子宮腺肌癥患者血清中Sirt6和氧化應(yīng)激指標(biāo)水平及其相關(guān)性分析

和 斌，康 樂，瞿曉燕，楊尚，劉楚穎，閆 薔

(同濟(jì)大學(xué)a.附屬楊浦醫(yī)院臨床研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心，上海 200090；b.附屬第一婦嬰保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，上海 200120)

子宮腺肌癥在臨床上是一種較為多見的婦科良性疾患，其病理表現(xiàn)為子宮基底層內(nèi)膜細(xì)胞增生并侵入至子宮內(nèi)膜肌層間質(zhì)中，其臨床表現(xiàn)為盆腔疼痛、子宮出血過多、貧血和不孕癥等，然而子宮腺肌癥的病因迄今仍然難以很好地解釋[1]。目前較為公認(rèn)的學(xué)說[2]認(rèn)為，該疾病的病變是由于子宮內(nèi)膜黏膜下層的缺失從而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜基底層的細(xì)胞侵襲和代償性增生而形成，基因因素、子宮內(nèi)膜基底層的損害如人工流產(chǎn)、分段刮宮術(shù)等均與子宮腺肌癥的發(fā)生緊密相關(guān)。

氧化應(yīng)激是指一種活性氧(ROS)與抗活性氧物之間形成的不平衡現(xiàn)象[3]。雖然正常細(xì)胞的生長需要一定量的ROS，但是過量的ROS產(chǎn)生可能損傷機(jī)體的天然抗氧化防御系統(tǒng)，形成一種不適于正常女性生理反應(yīng)的環(huán)境[4]。有研究[5]指出，不明原因不孕癥的發(fā)生與氧化應(yīng)激有關(guān)。而且，近年有文獻(xiàn)報(bào)道[6]指出：氧化應(yīng)激與多種婦科良性疾病有關(guān)，包括內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌病、輸卵管囊腫等。

沉默調(diào)節(jié)蛋白6(Sirt6)是去乙?；窼irtuin家族中最重要的成員之一，是一種NAD+依賴性組蛋白去乙酰化酶和ADP核糖轉(zhuǎn)移酶[7]。Sirt6在細(xì)胞衰老、新陳代謝、氧化應(yīng)激、炎癥及自噬等過程中起著重要作用[8]。有研究[9-11]發(fā)現(xiàn)，Sirt6在多種細(xì)胞模型中顯示良好的抗氧化應(yīng)激作用。例如，Sirt6可通過NRF2/ARE通路緩解氧化應(yīng)激從而保護(hù)肝細(xì)胞及視網(wǎng)膜細(xì)胞的氧化損傷，也可通過上調(diào)內(nèi)源性抗氧化劑來減輕心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷[9-10]。本研究旨在觀察子宮腺肌癥患者血清中Sirt6以及氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平并分析其相關(guān)性，為子宮腺肌癥發(fā)病機(jī)制的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2021年4—10月同濟(jì)大學(xué)附屬楊浦醫(yī)院收治的子宮腺肌癥患者20例作為腺肌癥組，另選擇同期體檢健康婦女20名作為正常組。腺肌癥組和正常組年齡分別為21～45(32.67±5.45)歲和21～48(30.83±5.63)歲，2組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)子宮腺肌癥患者均經(jīng)病理檢查確診；2)體檢健康婦女及子宮腺肌癥患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)3個(gè)月內(nèi)服用過激素類藥物者；2)合并內(nèi)分泌、免疫性疾病者；3)合并惡性腫瘤或其他器質(zhì)性疾病者；4)具有感染和糖尿病史者；5)合并精神疾病、智力障礙或無法交流者；6)處于妊娠期或哺乳期者。本研究已獲得同濟(jì)大學(xué)附屬楊浦醫(yī)院倫理委員會(huì)審核并通過。

1.2 主要試劑和儀器

人沉默調(diào)節(jié)蛋白6(Sirt6)酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自ELK Biotechnology公司；丙二醛(MDA)檢測試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒均購自Beyotime生物科技有限公司；Spectramax M5酶標(biāo)儀購自美谷分子公司。

1.3 方法

1.3.1 血清Sirt6檢測

采集2組空腹外周血，室溫下靜置1 h后1000 g(1 g=2.528 r·min-1)離心15 min；取上清保存于-80 ℃?zhèn)溆?。血清Sirt6檢測按照人Sirt6酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒說明書進(jìn)行，在波長450 nm處測定樣本的吸光度，根據(jù)吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線并分析Sirt6水平。

1.3.2 氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測

利用MDA檢測試劑盒、SOD活性檢測試劑盒分別檢測2組血清中MDA含量及SOD活性。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組血清Sirt6水平比較

正常組血清Sirt6水平高于腺肌癥組[(7.03±4.59)ng·mL-1比(2.65±1.52)ng·mL-1，P<0.001]。見圖1。

2.2 2組血清氧化應(yīng)激水平比較

正常組血清中MDA含量明顯低于腺肌癥組[(2.75±2.11)μmol·L-1比(5.45±2.48)μmol·L-1，P<0.001]，而SOD活性高于腺肌癥組[(0.75±0.20)U比(0.52±0.24)U，P<0.01]。見圖2。

*P<0.001。圖1 2組血清Sirt6水平比較

*P<0.01，**P<0.001。圖2 2組血清MDA含量、SOD活性比較

2.3 血清Sirt6與MDA、SOD相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，血清中Sirt6水平與MDA含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.56，P<0.05)，而Sirt6水平與SOD活性呈正相關(guān)(r=0.32，P<0.05)。見圖3。

MDA水平/(μmol·L-1)SOD水平/U

3 討論

子宮腺肌癥是一種子宮良性疾患，其往往伴有不孕癥和胚胎的不良植入，這是由于子宮環(huán)境改變、子宮收縮異常、炎癥增加和子宮內(nèi)膜功能異常等造成的[11]。在不孕癥婦女中約有25%患者存在著子宮腺肌癥，由于腺肌癥位置的原因，對于著床障礙患者，子宮腺肌癥極易造成其不孕。由于腺肌癥連接區(qū)肌層的異常收縮[12]，肥大肌纖維促進(jìn)明顯的子宮蠕動(dòng)和內(nèi)膜壓的增加，從而影響精子的運(yùn)輸和植入[13]。也有學(xué)者[13-14]認(rèn)為，過度的慢性炎癥、血管改變、細(xì)胞因子分泌異常以及因ROS相關(guān)酶的過度表達(dá)導(dǎo)致自由基水平異常等均可導(dǎo)致腺肌癥，從而影響早期胚胎植入和發(fā)育。

本研究發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，子宮腺肌癥組患者血清MDA含量明顯升高、SOD活性下降，表明子宮腺肌癥時(shí)患者機(jī)體處于高氧化應(yīng)激狀態(tài)。氧化應(yīng)激是機(jī)體內(nèi)活性氧與抗氧化系統(tǒng)的失衡導(dǎo)致ROS過度產(chǎn)生，進(jìn)而造成對機(jī)體的損害[15]。MDA和SOD是評價(jià)氧化應(yīng)激程度的重要指標(biāo)，MDA是硫代巴比妥酸的活性物質(zhì)，可間接反映細(xì)胞受活性氧攻擊造成的氧化損傷，而SOD是機(jī)體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)正常組血清中Sirt6水平高于子宮腺肌癥組，而且Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)Sirt6水平與SOD活性呈正相關(guān)，而與MDA含量呈負(fù)相關(guān)，這提示Sirt6可能參與子宮腺肌癥氧化損傷的調(diào)控機(jī)制。既往研究[7]顯示，Sirt6作為Sirtuins家族的一員在DNA修復(fù)、抗衰老、代謝等生理和病理進(jìn)程中具有重要作用。而且最新研究[16]表明，Sirt1、Sirt3和Sirt5具有保護(hù)細(xì)胞免受活性氧ROS攻擊的影響，Sirt2、Sirt6和Sirt7具有調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因的作用，Sirt4可誘導(dǎo)活性氧ROS產(chǎn)生而具有抗氧化作用。另有研究[17-18]發(fā)現(xiàn)，Sirt6在血管病變、肝損害、糖尿病、視網(wǎng)膜疾病中具有抗氧化作用，這與本研究結(jié)果相類似。而且，已有研究[19-21]顯示，Sirt6過表達(dá)可通過AMPK-FOXO3α通路降低氧化應(yīng)激和上調(diào)內(nèi)源性抗氧化劑來保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺血性再灌注的損傷[19]；Sirt6也可通過激活NRF2通路來保護(hù)人間充質(zhì)干細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷，Sirt6的缺失導(dǎo)致人間充質(zhì)干細(xì)胞的氧化還原代謝紊亂，從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷的增加[20]；在短時(shí)間的高糖暴露中，Sirt6下調(diào)使核因子κB的表達(dá)增加，而Sirt6的過表達(dá)則降低核因子κB的表達(dá)；天然抗氧化劑麥角硫因酸的抗氧化作用與麥角硫因酸增加Sirt1和Sirt6的表達(dá)及其負(fù)性調(diào)控核因子κB有關(guān)[21]。然而，Sirt6在子宮腺肌癥的抗氧化損傷中的作用機(jī)制是否與上述信號(hào)通路之間相關(guān)，需要后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上，子宮腺肌癥患者血清中Sirt6、超氧化物歧化酶活性水平降低，丙二醛含量升高，且Sirt6水平與丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性相關(guān)，提示Sirt6可能是子宮腺肌癥氧化損傷的調(diào)控機(jī)制之一，可能成為子宮腺肌癥治療的靶點(diǎn)。但是，本實(shí)驗(yàn)入組樣本數(shù)相對較少，后期應(yīng)擴(kuò)大樣本量或者進(jìn)行多中心研究來驗(yàn)證Sirt6在子宮腺肌癥氧化應(yīng)激損傷中的作用。