食品中泛酸測定方法研究進展

何浩 *，梁軍，許銀玉，吳海智，胡艷君，田雄

1.湖南省產(chǎn)商品質(zhì)量檢驗研究院（長沙 410007）；2.廣電計量檢測（湖南）有限公司（長沙 410000）

泛酸（pantothenic）又名“遍多酸”，又稱維生素B5，是一種水溶性維生素，因為在自然中廣泛存在，故俗稱“泛酸”。泛酸具有右旋光性，對酸、堿和熱都不穩(wěn)定。泛酸的主要生理功能是構成輔酶A和?；d體蛋白，并通過它們在代謝中發(fā)揮作用，參與體內(nèi)碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)代謝。人類因膳食引起的單純泛酸缺乏癥十分少見，個別見于嚴重營養(yǎng)不良及使用代謝拮抗劑的患者，表現(xiàn)為煩躁不安、食欲減退、消化不良、腹痛、疲倦無力、手足麻木和刺痛等。泛酸毒性很低，人體對其有很好的耐受性，偶爾可產(chǎn)生輕度腹瀉。泛酸在自然界中有廣泛的食物來源，主要是肝、腎、蛋黃、肉類和全谷食品。泛酸的缺乏，可能導致阿爾茨海默癥[1-2]。中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量速查手冊（2013版）對各年齡階段以及孕婦、乳母特殊人群泛酸攝入量給出了具體的建議[3]。GB 10765—2021《食品安全國家標準 嬰兒配方食品》[4]、GB 10766—2021《食品安全國家標準 較大嬰兒配方食品》[5]、GB 10767—2021《食品安全國家標準 較大嬰兒配方食品》[6]、GB 10769—2010《食品安全國家標準 嬰幼兒谷類輔助食品》[7]、GB 22570—2014《食品安全國家標準 輔助營養(yǎng)補充品》[8]、GB 24154—2015《食品安全國家標準 運動營養(yǎng)食品通則》[9]、GB 25596—2010《食品安全國家標準 特殊醫(yī)學用途嬰兒配方食品通則》[10]、GB 29922—2013《食品安全國家標準 特殊醫(yī)學用途配方食品通則》[11]、GB 31601—2015《食品安全國家標準 孕婦及乳母營養(yǎng)補充品》[12]等食品安全國家標準中對泛酸規(guī)定了最小含量或者范圍。文章綜述了檢測食品中泛酸含量的不同檢測方法，比較了各自的優(yōu)勢和不足，也為今后泛酸的檢測提供借鑒。

1 微生物法

泛酸是植物乳桿菌生長所必須的營養(yǎng)素，在一定控制條件下，將植物乳桿菌液接種至含有試樣液的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時間后測定透光率，根據(jù)泛酸含量與透光率的標準曲線計算出試樣中泛酸含量[13]，該方法的優(yōu)點是適用范圍廣、適合于所有食品的檢測，缺點是檢測周期長、過程繁瑣、準確定量較為困難，不適合大批量樣品的檢測[14]。AOAC Official Method 992.07《Pantothenic Acid in Milk-Based Infant Formula Microbiological Turbidimetric Method》[15]中規(guī)定了微生物法檢測食品中泛酸的具體步驟。AOAC Official Method 945.74《Pantothenic Acid in Vitamin Preparations Microbiological Methods》[16]中也規(guī)定了微生物法檢測食品中泛酸的方法。王晶等[17]比較了新舊國家標準微生物法檢測泛酸含量的差異，結果表明，新舊方法的結果精密度接近，泛酸結果差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。黃鐘標等[18]比較了國標微生物法和微孔試劑盒法測定泛酸的差異，結果表明，試劑盒法重現(xiàn)性好、準確度高，且相對于國標法而言，操作步驟簡單、檢驗周期短，可以快速有效地測定嬰幼兒乳粉中維生素B5的含量。趙平等[19]比較了GB 5009.210—2016第一法微生物法[13]和GB 5413.17—2010第一法微生物法[20]，結果表明，兩個國標的微生物法只是提取方法不同，但是兩種方法的精密度都很高，加標回收率都能達到要求。李興霖等[21]結合國家標準法和試劑盒法的優(yōu)點，建立了一種快速檢測嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的方法。該方法操作簡單、方便快捷，準確度和重現(xiàn)性好，試驗菌株活力穩(wěn)定，不確定因素干擾小，污染少，成本低廉，經(jīng)濟實用。趙平等[22]采用微孔板式微生物法對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量進行測定。該方法采用微孔板法將合適濃度的植物乳桿菌液接種至含有試樣液與培養(yǎng)液的無菌微孔板中，培養(yǎng)一定時間后測定吸光度，根據(jù)泛酸含量與吸光度的標準曲線計算出試樣中泛酸的含量。李全霞等[23]綜述了微生物法測定水溶性維生素（包括泛酸）的應用情況及研究進展。田浩等[24]比較了國標法和商品化試劑盒法測定泛酸含量的差異，結果發(fā)現(xiàn)國標微生物法操作復雜，方法建立難度大，缺乏經(jīng)驗的實驗室檢測成功率較低，建議開發(fā)小型試驗儀器提高試驗成功率。

2 液相色譜法

Rakua等[25]研究了液相色譜-DAD檢測器檢測膳食補充品中9種常見的水溶性維生素。GB/T 22246—2008《保健食品中泛酸鈣的測定》[26]規(guī)定了營養(yǎng)素補充劑類保健食品中泛酸鈣的測定方法。根據(jù)泛酸鈣溶于水，對酸和堿不穩(wěn)定，但在中性條件下很穩(wěn)定的特性，試樣中的泛酸鈣用水在超聲波振蕩下提取、定容、離心后上清液過濾膜，用反相C18柱分離，在200 nm波長下檢測，外標法定量。曾金林等[27]建立了HPLC法測定嬰幼兒營養(yǎng)米粉中泛酸含量的方法。樣品加淀粉酶水解后，調(diào)節(jié)pH，加沉淀劑后離心，取上清液分析。用C18柱分離，用DAD檢測器在200 nm波長下檢測待測物。Santos等[28]建立了蔬菜中水溶性維生素和脂溶性維生素的連續(xù)提取分析的方法，并測定了貨架期內(nèi)維生素含量變化的情況。紀世彬[29]建立了復合維生素B片中5種維生素的檢測方法。該方法按《中華人民共和國藥典》2015年版[30]四部通則0931第三法檢測，其方法和條件與食品中泛酸檢測較為相似，因為保健食品基質(zhì)沒有食品基質(zhì)復雜，目標物經(jīng)提取后過濾膜即可直接進樣分析，不用除雜等過程。杜晶晶等[31]分析了高效液相色譜法測定嬰幼兒食品和乳品中泛酸的不確定度分析的方法，該方法考察了國標液相法測泛酸的不確定因素，確定影響高效液相色譜法測定嬰幼兒乳粉中泛酸的不確定度來源。結果表明影響測定結果不確定度的因素主要有標準物質(zhì)本身和標準曲線擬合過程2個方面，提取液定容體積和樣品稱量對不確定度影響較小。尹爍等[32]建立了高效液相色譜法同時測定乳制品中泛酸和生物素的方法。樣品經(jīng)硫酸鈉沉淀蛋白后，采用C18柱分離，檢測波長為200 nm，以保留時間定性，峰面積定量。林春曉等[33]建立了利用HPLC方法測定復方羅布麻片I中包括泛酸在內(nèi)的7種化藥組分的含量的方法，該方法分離度、檢出限和重現(xiàn)性較好，且在儀器上分析時間僅20 min。

3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

Gentili等[34]建立了電噴霧-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法來測定食品中水溶性維生素。該方法在正離子模式下，不到10 min就完成所有目標物的分離和檢測。泛酸鈣的檢出限可以達到納克級別，在前處理過程中避免分析物暴露在光、空氣和熱環(huán)境中是保證回收率的關鍵。Gill等[35]建立了嬰幼兒奶粉和液態(tài)奶中泛酸的檢測方法。該方法13C153N1-泛酸鈣作為內(nèi)標物，內(nèi)標法定量，消除了前處理過程對回收率造成的影響。Phinney等[36]建立了穩(wěn)定同位素稀釋/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，可以同時測定嬰兒配方奶粉中5種脂溶性維生素的方法。宮明明[37]研究了SPE-UPLC-MS/MS分析植物運動型飲料中多種水溶性維生素含量。該方法采用Oasis HLB固相萃取柱凈化，取得了較好的回收率。任強強等[38]建立了UHILIC-MS/MS法同時測定復方三維右旋泛酸鈣糖漿中5種維生素的含量。該方法采用Waters ACQUITYBEH-HILIC Amide色譜柱，多種維生素在5 min內(nèi)的得到有效分離，利用多反應監(jiān)測模式（MRM）定量。薛霞等[39]建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，來測定蜂蜜中五種水溶性維生素含量。該方法采用HLB固相萃取柱凈化，HSS T3色譜柱分離，電噴霧離子源正離子模式，多方應模式檢測，外標法定量。渠巖等[40]研究了超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜法測定配方奶粉中泛酸。該方法采用高速離心除雜，HSS T3色譜柱分離，內(nèi)標法定量。孫宇等[41]研究了超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜法測定食品中的泛酸。黎小蘭等[42]研究了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測特殊醫(yī)學配方食品中泛酸含量，特殊醫(yī)學配方食品基質(zhì)復雜，該方法采用酸堿沉淀法沉淀蛋白質(zhì)后上機檢測，取得了較好的效果。

4 其他分析方法

Kristel等[43]研究了穩(wěn)定同位素稀釋-LC/MS-TOF法測定營養(yǎng)酵母中多種維生素。該方法比較了不同酸提取方法的優(yōu)缺點。胡雯雯[44]研究了定量毛細管電泳分析復合維生素B片中5種維生素。李丹鳳等[45]研究了膠束電動色譜法測定五維他口服溶液中維生素B1，B2，B6，煙酰胺，泛酸鈣與苯甲酸鈉。孫叢叢等[46]比較了國標微生物法和試劑盒法的差異。研究顯示，兩種檢測方法對嬰幼兒乳粉泛酸檢測無明顯差異。試劑盒法方便、快捷，檢測周期短，更適于企業(yè)實驗室大量實驗樣本的檢測。

5 結語與展望

泛酸是嬰幼兒食品和保健食品中的重要營養(yǎng)物質(zhì)。通過比較檢測泛酸含量的不同方法發(fā)現(xiàn)：微生物法是發(fā)展最早、適用范圍最廣的方法，但由于前處理復雜、步驟繁瑣、檢測周期長且結果重現(xiàn)性不好，不利于大批量樣品的檢測；液相色譜法前處理較為簡單，設備普及率較高，適合于基質(zhì)較為簡單的普通食品和保健食品的檢測；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢出限低，抗干擾能力強，適合大批量的樣品檢測，特別適合特殊醫(yī)用配方奶粉等基質(zhì)較為復雜的樣品的檢測，但缺點是儀器昂貴、設備普及率不高；試劑盒法對前處理要求低，處理簡單，檢測成本低，可大批量檢測，但檢測結果需經(jīng)儀器方法進一步驗證。因此，應根據(jù)檢測需求和檢測條件科學選擇檢測方法。