DLG1、DLG5在大腸腺瘤性息肉組織中的表達及臨床意義

朱貞祥，王文明，程桐花，沈瑞雪， 張 超 ，朱運超 ，朱運好

大腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害人類健康，多數(shù)病人在就診時已處于進展期，治療效果差[1]。大腸腺瘤性息肉是大腸癌最主要的癌前病變，早期切除可使大腸癌的發(fā)病風險降低85%～90%[2]，目前有關(guān)腺瘤性息肉癌變的確切機制不明。盤狀大同源物(discs large homolog，DLG)蛋白家族包括DLG1～DLG5等5個成員[3]，主要功能是調(diào)節(jié)細胞極性，其減少或缺失可引起細胞極性喪失，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。DLG1、DLG5作為DLG家族重要成員，已被證明與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但其在大腸息肉中研究鮮有報道。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測不同病理類型大腸息肉及大腸癌中DLG1、DLG5蛋白的表達情況，分析其與臨床病理特征的關(guān)系及這兩種蛋白在腺瘤性息肉中表達的相關(guān)性，探討其在大腸息肉癌變發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。現(xiàn)作報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018-2019年在皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科診治的大腸息肉病人83例，男45例，女38例，年齡15～77歲，平均(46±11.4)歲；結(jié)腸鏡下切除或活檢息肉標本經(jīng)病理證實：大腸腺瘤性息肉45例，炎性增生息肉38例。同時選取36例正常大腸黏膜組織及31例大腸癌組織進行檢測。本研究經(jīng)皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會批準(0126)，病人均簽署知情同意書。

1.2 試劑與方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測正常大腸組織、大腸息肉組織及大腸癌中DLG1和DLG5蛋白的表達。DLG1、DLG5抗體、二氨基聯(lián)苯胺試劑等均購于美國 Santa Cruz公司，所有操作按試劑說明進行，抗原修復(fù)均采用微波修復(fù)，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，采用已知陽性切片作為陽性對照。結(jié)果判定：DLG1、DLG5的陽性染色結(jié)果為細胞質(zhì)和/或核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，由2名病理學(xué)專家隨機選取5個高倍鏡視野進行雙盲評分。根據(jù)染色強度和陽性細胞數(shù)對標本進行評分：染色強度無顯色0分、弱顯色1分、中等程度顯色2分、高強度顯色3分；著色細胞數(shù)<5%為0分，5%～25% 為1分、>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%～100%為4分。每張切片平均著色程度與平均著色細胞百分率相加為最后得分:0～1分(-)；2分(+)；3～4分(2+)；≥5分(3+)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用χ2檢驗、χ2分割檢驗和Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 DLG1、DLG5在不同組織中表達水平比較 DLG1、DLG5在正常大腸組織、炎性增生息肉、腺瘤性息肉及大腸癌組織中陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，兩兩比較結(jié)果顯示，腺瘤性息肉和大腸癌組織DLG1和DLG5陽性率均低于正常大腸組織，大腸癌組DLG1和DLG5陽性率均低于炎性增生息肉組，大腸癌組DLG5陽性率低于腺瘤性息肉組(P<0.05)(見表1和圖1～2)。

表1 4種大腸組織中DLG1、DLG5的陽性表達情況比較[n;百分率(%)]

2.2 不同病理類型大腸腺瘤中DLG1、DLG5表達情況比較 DLG1在管狀腺瘤中的陽性率為64.3%、混合性腺瘤64.3%、絨毛狀腺瘤為23.5%，3組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；DLG5在管狀腺瘤中的陽性表達率為57.1%、混合性腺瘤50.0%、絨毛狀腺瘤為23.5%，3組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表2)。

表2 DLG1、DLG5在不同病理類型大腸腺瘤性息肉的表達情況[n;百分率(%)]

2.3 DLG1、DLG5蛋白表達與大腸腺瘤性息肉臨床病理特征關(guān)系 DLG1、DLG5蛋白在大腸腺瘤性息肉組織中的表達在不同大腸息肉直徑、息肉部位、有無蒂、年齡、性別及息肉數(shù)量等表達陽性率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表3)。

表3 DLG1、DLG5的陽性表達情況與大腸腺瘤性息肉的臨床病理特點[n;百分率(%)]

2.4 大腸腺瘤性息肉組織中DLG1及DLG5表達的相關(guān)性 DLG1和DLG5蛋白在大腸腺瘤性息肉組織中表達呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.784，P<0.01)(見表4) 。

表4 腺瘤性息肉組織中DLG1、DLG5表達的相關(guān)性

3 討論

2020年全球新發(fā)大腸癌病例數(shù)已居惡性腫瘤第三位[4]，早期大腸癌通過超聲內(nèi)鏡進行臨床分期并實施內(nèi)鏡下治療后獲得較好診治效果[5]，但很多大腸癌病人就診時常伴有遠處轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差[6]，因此需要尋找新的治療靶點和預(yù)后指標。DLG1、DLG5高度同源，兩者在正常組織中高度表達，在不同癌組織中表達差異明顯，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7-10]。DLG1是潛在的腫瘤抑制因子，腫瘤晚期由于Snai1基因觸發(fā)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化重新激活導(dǎo)致其表達減少；DLG5的表達水平與腫瘤分期及預(yù)后有關(guān)，車娟娟等[11]研究發(fā)現(xiàn)肺腺癌組織中DLG5的陽性表達率明顯減少，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期和腫瘤復(fù)發(fā)呈負相關(guān)，而另一項有關(guān)肺癌的研究[12]發(fā)現(xiàn)，與正常組織相比，DLG5在癌組織中表達增加，且表達水平與總生存時間和無復(fù)發(fā)生存等均呈負相關(guān)。故DLG1、DLG5與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，由于DLG1、DLG5在不同腫瘤中的表達、生存和預(yù)后表現(xiàn)出多樣性，因此檢測DLG1、DLG5基因在大腸腫瘤中的確切功能至關(guān)重要，它們可能是大腸腫瘤分子治療的潛在靶標。

大腸腺瘤性息肉是大腸腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要階段[13]，為研究DLG1、DLG5在息肉發(fā)生癌變中的作用，本研究運用免疫組織化學(xué)法檢測了83例大腸息肉及31例大腸癌組織中DLG1、DLG5的表達情況，發(fā)現(xiàn)不同病理類型的大腸息肉及大腸癌組織中DLG1、DLG5陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明DLG1、DLG5與大腸息肉的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。DLG1、DLG5在腺瘤性息肉中的陽性表達率顯著低于炎性增生息肉和正常大腸組織，提示DLG1、DLG5表達減少可能在息肉上皮內(nèi)瘤變至癌變過程中起重要作用。DLG1、DLG5在絨毛狀腺瘤中的陽性表達率顯著低于管狀腺瘤和混合性腺瘤，其陽性表達率有隨絨毛含量增多而逐漸減少趨勢，這與絨毛狀腺瘤更易癌變觀點一致。本研究中>1 cm息肉和無蒂息肉中DLG1、DLG5表達量有明顯減少趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與樣本量少及樣本來源單一有關(guān)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，在腺瘤性息肉中DLG1和DLG5表達呈正相關(guān)，二者隨著大腸病變惡性程度升高呈遞減趨勢，且與息肉的不同病理類型有關(guān)，提示其可能在息肉癌變過程中作為抑癌因子發(fā)揮作用。明確結(jié)腸息肉的病理類型并檢測DLG1、DLG5的表達情況對防治大腸腺瘤性息肉癌變具有重要意義。

綜上所述，不同病理類型的大腸息肉及大腸癌組織中DLG1、DLG5的陽性表達率不同，DLG、DLG5的表達情況與大腸息肉的病理類型及病變嚴重程度顯著相關(guān)，推測DLG1、DLG5可能參與了大腸息肉向大腸癌的發(fā)生發(fā)展，但所涉及的相關(guān)機制尚不明確，有待進一步研究。