豬偽狂犬病特性研究及防控

于 磊，王竹軍，李冰冰，張 宇

（1.赤峰市農(nóng)牧業(yè)綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 赤峰 024000；2.紹興市柯橋區(qū)畜牧獸醫(yī)所；3.阜新市轉(zhuǎn)型升級(jí)服務(wù)中心；4.南陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

1 病毒特性

偽狂犬病病毒（PRV）是一種甲型皰疹病毒，與單純皰疹病毒1 型（HSV1）和水痘帶狀皰疹病毒（VZV）相關(guān)。偽狂犬病是由皰疹病毒家族成員偽狂犬病病毒（PRV）引發(fā)的一種常見(jiàn)的傳染病，具體傳染特點(diǎn)表現(xiàn)為傳播迅速、急性傳染、地方流行性顯著、死亡率較高。病毒寄生的主要宿主為豬，被感染偽狂犬病毒的豬會(huì)在不同時(shí)間段內(nèi)出現(xiàn)病理性壞死，病理性壞死是細(xì)胞程序性死亡的一種炎癥形式，感染偽狂犬病毒后，這種病毒以誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的形式導(dǎo)致細(xì)胞死亡。PRV感染是通過(guò)與細(xì)胞受體結(jié)合以允許穿透細(xì)胞而開(kāi)始的。到達(dá)細(xì)胞核后，病毒基因組引導(dǎo)一個(gè)受調(diào)控的基因表達(dá)級(jí)聯(lián)，最終導(dǎo)致病毒DNA 復(fù)制和新病毒成分的產(chǎn)生，最后，子代病毒粒子自我組裝并離開(kāi)宿主細(xì)胞。除了豬這個(gè)主要宿主外，也有不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)該病可通過(guò)家鼠感染其他動(dòng)物，甚至也出現(xiàn)人類感染偽狂犬病毒的案例。因?yàn)檫@種病對(duì)新生仔豬有100%的致死率，并且對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的破壞，經(jīng)濟(jì)遭受巨大損失。

2 流行病學(xué)

豬偽狂犬病有季節(jié)性，像普通的大多數(shù)病一樣多發(fā)生在寒冷的季節(jié)，冬末春初是該病的高發(fā)時(shí)間段，因?yàn)楹涞募竟?jié)更有利于病毒的傳播，延長(zhǎng)了病毒的存活時(shí)間，但其他季節(jié)也有發(fā)生。豬場(chǎng)是偽狂犬病毒的溫泉，病毒在豬場(chǎng)中肆虐傳播。病豬、帶毒豬、帶毒豬場(chǎng)、帶毒家鼠是該病毒的重要傳染源。病毒通過(guò)空氣及體液接觸進(jìn)行傳播是該病毒傳播的重要途徑。病毒擴(kuò)散類型除了空氣傳播、體液傳播外，病豬可通過(guò)精液和胎盤傳播［1］。該病表現(xiàn)為易感率高、發(fā)病急。在豬場(chǎng)內(nèi)，病豬的體液、糞便可直接將病毒排出，相鄰豬圈因空氣流動(dòng)直接患病，整個(gè)豬場(chǎng)也會(huì)因此將整個(gè)疫情擴(kuò)散。不少學(xué)者認(rèn)為，牛、羊、犬、貓、野生動(dòng)物、肉食動(dòng)物等感染該病與接觸豬、鼠有關(guān)［2］。

3 臨床癥狀和致病機(jī)理

感染偽狂犬病毒后，不同年齡的豬有不同的反應(yīng)，年齡越大發(fā)病率和死亡率越低，新生仔豬有著相當(dāng)高的致死率，最高可達(dá)100%，而成年豬因?yàn)槠漭^高的抵抗力，因此多呈現(xiàn)為隱性感染。活下來(lái)的仔豬到了哺乳期，雖不發(fā)病但是長(zhǎng)期帶毒導(dǎo)致免疫力低下，各種有害應(yīng)激反應(yīng)會(huì)直接或間接引起該病病癥發(fā)作。仔豬表現(xiàn)為高熱、昏迷、嗜睡、四肢泳動(dòng)、轉(zhuǎn)圈、角弓反張、共濟(jì)失調(diào)、抽搐、后肢麻痹、口流泡沫狀液、嘔吐、拉稀、咳嗽、打噴嚏、流鼻涕，育肥豬表現(xiàn)為高熱厭食、呼吸道癥狀、偶有神經(jīng)癥狀、增重受阻和發(fā)育障礙、飼料報(bào)酬率低，種豬表現(xiàn)為繁殖障礙和呼吸癥狀，妊娠母豬表現(xiàn)為木乃伊胎、死胎、流產(chǎn)，母豬表現(xiàn)為屢配不孕、返情率高，公豬表現(xiàn)為睪丸腫脹、萎縮、精液質(zhì)量變差，喪失種用能力。PRV 編碼的糖蛋白都是很容易被機(jī)體識(shí)別并排斥的靶標(biāo)，這些有毒蛋白質(zhì)大約被分為3 類，分別是囊膜蛋白、病毒DNA 代謝酶、病毒結(jié)構(gòu)蛋白，這3 類蛋白質(zhì)決定了PRV 毒力的大小。研究PRV囊膜表面糖蛋白，對(duì)于了解其致病機(jī)理有很大的意義。在分子層面上，是病毒宿主與病毒的相互作用機(jī)制。眾所周知，囊膜蛋白是機(jī)體識(shí)別抗原的重要成分，現(xiàn)今已發(fā)現(xiàn)11種PRV的囊膜蛋白，這11種囊膜蛋白是機(jī)體識(shí)別的主要成員，也與病毒毒力存在一定關(guān)系。有研究表明病毒增殖的過(guò)程中必須要有糖蛋白的參與，非必須糖蛋白決定毒理的大小［3］。

4 臨床診斷

可根據(jù)病豬的內(nèi)臟等病理特征進(jìn)行初步診斷，由于目前的病豬存在多種交錯(cuò)復(fù)雜的病理病癥，一般采用常見(jiàn)的PCR檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)等簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)方法。

4.1 PCR檢測(cè)

根據(jù)偽狂犬病毒的穩(wěn)定特殊序列設(shè)計(jì)出引物，目前擴(kuò)增試驗(yàn)一般采集腦部組織作為病料進(jìn)行PCR擴(kuò)增快速檢測(cè)。反應(yīng)條件：95 ℃持續(xù)5 min，然后在94 ℃進(jìn)行35個(gè)周期，40 s，52 ℃進(jìn)行60 s，72 ℃進(jìn)行1 min，最后在72 ℃延長(zhǎng)10 min。PCR產(chǎn)物用溴化乙錠染色，并在1.5%瓊脂糖凝膠上用紫外光進(jìn)行可視化。

4.2 血清學(xué)檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，簡(jiǎn)稱ELISA，在大樣本量的病毒篩選檢測(cè)中，成本低、成效快、特異性高、靈敏度強(qiáng)，也可以作為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的一種常規(guī)有效的檢測(cè)方法。

5 疫苗免疫研究進(jìn)展

目前尚無(wú)針對(duì)偽狂犬病的特效治療藥，疫苗免疫作為經(jīng)濟(jì)高效的防控依然是主要措施。從低毒力現(xiàn)場(chǎng)分離物獲得的經(jīng)典減毒活疫苗開(kāi)始，根據(jù)疫苗類型不同，又主要分為滅活疫苗和減毒疫苗?；蚬こ桃呙缒壳罢谘邪l(fā)中，AD疫苗通過(guò)首次使用缺乏毒力決定基因的基因工程活病毒疫苗和DIVA的概念，開(kāi)創(chuàng)了動(dòng)物疾病控制的新策略，即通過(guò)使用標(biāo)記疫苗和相應(yīng)的伴隨診斷試驗(yàn)，將接種疫苗的動(dòng)物與田間病毒感染動(dòng)物進(jìn)行血清學(xué)鑒別。活疫苗中使用最廣的是Bartha-K61 株，目前有40 家生產(chǎn)廠家獲批生產(chǎn)。

筆者發(fā)現(xiàn)甘草多糖（GCP）在體外具有抗PRV 感染活性，600 μg/ml GCP可以完全阻斷病毒感染。在PRV感染的同時(shí)或感染后添加GCP對(duì)PRV有顯著的抑制作用。在病毒生命周期的不同階段添加GCP主要抑制PRV的附著和內(nèi)化，但不影響病毒的復(fù)制和釋放。研究結(jié)果表明，GCP作為一種抗PRV感染的藥物具有很大潛力。我國(guó)目前每年需要免疫的豬有8億頭份，疫苗研發(fā)有著巨大的市場(chǎng)，相信在這么大的需求刺激下，未來(lái)經(jīng)過(guò)疫苗研發(fā)公司的努力可以達(dá)到偽狂犬病毒徹底的防控和凈化。

6 防控措施

目前大多數(shù)疫苗因?yàn)樨i場(chǎng)陽(yáng)性率太高，導(dǎo)致疫苗的免疫保護(hù)作用甚微。除了偽狂犬病毒外，其他病毒也因?yàn)殛?yáng)性率過(guò)高導(dǎo)致豬只抵抗力差，在各種病毒不斷的攻擊下，呈現(xiàn)出較低的防御力，因此大多數(shù)豬場(chǎng)采取的防控措施都是提高豬只抵抗力。

目前的商業(yè)疫苗無(wú)法提供針對(duì)PRV 感染的完全保護(hù)，因此，抗病毒藥物可以作為控制和預(yù)防PRV的替代方法。研究了解到美克利嗪在分子機(jī)制上對(duì)PRV有潛在的抑制作用。在病毒感染之前、同時(shí)或之后添加美克利嗪對(duì)PRV表現(xiàn)出顯著的抑制作用。美克利嗪的抑制作用發(fā)生在病毒進(jìn)入和細(xì)胞間擴(kuò)散期間，而不是在病毒附著到PK-15 細(xì)胞時(shí)。美克利嗪還抑制感染后期的病毒顆粒釋放。在小鼠身上測(cè)試了美克利嗪的抗病毒作用，結(jié)果表明美克利嗪降低了PRV攻擊后臨床癥狀的嚴(yán)重程度和組織中的病毒載量，并延遲了死亡。以上結(jié)果表明美克利嗪對(duì)PRV有抑制作用。該研究結(jié)果將有助于開(kāi)發(fā)針對(duì)PRV感染的潛在治療藥物。