運用Logistic 回歸聯(lián)合ROC曲線評估m(xù)iR-19b-3p對抑郁癥療效的預測價值

蔣宏云，周晉波，劉 然

(四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院精神科，四川 內(nèi)江 641100)

抑郁癥是最常見的一種心理性疾病，以持續(xù)性心情低落、興趣減退為典型特征的精神障礙，其具有較高的發(fā)病率，截止至2019年，我國抑郁障礙終身患病率為6.8%[1]。據(jù)2017年WHO有關全球疾病負擔統(tǒng)計顯示，抑郁障礙的傷殘調(diào)整生命年(從發(fā)病到死亡所損失的全部健康壽命)上升至第11位，且其可能成為僅次于心血管疾病的第二大疾病負擔源，給個體、家庭和社會帶來嚴重經(jīng)濟負擔[2]。抑郁癥患者往往伴隨很高的自殺風險，有10%～15%患者死于自殺，抑郁癥導致的自殺是影響家庭及社會安定的重要因素之一[3]。目前，抑郁癥治療方式以藥物治療為主，常用的抗抑郁藥物能較好改善患者病情，治愈率較高，但仍有部分患者預后較差，且復發(fā)率較高[4]。鑒于此，明確影響抑郁癥患者預后不良的危險因素有助于該病的治療?，F(xiàn)如今，臨床上缺乏有效的預測抑郁癥患者預后的生物指標，因此研究抑郁癥患者血清指標對該病的預測顯得尤為重要。研究表明微小RNA(microRNA，miRNA)在抑郁癥患者腦組織、外周血中均存在異常表達[5]。miR-19b-3p是miRNA家族中的一員，其在正常人的外周血中表達較低，可穩(wěn)定存在人體血清中，且有研究顯示其能調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞遷移[6]?，F(xiàn)有研究顯示，miR-19b-3p水平變化與生活壓力關系密切，可增加精神障礙的患病風險[7]。Chen等[8]研究顯示，miR-19b-3p是區(qū)分雙相抑郁癥和單相抑郁癥的生物標志物。而Yoshino等[9]研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者背外側前額葉皮層突觸中miR-19b-3p的表達呈明顯上調(diào)趨勢，可能參與了抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展。但目前國內(nèi)尚無關于血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后影響的研究報道，本研究以抑郁癥患者為研究對象，探討血清miR-19b-3p在此類患者治療前后差異性表達及其與預后相關性。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2019年1月—2020年6月本院收治的抑郁癥患者112例為研究對象(病例組)，另選取同期于本院進行體檢的健康志愿者60例作為對照組。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。納入標準：①病例組均符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第5版對抑郁癥的診斷標準[10]；②年齡≥18歲；③未合并其他類型精神疾??；④有基本的溝通交流能力；⑤均知情同意。排除標準：①合并有嚴重心腦血管疾病或糖尿??；②近期服用過免疫抑制劑；③合并嚴重器質性病變；④伴有惡性腫瘤者；⑤伴有嚴重軀體疾??；⑥合并有感染性疾病者。

本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準。

表1 2組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between two groups

1.2方法

1.2.2血清miR-19b-3p水平檢測 采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)法檢測血清中miR-19b-3p表達水平，病例組在治療前及治療后取患者空腹外周靜脈血4 mL，對照組于入院體檢時取空腹外周靜脈血4 mL，將獲取的血液樣品放入離心機，以3 500 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，獲得血清，向血清樣本中加入細胞裂解液，采用Trizol試劑提取樣本中的總RNA，將獲得總RNA經(jīng)Agilent Bioanalyzer 2100電泳質檢合格后在進行逆轉錄操作。采用逆轉錄試劑盒將總RNA逆轉為模板單鏈cDNA，采用rt-PCR法檢測miR-19b-3p相對表達量，PCR反應條件為：共40個循環(huán)，94 ℃變性3 min，退火后是55～59 ℃復性30 s，72 ℃延伸1 min。以U6為內(nèi)參，其中miR-19b-3p逆轉錄正向序列：F5′-GACACTTAGCGATGAATTCAGAATA-3′，反向序列：R5′-GATGCTGCCTTAGCATGACCTAGG-A-3′，U6引物正向序列：F5′-TGACTAGCAGC-AGAGGATAATATCG-3′，反向序列：R5′-ACGTGGCGCATCATAGTACTTAGGC-3′。以2-△△Ct表示miR-19b-3p相對表達量。

1.2.3病例組臨床療效評估 在治療結束后對病例組進行臨床療效評估，評估標準[11]：參考漢密爾頓——抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)評分，共包括24項問題，多數(shù)項目采用0～4分的5級評分法，少數(shù)項目采用0～2分的3級評分法，以HAMD評分減分率判定臨床療效，顯效：HAMD評分減分率>75%；有效：HAMD評分減分率在25%～75%；無效:HAMD評分減分率<25%，總有效率=(顯效+有效)/總例數(shù)×100%。

1.2.4分組 根據(jù)治療后臨床療效分為預后良好組和預后不良組，其中臨床療效顯效、有效的患者納入預后良好組(79例)，將治療無效的患者納入預后不良組(33例)[12]。

1.2.5資料收集 收集可能影響抑郁癥患者預后不良的相關因素，包括性別、年齡、抑郁癥家族史、治療依從性差、家庭社會支持情況[采用家庭支持量表(Family Support Scale,PSS-Fa)和社會支持評定量表(Social Support Rating Scale，SSRS)評估[13]]、體重指數(shù)(body mass index，BMI)、總病程、發(fā)作次數(shù)、婚姻狀況、與鄰里關系(采用自擬一般情況調(diào)查表進行調(diào)查)、伴有精神病癥狀、血清miR-19b-3p(治療前后)水平、居住地、運動情況(采用自擬一般情況調(diào)查表進行調(diào)查，經(jīng)常、不經(jīng)常)、重大生活事件、受教育情況。

1.3觀察指標 ①比較病對照組與病例組(治療前)血清miR-19b-3p表達水平；②病例組治療前后血清miR-19b-3p表達水平比較；③單因素分析可能影響抑郁癥患者預后不良的相關因素；④Logistic回歸分析明確影響抑郁癥患者預后不良的危險因素；⑤繪制受試者工作特征(receiver operating characteristical，ROC)曲線評價血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后的評估價值。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SPSS 26.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；計量資料比較采用獨立樣本t檢驗和配對t檢驗；抑郁癥患者預后不良的危險因素分析采用多因素Logistic回歸分析。預測價值分析采用ROC曲線。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1血清miR-19b-3p水平 治療前，病例組血清miR-19b-3p水平高于對照組(P<0.05)，治療后，病例組血清miR-19b-3p水平為低于治療前(P<0.05)。見表2。

表2 血清miR-19b-3p水平Table 2 Serum miR-19b-3p levels

2.2單因素分析影響抑郁癥患者預后不良的相關因素 預后不良組性別、年齡、BMI、總病程、婚姻狀況、居住地、運動情況、受教育情況與預后良好組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。預后良好組抑郁癥家族史(陽性)、治療依從性差、家庭社會支持情況差、與鄰里關系差、重大生活事件占比，發(fā)作次數(shù)、治療前后血清miR-19b-3p水平均高于預后良好組，治療猴的血清miR-19b-3p水平高于治療前，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 單因素分析影響抑郁癥患者預后不良的相關因素Table 3 Univariate analysis of related factors for poor prognosis in patients with depression

2.3Logistic回歸分析影響抑郁癥患者預后不良的危險因素 將抑郁癥患者預后情況作為因變量(預后良好=0，預后不良=1)，將單因素分析有意義的因素：抑郁癥家族史、治療依從性差、家庭社會支持情況、發(fā)作次數(shù)、與鄰里關系、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p、重大生活事件作為自變量進行Logistic回歸分析，賦值見表4。經(jīng)Logistic回歸分析顯示治療依從性差、家庭社會支持情況差、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p水平(治療前后)、重大生活事件均是影響抑郁癥患者預后不良的危險因素(P<0.05)。見表5。

表4 Logistic回歸分析法賦值Table 4 Logistic regression analysis assignments

表5 Logistic回歸分析影響抑郁癥患者預后不良的危險因素Table 5 Logistic regression analysis of risk factors for poor prognosis in patients with depression

2.4血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后不良的預測價值 ROC曲線分析顯示，治療前血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的曲線下面積(area under curve，AUC)、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.739、78.56%、64.28%、11.25。見圖1A。治療后血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的AUC、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.756、80.75%、60.15%、7.14。見圖1B，表6。

圖1 不同時間點血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后價值評估ROC曲線圖A.治療前血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后價值評估ROC曲線圖;B.治療后血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后價值評估ROC曲線圖Figure 1 ROC curve of the prognostic value of serum miR-19b-3p levels at different time points in patients with depression

表6 不同時間點血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后的預測價值Table 6 Predictive value of serum miR-19b-3p levels at different time points for prognosis in patients with depression

3 討 論

抑郁癥是常見的精神障礙之一，近年來，隨著社會經(jīng)濟快速發(fā)展，生活壓力的升高，不同年齡群體之間思想觀念的沖擊，促使抑郁癥發(fā)病率不斷提升，且呈年輕化發(fā)展趨勢[14]。目前，臨床上關于抑郁癥發(fā)病機制尚不明確，通過現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者體內(nèi)存在相應腦區(qū)神經(jīng)元功能異常及氧化應激失衡等證據(jù)，懷疑抑郁癥發(fā)生可能與神經(jīng)分化異常、線粒體功能障礙及免疫功能紊亂等有關[15]。藥物治療是治療抑郁癥首先方式，尤其是對中度及以上的患者而言，現(xiàn)有抗抑郁藥物能有效改善患者臨床癥狀，提高臨床治愈率及患者生存質量，預防復發(fā)，但仍有部分患者臨床癥狀改善效果不明顯，預后差[16]。因此，明確影響抑郁癥患者預后不良的危險因素，有助于改善患者預后，提高治愈率，已成為醫(yī)護工作者追求的目標。

miRNA是一類由18～22個核苷酸構成的單鏈非編碼蛋白質RNA，其被證實參與多種疾病的發(fā)生及發(fā)展[17]。據(jù)報道，miRNA在腦組織中大量表達，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和神經(jīng)元分化過程中扮演者重要角色，其通過參與調(diào)控神經(jīng)干細胞增殖分化、神經(jīng)遞質釋放、神經(jīng)可塑性的形成等影響神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及相關疾病發(fā)展[18]。相關研究顯示已有多種miRNA參與了抑郁癥的發(fā)病與進展過程，如miR-34a[19]、miR-323a[20]、miR-326[21]等。Wang等[22]研究顯示miR-19b-3p沉默能顯著能加小鼠海馬神經(jīng)祖細胞的增殖，調(diào)節(jié)神經(jīng)元分化。劉濤等[21]研究顯示miR-19b-3p能調(diào)節(jié)巨噬細胞氧化應激機制。本研究主要分析miR-19b-3p在抑郁癥患者治療前后的表達差異性及其與預后的關系。miR-19b-3p首先對比了治療前病例組與對照組血清miR-19b-3p水平，結果顯示病例組血清miR-19b-3p水平高于對照組。同時病例組在治療后血清miR-19b-3p水平為低于治療前，提示血清miR-19b-3p可能參與了抑郁癥的發(fā)生及發(fā)展，可用于評估抑郁癥患者的臨床療效。分析其原因可能是因為血清miR-19b-3p能調(diào)控海馬神經(jīng)細胞增殖及神經(jīng)元分化，且能有效調(diào)節(jié)巨噬細胞氧化應激有關，相關研究有待進一步研究。

本研究結果還顯示預后良好組抑郁癥家族史(陽性)、治療依從性差、家庭社會支持情況差、與鄰里關系差、重大生活事件占比，發(fā)作次數(shù)、治療前后血清miR-19b-3p水平高于預后良好組。提示上述因素可能是影響抑郁癥患者預后不良的相關因素。為進一步確定影響抑郁癥患者預后不良的危險因素，本研究對單因素有統(tǒng)計學意義的因素進行Logistic回歸分析，結果顯示治療依從性差、家庭社會支持情況差、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p(治療前后)、重大生活事件均是影響抑郁癥患者預后不良的危險因素。暗示了治療依從性差、家庭社會支持情況差、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p(治療前后)、重大生活事件與抑郁癥患者預后不良的關系密切。提示影響抑郁癥患者預后不良的危險因素較多，其中治療依從性差會導致抑郁癥反復發(fā)作，加重疾病程度，不利于預后；而家庭社會支持情況差與重大生活事件易導致患者心理負擔過重，情緒不佳，這是誘發(fā)抑郁癥發(fā)生及產(chǎn)生治療抗拒的主要誘因之一，亦是導致患者反復發(fā)作的主要原因，從而不利于患者預后；伴有精神病癥狀的患者會加重病情，使得患者治療依從性差，導致治療效果差，進而影響預后；氧化應激與神經(jīng)細胞的的增殖分化與抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展關系密切，是影響抑郁癥患者預后的關鍵因素，而miR-19b-3p可能是通過影響患者機體內(nèi)在海馬神經(jīng)細胞的增殖分化或氧化反應影響患者病情，進而影響患者預后。上述結果揭示了抑郁癥患者預后受多種因素的影響，但本研究的重點在于觀察血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后的影響，故本研究對此類患者治療前后的水平進行ROC，觀察其對該類患者預后的評估價值。結果還顯示治療前血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的AUC、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.739、78.56%、64.28%、11.25。治療后血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的AUC、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.756、80.75%、60.15%、7.14。再次暗示了miR-19b-3p水平異常表達與抑郁癥的患者預后不良關系密切，血清miR-19b-3p水平可用于預測抑郁癥患者的預后。分析原因可能在于miR-19b-3p與氧化應激反應有關，能反映氧化應激的損傷程度，而氧化應激反應有參與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。另外miR-19b-3p能調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)祖細胞的增殖，參與神經(jīng)元分化，神經(jīng)分化情況與抑郁癥的發(fā)生相關。因此，miR-19b-3p是否是通過影響患者氧化應激反應與神經(jīng)細胞的增殖與分化來影響抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展的仍需進一步進行基礎研究來發(fā)掘。

綜上所述，血清miR-19b-3p在抑郁癥患者體內(nèi)呈異常高表達，與此類患者預后有一定的關系，在一定程度上可作為抑郁癥患者預后的有效預測指標。本研究亦存在一定的不足，首先樣本量少，未對血清miR-19b-3p影響抑郁癥患者預后的機制進行研究，在今后的研究中可通過進行多中心研究擴大樣本量，同時可通過一系列基礎研究，觀察miR-19b-3p影響抑郁癥患者預后機制。其次，本研究中運動情況、鄰里關系是通過本院自擬一般情況調(diào)查表進行調(diào)查獲得，內(nèi)容可能存在偏倚。