黃芩苷通過TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的阿爾茨海默病大鼠模型神經(jīng)炎癥反應(yīng)

于文靜，楊 苗，賀春香，金怡杰，李 澤，李 平，鄧思思，成紹武，宋禎彥

(湖南中醫(yī)藥大學(xué) 中西醫(yī)結(jié)合心腦疾病防治湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

阿爾茨海默病(AD)是一種以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙、記憶功能減退、生活能力下降并伴有精神行為異常為主的神經(jīng)退行性疾病。我國(guó)現(xiàn)有約1 000萬癡呆患者，隨著中國(guó)及全世界老齡化水平的增加，AD對(duì)全世界的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)將持續(xù)加重，據(jù)統(tǒng)計(jì)，到2030年將達(dá)到2.54萬億美元，到2050年將達(dá)到9.12萬億美元[1]。腦內(nèi)的慢性炎癥是AD的重要標(biāo)志，小膠質(zhì)細(xì)胞作為腦內(nèi)重要的免疫細(xì)胞被活化及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)等促炎細(xì)胞因子被大量釋放，使神經(jīng)細(xì)胞凋亡或死亡，最終導(dǎo)致AD相關(guān)的行為[2]。TLR4大量表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞上，通過髓樣分化因子(myeloid differentiation factor 88，MyD88)銜接誘導(dǎo)核因子-κB(nuclear factor kappaB，NF-κB)磷酸化和促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生[3]。

目前證據(jù)表明，傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥雖然能在一定程度上減輕炎癥，延緩AD的進(jìn)展，降低認(rèn)知功能的損害，但是其胃腸道并發(fā)癥等副作用限制了長(zhǎng)期作為臨床藥物使用的可能性，副作用小、性能更安全的天然產(chǎn)品作為AD患者的臨床長(zhǎng)期用藥是更好的選擇，大量研究證明，天然產(chǎn)品對(duì)于緩解AD腦內(nèi)神經(jīng)炎癥發(fā)揮著重要作用[4]。黃芩作為傳統(tǒng)中藥之一，有清熱燥濕、瀉火解毒之效，研究表明，黃芩及莖葉具有抗神經(jīng)炎癥、抗氧化應(yīng)激、緩解興奮性神經(jīng)毒性及抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用，可能對(duì)AD的治療有效。黃芩苷是從黃芩中提取出來的一種黃酮類化合物，已被證明具有抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用[5]。課題組前期研究表明，黃芩苷可以通過抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路減輕脂多糖/干擾素γ誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[6]，但是，黃芩苷是否對(duì)動(dòng)物模型有作用還尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠側(cè)腦室注射STZ構(gòu)建AD大鼠模型，從TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路探討黃芩苷對(duì)AD大鼠腦內(nèi)炎癥反應(yīng)的作用及神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD ♂大鼠50只，體質(zhì)量(150±20)g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK(湘)2019-0004，大鼠飼養(yǎng)在湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)動(dòng)物屏障系統(tǒng)中，分籠喂養(yǎng)(每籠3只)，使用標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料和水喂養(yǎng)，恒溫(25±2)℃，室內(nèi)明暗周期設(shè)置為12 h一循環(huán)，實(shí)驗(yàn)過程均符合動(dòng)物倫理學(xué)要求(LLBH202105100001)。

1.2 藥物與試劑黃芩苷(110715，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；STZ、米諾環(huán)素、山羊抗兔二抗(S0130、H1928056、AP132P，美國(guó)Sigma-Aldrich)；β-actin、IL-1β、IL-6、TNF-α引物由上海生工生物工程有限公司合成；TRIzol Reagent(15596018，美國(guó)Thermo Fisher Scientific)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(0521751，蘇州近岸蛋白質(zhì)科技股份有限公司)；SYBR Green預(yù)混液(MQ00401，上海莫納生物)；NF-κB p65/RelA和phospho-NF-κB p65/RelA-s276抗體(A2547和AP0123，武漢ABclonal)；β-actin(AF7018，中國(guó)Affinity Biosciences)；TLR4抗體(D220102，生工生物工程(上海)股份有限公司)；MyD88抗體(AH10163311，北京Bioss公司)；Histone H3抗體(#4499，Cell Signaling Technology)；Iba1抗體(011-27991，日本W(wǎng)AKO和光純藥株式會(huì)社)；細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞質(zhì)蛋白抽提試劑盒和PMSF(100 mmol·L-1)(P0027和ST506，碧云天生物科技有限公司)；RIPA蛋白裂解液(cw2333s，北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)；BCA試劑盒(A00445，杭州聯(lián)科生物科技股份有限公司)；TritonX-100和抗熒光衰減封片劑(含DAPI)(T8200和S2110，北京索萊寶)；Donkey anti-Goat IgG(H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody、Alexa Fluor 647(A32849，美國(guó)Invitrogen)；通用二步法檢測(cè)試劑盒(小鼠/兔增強(qiáng)聚合物法檢測(cè)系統(tǒng))(PV-9000，北京中杉金橋)。

1.3 儀器石蠟切片機(jī)(Thermo Fisher，美國(guó))；AI+共聚焦激光顯微鏡(Nikon，日本)；TissueFAXS Plus全景組織掃描成像系統(tǒng)(Tissue Gnostics GmbH，奧地利)；SorvallTMLegendTMMicro 17R微量離心機(jī)(Thermo Fisher，美國(guó))；Cytation3型多功能酶標(biāo)儀(Bio-Tek，美國(guó))；T100TMThermal Cycler型實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增儀、Mini-PROTEAN Tetra型電泳槽、Mini Trans-Blot型轉(zhuǎn)印槽、Gel Doc XR+凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad，美國(guó))。

2 方法

2.1 STZ側(cè)腦室注射構(gòu)建AD大鼠模型將21.6 mg STZ溶于300 μL檸檬酸緩沖液中配置成72 μg·μL-1的注射液。SD大鼠禁食12 h后造模，麻醉給予3%戊巴比妥鈉，大鼠頭部固定于腦固定裝置，以《大鼠腦立體定位圖譜》的第六版作為參照，以前囟為基準(zhǔn)，距離前囟向后0.8 mm；距顱骨正中線左右各1.5 mm；距顱骨表面進(jìn)針3.7 mm，往除假手術(shù)組外大鼠雙側(cè)側(cè)腦室各注5 μL STZ(2.4 mg·kg-1)[7]，假手術(shù)組注射5 μL生理鹽水，控制速度1 μL·min-1，結(jié)束后留針5 min。緩慢出針，傷口及時(shí)止血并涂碘伏，最后對(duì)傷口手術(shù)縫合，將動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠觀察，等待自然蘇醒。

2.2 分組與黃芩苷干預(yù)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將50只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、黃芩苷干預(yù)低劑量組(60 mg-1·kg-1·d-1)、高劑量組(120 mg-1·kg-1·d-1)[2]、米諾環(huán)素組(36 mg-1·kg-1·d-1)[8]5組。造模2 d后,進(jìn)行藥物干預(yù)治療14 d，每天給藥分為2次，固定時(shí)間在早晨9點(diǎn)和晚6點(diǎn)，藥物干預(yù)組按上述劑量灌胃，其余兩組以等體積生理鹽水灌胃。

2.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)藥物干預(yù)14 d后，進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)，用Smart 3.0軟件記錄大鼠的行動(dòng)軌跡及時(shí)間路程數(shù)據(jù)。(1)定位航行實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)前5 d，每天固定時(shí)間，從4個(gè)象限分別將大鼠放進(jìn)水池中，頭面向筒壁，軟件設(shè)置大鼠尋找平臺(tái)時(shí)間(逃避潛伏期)為1 min。若1 min內(nèi)爬上平臺(tái)且停留>2 s，測(cè)試結(jié)束，記錄所需時(shí)間；若未爬上平臺(tái)，則逃避潛伏期記錄時(shí)間60 s，然后需由實(shí)驗(yàn)者將大鼠引導(dǎo)至平臺(tái)，停留10 s左右進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶。(2)空間探索實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)d 6取出平臺(tái)，再?gòu)?個(gè)象限位置將大鼠放入水池，記錄60 s內(nèi)大鼠穿梭原平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)及在第一象限即平臺(tái)象限停留的時(shí)間。

2.4 取材及保存行為學(xué)測(cè)試結(jié)束，麻醉大鼠給予3%戊巴比妥鈉，固定大鼠四肢暴露腹部，消毒并打開腹腔，注射器吸取提前預(yù)冷生理鹽水，左心室進(jìn)針，剪右心耳行心臟灌注，至內(nèi)臟發(fā)白，斷頭取腦。提前準(zhǔn)備冰盒放置取出的腦組織，分離左腦保存固定在4%多聚甲醛中，右腦海馬放入凍存管置于液氮中速凍，后放入-80 ℃冰箱保存。

2.5 免疫熒光檢測(cè)NF-κB核轉(zhuǎn)移情況和小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況石蠟切片，于65 ℃烘烤1 h，脫蠟后，3% H2O2滅活10 min后，使用0.3% Triton X-100(PBS配制)透膜5 min，然后5%正常驢血清封閉1 h，分別使用NF-κB p65(1 ∶200)、Iba1(1 ∶50)4 ℃孵育過夜，次日熒光二抗Alexa Fluor 647(紅色，1 ∶500)避光室溫1.5 h，PBS洗3次，每次10 min，最后滴加抗熒光淬滅劑(含DAPI)，加蓋蓋玻片，使用全景組織掃描成像系統(tǒng)分析。

2.6 PCR法檢測(cè)細(xì)胞表型標(biāo)志物和炎性因子表達(dá)取一半海馬組織，加入1 mL TRIzol研磨，加入氯仿200 μL，離心取上清加入500 μL異丙醇，離心棄上清加75%乙醇1 mL，離心晾干乙醇，加DEPC水50 μL溶解RNA，測(cè)定RNA濃度，計(jì)算調(diào)整RNA量為每20 μL體系1 μg，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用SYBR染料法使用Bio-Red CFX96 real-time PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。PCR擴(kuò)增體系為20 μL，cDNA 2 μL，上下游引物各1 μL；程序：95 ℃ 5 min，1循環(huán)；95 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，40循環(huán)；采用2-ΔΔCt法分析各目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)水平，引物序列見Tab 1。

2.7 Western blot法檢測(cè)TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)另一半海馬組織破碎儀破碎后取一部分加入RIPA裂解液(內(nèi)含磷酸蛋白酶抑制劑)，離心，上清即為海馬細(xì)胞總蛋白；另一部分按照胞核與胞質(zhì)蛋白抽提試劑盒說明書分別提取出細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)蛋白。使用BCA試劑盒于酶標(biāo)儀上測(cè)定各部分蛋白濃度，標(biāo)曲R2>0.99，計(jì)算并配置濃度為2 g·L-1的上樣緩沖液，-20 ℃保存。電泳80 V，30 min；100 V，90 min；200 mA濕轉(zhuǎn)90 min至0.45 μm或0.22 μm的PVDF膜；5%脫脂牛奶或5% BSA(磷酸蛋白)(TBST配制)室溫?fù)u床封閉1 h后孵育一抗(TLR4 1 ∶1 000、MyD88 1 ∶1 000、phospho-NF-κB p65 1 ∶1 000、NF-κB p65 1 ∶1 000、β-actin 1 ∶10 000、Histone H3 1 ∶8 000)4 ℃過夜；次日二抗(1 ∶8 000)37 ℃恒溫1 h，凝膠成像系統(tǒng)顯影成像；全細(xì)胞以β-actin作為參照，胞核以Histone H3為參照，使用ImageJ軟件對(duì)條帶進(jìn)行分析。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析(One Way ANOVA)及t檢驗(yàn)；統(tǒng)計(jì)圖使用Prism Graphpad 8.0軟件制作。

3 結(jié)果

3.1 黃芩苷對(duì)AD大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力的影響大鼠雙側(cè)側(cè)腦室注射STZ誘導(dǎo)AD大鼠模型，造模后連續(xù)14 d給予不同濃度黃芩苷(60 mg-1·kg-1·d-1，120 mg-1·kg-1·d-1)和米諾環(huán)素組(36 mg-1·kg-1·d-1)灌胃治療。Morris水迷宮結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力有一定程度下降，尋找平臺(tái)時(shí)間增加(P<0.01)；與模型組相比，黃芩苷低(P<0.05)、高劑量和米諾環(huán)素(P<0.01)治療后能明顯減少AD大鼠尋找平臺(tái)時(shí)間，行動(dòng)目標(biāo)明確。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組相比，AD大鼠第一象限停留的時(shí)間減少(P<0.01)，且救生平臺(tái)穿梭的次數(shù)明顯減少(P<0.01)；與模型組比較，黃芩苷低(P<0.05)、高劑量(P<0.01)和米諾環(huán)素(P<0.05)治療后AD大鼠穿梭平臺(tái)次數(shù)和第一象限停留時(shí)間增加(Fig 1)。

Fig 1 Effect of baicalin on learning and memory of AD

3.2 黃芩苷對(duì)AD大鼠模型海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響通過免疫熒光結(jié)果顯示，假手術(shù)組小膠質(zhì)細(xì)胞少有活化，模型組中小膠質(zhì)細(xì)胞活化數(shù)量較假手術(shù)組明顯增多(P<0.01)，且呈現(xiàn)聚集性，多分布在海馬CA2和CA3區(qū)；與模型組比較，在不同劑量的黃芩苷和米諾環(huán)素干預(yù)后均能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化(P<0.01)(Fig 2)。

Fig 2 Effect of baicalin on microglia activation in hippocampus of AD

3.3 黃芩苷對(duì)AD大鼠模型海馬區(qū)炎癥因子表達(dá)的影響采用qPCR檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)炎癥因子的mRNA表達(dá)水平，與假手術(shù)組比較，模型組的TNF-α、IL-6的表達(dá)升高(P<0.05)，IL-1β的表達(dá)明顯上升(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組比較，黃芩苷低、高劑量和米諾環(huán)素處理能有效抑制TNF-α、IL-6(P<0.05)、IL-1β(P<0.01)的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fig 3)。

Fig 3 Effect of baicalin on TNF-α，IL-6 and IL-1β mRNA expression in hippocampus of AD

3.4 黃芩苷對(duì)AD大鼠模型海馬區(qū)TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路的影響TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路調(diào)控促炎因子的產(chǎn)生，是經(jīng)典的炎癥通路。通過Western blot法檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65的蛋白表達(dá)情況，提取各組大鼠海馬區(qū)全蛋白，與假手術(shù)組相比，模型組TLR4、MyD88的蛋白表達(dá)量(P<0.01)及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值明顯上升(P<0.05)。不同濃度的黃芩苷及米諾環(huán)素處理能有效抑制TLR4、MyD88的表達(dá)量，減少NF-κB p65活化(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

提取各組大鼠海馬區(qū)胞質(zhì)和胞核蛋白，通過Western blot法檢測(cè)NF-κB蛋白表達(dá)情況，結(jié)果見Fig 4。與假手術(shù)組相比，模型組NF-κB p65胞核/胞質(zhì)比增加(P<0.05)，說明NF-κB p65入核增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同濃度黃芩苷處理可降低NF-κB p65胞核/胞質(zhì)比，減少NF-κB p65入核，米諾環(huán)素處理后與黃芩苷高劑量組干預(yù)結(jié)果一致(P<0.01)(Fig 4)。

Fig 4 Effect of baicalin on TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway in hippocampus of AD

3.5 黃芩苷對(duì)AD大鼠模型海馬區(qū)NF-κB核轉(zhuǎn)移的影響免疫熒光結(jié)果顯示，假手術(shù)組組織中NF-κB p65主要位于胞質(zhì)，而在模型組中NF-κB p65出現(xiàn)散點(diǎn)狀入核的細(xì)胞數(shù)量增多，在不同劑量的黃芩苷或米諾環(huán)素干預(yù)下，一定程度上抑制NF-κB p65進(jìn)入細(xì)胞核，與Western blot結(jié)果一致(Fig 5)。

Fig 5 Effect of baicalin on intracellular nuclear transfer of NF-κB p65 in hippocampus of AD rats

4 討論

AD是以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶功能減退為主的神經(jīng)退行性疾病，多種證據(jù)表明腦內(nèi)炎癥是AD的重要病理學(xué)特征。STZ是一種亞硝基脲衍生物，會(huì)優(yōu)先破壞胰島β細(xì)胞，通常用作糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。研究表明，側(cè)腦室注射低劑量STZ可引起腦胰島素信號(hào)穩(wěn)態(tài)的破壞及腦內(nèi)葡萄糖代謝障礙但不會(huì)誘發(fā)全身性糖尿病，這與散發(fā)型阿爾茨海默病(SAD)的病理學(xué)變化類似，其主要病理改變包括突觸功能障礙、tau過度磷酸化、神經(jīng)炎癥、大腦中Aβ沉積、氧化應(yīng)激和胰島素抵抗等引起腦內(nèi)神經(jīng)元損失，最終導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行性缺失及認(rèn)知行為改變[9]，目前已成為較為成熟的AD動(dòng)物模型。相較于APP/PS1小鼠，從基因?qū)用娲龠M(jìn)Aβ生成模擬AD發(fā)病過程，本模型模擬的是在AD發(fā)病類型中占比約為90%的SAD，更具有代表性。STZ側(cè)腦室注射的AD模型已被證明腦內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子升高[10]及NF-κB的上調(diào)[11]，說明神經(jīng)炎癥在此AD模型中是關(guān)鍵性病理特征。本研究探索了黃芩苷對(duì)STZ側(cè)腦室注射損傷的AD大鼠模型的腦內(nèi)炎癥的抗神經(jīng)炎癥作用，發(fā)現(xiàn)黃芩苷可以對(duì)AD大鼠起到神經(jīng)保護(hù)作用，在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間明顯較正常組、藥物組及陽性對(duì)照組延長(zhǎng)，說明STZ側(cè)腦室注射損傷了大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，而給與黃芩苷的AD大鼠的逃避潛伏期則明顯縮短，提示黃芩苷對(duì)AD大鼠模型具有一定的保護(hù)作用。

黃芩性味苦寒，入肺、胃、膽、大腸經(jīng)，有清熱燥濕、瀉火解毒之效，用于治療各種炎性疾病。黃芩苷是黃芩的有效成分，有抗菌抗病毒、抗過敏、鎮(zhèn)痛消炎、抗腫瘤、保護(hù)肝損傷、改善糖尿病腎病、腦損傷修護(hù)等功效，同時(shí)也具有很好的神經(jīng)保護(hù)作用[5]。黃芩苷可以改善AD小鼠模型的突觸可塑性及線粒體功能[12]，促進(jìn)AD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化[13]、抗氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡[14]，尤其是在抗炎及神經(jīng)保護(hù)方面的作用尤為突出[2]，這也與中藥黃芩本身的功效相適應(yīng)。TLR4表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上，可被多種病原體和細(xì)胞因子激活[3]。多項(xiàng)研究表明，TLR4與先天免疫激活密切相關(guān)，可參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷時(shí)的免疫調(diào)節(jié)，在炎癥調(diào)節(jié)中起重要作用[15]，MyD88作為TLR4接頭分子有依賴性和非依賴性兩種，其依賴途徑介導(dǎo)NF-κB的活化和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，在AD的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[16]。正常狀態(tài)下，NF-κB p65 和NF-κB p50結(jié)合在一起，其抑制蛋白IκB也結(jié)合在其上，此時(shí)NF-κB無活性。IκB的激酶IKK可以促進(jìn)其磷酸化，磷酸化后的IκB會(huì)被泛素化降解，NF-κB脫離出來入核，激活下游基因的轉(zhuǎn)錄，可以上調(diào)編碼各種促炎蛋白或酶的基因[17]，如升高TNF-α、IL-1β、IL-6等的表達(dá)。在本實(shí)驗(yàn)中，黃芩苷可以降低AD大鼠腦中的TLR4、MyD88的表達(dá)，減少NF-κB p65的磷酸化和抑制NF-κB入核，從而下調(diào)TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的表達(dá)。提示黃芩苷改善STZ誘導(dǎo)的AD大鼠認(rèn)知功能障礙可能與調(diào)控TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路抑制神經(jīng)炎癥密切相關(guān)。有趣的是，炎癥因子的表達(dá)與黃芩苷的干預(yù)無劑量依賴關(guān)系，研究表明，黃芩苷通過下調(diào)SIRT1/HMGB1通路，減少小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)的神經(jīng)炎癥，并改善了LPS誘導(dǎo)的小鼠急性神經(jīng)認(rèn)知缺陷[18]，因此，我們推測(cè)黃芩苷抑制神經(jīng)炎癥可能是多途徑共同參與的。

綜上所述，STZ側(cè)腦室注射導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退可能與腦內(nèi)神經(jīng)炎癥有關(guān)，黃芩苷灌胃可改善STZ誘導(dǎo)的大鼠認(rèn)知障礙，其機(jī)制可能與抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路，減輕AD腦內(nèi)神經(jīng)炎癥有關(guān)，本研究為黃芩苷用于AD的防治的后續(xù)研究提供了科學(xué)依據(jù)。