• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    原兒茶酸對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠炎癥反應(yīng)及血管生成的作用機制研究

    2023-02-01 12:49:36王曉莉殷金鳳黃超林
    河北醫(yī)學(xué) 2023年1期
    關(guān)鍵詞:劑量模型

    潘 敏, 王曉莉, 胡 婷, 付 瓊, 殷金鳳, 黃超林

    (1.四川省成都市第二人民醫(yī)院, 四川 成都 610000 2.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院, 四川 成都 610000)

    子宮內(nèi)膜異位癥(heterotopia endometriosis,EMS)為子宮內(nèi)膜腺體或間質(zhì)在子宮外腔的沉降,與不規(guī)則子宮出血、不孕、性交困難和慢性盆腔疼痛相關(guān)[1]。5-50%的有生育問題的夫婦會患該病,10-20%的育齡婦女患有該病[2,3]。雖然該病在女性中很常見,但是目前對子宮內(nèi)膜異位癥的病因和病理生理學(xué)的了解尚不清楚?,F(xiàn)存在幾種不同的學(xué)說來解釋子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制,其中逆月經(jīng)理論是認(rèn)可度最高的理論,即子宮內(nèi)膜細(xì)胞在月經(jīng)期間通過輸卵管回流到腹膜腔,植入并啟動子宮內(nèi)膜異位病變的形成[4]。因此,根據(jù)其發(fā)病機制尋找有效的治療藥物對患者的康復(fù)非常有意義。原兒茶酸(Protocatechuic acid,PA)是一種天然酚酸,廣泛存在于日常的飲食和中草藥[5]。近年來,現(xiàn)代藥理學(xué)對原兒茶酸的藥理活性進(jìn)行了大量研究,其具有廣泛的藥理活性,如抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護(hù)、抗菌、抗病毒、抗癌、抗骨質(zhì)疏松、鎮(zhèn)痛、抗衰老等活性,具有保護(hù)肝臟、腎臟和生殖功能的作用[6]。近期有研究報道[7],原兒茶酸通過抑制氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡,改善呋喃暴露大鼠下丘腦-垂體-性腺軸功能的缺陷。推測原兒茶酸可能對子宮內(nèi)膜異位癥的治療也有一定作用。因此本研究擬建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型,觀察原兒茶酸對模型大鼠子宮內(nèi)膜損傷、炎癥反應(yīng)的影響,揭示其與ERK/VEGF/MMP通路之間的聯(lián)系。

    1 材料與方法

    1.1藥物與試劑:原兒茶酸(北京百靈威科技有限公司,批號:2954-52-1)、孕三烯酮膠囊(北京紫林藥業(yè)有限公司,國藥準(zhǔn)字H19980020)、蛋白提取試劑盒(批號:P0027)及BCA試劑盒(批號:P0011)(上海碧云天公司)、兔源GAPDH抗體、羊抗兔二抗、抗鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)抗體、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)抗體、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)抗體、血管生成素 1(Ang-1)抗體、血管生成素 2(Ang-2)抗體、總細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(t-ERK1/2)及磷酸化總細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK1/2)抗體(美國Santa Cruz公司)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及白介素1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒(北京沃萊士生物科技有限公司)。

    1.2實驗動物:選擇動情期、未生育SPF級SD大鼠54只,均為雌性,體質(zhì)量(220±20)g,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,動物使用許可證SYXK(京)2017-0033。SD大鼠均飼養(yǎng)環(huán)境保持安靜、整潔、通風(fēng),溫度約25℃,自由飲食,定期更換墊料,對鼠籠清潔、消毒。

    1.3模型建立:參考王金霞[8]等的方法,通過自體移植法建立EMS大鼠,將雌性成年大鼠(未生育)腹腔注射5%水合氯醛進(jìn)行麻醉,劑量為0.07mL/kg。麻醉大鼠后,常規(guī)術(shù)前消毒,切開下腹部暴露子宮,挑離右側(cè)子宮角,切除約1cm子宮段,取5mm×5mm大小的子宮內(nèi)膜片,使其表面上皮對著腹壁,將四角與腹壁肌肉縫合,然后常規(guī)關(guān)腹,青霉素預(yù)防感染。大鼠常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水及進(jìn)食。術(shù)后4周移植物外觀隆起透亮小包,表面有血管,內(nèi)部充滿積液。移植的子宮內(nèi)膜成活并沿腹壁表面再生,提示建模成功。

    1.4分組處理:選取EMS模型大鼠54只隨機均分為6組,包括空白組、模型組、孕三烯酮組0.5mg·kg-1·d-1、PA(高、中、低)劑量組(劑量分別為1.5mg·kg-1·d-1、1mg·kg-1·d-1及0.5mg·kg-1·d-1),另取9只正常大鼠作為正常組。PA各個劑量組和孕三烯酮組每天灌胃給藥1次,模型組每天給予等量生理鹽水灌胃,連續(xù)給藥28d。

    1.5指標(biāo)檢測

    1.5.1大鼠異位子宮內(nèi)膜體積測量及標(biāo)本采集:造模8周后,開腹觀察異位子宮內(nèi)膜生長情況,測量體積,記為V1,縫合腹部,以藥物灌胃治療7d,末次給藥24h后,再次開腹觀察異位子宮內(nèi)膜生長情況,測量體積,記為V2,計算大鼠的病灶體積。 末次給藥結(jié)束24h后,靜脈采血3mL,各組大鼠尾靜脈取血約3mL,4℃靜置過夜,2000rpm/min轉(zhuǎn)速,離心15min,取上清液,備用。處死大鼠,抽取腹腔積液3mL;剖取子宮,生理鹽水洗凈血污后,剪取1g組織,備用。

    1.5.2ELISA檢測腹腔液炎性因子:取出上清液,使用TNF-α、IL-6及IL-1βELISA試劑盒檢測大鼠血清中TNF-α、IL-6及IL-1β水平,具體操作參照說明書步驟。

    1.5.3Western blot檢測子宮內(nèi)膜組織Ang-1、Ang-2、t-ERK1/2、p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá):取2.4.1凍存子宮組織約0.3 g,使用蛋白提取試劑盒提取總蛋白,BCA法測定蛋白濃度,調(diào)整蛋白濃度后,各組分別取20μg蛋白樣品進(jìn)行電泳。再將分離蛋白轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維膜,根據(jù)目的蛋白的相對分子質(zhì)量截取目的蛋白,進(jìn)行蛋白標(biāo)記。加入5%的脫脂奶粉室溫封閉2h,分別加入Ang-1、Ang-2、t-ERK1/2、p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9一抗溶液(1∶1000),4℃孵育過夜,使用TBST漂洗3次,加入羊抗兔二抗溶液,室溫孵育2h。凝膠成像儀采集圖像,Image J軟件分析蛋白的相對表達(dá)量。

    1.6統(tǒng)計學(xué)處理:實驗數(shù)據(jù)使用SPSS26.0分析。符合正態(tài)分布且方差齊的多組數(shù)據(jù)使用方差分析聯(lián)合LSD-t檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計意義。

    2 結(jié) 果

    2.1原兒茶酸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥病灶體積的影響:與空白組比較,模型組大鼠第14、42d的病灶體積顯著升高;與模型組相比,原兒茶酸低劑量組、原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠第14、42d的病灶體積顯著降低(P<0.05)。與原兒茶酸低劑量組相比,原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠第14、42d的病灶體積顯著降低(P<0.05);與原兒茶酸中劑量組相比,原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠第14、42d的病灶體積顯著降低(P<0.05)。見表1。

    表1 原兒茶酸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥病灶體積的影響

    2.2原兒茶酸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥腹腔液炎癥因子的影響:與空白組比較,模型組大鼠腹腔液炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β均顯著升高;與模型組相比,原兒茶酸低劑量組、原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠腹腔液炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β均顯著降低(P<0.05)。與原兒茶酸低劑量組相比,原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠腹腔液炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β均顯著降低(P<0.05);與原兒茶酸中劑量組相比,原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠腹腔液炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β均顯著降低(P<0.05)。見表2。

    表2 原兒茶酸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥腹腔液炎癥因子的影響

    2.3原兒茶酸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥子宮內(nèi)膜組織Ang-1和Ang-2蛋白表達(dá)的影響:與空白組比較,模型組大鼠子宮內(nèi)膜組織Ang-1、Ang-2蛋白表達(dá)均顯著升高;與模型組相比,原兒茶酸低劑量組、原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠子宮內(nèi)膜組織Ang-1、Ang-2蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。與原兒茶酸低劑量組相比,原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠子宮內(nèi)膜組織Ang-1、Ang-2蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05);與原兒茶酸中劑量組相比,原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠子宮內(nèi)膜組織Ang-1、Ang-2蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。見圖1。

    圖1 Western blot檢測大鼠子宮內(nèi)膜異位癥子宮內(nèi)膜組織Ang-1和Ang-2蛋白表達(dá)A:Ang-1和Ang-2蛋白電泳圖;B:Ang-1蛋白表達(dá)量;C:Ang-2蛋白表達(dá)量

    2.4原兒茶酸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥組織中ERK/VEGF/MMP通路的影響:與空白組比較,模型組大鼠子宮內(nèi)膜異位癥組織中p-ERK1/2、VEGF 、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)均顯著升高;與模型組相比,原兒茶酸低劑量組、原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠子宮內(nèi)膜異位癥組織中p-ERK1/2、VEGF 、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。與原兒茶酸低劑量組相比,原兒茶酸中劑量組、原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠子宮內(nèi)膜異位癥組織中p-ERK1/2、VEGF 、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05);與原兒茶酸中劑量組相比,原兒茶酸高劑量組、孕三烯酮組大鼠子宮內(nèi)膜異位癥組織中p-ERK1/2、VEGF 、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。見圖2。

    圖2 Western blot檢測大鼠子宮內(nèi)膜異位癥組織中t-ERK1/2、p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)A:t-ERK1/2、p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白電泳圖;B-F:t-ERK1/2、p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)量

    3 討 論

    原兒茶酸對機體的多種疾病均具有炎癥和氧化應(yīng)激抑制的作用[9,10],但是其在子宮內(nèi)膜異位癥中是否具有治療功能尚未可知。張玉珠等[11]研究報道,原兒茶酸明顯的減脂多糖對小鼠子宮內(nèi)膜的病理損害,濃度依賴性抑制小鼠子宮內(nèi)膜組織中致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌。遺憾的是,原兒茶酸在子宮內(nèi)膜異位癥中的治療作用并未進(jìn)行相關(guān)研究。為了填補這一空白,本研究成功建立了子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型,觀察原兒茶酸對模型大鼠是否有治療效果,結(jié)果顯示:子宮內(nèi)膜異位癥大鼠在第14d、42d時病灶體積明顯變大,TNF-α、IL-6、IL-1β分泌增多,異位子宮內(nèi)膜組織血管生成因子Ang-1、Ang-2表達(dá)升高,這證明大鼠的子宮內(nèi)膜異位癥模型制造成功。深入研究,給予不同濃度的原兒茶酸治療,發(fā)現(xiàn)模型大鼠的病灶明顯減少了,致炎因子的分泌量也降低了,Ang-1、Ang-2的水平也下降了,并且這些作用與原兒茶酸具有濃度依賴性,這些實驗結(jié)果揭示了原兒茶酸對子宮內(nèi)膜異位癥的治療潛力。大鼠子宮內(nèi)膜異位癥涉及炎癥、血管生成,其參與的分子有炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及PCT、SAA、CRP等,血管生成相關(guān)的血管內(nèi)皮生長因子可溶性受體-1(sFlt-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血管生成素(Ang),而本文中檢驗的指標(biāo)TNF-α、IL-6、IL-1β代表炎癥的變化,Ang-1、Ang-2指標(biāo)表示血管生成的變化。

    血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種有效的血管生成誘導(dǎo)劑,被確定與腫瘤血管生成相關(guān)[12]?;|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在蛋白水解、降解以及血管生成過程中降低細(xì)胞黏附,促進(jìn)細(xì)胞遷移中發(fā)揮關(guān)鍵作用[13]。ERK是絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)信號級聯(lián)的成員,參與磷酸化級聯(lián)調(diào)節(jié)的多種生物學(xué)過程,如細(xì)胞的遷徙[14]。戴曉曉等[15]在子宮內(nèi)膜異位癥的研究中報道,ERK/VEGF/MMP9信號通路參與疾病的致病過程,并且該通路的活性可被熊果酸抑制,以發(fā)揮子宮內(nèi)膜血管生成的抑制作用。本研究發(fā)現(xiàn),在子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠的異位子宮沒摸組織中p-ERK、VEGF 、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)均上調(diào),說明了該通路的活性被異常激活,再次揭示了ERK/VEGF/MMP通路激活對子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)揮致病作用。原兒茶酸給藥治療,呈現(xiàn)濃度依賴性降低p-ERK1/2、VEGF 、MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平,抑制ERK/VEGF/MMP通路的活性,這說明原兒茶酸發(fā)揮子宮內(nèi)膜異位癥的治療效果與失活ERK/VEGF/MMP通路存在一定的相關(guān)性。

    綜上所述,原兒茶酸縮小子宮內(nèi)膜異位癥大鼠的子宮內(nèi)膜損傷面積,抑制炎癥反應(yīng),產(chǎn)生這種作用的機制可能與抑制了ERK/VEGF/MMP通路活性有關(guān),為原兒茶酸在臨床上用于子宮內(nèi)膜異位癥的治療奠定實驗基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    劑量模型
    一半模型
    結(jié)合劑量,談輻射
    ·更正·
    中藥的劑量越大、療效就一定越好嗎?
    不同濃度營養(yǎng)液對生菜管道水培的影響
    90Sr-90Y敷貼治療的EBT3膠片劑量驗證方法
    重要模型『一線三等角』
    重尾非線性自回歸模型自加權(quán)M-估計的漸近分布
    3D打印中的模型分割與打包
    FLUKA幾何模型到CAD幾何模型轉(zhuǎn)換方法初步研究
    日日摸夜夜添夜夜爱| 美女大奶头黄色视频| 女性生殖器流出的白浆| 99精国产麻豆久久婷婷| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲性久久影院| 亚洲精品一二三| 少妇高潮的动态图| 国产成人精品福利久久| 久久av网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 色94色欧美一区二区| 国产高清不卡午夜福利| 99国产综合亚洲精品| 欧美精品一区二区大全| 午夜激情久久久久久久| av女优亚洲男人天堂| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品酒店卫生间| 在线观看免费日韩欧美大片 | 中文字幕久久专区| 三级国产精品欧美在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产乱来视频区| 成人综合一区亚洲| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 高清av免费在线| 高清欧美精品videossex| 伊人久久国产一区二区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 人人妻人人澡人人看| 在线观看国产h片| 水蜜桃什么品种好| 蜜桃在线观看..| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜激情av网站| 精品一区二区三卡| 精品人妻偷拍中文字幕| xxx大片免费视频| av不卡在线播放| 亚洲少妇的诱惑av| 免费观看av网站的网址| 亚洲av男天堂| 99久国产av精品国产电影| 老女人水多毛片| 亚洲人成77777在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲av综合色区一区| 国产一级毛片在线| 国产成人aa在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 麻豆乱淫一区二区| 大香蕉97超碰在线| 老司机亚洲免费影院| 欧美xxxx性猛交bbbb| 婷婷色av中文字幕| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久久久久久久久丰满| 午夜福利视频在线观看免费| 99久久精品一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 在线 av 中文字幕| 国产成人a∨麻豆精品| 精品久久久精品久久久| 91久久精品国产一区二区成人| 精品少妇久久久久久888优播| 一二三四中文在线观看免费高清| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 在线观看免费高清a一片| 一区二区三区免费毛片| 下体分泌物呈黄色| 在线观看www视频免费| 成年av动漫网址| 成人综合一区亚洲| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 少妇被粗大猛烈的视频| 久久午夜福利片| 伊人久久国产一区二区| 永久免费av网站大全| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲国产精品999| 国产精品偷伦视频观看了| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 中文字幕亚洲精品专区| 精品国产露脸久久av麻豆| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 最近手机中文字幕大全| 精品人妻在线不人妻| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产成人精品无人区| 2018国产大陆天天弄谢| 国产乱来视频区| 99re6热这里在线精品视频| 一区在线观看完整版| 国产高清有码在线观看视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| av.在线天堂| 亚洲综合色网址| 久久久久网色| 国产伦理片在线播放av一区| 草草在线视频免费看| 亚洲国产最新在线播放| 午夜免费观看性视频| freevideosex欧美| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲国产精品国产精品| 91久久精品电影网| 一级二级三级毛片免费看| 久热久热在线精品观看| 国产有黄有色有爽视频| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品国产三级国产专区5o| 99re6热这里在线精品视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 大香蕉97超碰在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美日韩在线观看h| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 99久久人妻综合| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| a级毛片免费高清观看在线播放| a级毛色黄片| 九草在线视频观看| 亚洲综合色网址| 亚洲精品第二区| 色5月婷婷丁香| 看非洲黑人一级黄片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一级a做视频免费观看| 韩国av在线不卡| 亚洲国产日韩一区二区| 日日撸夜夜添| 午夜激情福利司机影院| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av男天堂| 国产日韩欧美视频二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 免费人妻精品一区二区三区视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 高清在线视频一区二区三区| 成人毛片60女人毛片免费| 日韩强制内射视频| 亚洲国产精品国产精品| 2022亚洲国产成人精品| 午夜老司机福利剧场| 美女中出高潮动态图| 91国产中文字幕| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人精品一,二区| 午夜日本视频在线| 热re99久久国产66热| 亚洲av成人精品一区久久| 国产黄色免费在线视频| 午夜老司机福利剧场| 成人午夜精彩视频在线观看| 最新中文字幕久久久久| a 毛片基地| 不卡视频在线观看欧美| 女人精品久久久久毛片| 最近2019中文字幕mv第一页| 午夜福利,免费看| 一区二区av电影网| 久久精品夜色国产| 久久久久久久久久人人人人人人| 丰满乱子伦码专区| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 在线观看免费高清a一片| 日韩视频在线欧美| 91国产中文字幕| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲精品美女久久av网站| 51国产日韩欧美| 久久久久久人妻| 18+在线观看网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产男人的电影天堂91| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲精品成人av观看孕妇| 如何舔出高潮| 欧美人与善性xxx| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产精品专区欧美| 欧美精品国产亚洲| 热re99久久国产66热| av电影中文网址| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美日韩在线观看h| videossex国产| 赤兔流量卡办理| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久精品国产亚洲av天美| 国产成人精品无人区| 日本av手机在线免费观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜日本视频在线| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩在线高清观看一区二区三区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 热re99久久精品国产66热6| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产高清国产精品国产三级| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 中文欧美无线码| 春色校园在线视频观看| 国产成人精品福利久久| 制服人妻中文乱码| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成人手机av| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 熟女av电影| 桃花免费在线播放| 丝袜在线中文字幕| 亚洲精品亚洲一区二区| 成人无遮挡网站| 国产精品国产av在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品久久久久久精品古装| 久久人妻熟女aⅴ| xxxhd国产人妻xxx| 青春草视频在线免费观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 在线天堂最新版资源| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久久久久久国产电影| 成人手机av| 一本一本综合久久| 最近中文字幕2019免费版| 久久午夜综合久久蜜桃| av在线老鸭窝| 一区二区av电影网| 91精品国产九色| 成人毛片60女人毛片免费| 中文字幕av电影在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 人人妻人人澡人人看| 久久人人爽人人片av| 九九在线视频观看精品| 国产高清有码在线观看视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚州av有码| 欧美成人精品欧美一级黄| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99久久综合免费| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲内射少妇av| av线在线观看网站| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 少妇高潮的动态图| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 国产一区二区在线观看日韩| 国产精品一二三区在线看| 中文字幕人妻丝袜制服| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 看免费成人av毛片| 国产综合精华液| 欧美97在线视频| 国产精品 国内视频| 一级毛片电影观看| 丝袜在线中文字幕| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产av精品麻豆| 免费观看无遮挡的男女| 免费大片黄手机在线观看| 视频区图区小说| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产av精品麻豆| 日韩av免费高清视频| 99热6这里只有精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美国产精品一级二级三级| 视频在线观看一区二区三区| 少妇精品久久久久久久| 日本黄色片子视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本爱情动作片www.在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 一区二区三区四区激情视频| 插阴视频在线观看视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久久久网色| 婷婷成人精品国产| 国产淫语在线视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 日韩av不卡免费在线播放| 哪个播放器可以免费观看大片| 婷婷色麻豆天堂久久| 欧美另类一区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 日韩制服骚丝袜av| 晚上一个人看的免费电影| 日本黄大片高清| 免费观看无遮挡的男女| 久久久久久久久久成人| 久久ye,这里只有精品| 日日啪夜夜爽| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 成人无遮挡网站| 99国产精品免费福利视频| 精品久久国产蜜桃| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 最黄视频免费看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 永久免费av网站大全| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲,欧美,日韩| 色哟哟·www| 91成人精品电影| 免费观看a级毛片全部| 一本大道久久a久久精品| 国产欧美亚洲国产| 色视频在线一区二区三区| 日韩欧美一区视频在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 草草在线视频免费看| 亚洲成人一二三区av| 久久久亚洲精品成人影院| 国产精品久久久久成人av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产视频首页在线观看| 久久狼人影院| 日韩三级伦理在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美日韩在线观看h| 久久韩国三级中文字幕| 秋霞伦理黄片| 亚洲国产欧美在线一区| 日日啪夜夜爽| 一级毛片 在线播放| 久久久久久久精品精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 波野结衣二区三区在线| 在线精品无人区一区二区三| 久久亚洲国产成人精品v| 色网站视频免费| 蜜桃在线观看..| 国产不卡av网站在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 久久99热6这里只有精品| 在线观看www视频免费| 久久精品国产亚洲av天美| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美激情国产日韩精品一区| 日本黄大片高清| 亚洲伊人久久精品综合| 色视频在线一区二区三区| 简卡轻食公司| 91成人精品电影| 亚洲中文av在线| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲内射少妇av| 国精品久久久久久国模美| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产精品偷伦视频观看了| 三级国产精品片| 日韩一本色道免费dvd| 老司机影院成人| 亚洲成人av在线免费| 免费观看无遮挡的男女| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美人与善性xxx| 久久久久人妻精品一区果冻| 97超碰精品成人国产| 97在线视频观看| 日韩电影二区| 色哟哟·www| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日日啪夜夜爽| 老女人水多毛片| 国产精品国产av在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久久午夜欧美精品| 亚洲伊人久久精品综合| 精品国产国语对白av| 性色av一级| 午夜影院在线不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| 少妇丰满av| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲av不卡在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一级毛片电影观看| 97精品久久久久久久久久精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产色婷婷99| 少妇的逼水好多| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲av二区三区四区| 黄色一级大片看看| 成人亚洲精品一区在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 99热网站在线观看| 精品少妇内射三级| 国产精品一二三区在线看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久久久久人妻| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品久久久噜噜| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 赤兔流量卡办理| 国产探花极品一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 18在线观看网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 全区人妻精品视频| 午夜激情av网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美日韩av久久| 18在线观看网站| 精品一区二区三卡| 国产精品免费大片| 尾随美女入室| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 9色porny在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 啦啦啦视频在线资源免费观看| av在线播放精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 丰满乱子伦码专区| 毛片一级片免费看久久久久| 水蜜桃什么品种好| videos熟女内射| 丁香六月天网| 国产毛片在线视频| 午夜av观看不卡| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av在线老鸭窝| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 少妇丰满av| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲人成网站在线播| 国产精品一区二区在线观看99| 制服诱惑二区| 我要看黄色一级片免费的| 男女免费视频国产| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 视频中文字幕在线观看| 老司机影院毛片| 在现免费观看毛片| 91aial.com中文字幕在线观看| 99热这里只有精品一区| 五月玫瑰六月丁香| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国精品久久久久久国模美| av.在线天堂| 欧美精品亚洲一区二区| av.在线天堂| 美女cb高潮喷水在线观看| 黄色一级大片看看| 天美传媒精品一区二区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 在线观看三级黄色| 丝袜喷水一区| av免费在线看不卡| 自线自在国产av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 国产一区亚洲一区在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美日韩在线观看h| 99热6这里只有精品| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品久久久久成人av| 全区人妻精品视频| 老司机亚洲免费影院| 亚洲av国产av综合av卡| 99热这里只有精品一区| 精品久久国产蜜桃| 国产精品.久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| av在线观看视频网站免费| 久久久久久久国产电影| 大码成人一级视频| 久久av网站| 99久久综合免费| 我的老师免费观看完整版| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲第一av免费看| 天堂8中文在线网| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产 精品1| 观看av在线不卡| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 天美传媒精品一区二区| 国产成人精品久久久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| www.色视频.com| 精品人妻在线不人妻| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品一区蜜桃| a级毛片免费高清观看在线播放| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 黄色怎么调成土黄色| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 精品久久久噜噜| 各种免费的搞黄视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国模一区二区三区四区视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 新久久久久国产一级毛片| 成人漫画全彩无遮挡| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品少妇内射三级| 国产精品久久久久久久电影| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲精品第二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 在线观看www视频免费| 日本午夜av视频| 国产深夜福利视频在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 国产成人精品一,二区| 亚洲欧洲日产国产| 两个人免费观看高清视频| 2018国产大陆天天弄谢| 午夜视频国产福利| 高清不卡的av网站| 伊人亚洲综合成人网| 久久精品国产亚洲av天美| av天堂久久9| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品456在线播放app| 精品午夜福利在线看| 国产探花极品一区二区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 看非洲黑人一级黄片| 精品视频人人做人人爽| 精品少妇内射三级| 只有这里有精品99| 国产色爽女视频免费观看| 免费大片18禁| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 97在线视频观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产毛片在线视频| 国产片特级美女逼逼视频| 免费观看a级毛片全部| 久久这里有精品视频免费| 91精品伊人久久大香线蕉| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一个人免费看片子| 久久97久久精品| 亚洲一区二区三区欧美精品| 一个人免费看片子| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产永久视频网站| 久久精品国产a三级三级三级| 18禁在线播放成人免费| 久久女婷五月综合色啪小说| 一本一本综合久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 欧美bdsm另类| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品久久久噜噜| 97在线视频观看| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品av麻豆狂野| 成人亚洲欧美一区二区av| 色婷婷久久久亚洲欧美| av在线观看视频网站免费| 亚洲人成网站在线播| 色吧在线观看| av视频免费观看在线观看| 免费大片18禁| 色94色欧美一区二区| 国内精品宾馆在线| 午夜日本视频在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 日日撸夜夜添| 秋霞伦理黄片| 黄色怎么调成土黄色|