葡萄柚果實(shí)質(zhì)量損失率的影響

2.5 不同涂膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)外觀色澤的變化

隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)的值總體呈下降的趨勢(shì)，CTS?.處理組果皮的值高于CK組的值，在貯藏初期（5～10 d）存在顯著性差異（<0.05），這表明CTS?.處理能夠提高果皮的亮度。在整個(gè)貯藏期間，除第20天外，CTS?.處理組果皮的值顯著（<0.05）低于CK組的值，這表明CTS?.組果皮呈綠色，CK組果皮由綠轉(zhuǎn)紅；除貯藏第5天外，CTS?.處理組果皮的值顯著（<0.05）高于CK組果實(shí)的值，這表明CTS?.組與CK組相比，其果皮顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)黃色的時(shí)間提前。此外，單一顏色不能代表果皮色澤的真實(shí)變化，在貯藏10～25 d時(shí)，CTS?.處理組果皮的/值顯著（<0.05）低于CK組的/值，該處理有效延緩了果皮色澤向紅黃色轉(zhuǎn)變的進(jìn)程。在貯藏中后期（15～25 d），CTS?.處理組果皮的值顯著（<0.05）高于CK組的值，有效增加了果皮的色澤飽和度，見表1。

采后葡萄柚果實(shí)在后熟作用下，其果皮從青綠向黃紅轉(zhuǎn)變，CTS?.處理在一定程度上維持了果品采收時(shí)的外觀光澤品質(zhì)，延緩了果皮后熟轉(zhuǎn)色的進(jìn)程。

2.6 不同涂膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的影響

在葡萄柚果實(shí)中含有豐富的糖、酸和抗壞血酸，隨著果實(shí)貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，以及貯藏環(huán)境的影響，這4種成分會(huì)隨之變化，因此可以將其作為評(píng)價(jià)果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和貯藏效果的重要指標(biāo)[18]。

由圖5a可以看出，果實(shí)的抗壞血酸含量呈先升后降的趨勢(shì)。原因是，近熟果實(shí)采后在短期內(nèi)其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（糖、抗壞血酸等）仍會(huì)繼續(xù)積累，含量會(huì)不斷升高，抗壞血酸含量也會(huì)有所增加。在貯藏期間果實(shí)的呼吸作用持續(xù)進(jìn)行，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)會(huì)作為呼吸底物被消耗。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗減少，因此抗壞血酸含量不斷降低。在貯藏過(guò)程中，CTS?.與CK組果實(shí)的抗壞血酸含量存在顯著性（<0.05）差異。在貯藏20 d時(shí)，各處理組果實(shí)的抗壞血酸含量達(dá)到了峰值，其中CTS?.處理組果實(shí)的抗壞血酸含量最高，顯著高于其他處理組（<0.05）。在貯藏25 d時(shí)，果實(shí)的ASA含量開始下降，與CK組相比，采用3種處理均能延緩果實(shí)抗壞血酸含量的下降進(jìn)程。

表1 不同生物活性膜處理對(duì)貯藏期葡萄柚果實(shí)外觀品質(zhì)的影響

注：表示果皮的亮度；為正值表示紅色，為負(fù)值表示綠色；為正值表示黃色，為負(fù)值表示藍(lán)色；表示飽和度；、、、越大表示顏色越深。

如圖5b所示，在貯藏期間，CK組葡萄柚果實(shí)的可滴定酸含量持續(xù)減少。經(jīng)CTS?.處理后，在貯藏早期有效維持了果實(shí)的可滴定酸含量。在貯藏期間，除CTS和.處理在第5、15天外，其他處理組果實(shí)的可滴定酸含量均顯著（<0.05）高于CK組果實(shí)的可滴定酸含量。

由圖5c可見，采后葡萄柚果實(shí)的可溶性固形物含量增加。3種處理均不同程度地促進(jìn)了可溶性固形物的增加，CTS?.處理的效果最明顯，在貯藏期間，該處理組果實(shí)的可溶性固形物含量顯著高于CK組果實(shí)（<0.05）的可溶性固形物含量。

由圖5d可知，在貯藏期間葡萄柚果實(shí)的還原糖含量呈先升后降的趨勢(shì)。經(jīng)3種涂膜處理后，葡萄柚果實(shí)的還原糖含量保持相同的變化趨勢(shì)，并且顯著（<0.05）提高了果實(shí)的還原糖含量。CTS?.處理的效果最優(yōu)，該處理組果實(shí)的還原糖含量明顯（<0.05）高于其他涂膜處理組果實(shí)的還原糖含量。

2.7 PCA綜合評(píng)價(jià)生物活性膜處理對(duì)葡萄柚果實(shí)貯藏性的影響

圖5 不同生物活性膜處理對(duì)貯藏期葡萄柚果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的影響

表2 主成分特征值和貢獻(xiàn)率

表3 主成分得分

3 討論

柑橘類果實(shí)在采后運(yùn)輸和貯藏過(guò)程中容易感染青霉病害[19]。果實(shí)抗病性最直觀的外部表現(xiàn)為果實(shí)發(fā)病率和病斑直徑的變化[6]。研究表明，將拮抗生防菌與一些特殊的物質(zhì)結(jié)合可以提高生防菌的抑菌能力，如水楊酸、殼聚糖、氯化鈣等[20]。另有研究表明，在羅倫隱球酵母中添加殼聚糖可以增強(qiáng)酵母的抗氧化能力，有效提高酵母對(duì)果實(shí)采后病害的生防效力[21]。在實(shí)驗(yàn)中，采用CTS、.復(fù)合生物活性膜處理葡萄柚果實(shí)后接種青霉菌（.）發(fā)現(xiàn)，經(jīng)涂膜處理后葡萄柚果實(shí)的發(fā)病率和病斑直徑顯著（<0.05）低于CK果實(shí)的的發(fā)病率和病斑直徑，其中CTS?.處理的效果最優(yōu)。推測(cè).添加CTS制備的復(fù)合膜，可以有效提高.在果實(shí)表面的定殖能力，延長(zhǎng)酵母在果實(shí)表面的存活時(shí)間，從而提高酵母的生防效力。CHI和GLU是植物體內(nèi)最重要的病程相關(guān)蛋白[22]，可分別降解β?1, 3?葡聚糖和病原真菌細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)，破壞病原菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而抑制病原菌的侵染、繁殖和生長(zhǎng)[23-24]。文中實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CTS?.處理對(duì)果實(shí)GLU、CHI酶活性的誘導(dǎo)提高效果顯著優(yōu)于CTS、.單獨(dú)處理，有效抑制了青霉菌的繁殖和侵染。在貯藏過(guò)程中，果實(shí)后熟軟化、表皮失水皺縮、果皮轉(zhuǎn)色、色澤變化是反映果實(shí)外觀品質(zhì)的直接指標(biāo)，經(jīng)CTS?.復(fù)合膜處理后顯著推延了果實(shí)的轉(zhuǎn)色期，維持了采后果皮的亮度和飽和度，使果實(shí)表皮更加光澤鮮亮，降低了果實(shí)水分的損失，延緩了果皮的皺縮。

營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)是果實(shí)品質(zhì)的重要指標(biāo)。果實(shí)在采后仍然會(huì)呼吸代謝，會(huì)消耗果實(shí)中糖、酸、抗壞血酸等呼吸作用底物，這些物質(zhì)含量的變化可以用來(lái)衡量采后果實(shí)品質(zhì)的好壞[25]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與CK組相比，采用3種涂膜處理均能有效維持果實(shí)的抗壞血酸、可溶性固形物、還原糖等含量，延緩可滴定酸含量的下降，減少果實(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失。主成分CTS?.處理的抗病保鮮效果最好，推測(cè)可能是CTS?.處理使果皮表面形成了多糖?酵母復(fù)合膜，減緩了果實(shí)的呼吸強(qiáng)度，降低了呼吸作用對(duì)果實(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，能夠防止果皮的氧化，維持采后果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。

4 結(jié)語(yǔ)

采用CTS?.生物活性膜處理能有效誘導(dǎo)提高果實(shí)抗病防御酶（β?1,3葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶）的活性，明顯抑制了葡萄柚果實(shí)青霉病害的發(fā)生，延緩了果皮的皺縮，增強(qiáng)了果皮的鮮亮度，有效改善了果實(shí)的外觀品質(zhì)，降低了果實(shí)可溶性固形物、抗壞血酸、可滴定酸、還原糖等含量的下降速率，減緩了果實(shí)內(nèi)在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，維持了采后葡萄柚果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。

[1] 徐娟, 劉祥義, 侯英, 等. 有機(jī)多肽酶影響下葡萄柚果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)成分[J]. 食品工業(yè), 2021, 42(3): 335-337.

XU Juan, LIU Xiang-yi, HOU Ying, et al. Nutrient Composition of Grapefruit under the Influence of Organic Peptide[J]. The Food Industry, 2021, 42(3): 335-337.

[2] 馬電通, 呂鶴飛, 常雪苗, 等. 羧甲基纖維素誘導(dǎo)提高羅倫隱球酵母對(duì)采后砂糖桔抗青霉、綠霉病的生防效果[J/OL]. 食品科學(xué). [2022-09-11]. https://kns.cnki.net/ kcms/detail/11.2206.TS.20211227.1955.020.html.

MA Dian-tong, LYU He-fei, CHANG Xue-miao, et al. Carboxymethyl Cellulose Induced Improvement of the Biological Control Effect ofon Post-Harvest Citrus Shatangju Againstand Green Mold[J/OL]. Food Science. [2022-09-11]. https://kns.cnki.net/kcms/ detail/11.2206.TS.20211227.1955.020.html.

[3] BALLESTER A R, LAFUENTE M T, FORMENT J, et al. Transcriptomic Profiling of Citrus Fruit Peel Tissues Reveals Fundamental Effects of Phenylpropanoids and Ethylene on Induced Resistance[J]. Molecular Plant Pathology, 2011, 12(9): 879-897.

[4] 劉椰. 拮抗酵母新種鑒定及其對(duì)柑橘果實(shí)采后主要病害的防治機(jī)理研究[D]. 重慶: 西南大學(xué), 2019: 1-3.

LIU Ye. Identification of a Novel Antagonistic Yeast Species and Its Mechanisms in Controlling the Major Postharvest Diseases of Citrus Fruit[D]. Chongqing: Southwest University, 2019: 1-3.

[5] HAN L F. Physicochemical Properties of Chitosan/Graphene Oxide Composite Films and Their Effects on Storage Stability of Palm-Oil Based Margarine[J]. Food Hydrocolloids, 2021, 117: 106707.

[6] 陳花, 王建軍, 王建武, 等. 拮抗酵母結(jié)合水溶性殼聚糖對(duì)海紅果采后貯藏品質(zhì)的影響[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2020, 46(23): 147-155.

CHEN Hua, WANG Jian-jun, WANG Jian-wu, et al. Effect of Antagonistic Yeast Combined with Water Soluble Chitosan on Postharvest Storage Quality of Malus Micromalus Fruit[J]. Food and Fermentation Industries, 2020, 46(23): 147-155.

[7] VAN D, KNOOP R, KAPPEN F, et al. Chitosan Films and Blends for Packaging Material[J]. Carbohydr Polym, 2015, 116: 237-242.

[8] 朱露露, 高豐衣, 李大虎. 殼聚糖涂膜技術(shù)在水果保鮮中的研究進(jìn)展[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工, 2022(6): 72-76.

ZHU Lu-lu, GAO Feng-yi, LI Da-hu. Research Progress of Chitosan Coating Technology in Fruit Preservation[J]. Farm Products Processing, 2022(6): 72-76.

[9] FAN Yan. Effect of Alginate Coating Combined with Yeast Antagonist on Strawberry () Preservation Quality[J]. Postharvest Biology and Technology, 2009, 53(1/2): 84-90.

[10] YU Ting, et al. Effect ofand Calcium Chloride on Control ofandInfections in Pear Fruit[J]. Biological Control, 2012, 61(2): 169-175.

[11] ROBERTS R G. Postharvest Biological Control of Gray Mold of Apple by[J]. Phytopathology, 1990, 80(6): 526.

[12] BLUM L E B, AMARANTE C V T, VALDEBENITO- SANHUEZA R M, et al. Cryptococcus Laurentii Aplicado Em PóS-Colheita Reduz Podrid?es Em Ma??s[J]. Fitopatologia Brasileira, 2004, 29(4): 433-436.

[13] DENG Jia, LI Wen-qing, MA Dian-tong, et al. Synergistic Effect of Carboxymethylcellulose and Cryptococcus Laurentii on Suppressing Green Mould of Postharvest Grapefruit and Its Mechanism[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2021, 181: 253-262.

[14] 王蕓. β?葡聚糖誘導(dǎo)提高Cryptococcus Podzolicus對(duì)蘋果青霉病的防治效力及其機(jī)制研究[D]. 鎮(zhèn)江: 江蘇大學(xué), 2018: 12-13.

WANG Yun. Exploring the Effect of Β-Glucan on the Biocontrol Activity of Cryptococcus Podzolicus Against Postharvest Decay of Apples and the Possible Mechanisms Involved[D]. Zhenjiang: Jiangsu University, 2018: 12-13.

[15] 王麗瓊, 林少華, 陳存坤, 等. 3種不同的保鮮方法對(duì)香椿貯藏品質(zhì)的影響[J]. 食品研究與開發(fā), 2019, 40(13): 150-155.

WANG Li-qiong, LIN Shao-hua, CHEN Cun-kun, et al. Effects of Three Different Preservation Methods on Storage Quality of Toona Sinensis[J]. Food Research and Development, 2019, 40(13): 150-155.

[16] 曹建康, 姜微波, 趙玉梅. 果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 北京: 中國(guó)輕工業(yè)出版社, 2007: 24-59.

CAO Jian-kang, JIANG Wei-bo, ZHAO Yu-mei. Experimental Guidance of Postharvest Physiology and Biochemistry of Fruits and Vegetables[M]. Beijing: China Light Industry Press, 2007: 24-59.

[17] 潘永貴, 劉新華, 黎壽英. 采后BTH處理對(duì)不同品種芒果果實(shí)防御酶活性的影響[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(20): 469-472.

PAN Yong-gui, LIU Xin-hua, LI Shou-ying. Effect of BTH Treatment on Defense Enzymes in Postharvest Mango Fruits from Different Varieties[J]. Food Science, 2010, 31(20): 469-472.

[18] 蔡晨晨, 馬瑞佳, 劉濤, 等. 百里香精油微膠囊復(fù)合涂膜在芒果保鮮中的應(yīng)用[J]. 食品工業(yè)科技, 2021, 42(10): 275-280.

CAI Chen-chen, MA Rui-jia, LIU Tao, et al. Application of Thyme Oil Microcapsule Composite Coating in Mango Preservation[J]. Science and Technology of Food Industry, 2021, 42(10): 275-280.

[19] 路來(lái)風(fēng). 海洋拮抗酵母Rhodosporidium Paludigenum對(duì)柑橘果實(shí)抗性的增強(qiáng)效應(yīng)及其生物學(xué)機(jī)理研究[D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2015: 2-3.

LU Lai-feng. Enhancement Effect of Marine Antagonistic Yeast Rhodosporidium Paludigenum on Citrus Fruit Resistance and Its Biological Mechanism[D]. Hangzhou: Zhejiang University, 2015: 2-3.

[20] 于悅. 生物活性膜的制備及其對(duì)藍(lán)莓和甜櫻桃保鮮作用的研究[D]. 青島: 中國(guó)海洋大學(xué), 2015: 1-66.

YU Yue. Study on the Preparation of Bioactive Membrane and the Fresh-Keeping Effects of Blueberries and Sweet Cherries[D]. Qingdao: Ocean University of China, 2015: 1-66.

[21] YU T, HONG Y L, XIAO D Z . Investigation of the Biocontrol Efficacy of Antagonistic Yeast Induced by Calcium Ascorbate and Underlying Mechanisms[C]// Abstracts of the 18th Annual Meeting of CIFST, 2008: 303-305.

[22] MAUCH F, MAUCH-MANI B, BOLLER T. Antifungal Hydrolases in Pea Tissue: Ⅱ. Inhibition of Fungal Growth by Combinations of Chitinase and Beta-1,3-Glucanase[J]. Plant Physiology, 1988, 88(3): 936-942.

[23] 劉周陽(yáng), 張紅印, 陳克平. 激發(fā)子誘導(dǎo)培養(yǎng)提高拮抗酵母對(duì)水果采后病害生防效力的研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技, 2012, 33(4): 450-453.

LIU Zhou-yang, ZHANG Hong-yin, CHEN Ke-ping. Review on Improving the Biological Control Efficacity of Postharvest Fruits with Antagonistic Yeast Cultivated with Culture Added Elicitors[J]. Science and Technology of Food Industry, 2012, 33(4): 450-453.

[24] 郭欣, 林育釗, 林河通, 等. 殼聚糖處理對(duì)西番蓮果實(shí)感病指數(shù)、抗病相關(guān)酶活性和抗病物質(zhì)含量的影響[J]. 食品科學(xué), 2021, 42(15): 206-212.

GUO Xin, LIN Yu-zhao, LIN He-tong, et al. Effect of Chitosan Treatment on Disease Index, Disease Resistant-Related Enzyme Activities and Disease Resistance-Related Substance Contents in Passiflora Caerulea L. Fruit during Storage[J]. Food Science, 2021, 42(15): 206-212.

[25] 趙洪薇. 殼寡糖、水楊酸處理提高甜瓜耐貯性及其機(jī)理研究[D]. 烏魯木齊: 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016: 11-19.

ZHAO Hong-wei. Studies on the Mechanism of Improving the Resistance of Postharvest Muskmelons with Chitosan Oligosaccharide and Salicylic Acid[D]. Urumqi: Xinjiang Agricultural University, 2016: 11-19.

Effect of CTS-Bioactive Film on Quality of Grapefruit During Storage

HUANG Er-bin1, DU Rong-yu1, YANG Qing1,WU Hua-yu1,LI Xian-zhong1,WANG Fang1,2,DENG Jia1,3

(1. College of Forestry, Southwest Forestry University, Kunming 650224, China; 2. Key Laboratory of National Forestry and Grassland Administration on Biodiversity Conservation in Southwest China, Kunming 650224, China; 3. Key Laboratory for Forest Resources Conservation and Utilization in the Southwest Mountains of China, Ministry of Education, Kunming 650224, China)

The work aims to investigate the effects of chitosan-yeast bioactive film coating treatment on disease resistance, preservation and quality of grapefruit during storage. With ''Rio Red'' grapefruit as the experimental material, harvested grapefruit was soaked respectively with 10 g/L chitosan, fermentation broth ofyeast (1×107CFU/mL) and chitosan-yeast complex solution for 3 min. A deionized-water-treatment group was set as the CK group, and then they were stored at room-temperature conditions (temperature: (20±2)℃, relative humidity: 85%-90%). Quality indicators of fruits during storage such as disease incidence of fruits, chitinase and β-1,3-glucanase activity of peels, weight loss of fruits, color and nutrient quality were determined during storage. The best way of preservation was analyzed through the comprehensive principal component scoring method. During the storage at room temperature, the disease incidence and diameter lesions were effectively reduced in grapefruit through the treatment of chitosan,and chitosan-compared with the CK group. The activity of fruit peel resistance defense enzymes was enhanced to a certain extent after different treatments. These treatments also exhibited excellent preservation effects, such as the inhibition of weight loss, the enhancement of peel brightness and the delaying of nutrients loss. Among these treatments, with chitosan-complex solution, the best postharvest quality of fruit was maintained. The results of principal component analysis showed that the comprehensive score of grapefruit storage quality was in the following order: chitosan-composite film > CTS film >film > CK film. Chitosan-bioactive film treatment has the best effect on the disease resistance and preservation of green mold of harvested grapefruit, which can significantly reduce the incidence of disease and maintain fruit storage quality.

bioactive film; grapefruit; disease-resistance; storage quality

TS255.3

A

1001-3563(2023)01-0185-10

10.19554/j.cnki.1001-3563.2023.01.021

2022?10?05

云南省農(nóng)業(yè)聯(lián)合專項(xiàng)（202101BD070001?065）；國(guó)家自然科學(xué)基金（31960326，32160394）；云南省高層次人才培養(yǎng)支持計(jì)劃（YNWR?QNBJ?2020?205）；云南省“兩類”人才培養(yǎng)項(xiàng)目（202105AC160045）；科技處科研預(yù)研基金（110822082）

黃二賓（1995—），男，碩士生，主攻經(jīng)濟(jì)林栽培與利用。

鄧佳（1983—），女，教授，博士，主要研究方向?yàn)榻?jīng)濟(jì)林（果樹）栽培與利用。

責(zé)任編輯：彭颋