貴州山區(qū)小反芻獸疫綜合防控措施

楊家禹，袁曉娟，梁 均

1 貴州省天柱縣動物疫病預(yù)防控制中心，貴州天柱 5566032 貴州省黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556000

0 引言

小反芻獸疫（Peste des Petits Ruminants，PPR）被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的動物疫病，在我國被列為一類動物疫病。該病是由副粘病毒科麻疹病毒屬小反芻獸疫病毒（PPRV）引起小反芻動物的嚴(yán)重烈性、接觸性傳染病，發(fā)病率和死亡率都非常高。2007年，該病在我國西藏首次發(fā)現(xiàn)，2014年迅速擴(kuò)散，國內(nèi)20 多個(gè)省份陸續(xù)爆發(fā)，嚴(yán)重制約了畜牧業(yè)的健康發(fā)展及畜產(chǎn)品的公共衛(wèi)生安全。據(jù)原農(nóng)業(yè)部通報(bào)，2014年貴州省黔東南州凱里市、黃平縣和榕江縣發(fā)生4 起該病，累計(jì)發(fā)病羊744 只，死亡109 只，撲殺1126 只；2016年貴州省黔東南州從江縣發(fā)生一起PPR疫情，該地從廣西運(yùn)進(jìn)一批羊（扶貧項(xiàng)目羊）共516 只，累計(jì)發(fā)病羊420 只，死亡416 只，撲殺疫點(diǎn)羊516 只，對周邊疫區(qū)和受威脅區(qū)1068 只羊進(jìn)行了緊急免疫接種，該疫情給養(yǎng)羊戶造成了重大經(jīng)濟(jì)損失，影響了畜牧業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。本文從該病的流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷方法以及綜合防控措施等方面進(jìn)行闡述，為廣大養(yǎng)殖戶提供參考。

1 流行病學(xué)

PPR的最長潛伏期可達(dá)21 天，一般為3～6 天，一年四季皆可發(fā)病，主要感染山羊、綿羊，也可以感染羚羊、巖羊、野山羊。山羊更易感，幼羊比成羊易感率更高。傳染源為患病羊和帶毒羊，可通過直接接觸、間接接觸、呼吸等方式傳播。病羊的鼻液、糞便、尿液、精液、乳汁等分泌物和排泄物含有大量的病毒，可以在接觸、授精、哺乳時(shí)進(jìn)行直接傳播；接觸被污染的飼料、飲水、工具、圈舍等進(jìn)行間接傳播；在飼養(yǎng)密度較高的羊群，病毒形成氣溶膠，偶爾發(fā)生近距離呼吸傳播。

2 臨床癥狀

病羊主要表現(xiàn)出眼鼻黏液性或膿性分泌物增多、發(fā)熱、口腔發(fā)炎、腹瀉、肺炎、腸炎等癥狀，嚴(yán)重時(shí)發(fā)生突發(fā)性死亡。發(fā)病初期體溫可達(dá)40 ℃以上，發(fā)熱持續(xù)3 天左右，病羊死亡多集中在發(fā)熱后期[1]。病初有水樣鼻液，此后大量的黏膿性卡他樣鼻液，阻塞鼻孔造成呼吸困難，鼻內(nèi)膜發(fā)生壞死；眼流分泌物，遮住眼瞼，出現(xiàn)眼結(jié)膜炎。發(fā)熱癥狀出現(xiàn)后，病羊口腔內(nèi)膜輕度充血，繼而出現(xiàn)糜爛。病情持續(xù)，羊群出現(xiàn)腹瀉、脫水，懷孕母羊出現(xiàn)流產(chǎn)。

3 病理變化

病羊在解剖時(shí)可發(fā)現(xiàn)，口腔黏膜、鼻腔黏膜、腸黏膜出現(xiàn)不同程度的糜爛與壞死，有的可見眼結(jié)膜炎，支氣管肺炎、肺尖炎及胸腔積液等典型病變，脾和淋巴結(jié)出現(xiàn)腫大壞死性病變狀態(tài)，腸道出現(xiàn)壞死或者出血，呈特征性斑馬樣條紋狀[2]。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 血清學(xué)檢測方法

血清學(xué)檢測方法主要包括病毒中和試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。病毒中和試驗(yàn)是最早檢測PPRV抗體的血清學(xué)方法，該方法可以區(qū)分PPR與牛瘟（RP）的血清抗體，具有很強(qiáng)的特異性，但缺點(diǎn)是耗時(shí)長且不適用于大批量檢測。

ELISA是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種靈敏性高、特異性強(qiáng)的抗體檢測新技術(shù)，是將可溶性抗原或抗體吸附于固相載體上，利用酶標(biāo)抗體或抗原結(jié)合形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物，加入相應(yīng)酶底物顯色，通過反應(yīng)液顏色在反應(yīng)酶標(biāo)儀讀數(shù)的方式判定待檢血清中是否含有PPRV抗體。該方法操作方便、檢測迅速、靈敏度高、特異性強(qiáng)，但并不能區(qū)分是免疫接種產(chǎn)生的抗體還是野毒感染產(chǎn)生的抗體。ELISA主要有間接ELISA、阻斷ELISA、夾心ELISA、競爭ELISA。錢榜等[3]以篩選的H蛋白B細(xì)胞為基礎(chǔ)建立的針對PPRV H蛋白抗體的間接ELISA檢測方法具有良好的穩(wěn)定性、特異性和敏感性，對羊痘、口蹄疫、藍(lán)舌病陽性血清的檢測均為陰性，與商品化cELISA試劑盒平行檢測符合率為92.81%，此法操作簡便快捷，可用于臨床PPR抗體檢測。目前，競爭ELISA是OIE規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法之一，具體操作按照《GB∕T 27982—2011小反芻獸疫診斷技術(shù)》執(zhí)行。

4.2 病毒核酸檢測方法

常見的病毒核酸檢測方法包括反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增（LAMP）。RT-PCR是20世紀(jì)80年代中期發(fā)展起來的一種在體外迅速大量擴(kuò)增特異性DNA的新技術(shù)，具有高度的靈敏性和特異性。簡單來說，當(dāng)需要檢測某種目的DNA片段是否存在時(shí)，該片段的量比較少，如果是直接檢測，則不容易檢測出來，這時(shí)如果采用該技術(shù)，可以在體外（比如EP管內(nèi)）對該DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增。何世成等[4]對GenBank中的PPRV及疫苗毒株設(shè)計(jì)引物和特異探針建立PPRV野毒與疫苗毒株的雙重?zé)晒釸T-PCR鑒別檢測方法，可以有效區(qū)分野毒和疫苗毒株，特異性、靈敏度、重復(fù)性均表現(xiàn)較好，適用于臨床檢測。在PPR與其他病種（山羊痘、藍(lán)舌病、口蹄疫等）的鑒別診斷方法建立上，目前國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)建立了雙重和多重RT-PCR檢測方法。

21世紀(jì)初，Notomi等[5]發(fā)明的LAMP是根據(jù)目的基因的保守序列設(shè)計(jì)出1組引物，即內(nèi)外引物（FIP、BIP，F(xiàn)3、B3），利用Bst DNA聚合酶的相關(guān)功能對目的基因片段進(jìn)行特定的指數(shù)式體外擴(kuò)增，以檢測出目的基因。徐瀅等[6]根據(jù)GenBank公布的PPRV F基因設(shè)計(jì)特異性LAMP引物建立的方法對臨床樣品檢測，建立特異性、靈敏度均好，適用于基層養(yǎng)殖場快速、可視化的PPRV LAMP檢測方法。另外，范晴等[7]比對GenBank中PPRN基因和藍(lán)舌病NS3基因保守區(qū)域建立一種可視化多重?zé)晒釸TLAMP方法用于檢測PPRV和藍(lán)舌病病毒的核酸，該方法對PPRV和藍(lán)舌病病毒高度特異，與口蹄疫病毒、鹿流行性出血熱病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反芻動物病毒均無交叉反應(yīng)，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

5 綜合防控措施

5.1 加強(qiáng)引種調(diào)運(yùn)、檢疫監(jiān)管工作

貴州省黔東南州先后發(fā)生5 起PPR，主要原因是養(yǎng)殖戶在引種調(diào)運(yùn)時(shí)，未經(jīng)輸出地、調(diào)入地動物監(jiān)督機(jī)構(gòu)衛(wèi)生檢疫或檢疫不嚴(yán)格，造成疫情發(fā)生，因此建議養(yǎng)殖戶在引種時(shí)，要到無疫病發(fā)生地區(qū)調(diào)運(yùn)活羊，開展嚴(yán)格產(chǎn)地檢疫，到場后再隔離飼養(yǎng)45 天。在這段時(shí)間若發(fā)生疫病可將其控制在隔離點(diǎn)內(nèi)，避免病原大范圍傳播。隔離期滿45 天后，經(jīng)當(dāng)?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)后，才能逐步合群飼養(yǎng)（同時(shí)避免打架），在隔離程中發(fā)現(xiàn)患病或者疑似患病的羊要及時(shí)撲殺和無害化處理；同時(shí)嚴(yán)格羊群產(chǎn)地和屠宰檢疫，要加強(qiáng)對養(yǎng)殖戶疫病防控意識的培訓(xùn)和屠宰場的日常監(jiān)管巡查。

5.2 加強(qiáng)免疫預(yù)防，做好疫情監(jiān)測

疫苗接種是預(yù)防PPR最重要的措施。免疫后的有效保護(hù)期一般為2 年。推薦免疫程序：羊群在出生1 個(gè)月后肌內(nèi)注射疫苗1 頭份，以后每間隔2 年再免疫1 次。在每年春、秋兩防后，各縣市疫病預(yù)防控制中心完成PPR免疫抗體監(jiān)測和病原檢測抽樣工作，根據(jù)監(jiān)測和檢測情況及時(shí)進(jìn)行反饋、分析、總結(jié)、預(yù)警、預(yù)報(bào)。對抗體合格率低于70%以下羊群，需要再次加強(qiáng)免疫。

5.3 增強(qiáng)管理水平，提高羊群抵抗力

日常飼養(yǎng)管理中，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，在春、秋兩季進(jìn)行科學(xué)驅(qū)蟲，在補(bǔ)充精料時(shí)，要適當(dāng)添加電解多維以及礦物質(zhì)，在母羊懷孕后期、哺乳期限制遠(yuǎn)距離放牧，提高精料比例，從而提高羊群的抵抗能力。保證空氣流通與飼料、飲水的清潔，定期做好羊群及養(yǎng)殖環(huán)境清掃和消毒工作，將羊群排泄物及其他垃圾進(jìn)行清理和無害化處理，避免細(xì)菌和病毒滋生，最大限度降低PPR的發(fā)生率。

5.4 科學(xué)規(guī)范選址，合理優(yōu)化布局

貴州省黔東南州為典型的山區(qū)地貌，林地200 多萬公頃，有著豐富的喬木、灌木、蔓藤、山草、植被，同時(shí)具有良好的自然氣候以及生態(tài)環(huán)境，為羊只提供了優(yōu)質(zhì)豐盛牧草。養(yǎng)殖場的選址和圈舍的布局要充分結(jié)合當(dāng)?shù)氐酿B(yǎng)殖模式、地形、地勢、環(huán)保、防疫、交通、水電等因素，符合動物防疫辦證要求，最好能夠與大自然形成天然屏障，從而減少羊群患病以及大范圍傳播幾率，提高養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。

5.5 加強(qiáng)宣傳，建立健全應(yīng)急預(yù)案機(jī)制

各級相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)對PPR防控知識宣傳，開展知識培訓(xùn)講座，提高畜牧部門人員及養(yǎng)殖戶對該病的認(rèn)知與重視。當(dāng)發(fā)生PPR后不允許治療，應(yīng)限制羊群移動，立即上報(bào)疫情，及時(shí)采取樣品，迅速送檢確診；確診后進(jìn)行劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)，嚴(yán)格按照“早、快、嚴(yán)、小”的原則，對疫區(qū)實(shí)施封鎖；撲殺疫點(diǎn)所有羊群，對病死羊及產(chǎn)品、排泄物、污染草料、污水嚴(yán)格進(jìn)行無害化處理；對污染車輛、工具、用具、環(huán)境進(jìn)行徹底消毒；對疫區(qū)內(nèi)的羊群進(jìn)行疫病監(jiān)測；對疫區(qū)、受威脅區(qū)健康羊群進(jìn)行緊急免疫接種；經(jīng)驗(yàn)收合格后，方能解除封鎖。

6 小結(jié)

PPR應(yīng)堅(jiān)持預(yù)防為主，增強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理水平，做好免疫和補(bǔ)免接種，加強(qiáng)引種調(diào)運(yùn)檢疫，做好抗體、病原檢測和疫情監(jiān)測，強(qiáng)化培訓(xùn)宣傳建立應(yīng)急機(jī)制。結(jié)合流行病學(xué)、臨床癥狀，解剖變化及時(shí)發(fā)現(xiàn)診斷、及時(shí)隔離撲滅等綜合防控，控制PPR傳播和擴(kuò)散，把損失降到最低。