川崎病患兒血清小凹蛋白-1水平與冠狀動(dòng)脈瘤的關(guān)系研究

李 君，石 錦，何 艾，張 瑩

1.黃石市婦幼保健院兒科，湖北黃石 435100;2.黃石市中醫(yī)醫(yī)院兒科，湖北黃石 435000

川崎病(KD)的發(fā)病特點(diǎn)以急性、自限性血管炎為主，多見(jiàn)于5歲以下兒童[1]，然而多年來(lái)該病的病因尚不清楚。冠狀動(dòng)脈病變(CALs)或冠狀動(dòng)脈瘤(CAAs)的發(fā)展是KD最嚴(yán)重的并發(fā)癥，這是引起缺血性心肌梗死甚至血管破裂的高危因素[2]。血管內(nèi)皮損傷是KD血管炎的始動(dòng)環(huán)節(jié)[3]。小凹蛋白-1(Cav-1)是存在于小凹細(xì)胞膜中的一種骨架蛋白，是負(fù)向調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵分子；此外，它還能影響炎癥細(xì)胞對(duì)炎癥介質(zhì)的反應(yīng)[4]。據(jù)報(bào)道，Cav-1已在諸如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病微血管疾病等慢性血管炎癥性疾病中得到研究。然而，Cav-1是否參與了KD的進(jìn)展尚不清楚[4-5]。本研究旨在探討血清Cav-1水平在KD患兒中預(yù)測(cè)CAAs的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年7月至2020年4月于黃石市婦幼保健院兒科(下稱(chēng)本院)治療的95例KD患兒作為KD組，其中男57例，女38例，平均年齡(2.69±1.96)歲。根據(jù)是否合并CAAs，分為KD合并CAAs患兒45例(KD-CAAs亞組)，KD未合并CAAs患兒50例(KD-NCAAs亞組)。另選取同時(shí)期在本院兒?？七M(jìn)行健康體檢的健康兒童100例作為健康對(duì)照組，其中男65例，女35例，平均年齡(2.79±1.36)歲，體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果均正常。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒均符合日本川崎病研究委員會(huì)提出的診斷指南[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：所有入組兒童均排除入院前靜脈注射人免疫球蛋白(IVIG)或糖皮質(zhì)激素治療、合并炎癥、免疫、代謝和血液系統(tǒng)疾病及其他心臟疾病。KD患兒在治療前1 d進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查[7]，體表面積標(biāo)準(zhǔn)化的Z≥2.5的受試者納入KD-CAAs組，Z<2.5的受試者被納入KD-NCAAs組。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲得患兒家長(zhǎng)或法定監(jiān)護(hù)人的知情同意。

1.2檢測(cè)血清中Cav-1和其他常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平 在KD組患兒急性期(注射IVIG或抗凝劑前)和IVIG+糖皮質(zhì)激素初始治療后第3天(正常體溫維持48～72 h)采集靜脈血液標(biāo)本2 mL。樣品在3 000 r/min條件下離心10 min以分離血清，將血清樣品立即保存在-80 ℃待測(cè)。以相同的程序收集健康對(duì)照組兒童的血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(上海西塘生物技術(shù)有限公司，中國(guó))測(cè)定血清Cav-1水平。

2 結(jié) 果

2.1KD患兒和健康對(duì)照組基線臨床資料比較 在性別、年齡、體質(zhì)量、血脂、血糖等基線特征方面，KD組與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但是與健康對(duì)照組相比，KD患兒(包括KD-NCAAs組和KD-CAAs組)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、中性粒細(xì)胞百分比(NEU%)、C 反應(yīng)蛋白(CRP)、紅細(xì)胞沉降率 (ESR)、降鈣素原(PCT)升高，同時(shí)淋巴細(xì)胞百分比(LYM%)、Cav-1水平降低(P<0.05)；此外KD患兒活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)較健康對(duì)照組有所延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。KD-CAAs組患兒血紅蛋白低于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且APTT和TT長(zhǎng)于KD-NCAAs組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 健康對(duì)照組兒童和KD患兒一般臨床資料比較或n(%)或M(P25～P75)]

續(xù)表1 健康對(duì)照組兒童和KD患兒一般臨床資料比較或n(%)或M(P25～P75)]

2.2KD患兒血清Cav-1水平變化 KD-CAAs組患兒血清Cav-1基線水平顯著低于KD-NCAAs組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。另外，標(biāo)準(zhǔn)治療后KD-CAAs組和KD-NCAAs組患兒血清Cav-1水平較治療前均升高，且KD-CAAs組患兒血清Cav-1水平仍低于KD-NCAAs組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 KD-CAAs組和KD-NCAAs組血清Cav-1水平治療前后變化[M(P25～P75)，ng/mL]

2.3KD患兒中血清Cav-1水平與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的相關(guān)性 全部KD患兒血清Cav-1水平與NEU%、CRP、纖維蛋白原水平呈負(fù)相關(guān)，與LYM%呈正相關(guān)(P<0.05)。對(duì)于KD-CAAs組，患兒血清Cav-1水平與ESR、D-二聚體水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。另外，在KD-NCAAs組中，血清Cav-1水平與NEU%、CRP、纖維蛋白原呈負(fù)相關(guān)，與LYM%呈正相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 KD患兒血清Cav-1水平與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室變量的相關(guān)性

續(xù)表3 KD患兒血清Cav-1水平與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室變量的相關(guān)性

2.4多因素Logistic回歸分析血清Cav-1水平與KD患兒CAAs發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性 根據(jù)KD患兒血清Cav-1水平，分為4組：<11.84 ng/mL組、11.84～21.34 ng/mL組、>21.34～44.45 ng/mL組、>44.45 ng/mL組，經(jīng)單因素和多因素Logistic回歸分析，校正年齡、性別、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等混雜因素后，血清Cav-1≥21.35 ng/mL是KD患兒發(fā)生CAAs的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 多因素Logistic回歸分析血清Cav-1水平與KD患兒CAAs發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性[M(P25～P75)]

2.5ROC曲線分析血清Cav-1水平用于預(yù)測(cè)KD-CAAs患兒的臨床價(jià)值 經(jīng)ROC曲線分析，血清Cav-1基線水平預(yù)測(cè)KD-CAAs患兒的曲線下面積為0.930(95%CI：0.882～0.978)，cut off值為23.98 ng/mL，在該閾值下，最佳靈敏度和特異度分別為86.7%和88.0%，見(jiàn)圖1。

圖1 血清Cav-1水平用于預(yù)測(cè)KD-CAAs的ROC曲線

3 討 論

KD進(jìn)展主要影響中小型動(dòng)脈，尤其是冠狀動(dòng)脈，如擴(kuò)張、動(dòng)脈瘤形成或嚴(yán)重狹窄，這與內(nèi)皮細(xì)胞的免疫激活和免疫性血管炎癥反應(yīng)有關(guān)[2,8]。在本研究證實(shí)KD患兒血清Cav-1水平普遍降低，且血清低水平Cav-1與CAAs發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。

小凹是細(xì)胞膜上小的(50～100 nm)類(lèi)似于燒瓶樣的凹陷狀結(jié)構(gòu)。Cav-1是其中一種重要的功能蛋白，廣泛表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞[4,9]。除了誘導(dǎo)小凹的形成和維持其結(jié)構(gòu)外，Cav-1還參與多種炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生和炎癥反應(yīng)介質(zhì)的釋放[10]，并且在血管生成、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)缺陷、應(yīng)激和免疫等方面也發(fā)揮著重要作用[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)KD組患兒血清Cav-1水平明顯低于健康對(duì)照組。特別是，與KD-NCAAs組相比，KD-CAAs組患兒血清Cav-1水平降低更明顯。表明Cav-1可能參與了KD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，而Cav-1的低血清濃度可能是導(dǎo)致KD特征性過(guò)度炎癥反應(yīng)的原因之一。有研究表明IL-6等炎性細(xì)胞因子協(xié)同介導(dǎo)了KD急性期血管炎的發(fā)生[12]。有研究發(fā)現(xiàn)[4,13]，Cav-1可通過(guò)核因子κB、janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子通路等抑制IL-6的表達(dá)。這也解釋了本研究中KD患兒血清Cav-1水平與NEU%、CRP、FIB、LYM%等常規(guī)生化指標(biāo)的相關(guān)性。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)KD組血清中Cav-1水平與CRP水平呈負(fù)相關(guān)。CRP水平與炎癥程度密切相關(guān)。過(guò)度炎癥反應(yīng)可進(jìn)一步反饋性抑制Cav-1表達(dá)[10,12]。總之，Cav-1可能參與KD血管炎的發(fā)展，并且血清低濃度Cav-1可能導(dǎo)致KD更嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。

KD主要影響全身中等大小的血管，其最嚴(yán)重的血管并發(fā)癥是CAAs[2]。本研究結(jié)果表明，Cav-1可能是參與CAAs發(fā)展過(guò)程的關(guān)鍵因素。首先，本研究發(fā)現(xiàn)KD-CAAs組患兒血清Cav-1水平明顯低于KD-NCAAs組。KD急性期，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)血管壁，介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞嚴(yán)重病變[14-15]。而血清低水平Cav-1可能是血管壁過(guò)度炎癥反應(yīng)的原因之一。第二，本研究還發(fā)現(xiàn)KD-CAAs患兒血清Cav-1水平與ESR水平呈負(fù)相關(guān)。既往研究已經(jīng)證實(shí)，炎癥參與了KD中CALs的發(fā)展過(guò)程[12]。ESR也被認(rèn)為是KD患者發(fā)生CAAs的重要預(yù)測(cè)標(biāo)志物[16]。本研究觀察到血清Cav-1水平與這些CALs相關(guān)炎癥參數(shù)呈負(fù)相關(guān)，表明Cav-1可能參與了CAAs的發(fā)展過(guò)程，并能夠通過(guò)負(fù)反饋機(jī)制在過(guò)度炎癥狀態(tài)下進(jìn)一步受到抑制。在KD-NCAAs患兒中，筆者也觀察到血清Cav-1濃度與炎癥相關(guān)參數(shù)NEU%、CRP水平呈負(fù)相關(guān)。這進(jìn)一步證實(shí)了Cav-1會(huì)受到炎癥因子的進(jìn)一步抑制，并起到抗炎細(xì)胞因子的作用[11,13-14]。最后，先前的研究表明，Cav-1通過(guò)阻止炎癥細(xì)胞滲入血管壁，作為保護(hù)因子參與動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死[4]。在動(dòng)脈粥樣硬化的小鼠模型中，Cav-1敲除導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈損傷的傾向增加[14,17]。上述數(shù)據(jù)均證實(shí)，血清中低水平Cav-1可能是KD患者CAAs進(jìn)展的關(guān)鍵因素。

另外，IVIG聯(lián)合糖皮質(zhì)激素可顯著可顯著降低KD急性期CALs的發(fā)生率，并進(jìn)一步縮短臨床癥狀的持續(xù)時(shí)間和住院時(shí)間[18]。在本研究中，經(jīng)治療后，血清Cav-1水平較治療前升高。Cav-1亦是一種糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白，糖皮質(zhì)激素可與細(xì)胞質(zhì)糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合，進(jìn)一步促進(jìn)Cav-1基因的表達(dá)水平，從而導(dǎo)致大量Cav-1分泌到循環(huán)中以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)[19]。此外，Cav-1還參與一些炎性細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，這可能是糖皮質(zhì)激素可以減弱KD中CALs發(fā)展的潛在機(jī)制之一[20]。

綜上所述，本研究證明KD患者血清Cav-1水平顯著低于健康對(duì)照組，尤其是伴有CAAs的患兒血清Cav-1表達(dá)水平降低更明顯。此外，KD患兒血清Cav-1表達(dá)水平與NEU%、CRP、LYM%等常規(guī)指標(biāo)有關(guān)。這些結(jié)果表明，Cav-1可能是KD，特別是伴有CAAs新的治療靶點(diǎn)。然而，仍然需要進(jìn)一步的研究來(lái)驗(yàn)證和闡明這種潛在的治療選擇。