心電圖參數(shù)聯(lián)合外周血miR-21、miR-133a、miR-150檢測(cè)對(duì)急性心肌梗死的診斷價(jià)值*

張敏敏，鄭蒙蒙

1.淮安市第二人民醫(yī)院心電圖室，江蘇淮安 223001;2.漣水縣人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，江蘇淮安 223499

急性心肌梗死(AMI)是冠狀動(dòng)脈急性閉塞引起的心肌缺血性壞死，具有起病急驟、進(jìn)展迅速、致殘致死率高等特點(diǎn)，及時(shí)再通梗死冠狀動(dòng)脈、恢復(fù)心肌血流灌注對(duì)挽救瀕死心肌、改善患者預(yù)后至關(guān)重要[1-2]。近年來，心電圖在心臟疾病的早期診斷及病情監(jiān)測(cè)中發(fā)揮著重要作用，心電圖參數(shù)QT間期離散度(QTD)代表各部分心室肌復(fù)極的不同步和不穩(wěn)定程度，其值變化與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[3]。且有報(bào)道[4-7]指出，多種微小RNA(miRNA)可作為AMI診斷的潛在生物標(biāo)志物，miR-21、miR-133a、miR-150均已被證實(shí)參與AMI的發(fā)生發(fā)展過程。此外，心肌纖維化是導(dǎo)致AMI病情惡化的主要因素之一?；诖耍狙芯繃L試探討心電圖參數(shù)聯(lián)合外周血miR-21、miR-133a、miR-150檢測(cè)對(duì)AMI的診斷價(jià)值及與心肌纖維化的關(guān)聯(lián)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 前瞻性選取2017年10月至2020年10月本院74例AMI患者作為研究組，其中男43例，女31例，年齡20～78歲，平均(62.35±8.17)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)參照美國心臟協(xié)會(huì)(AHA)、美國心臟病學(xué)會(huì)(ACC)共同發(fā)布的AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]診斷為AMI；(2)首次患AMI；(3)年齡18～79歲；(4)無心臟手術(shù)史；(5)認(rèn)知功能良好；(6)患者及家屬知曉本研究，已簽署同意書。依據(jù)1∶1配對(duì)試驗(yàn)原則，另隨機(jī)選取同期健康體檢者74例作為對(duì)照組，其中男45例，女29例，年齡18～75歲，平均(60.12±7.42)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)無心臟手術(shù)史及心血管疾??；(2)自主行為能力良好，無溝通交流障礙。兩組排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)凝血功能異?；蛴谐鲅獌A向者；(2)惡性腫瘤患者；(3)急慢性感染性疾病患者；(4)腦血管疾病、肝腎功能障礙患者；(5)自身免疫性疾病患者。本研究通過本院倫理委員會(huì)審批。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 所有受試者均采集外周靜脈血。取血液標(biāo)本3 mL，采用枸櫞酸鈉抗凝(9∶1)處理，采用miRNA提取試劑盒(購自北京索萊寶科技有限公司)提取全血中總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國Promega公司)逆轉(zhuǎn)錄，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑盒(購自德國Qiagen公司)，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平，采用通用TaqMan探針，miR-21正向引物為5′-TCA AGC AAG AGA AGA AGG ATG A-3′，反向引物為5′-GCA GGA TTT AGA GGG GAC AGA A-3′；miR-133a正向引物為5′-ATG GAC TTC CGG TCA GGT TCA-3′，反向引物為5′-GCC CTT GCC CAG TAG CTT CA-3′；miR-150正向引物為5′-CAG GCA TGG AGA CGC TAC TGA-3′，反向引物為5′-TCC GAT CGC AGG TGA CTG A-3′；引物設(shè)計(jì)與合成由廣州銳博公司完成。U6作為miRNA定量內(nèi)參。應(yīng)用公式2-ΔΔct計(jì)算miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平(Δct=ct目標(biāo)-ct內(nèi)參，ΔΔct=Δct實(shí)驗(yàn)-Δct對(duì)照)。取血液標(biāo)本3 mL，離心處理(轉(zhuǎn)速3 500 r/min，半徑8 cm，時(shí)間5 min)取血清，采用貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的DX800免疫發(fā)光儀器及配套試劑盒測(cè)定血清心肌纖維化指標(biāo)，包括層黏連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)、心肌肌鈣蛋白T(CTnT)。取血液標(biāo)本2 mL，采用沈陽萬泰醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司生產(chǎn)的OTA-400型全自動(dòng)生化分析儀、血脂測(cè)試卡(干化學(xué)法)檢測(cè)三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。采用智能電子血壓計(jì)(購自上海聚慕醫(yī)療器械有限公司)測(cè)定收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。實(shí)驗(yàn)室操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2心電圖檢查 研究組于入院時(shí)、對(duì)照組于體檢時(shí)行十二導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查，儀器為KF-2000型動(dòng)態(tài)心電記錄分析儀(購自西安交大辰方科技有限公司)，檢測(cè)并記錄心電圖參數(shù)QTD，測(cè)量結(jié)果采用心率具體數(shù)值進(jìn)行校正。

2 結(jié) 果

2.1兩組臨床資料比較 兩組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙史、飲酒史、SBP、DBP、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組臨床資料比較或n(%)]

2.2兩組心肌纖維化指標(biāo)、心電圖參數(shù)、外周血miRNA比較 研究組QTD、LN、HA、TGF-β1、miR-21、miR-133a、miR-150及CTnT水平均較對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組心肌纖維化指標(biāo)、心電圖參數(shù)、外周血miRNA比較

2.3心電圖參數(shù)、外周血miRNA與心肌纖維化指標(biāo)相關(guān)性 相關(guān)性分析可知，AMI患者心電圖參數(shù)QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150均與心肌纖維化指標(biāo)LN、HA、TGF-β1及CTnT均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 心電圖參數(shù)、外周血miRNA與心肌纖維化指標(biāo)相關(guān)性

2.4心電圖參數(shù)、外周血miRNA對(duì)AMI的診斷價(jià)值 繪制ROC曲線，評(píng)價(jià)心電圖參數(shù)、外周血miRNA對(duì)AMI的診斷價(jià)值，發(fā)現(xiàn)心電圖參數(shù)QTD聯(lián)合外周血miR-21、miR-133a、miR-150診斷AMI的曲線下面積(AUC)值最大，為0.900，最佳診斷靈敏度、特異度分別為86.49%、81.08%，具有良好診斷效能。見表4、圖1。

表4 心電圖參數(shù)、外周血miRNA對(duì)AMI的診斷價(jià)值

圖1 心電圖參數(shù)、外周血miRNA診斷AMI的ROC曲線

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，AMI患者的心電圖參數(shù)QTD大于健康對(duì)照組，與國內(nèi)外相關(guān)研究[9-10]結(jié)果一致。分析其原因?yàn)锳MI發(fā)生時(shí)由于心肌缺血缺氧，使相鄰心肌細(xì)胞在復(fù)極時(shí)產(chǎn)生電位差，導(dǎo)致QTD增大[11-12]。本研究ROC曲線結(jié)果顯示QTD診斷AMI的AUC為0.878，具有較高診斷效能，進(jìn)一步證實(shí)心電圖參數(shù)QTD在AMI的發(fā)生發(fā)展及診斷方面具有良好應(yīng)用價(jià)值。但QTD診斷AMI的靈敏度較低，僅為68.92%，需要與其他診斷方法聯(lián)合。

近期的多項(xiàng)研究[13-14]證實(shí)，miRNA可作為AMI早期診斷的生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果中，AMI患者外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平均明顯高于健康人群，提示上述指標(biāo)與AMI的患病有關(guān)。miR-21是位于基因組第17號(hào)染色體上的跨膜蛋白基因，文獻(xiàn)報(bào)道指出，在AMI患病早期階段miR-21表達(dá)增加，可能通過促進(jìn)炎癥反應(yīng)加重心肌細(xì)胞損傷[15]。支持本研究結(jié)果結(jié)論。miR-133a是調(diào)控肌肉細(xì)胞增殖的一種miRNA，在平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，具有調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能、調(diào)控平滑肌細(xì)胞增殖的生物學(xué)作用，與心肌受損、心臟衰竭的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[16]。當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)生損傷時(shí)，可釋放出miR-133a，并進(jìn)入冠脈循環(huán)，引起血液系統(tǒng)中miR-133a含量增加。而miR-150位于染色體19q13區(qū)域，是一種與炎癥有關(guān)的miRNA，其過表達(dá)可上調(diào)炎性因子從而介導(dǎo)心臟肥大和纖維化的發(fā)生，且能直接抑制心肌細(xì)胞中的促凋亡基因egr2和p2x7r參與缺血性損傷期間心臟結(jié)構(gòu)和功能重構(gòu)的調(diào)節(jié)[17-18]。本研究還發(fā)現(xiàn)外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平診斷AMI的AUC均在0.75以上，具有一定診斷效能。

筆者認(rèn)為，心電圖參數(shù)可反映AMI患者病理性心肌細(xì)胞復(fù)極電位變化，而miRNA能從分子生物學(xué)方面反映心肌細(xì)胞的病理變化，推測(cè)兩種方法聯(lián)合能更全面反映AMI患者心肌細(xì)胞損傷情況，或許能提高診斷價(jià)值。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，QTD聯(lián)合外周血miR-21、miR-133a、miR-150診斷AMI的AUC達(dá)到0.900，大于各指標(biāo)單獨(dú)診斷，有助于提高診斷效能，且心電圖參數(shù)聯(lián)合外周血miRNA診斷AMI的研究較少，心電圖參數(shù)QTD聯(lián)合外周血miR-21、miR-133a、miR-150或許能為臨床診斷AMI提供新的方法。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)AMI患者心電圖參數(shù)QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150均與CTnT水平、心肌纖維化指標(biāo)LN、HA、N末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)密切相關(guān)。心肌纖維化是AMI患者心肌細(xì)胞外基質(zhì)變化的主要特征，心肌纖維化可引起心肌重塑，加重患者心功能損傷[19]。由此可見，通過檢測(cè)心電圖參數(shù)QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平可反映心肌纖維化情況，有助于對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)估。

綜上所述，AMI患者心電圖參數(shù)QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平明顯升高，各指標(biāo)聯(lián)合可為臨床診斷AMI提供參考，且與心肌纖維化指標(biāo)密切相關(guān)，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。但本研究仍存在一定不足，如未動(dòng)態(tài)觀察QTD、外周血miR-21、miR-133a、miR-150相對(duì)表達(dá)水平變化，QTD與心電圖顯示的梗死部位的關(guān)系未明確，未明確miRNA與心梗嚴(yán)重度、預(yù)后的關(guān)系，未來工作中仍需進(jìn)一步深入探討。