豬偽狂犬病與豬圓環(huán)病毒2型混感的診療

薛曉陽(yáng)，費(fèi)奕強(qiáng)

（廣東省珠海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 珠海 519005）

豬偽狂犬病病毒是誘發(fā)豬偽狂犬病的病原，斷奶仔豬發(fā)病率較高，會(huì)出現(xiàn)呼吸性障礙、伴有流涕、腹瀉癥狀，甚至?xí)霈F(xiàn)神經(jīng)癥狀，致死率為30%左右。某豬場(chǎng)發(fā)現(xiàn)飼養(yǎng)仔豬出現(xiàn)吸困難、拒絕進(jìn)食、體溫異常升高，且有顯著的神經(jīng)癥狀，哺乳仔豬的病死率高達(dá)95%，保育豬死亡率達(dá)到25%左右。這些癥狀與豬偽狂犬病極其相似，但不同之處在于發(fā)病較急，且具有極高的發(fā)病率與致死率，免疫后豬也有患病現(xiàn)象，懷疑這是一起由豬偽狂犬病與豬圓環(huán)病毒2型病混合引起的流行病，現(xiàn)將診斷及治療情況報(bào)告如下：

1 發(fā)病情況與臨床癥狀

某生豬養(yǎng)殖基地的基礎(chǔ)母豬數(shù)量高達(dá)上千頭，在2020年11月～2021年1月份期間，該基地的保育豬群體溫異常升高，平均高達(dá)40℃以上，并且多數(shù)豬拒絕進(jìn)食，同時(shí)伴有流口水、呼吸受阻與全身震顫等癥狀。發(fā)病后期許多病豬出現(xiàn)了明顯的神經(jīng)癥狀，不僅癲癇明顯，且伴有側(cè)臥劃水癥狀。哺乳期仔豬患病后大部分會(huì)死亡，僅有不足5%的病豬得以生存。保育豬雖死亡率相對(duì)較低，但也達(dá)到了30%左右，病豬轉(zhuǎn)入生長(zhǎng)育肥舍后，有4.5%的豬于30d內(nèi)死亡。

2 病理變化

2.1 剖檢變化對(duì)病死豬解剖檢查發(fā)現(xiàn)，病豬肝臟有明顯的彌散性壞死點(diǎn)，呈白色，脾臟有部分梗死點(diǎn)，顏色微紅，并且病豬扁桃體嚴(yán)重潰瘍，肺臟背側(cè)存在針尖樣出血點(diǎn)，但數(shù)量不多，多數(shù)病豬腦部有明顯的水腫現(xiàn)象。

2.2 病理組織學(xué)變化摘取病豬的病變組織臟器，用中性福爾馬林做固定處理后將其制成石蠟切片，用蘇木精伊紅染色液對(duì)石蠟切片染色，再用顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，病豬扁桃體炎性細(xì)胞缺失明顯，腦部也有明顯的非化膿性腦炎病變。病豬肝細(xì)胞變性明顯，著色均勻性下降，并且竇狀隙比正常豬寬，有明顯充血，炎性細(xì)胞呈浸潤(rùn)狀。此外，病豬的肺臟間質(zhì)也明顯變寬。

3 病原檢測(cè)

從病豬中提取肺臟、大腦皮質(zhì)層、腹股溝淋巴結(jié)等病料混合配制勻漿，之后分別進(jìn)行DNA提取與檢測(cè)。

3.1 DNA提取與檢測(cè)DNA提取時(shí)，應(yīng)用的是柱式動(dòng)物DNAOUT提取試劑盒，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求實(shí)施提取操作。提取出DNA后實(shí)施檢測(cè)，主要檢測(cè)豬偽狂犬病病毒，除此之外，還應(yīng)分別進(jìn)行豬圓環(huán)病毒檢測(cè)與豬鏈球菌檢測(cè)。

3.2 RNA提取與檢測(cè)RNA提取時(shí)應(yīng)用的是柱式動(dòng)物RNAOUT提取試劑盒，提取RNA后先做反轉(zhuǎn)錄，再用其檢測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)，檢測(cè)內(nèi)容主要是豬繁殖與呼吸綜合征病毒與豬瘟病毒。而后利用25μL反應(yīng)體系進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增，此反應(yīng)體系主要由25μL濃縮10倍的PCR緩沖液、各為2μL的氯化鎂與脫氧核糖核苷三磷酸、各為0.2μL的上下游引物與聚合酶、1μ的模板DNA以及16.9μL的雙蒸水混合而成。擴(kuò)增時(shí)應(yīng)根據(jù)片段大小調(diào)節(jié)退火溫度及延生時(shí)間，并利用1%的瓊脂糖凝膠電泳作為擴(kuò)增結(jié)果的觀察工具。

3.3 檢測(cè)結(jié)果分析綜合DNA及RNA檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)豬藍(lán)耳病病毒呈陰性，并且病料也未感染豬瘟病毒與豬鏈球菌，但電泳檢查結(jié)果可見(jiàn)豬偽狂犬病病毒抗體，在電泳條帶188處有明顯的豬圓環(huán)病毒2型條帶，這說(shuō)明，此次疫情是由豬偽狂犬病與豬圓環(huán)病毒2型病混合感染引起的。

4 混感的治療方法

4.1 弱小病豬淘汰與隔離消毒發(fā)現(xiàn)病豬后，應(yīng)將所有患病豬分欄隔離飼養(yǎng)，并淘汰部分體質(zhì)偏弱的病豬，及時(shí)對(duì)圈舍用燒堿溶液消毒處理。還應(yīng)將圈舍內(nèi)病豬的排泄物及垃圾全部清除，之后再做全面的消毒處理，以切斷病毒傳染途徑。同時(shí)，應(yīng)對(duì)整個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行常規(guī)消毒，一周消毒2次，可選用酚類消毒劑，豬出欄或轉(zhuǎn)群之后，應(yīng)對(duì)豬舍墻面、地面以及過(guò)道等區(qū)域進(jìn)行全面消毒，并要做好飼料槽、飲水槽的消毒處理，消毒藥劑應(yīng)改用2%的火堿溶液。

4.2 疫苗免疫治療疫苗接種時(shí)，先將疫苗在磷酸鹽緩沖液中稀釋后再接種，利用生理鹽水稀釋也可，豬群需要接種2次疫苗，第一次免疫接種后28d后再次注射一次偽狂犬病疫苗。保育豬及新生仔豬應(yīng)注射基因缺失弱毒疫苗，每頭豬注射1頭份疫苗，30d后再做一次加強(qiáng)免疫。哺乳期的仔豬，21日齡斷奶時(shí)、無(wú)論是否轉(zhuǎn)群，均要接種脫毒疫苗，28d后再做一次加強(qiáng)免疫。后備母豬應(yīng)提前3個(gè)月接種豬偽狂犬病疫苗，妊娠母豬應(yīng)于生產(chǎn)前30d完成滅活偽狂犬病疫苗注射，注射劑量均為5mL。上述豬群接種疫苗時(shí)均采取肌肉注射方法。

4.3 合理調(diào)整豬偽狂犬病常規(guī)免疫程序?yàn)樵鰪?qiáng)免疫效果，需要對(duì)常規(guī)豬偽狂犬病的免疫程序進(jìn)行調(diào)整，公豬及母豬的普檢免疫應(yīng)設(shè)置為每年4次，每3個(gè)月進(jìn)行一次普免。育肥豬2日齡時(shí)應(yīng)采取滴鼻免疫法，兩個(gè)鼻孔均要做滴鼻。豬在56日齡、100日齡兩個(gè)階段均應(yīng)按照每頭1份豬偽狂犬病疫苗的劑量，采用肌肉注射法接種。

4.4 做好繼發(fā)感染的預(yù)防工作為防止繼發(fā)感染，可在病豬的飼料中加入預(yù)防性藥物?？杉尤?0%的替米考星、黃芪多糖、磺胺間甲氧嘧啶鈉以及電解多維，這四種藥物的添加劑量均為1kg/t。也可將繼發(fā)感染預(yù)防藥加入到飲水中，主要添加藥物可選用板藍(lán)根超微粉劑，也可將阿莫西林拌入病豬的日常飲水中用于預(yù)防繼發(fā)感染。仔豬斷奶之前與之后需要在飼料加入適量的抗生素藥物，以起到繼發(fā)感染有效預(yù)防的效果。

4.5 藥物治療隔離期間的病豬確定為豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒2型病混合感染后，應(yīng)結(jié)合具體的發(fā)病癥狀、病情嚴(yán)重程度選用適合的治療藥物，除了可采用西藥治療外，也可選用適合的中藥藥劑控制與治療病情。

4.5.1 治療藥物選擇（1）西藥 西藥治療屬于常用的治療方法，可在病豬飼料中加入適量的抗生素藥物，如多西環(huán)素、高能速補(bǔ)等藥物。利用多西環(huán)素治療病豬時(shí)，主要是將藥物拌入病豬飼料之中，每100kg飼料中所添加藥量應(yīng)為100g。若應(yīng)用的是高能速補(bǔ)藥物，則每100kg飼料中添加藥物的劑量應(yīng)為20g，這兩種藥物均要連續(xù)給藥7d。

（2）中藥 中藥治療可取石膏、板藍(lán)根、金銀花各15g，加入各為10g的穿心蓮與連翹、各為5g的甘草、當(dāng)歸及火麻仁，混合后磨成粉末狀，將之拌入到飼料當(dāng)中，按照20g/頭的劑量喂食給病豬，同樣需要連續(xù)給藥7d再停藥。

（3）輔助藥物 混合感染治療期間，為提高藥物療效，也可將多種維生素加入到病豬飼料中，可在生理水中加入適量的VC，注射于病豬的腹腔之內(nèi)，對(duì)病豬脫水具有良好的預(yù)防效果。同時(shí)也可注射地塞米松、安納加等其他藥物加快病豬病情的恢復(fù)速度。

4.5.2 不同豬群的治療方法對(duì)患有混合感染病癥的不同豬群，應(yīng)喂服適當(dāng)?shù)乃幬?。母豬飼料應(yīng)按180g/t添加強(qiáng)力霉素，再分別添加穿心蓮粉500g、氟苯尼考300g，以治療混合感染。仔豬治療時(shí)，也可采取飼料拌藥法，但所用藥物應(yīng)為干擾素600g/t、阿莫西林180g/t，且每噸飼料中還需分別加入強(qiáng)力霉素140g、板藍(lán)根粉400g，連續(xù)給藥12d左右即可停藥。若病仔豬的癥狀較為明顯，可采用高免血清治療方法，應(yīng)對(duì)母豬血清進(jìn)行采集，而入注射到發(fā)病仔豬體內(nèi)，如此可取得良好的治療效果。

5 討論與總結(jié)

生豬的多種病原混合感染、繼發(fā)性感染的發(fā)病情況居多，由于疫病較為復(fù)雜，難以快速診斷出具體病癥，因而生豬疫病控制存在一定難度。流行疫病有效控制的重點(diǎn)是做好原發(fā)性與繼發(fā)性兩種病原的精準(zhǔn)區(qū)分，通過(guò)主要及次要病原的判定為有效治療提供依據(jù)。

5.1 區(qū)分主要及次要致病病原根據(jù)臨床癥狀、剖檢變化，推測(cè)出了引起本次流行疫病的有5種病原，即豬瘟病毒、鏈球菌、豬呼吸與繁殖綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒，經(jīng)病原檢測(cè)后，確定此次流行是由豬偽狂犬病病毒與豬圓環(huán)病毒2型混合感染引起的。然而病原診斷后仍無(wú)法確定這兩種致病病原的主次，需要通過(guò)進(jìn)一步的病理學(xué)分析及組織學(xué)觀察找出主要致病病原。經(jīng)組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，部分病例有非化膿性腦炎、扁桃體或肝臟壞死現(xiàn)象，且有間質(zhì)性肺炎病變等癥狀，與豬偽狂犬病的病理變化相一致。然而豬圓環(huán)病毒感染的病理特征是淋巴組織缺失、肺臟間質(zhì)內(nèi)淋巴細(xì)胞損失，并有巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象，病理檢測(cè)得出的癥狀與這些特征并不一致，因此可判定豬圓環(huán)病毒應(yīng)為次要致病病原，主要病原是豬偽狂犬病，因而具體治療時(shí)，應(yīng)將豬偽狂犬病的預(yù)防與治療作為重點(diǎn)。

5.2 對(duì)常規(guī)免疫程序的修正

5.2.1 常規(guī)免疫后發(fā)生豬偽狂犬病的原因本次流行疫病是在注射了豬偽狂犬疫苗的前提下發(fā)生的，經(jīng)剖檢及顯微鏡檢病變，結(jié)合組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，此病的病理接近新型偽狂犬病。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病毒兩項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均呈陽(yáng)性。此豬場(chǎng)在常規(guī)免疫中還注射了勃林格圓環(huán)病毒疫苗，即便聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)了豬圓環(huán)病毒2型病原，仍然判定豬偽狂犬病病毒是引起此次疫情的關(guān)鍵。這是因?yàn)?，豬偽狂犬流行毒株存在抗原變異現(xiàn)象，傳統(tǒng)疫苗保護(hù)效果被削弱，或是抗原變異的同時(shí)出現(xiàn)了毒力增強(qiáng)現(xiàn)象，雖然養(yǎng)殖場(chǎng)之前采取了常規(guī)免疫措施，但仍然具有一定的豬偽狂犬病發(fā)生率。

5.2.2 常規(guī)程序修正的效果判定研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有疫苗對(duì)流行毒株感染的保護(hù)作用不好，然而通過(guò)疫苗接種程序修改，將普免次數(shù)增至每年4次，或是將注射劑量增至3份/頭，可強(qiáng)化免疫保護(hù)效果，能夠有效降低豬偽狂犬病的發(fā)病率。相關(guān)專家對(duì)不同免疫策略在豬偽狂犬病防控方面的效果差異展開(kāi)了研究，驗(yàn)證了增強(qiáng)傳統(tǒng)疫苗注射劑量、提高免疫次數(shù)對(duì)新流行豬偽狂犬病病毒具有一定的防控效果。本案例確定了主要致病病原是豬偽狂犬病病毒，并應(yīng)用修正后的新免疫程序進(jìn)行了免疫接種，取得了良好的免疫治療效果，疫情在短期內(nèi)得到了控制，同時(shí)也說(shuō)明目前所用疫苗對(duì)新型豬偽狂犬病病毒的侵襲仍有一定的保護(hù)效果。

5.3 繼發(fā)感染的預(yù)防本案例確定主要致病病原是豬偽狂犬病病毒，而豬圓環(huán)病毒2型屬于次要病原，由于此養(yǎng)豬場(chǎng)在常規(guī)免疫中完成了勃林格圓環(huán)病毒疫苗的注射，因而并未修改圓環(huán)病毒的免疫方案，然而豬圓環(huán)病毒2型病也與豬偽狂犬病一樣屬于免疫抑制病，存在繼發(fā)其他感染的可能。為此，需要在治療過(guò)程中同步做好繼發(fā)感染的預(yù)防，主要是預(yù)防鏈球菌、巴氏桿菌以及副豬嗜血桿菌等豬易感的細(xì)菌性疾病，通過(guò)有效預(yù)防藥物應(yīng)用，取得了相對(duì)理想的繼發(fā)感染預(yù)防效果。

6 結(jié)語(yǔ)

豬偽狂犬病疫苗免疫接種是有效防控以豬偽狂犬病病毒為主要致病病原的混合感染的重要舉措，但疫苗免疫難以將病毒完全清除，豬感染此病毒后病毒會(huì)伴隨終身。因此，養(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)做好豬偽狂犬病的日常監(jiān)測(cè)。免疫抗體應(yīng)每3個(gè)月檢測(cè)一次，豬場(chǎng)豬偽狂犬病檢測(cè)應(yīng)每6個(gè)月開(kāi)展一次。同時(shí)，應(yīng)結(jié)合群體大小確定采血檢查比例，若養(yǎng)豬場(chǎng)基礎(chǔ)母豬數(shù)量高于300頭，采血檢查豬不可少于10%，若為300頭以下，最低采血檢查例數(shù)為30例。針對(duì)豬偽狂犬病血清抗體檢測(cè)為陰性但抗體水平不足的豬，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充接種疫苗，陽(yáng)性或隱性帶毒豬應(yīng)立即淘汰，以有效防控豬偽狂犬病及其他病癥混合感染。