雙歧桿菌聯(lián)合干擾素對病毒性腹瀉患兒中性粒細胞及心肌酶譜的影響

翟豪強，沈德新

(中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九八八醫(yī)院小兒科，河南 鄭州 450000)

病毒性腹瀉主要通過糞-口傳播，好發(fā)于0.5～2.0歲小兒，輪狀病毒是其發(fā)生主要病原體，發(fā)生率約占20.0%～70.0%，若未予以及時有效干預(yù)，患兒常因水分不足或體內(nèi)大量酮體生成，出現(xiàn)程度不一的脫水酸中毒現(xiàn)象，從而引起心肌損傷，增加心肌炎發(fā)生風險[1-3]。病毒性腹瀉發(fā)病機制較為復雜，相關(guān)研究認為，機體感染輪狀病毒后，可激活體內(nèi)炎性反應(yīng)，釋放大量炎性因子，而中性粒細胞桿狀核、分葉核表達升高有助于評估炎性反應(yīng)、判斷感染程度及病情進展[4]。目前，臨床上針對病毒性腹瀉患兒主要采用補液、糾正水電解質(zhì)紊亂或酸堿失衡等常規(guī)治療，但其難以有效緩解腸道菌群紊亂，改善營養(yǎng)吸收。雙歧桿菌三聯(lián)活菌中富含長型雙歧桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌等益生菌，有助于糾正腸道菌群紊亂，降低內(nèi)毒素含量，減輕腹瀉癥狀[5-6]。注射用重組人干擾素α-1b具有高效、廣譜抗病毒活性，可刺激抗病毒蛋白基因，抑制病毒蛋白復制[7]，然而關(guān)于其與雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合對患兒中性粒細胞桿狀核、分葉核的影響臨床尚未完全明確，有待進一步深入研究?；诖?，本研究嘗試分析雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合注射用重組人干擾素α-1b對病毒性腹瀉患兒中性粒細胞桿狀核、分葉核的影響,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集2019年4月至2021年12月本院93例病毒性腹瀉患兒作為研究對象，均符合《諸福棠實用兒科學》[8]中病毒性腹瀉診斷標準；大便表現(xiàn)為黃稀水樣或蛋花湯樣；酶聯(lián)免疫吸附試驗測定糞便輪狀病毒抗原呈陽性；排除大便呈黏液膿血便或大便常規(guī)白細胞、紅細胞分別超過5個/HP者；伴有細菌性痢疾或霍亂等疾病者；存在重組人干擾素α-1b藥物過敏史者；近12周內(nèi)有微生態(tài)制劑或抗菌藥物治療史者；監(jiān)護人精神行為異常。兩組基線資料(年齡、病程、性別、腹瀉次數(shù)、脫水程度)均衡可比(P>0.05)，見表1。本研究經(jīng)本院倫理委員會審核評議并通過。

表1 兩組基線資料比較

1.2方法 兩組均予以糾正機體水電解質(zhì)、酸堿失衡、口服或靜脈補液、營養(yǎng)支持等常規(guī)治療。在此基礎(chǔ)上，對照組將雙歧桿菌三聯(lián)活菌(上海上藥信誼藥廠有限公司，國藥準字：S10950032)溶于溫水或溫牛奶中送服，每次210 mg，2次/天。觀察組在對照組基礎(chǔ)上肌肉注射重組人干擾素α-1b(深圳科興藥業(yè)有限公司，國藥準字：S10960059)，每天注射1次1 μg/kg。兩組均持續(xù)治療3 d。

1.3觀察指標 (1)臨床療效。評價標準：治療3 d內(nèi)，全身癥狀消退，大便性狀、次數(shù)恢復正常為顯效；治療3 d內(nèi)，全身癥狀顯著緩解，大便性狀、次數(shù)有所控制為有效；治療3 d內(nèi)，未達到顯效、有效標準為無效。總有效率=(顯效+有效)/總例數(shù)×100%。(2)癥狀緩解時間，包括止嘔、止瀉及退熱時間。(3)中性粒細胞桿狀核、分葉核、炎性因子、心肌酶譜、免疫功能。檢測方法：分別于治療前、治療1、3 d后清晨空腹取外周靜脈血9 mL，均分為3份：①取其中一份根據(jù)艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司提供的HA-360型全自動血細胞分析儀說明書測定中性粒細胞桿狀核、分葉核；②再取其中一份，抗凝處理，根據(jù)美國BD公司提供的Accuri C6型流式細胞儀測定CD4+、CD8+水平；③另一份常規(guī)離心處理(3 000 r/min離心12 min)，取上清液，-80 ℃低溫保存待檢。根據(jù)上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒說明書檢測白細胞介素(IL)-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平；根據(jù)上海玉蘭生物技術(shù)有限公司提供的酶法試劑盒說明書檢測肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、羥丁酸脫氫酶(HBDH)、乳酸脫氫酶(LDH)水平。

2 結(jié) 果

2.1臨床療效 觀察組治療總有效率95.74%，高于對照組(80.43%)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.225，P<0.05)，見表2。

表2 兩組臨床療效對比[n(%)]

2.2癥狀緩解時間 觀察組的止嘔、止瀉及退熱時間均短于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組癥狀緩解時間對比

2.3中性粒細胞桿狀核、分葉核 治療1、3 d后，兩組中性粒細胞桿狀核、分葉核計數(shù)均較治療前明顯下降，且觀察組下降幅度大于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組中性粒細胞桿狀核、分葉核對比

2.4血清炎性因子 治療1、3 d后，兩組血清炎性因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均較治療前明顯下降，且觀察組下降幅度大于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 兩組血清炎性因子水平對比

續(xù)表5 兩組血清炎性因子水平對比

2.5血清心肌酶譜 治療1、3 d后，兩組血清心肌酶譜CK、CK-MB、LDH及HBDH水平均較治療前明顯下降，且觀察組下降幅度大于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表6。

表6 兩組血清心肌酶譜水平對比

組別nLDH治療前治療1 d后治療3 d后HBDH治療前治療1 d后治療3 d后觀察組47175.41±23.16157.36±12.12a148.32±7.62a183.41±15.82149.63±10.37a132.58±8.41a對照組46173.69±25.38165.24±13.47a155.83±8.41a180.69±13.24159.73±11.28a141.26±10.29at-0.3422.9674.5150.9044.4974.459P-0.7340.004<0.0010.368<0.001<0.001

2.6免疫功能 治療1、3 d后，兩組CD4+、CD4+/CD8+水平均較治療前明顯升高，CD8+水平較治療前明顯下降，且觀察組下降及升高幅度均大于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表7。

表7 兩組免疫功能指標水平對比

組別nCD4+/CD8+治療前治療1 d后治療3 d后觀察組470.96±0.101.23±0.15a1.43±0.22a對照組460.99±0.121.10±0.14a1.23±0.19at-1.3114.3194.688P-0.193<0.001<0.001

3 討 論

雙歧桿菌三聯(lián)活菌可為機體補充有益生菌，發(fā)揮良好抗病毒作用，修復受損腸道黏膜[9-10]，但單獨服用存在起效慢、治療時間長等不足，需與其他藥物聯(lián)合以增強治療效果，縮短治療時間。本研究針對病毒性腹瀉患兒采用雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合重組人干擾素α-1b治療，結(jié)果顯示，二者聯(lián)合能有效緩解腹瀉癥狀，且其總有效率高達95.74%，考慮機制可能在于重組人干擾素α-1b不僅可結(jié)合細胞表面受體，促進大量細胞抗病毒蛋白產(chǎn)生，從而抑制細胞內(nèi)病毒合成，還能通過抑制胃腸激素分泌，加快腸內(nèi)氯離子、鈉離子吸收，減輕腸腔滲透壓，進而產(chǎn)生良好止瀉作用，加快癥狀改善速度[11]；雙歧桿菌三聯(lián)活菌可提高腸道防御屏障功能，降低腸道pH值，抑制病原菌定植與入侵，兩者聯(lián)合可從不同作用機制方面發(fā)揮抗病毒作用，維持患兒胃腸道生態(tài)平衡，進而修復患兒受損腸道功能。

同時，多項研究證實，腸道炎性反應(yīng)是輪狀病毒性腹瀉主要病理變化，TNF-α作為炎性反應(yīng)的啟動因子，可誘導IL-10等促炎因子釋放，加劇腸黏膜炎性損傷[12-14]。IL-6主要由T淋巴細胞、單核吞噬細胞分泌、合成，其表達在輪狀病毒感染性腹瀉患兒中異常升高，可調(diào)控體液免疫與炎性反應(yīng)[15]。IL-8作為機體重要趨化因子，可刺激中性粒細胞，激活機體局部炎性反應(yīng)，郝雯穎等[16]認為，其與輪狀病毒腸炎患兒病情程度呈正相關(guān)，可為評估患兒病情提供有效依據(jù)。中性粒細胞桿狀核、分葉核兩者比值與超敏C反應(yīng)蛋白、IL-6均存在正相關(guān)性，可表現(xiàn)炎性反應(yīng)程度[17]。既往臨床多側(cè)重于癥狀改善，本研究創(chuàng)新性對患兒中性粒細胞桿狀核、分葉核及炎性因子水平進行分析，發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合重組人干擾素α-1b在調(diào)節(jié)病毒性腹瀉患兒炎性反應(yīng)方面具有一定積極效應(yīng)，這可能歸因于重組人干擾素α-1b可提高靶細胞表面主要組織相容性復合物表達，幫助淋巴細胞完成抗原提呈過程，激活巨噬細胞、殺傷細胞，抑制炎性因子生成，與雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合，可抑制輪狀病毒對黏膜上皮細胞的黏附、侵襲，阻斷炎癥信號傳導，從而產(chǎn)生良好抗炎作用。

另有學者指出，隨著輪狀病毒性腹瀉患兒脫水程度增加，氧自由基不斷釋放，在一定程度上可誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，引起心肌細胞損傷[18-19]。CK、CK-MB、LDH及HBDH均是臨床評估心肌損傷程度的特異指標，余萬輝等[20]研究認為，上述指標在輪狀病毒性腹瀉患兒中呈高表達，對指導小兒輪狀病毒腹瀉的早期診治具有較好應(yīng)用價值。本研究指出，雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合重組人干擾素α-1b在降低病毒性腹瀉患兒心肌酶譜水平方面優(yōu)于雙歧桿菌三聯(lián)活菌單獨服用，這可能是由于二者聯(lián)合可強化抗病毒作用，有助于調(diào)節(jié)腸道水電解質(zhì)平衡，提高小腸黏膜能力，減少水鈉潴留，防止腸腔內(nèi)大量腸液聚集，從而緩解心肌損害。此外，由于小兒免疫系統(tǒng)尚未達到成人水平，再加上輪狀病毒可直接附著于小腸表面，影響小腸絨毛功能，破壞腸絨毛完整性與連續(xù)性，降低機體免疫蛋白水平，從而導致患兒免疫功能紊亂，癥狀改善時間延長[21-22]。T淋巴細胞亞群是評價機體免疫狀態(tài)的重要指標。本研究對治療前后免疫功能指標變化進行分析，兩組治療1、3 d后CD4+、CD4+/CD8+水平均較治療前升高，CD8+水平較治療前降低，提示雙歧桿菌三聯(lián)活菌能改善病毒性腹瀉患兒免疫功能。進一步分析兩組治療后免疫功能指標差異可知，治療1、3 d后觀察組CD4+、CD4+/CD8+水平高于對照組，CD8+水平低于對照組。這一結(jié)果說明在雙歧桿菌三聯(lián)活菌治療的同時加用重組人干擾素α-1b更能改善病毒性腹瀉患兒免疫功能，這可能與重組人干擾素α-1b對免疫功能具有調(diào)節(jié)作用，可激活各種免疫細胞，提高自然殺傷細胞活性，誘導淋巴細胞增殖反應(yīng)，促進免疫蛋白合成，進而增強機體免疫系統(tǒng)防御功能，清除機體病毒感染細胞有關(guān)。

綜上所述，雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合注射用重組人干擾素α-1b通過降低心肌酶譜水平、調(diào)節(jié)免疫炎性反應(yīng)可有助于增強治療效果，縮短病毒性腹瀉患兒癥狀改善時間。但本研究為回顧性分析，數(shù)據(jù)結(jié)果可能存在一定偏移，今后需進行大樣本量前瞻性研究，進一步論證結(jié)果可靠性。