利拉魯肽通過(guò)調(diào)控自噬和Na+，K+-ATPase活性抑制高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大

張 哲，野戰(zhàn)鷹，王 杏，楊林泉，馬慧娟

(河北省人民醫(yī)院 1. 代謝病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、2. 神經(jīng)外三科，河北 石家莊 050051)

近年來(lái)，糖尿病患病率持續(xù)增高，預(yù)計(jì)截至2030年全球范圍內(nèi)糖尿病患病人數(shù)將達(dá)到3億，而心血管并發(fā)癥是糖尿病患者致死和致殘的主要原因。心室重構(gòu)是糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy，DCM)的重要病理機(jī)制，而心肌肥厚是心室重構(gòu)的起始階段，持續(xù)的心肌肥厚進(jìn)一步加重心臟收縮和/或舒張功能障礙，最終發(fā)展為心力衰竭[1]。因此，探索逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的新靶點(diǎn)對(duì)于延緩DCM進(jìn)展，降低心力衰竭致死率具有重要臨床意義。

自噬是真核生物細(xì)胞內(nèi)的一種自我保護(hù)機(jī)制，可通過(guò)溶酶體降解途徑清除受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白、應(yīng)激產(chǎn)物等，在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、促進(jìn)能量再生方面發(fā)揮重要作用。自噬障礙與代謝性疾病發(fā)病密切相關(guān)，如肥胖、胰島素抵抗、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在多種心肌肥厚模型中均存在自噬缺陷，而增強(qiáng)AMPK/mTOR通路介導(dǎo)的自噬可逆轉(zhuǎn)心肌肥厚，提示調(diào)控自噬活性有可能成為減輕心肌肥厚的潛在策略[2-3]。

Na+，K+-ATPase(NKA)是哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上普遍存在的一種跨膜蛋白，在維持離子平衡、靜息電位及肌細(xì)胞興奮性方面發(fā)揮重要調(diào)控作用。已證實(shí)NKA活性下降可引起細(xì)胞內(nèi)Na+、Ca2+積聚，從而促進(jìn)肥厚相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致心肌肥厚發(fā)生，而上調(diào)NKA活性能夠抑制心肌肥厚[4]。新近研究表明，自噬與NKA之間存在相關(guān)性，激活自噬可通過(guò)調(diào)控NKA活性影響疾病發(fā)生發(fā)展。Singh等[5]報(bào)道，自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素可減輕氧化應(yīng)激損傷并上調(diào)NKA活性，從而延緩神經(jīng)退行性變進(jìn)程。Liu等[6]也提示，激活自噬可減輕缺血/再灌注所致腎損傷，并顯著提高NKA等Na+轉(zhuǎn)運(yùn)體活性；利用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)或敲除自噬標(biāo)志基因Atg5能夠阻斷這一作用。但是，自噬能否通過(guò)調(diào)控NKA抑制糖尿病心肌肥厚仍未可知。

利拉魯肽(liraglutide，LRG)是一種新型降糖藥，可通過(guò)抗炎、抗氧化、抗凋亡等機(jī)制發(fā)揮心血管保護(hù)作用。本課題組前期研究表明，LRG可調(diào)控Sirt1/AMPK通路減輕DCM大鼠心肌損傷[7]。本研究建立高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞肥大模型，探討LRG對(duì)心肌細(xì)胞肥大的保護(hù)作用及其與自噬、NKA間的關(guān)系，并進(jìn)一步闡明其分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑大鼠心肌H9c2細(xì)胞株，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)。LRG(國(guó)藥準(zhǔn)字J20160037)，諾和諾德；羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(CA1610)、單丹磺胺戊二胺(MDC)試劑盒(G0170)，索萊寶；FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒(U8918)，天根；Na+，K+-ATPase(NKA)測(cè)定試劑盒(A070-2-2)，建成；ANP(sc-515701)，Santa Cruz；β-MHC(ab207926)、Beclin-1(ab62557)、NKA α1(ab7671)、NKA α2(ab166888)，Abcam；LC3(CST4108)、p62(CST5114)、Sirt1(CST8469)、AMPK(CST2532)、p-AMPK(CST2535)、mTOR(CST5536)、p-mTOR(CST2983)，Cell Signaling Technology；3-MA(T1879)，Targetmol；EX 527(S1541)、Compound C(CC，S7840)，Selleck。

1.2 儀器HERA cell-150i二氧化碳培養(yǎng)箱、ND-2000紫外分光光度計(jì)，Thermo Fisher Scientific；AXOVERT25C倒置顯微鏡，Zeiss；DMI3000B熒光顯微鏡，Leica；Fresco17冷凍高速離心機(jī)，Thermo；7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，ABI；JY300HE電泳儀，君意；MiniChemi 610 Plus凝膠成像系統(tǒng)，賽智。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及分組H9c2細(xì)胞在含10%胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基中，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞達(dá)80%融合時(shí)收集細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞分為對(duì)照(CON)組(5.5 mmol·L-1葡萄糖處理細(xì)胞48 h)、高糖(HG)組(33.3 mmol·L-1葡萄糖處理細(xì)胞48 h)、低、中、高劑量LRG(LRG-L、LRG-M、LRG-H)組(分別用25、50、100 nmol·L-1LRG和33.3 mmol·L-1葡萄糖共同處理細(xì)胞48 h)、LRG-H+自噬抑制劑3-MA組(1 mmol·L-13-MA作用細(xì)胞24 h后，用100 nmol·L-1LRG和33.3 mmol·L-1葡萄糖共同處理細(xì)胞48 h)、LRG-H+Sirt1抑制劑EX 527組(200 nmol·L-1EX 527作用細(xì)胞24 h后，用100 nmol·L-1LRG和33.3 mmol·L-1葡萄糖共同處理細(xì)胞48 h)、LRG-H+AMPK抑制劑CC組(20 μmol·L-1CC作用細(xì)胞24 h后，用100 nmol·L-1LRG和33.3 mmol·L-1葡萄糖共同處理細(xì)胞48 h)。

1.4 鬼筆環(huán)肽染色細(xì)胞接種于24孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)至50%時(shí)，4%多聚甲醛室溫固定10 min，PBS清洗2次，0.5% Triton X-100透化處理5 min，PBS清洗2次，加入終濃度為200 nmol·L-1的鬼筆環(huán)肽染料，室溫避光孵育30 min，DAPI染核5 min，熒光顯微鏡觀察心肌細(xì)胞骨架微絲，拍照。每組隨機(jī)選取50個(gè)細(xì)胞，ImageJ測(cè)定細(xì)胞表面積。

1.5 NKA活性測(cè)定細(xì)胞接種于6孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%時(shí)，收集各組細(xì)胞至離心管中，制備細(xì)胞勻漿，20 000×g離心30 min，棄上清液，分離肌膜成分，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)細(xì)胞膜NKA活性。

1.6 MDC染色細(xì)胞接種于24孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)至50%時(shí)，棄去培養(yǎng)基，Wash buffer清洗2次，每孔加入MDC染液100 μL，室溫避光孵育45 min，棄去染液，Wash buffer清洗2次，熒光顯微鏡觀察自噬囊泡，計(jì)數(shù)并拍照，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。

1.7 Real time PCRTRIzol提取心肌細(xì)胞總RNA，用FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒合成cDNA。NKA α1引物，F(xiàn)：5′-GCTGTCGTCATCATAACTGGC-3′，R：5′-GCTCATCTTCTCTCCATTTCG-3′；NKA α2引物，F(xiàn)：5′-TCATCGGCATCATCGTAGC-3′，R：5′-CGTCAGGCACACAGTAACAGT-3′；GAPDH引物，F(xiàn)：5′-TGAACGGGAAGCTCACTG-3′，R：5′-GCTTCACCACCTTCTTGATG-3′。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，2-ΔΔCt法分析NKA α1、NKA α2 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.8 Western blot提取各組細(xì)胞總蛋白，BCA法定量后進(jìn)行SDS-PAGE電泳，將目的蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2 h，加入特異性一抗(ANP 1 ∶600，β-MHC 1 ∶600，NKA α1 1 ∶1 000，NKA α2 1 ∶1 000，Beclin-1 1 ∶500，LC3 1 ∶1 000，p62 1 ∶1 000，Sirt1 1 ∶1 000，AMPK 1 ∶1 000，p-AMPK 1 ∶1 000，mTOR 1 ∶1 000，p-mTOR 1 ∶1 000)，4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，洗膜后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG(1 ∶5 000稀釋)，室溫孵育1 h，ECL顯影劑顯色后用ImageJ進(jìn)行灰度分析。

2 結(jié)果

2.1 LRG對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的影響鬼筆環(huán)肽染色顯示(Fig 1A)：與CON組相比，HG組細(xì)胞表面積明顯增加(P<0.01)，不同劑量LRG干預(yù)后細(xì)胞表面積較HG組明顯降低(P<0.01)，而自噬抑制劑3-MA可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。Western blot顯示(Fig 1B)：與CON組相比，HG組ANP、β-MHC蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01)，不同劑量LRG干預(yù)后ANP、β-MHC蛋白表達(dá)較HG組明顯降低(P<0.01)，而自噬抑制劑3-MA可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。

Fig 1 Effects of LRG on HG-induced cardiomyocyte hypertrophy

2.2 LRG對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞NKA活性和NKA α亞基表達(dá)的影響NKA活性測(cè)定顯示(Fig 2A)：與CON組相比，HG組NKA活性明顯降低(P<0.01)，不同劑量LRG干預(yù)后NKA活性較HG組明顯增加(P<0.05或P<0.01)，而自噬抑制劑3-MA可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。文獻(xiàn)報(bào)道，NKA最小功能單位為αβ異源二聚體，其中α亞基是NKA的催化亞基，包括α1～α4四種亞型，嚙齒類(lèi)動(dòng)物心肌僅表達(dá)NKA α1、α2，本研究進(jìn)一步檢測(cè)NKA α1、α2表達(dá)情況。Real time PCR和Western blot顯示(Fig 2B-C)：各組NKA α2 mRNA和蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)與NKA活性測(cè)定結(jié)果一致，而NKA α1 mRNA和蛋白表達(dá)相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.3 LRG對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬的影響MDC染色顯示(Fig 3A)：與CON組相比，HG組自噬囊泡數(shù)量明顯降低(P<0.01)，不同劑量LRG干預(yù)后自噬囊泡數(shù)量較HG組明顯增加(P<0.01)，而自噬抑制劑3-MA可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。Western blot顯示(Fig 3B)：與CON組相比，HG組Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表達(dá)明顯降低，p62蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01)，不同劑量LRG干預(yù)后，Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表達(dá)較HG組明顯增加，p62蛋白表達(dá)較HG組明顯降低(P<0.05或P<0.01)，而自噬抑制劑3-MA可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。

2.4 阻斷Sirt1/AMPK/mTOR信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)LRG對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的抑制作用鬼筆環(huán)肽染色顯示(Fig 4A)：與CON組相比，HG組細(xì)胞表面積明顯增加(P<0.01)，高劑量LRG干預(yù)后細(xì)胞表面積較HG組明顯降低(P<0.01)，而Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。同時(shí)，Western blot也證實(shí)(Fig 4B)：Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC可減弱高劑量LRG下調(diào)ANP、β-MHC蛋白表達(dá)的作用(P<0.01)。

Fig 2 Effects of LRG on NKA activity and NKA αexpression in HG-induced H9c2 cells

Fig 3 Effects of LRG on autophagy in HG-induced H9c2 cells

Fig 4 Inhibition of Sirt1 or AMPK reversed LRG-mediated cardioprotective effect in HG-exposed H9c2 cells

2.5 阻斷Sirt1/AMPK/mTOR信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)LRG對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞NKA活性和NKA α2亞基表達(dá)的上調(diào)作用NKA活性測(cè)定顯示(Fig 5A)：與CON組相比，HG組NKA活性明顯降低(P<0.01)，高劑量LRG干預(yù)后NKA活性較HG組明顯增加(P<0.01)，而Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。同時(shí),Real time PCR和Western blot也證實(shí)(Fig 5B-C)：Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC可減弱高劑量LRG上調(diào)NKA α2 mRNA和蛋白表達(dá)的作用(P<0.01)。

Fig 5 Inhibition of Sirt1 or AMPK reversed LRG-mediated increase of NKA activity and up-regulation of NKA α2 in HG-exposed H9c2 cells

2.6 阻斷Sirt1/AMPK/mTOR信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)LRG對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬的上調(diào)作用MDC染色顯示(Fig 6A)：與CON組相比，HG組自噬囊泡數(shù)量明顯降低(P<0.01)，高劑量LRG干預(yù)后自噬囊泡數(shù)量較HG組明顯增加(P<0.01)，而Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC可部分拮抗LRG的作用(P<0.01)。同時(shí)Western blot也證實(shí)(Fig 6B)：Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC可減弱高劑量LRG上調(diào)Sirt1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1蛋白表達(dá)及下調(diào)p-mTOR/mTOR蛋白表達(dá)的作用(P<0.01)。

Fig 6 Inhibition of Sirt1 or AMPK reversed LRG-mediated activation of Sirt1/AMPK/mTOR signaling and autophagy in HG-exposed H9c2 cells

3 討論

2型糖尿病是以血糖異常升高為特征的慢性代謝性疾病，持續(xù)的高血糖被認(rèn)為是導(dǎo)致DCM、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變等慢性并發(fā)癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。LRG是一種新型胰高血糖素樣肽1類(lèi)似物，因其良好的降糖效果被廣泛應(yīng)用于2型糖尿病的臨床治療中，且對(duì)多種心血管疾病具有顯著保護(hù)作用，如高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭等。但LRG對(duì)糖尿病心肌肥厚的作用及機(jī)制報(bào)道尚少。既往研究發(fā)現(xiàn)，高濃度葡萄糖刺激下H9c2心肌細(xì)胞，具有與原代培養(yǎng)的胎鼠心肌細(xì)胞相似的肥厚性反應(yīng)，表現(xiàn)為肥大標(biāo)志基因(ANP、β-MHC、CTGF等)mRNA表達(dá)快速上調(diào)。本研究中，我們采用33.3 mmol·L-1葡萄糖作用于H9c2細(xì)胞48 h，觀察到細(xì)胞表面積顯著增加，同時(shí)ANP、β-MHC蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，證實(shí)糖尿病心肌肥厚模型構(gòu)建成功；LRG干預(yù)能夠抑制心肌細(xì)胞肥大，提示LRG可能成為治療該病的有效藥物。

大量研究顯示，NKA是細(xì)胞排出Na+的唯一途徑，其活性降低造成細(xì)胞內(nèi)Na+積聚，繼而通過(guò)促進(jìn)Na+/Ca2+交換體(NCX)反向轉(zhuǎn)運(yùn)模式導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加。持續(xù)升高的細(xì)胞內(nèi)Ca2+是誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥厚性生長(zhǎng)的重要病理機(jī)制，并導(dǎo)致心功能障礙和心力衰竭進(jìn)一步加重[8]。本研究表明，高糖處理后心肌細(xì)胞NKA活性、NKA α2 mRNA和蛋白表達(dá)降低；給予LRG干預(yù)后，NKA活性、NKA α2 mRNA和蛋白表達(dá)得以升高。可見(jiàn)，LRG對(duì)糖尿病心肌肥厚的治療機(jī)制與促進(jìn)NKA活性恢復(fù)及上調(diào)NKA α2表達(dá)有關(guān)。同時(shí)，Real time-PCR和Western blot檢測(cè)到NKA α1 mRNA和蛋白表達(dá)在各組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明糖尿病心肌肥厚發(fā)生發(fā)展并不涉及NKA α1變化。我們分析NKA α1、α2在心肌肥厚中的不同作用與其在心肌細(xì)胞膜的分布不同有關(guān)。多項(xiàng)研究表明，α1廣泛表達(dá)在表面肌膜，可將細(xì)胞內(nèi)Na+維持在整體較低的水平，在調(diào)控離子穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮“管家作用”；而α2與NCX、L型Ca2+通道均集中表達(dá)在橫小管，且α2對(duì)其內(nèi)源性抑制劑強(qiáng)心苷的親和力較α1高4倍，因此局部Na+水平升高即可通過(guò)調(diào)控毗鄰的NCX和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+通道引起Ca2+的大量釋放，可見(jiàn)α2在調(diào)控心肌收縮力方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[9-10]。已證實(shí)NKA α2表達(dá)下調(diào)是異丙腎上腺素導(dǎo)致的心肌細(xì)胞NKA活性降低和心肌肥厚的重要因素[11]。在心肌梗死小鼠模型中，特異性過(guò)表達(dá)NKA α2的轉(zhuǎn)基因小鼠心肌細(xì)胞Ca2+瞬變幅度較WT小鼠顯著降低，可逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)，并阻止心功能惡化[12]。因此，LRG可能通過(guò)上調(diào)NKA α2表達(dá)增強(qiáng)NKA活性，從而逆轉(zhuǎn)高糖誘導(dǎo)的心肌肥厚。

目前，自噬在心肌肥厚中的作用仍存在爭(zhēng)議。有學(xué)者認(rèn)為，增強(qiáng)自噬活性可能通過(guò)增加ATP合成、降解錯(cuò)誤折疊的蛋白逆轉(zhuǎn)心肌肥厚，延緩心力衰竭進(jìn)程。然而，過(guò)度自噬可能促進(jìn)細(xì)胞凋亡加重心室重構(gòu)，采用自噬抑制劑3-MA或siRNA干擾技術(shù)下調(diào)自噬相關(guān)基因表達(dá)后，心肌肥厚得以明顯減輕[13]。本研究結(jié)果顯示，高糖誘導(dǎo)心肌細(xì)胞自噬缺陷，LRG干預(yù)通過(guò)調(diào)控自噬相關(guān)基因表達(dá)增強(qiáng)自噬水平，提示LRG的心臟保護(hù)作用可能是通過(guò)調(diào)控自噬實(shí)現(xiàn)的。我們推測(cè)，自噬在心肌肥厚中發(fā)揮保護(hù)性作用還是有害作用與心室重構(gòu)的不同階段、造模方法及涉及的信號(hào)通路有關(guān)。

Sirt1/AMPK通路在調(diào)控炎癥、凋亡、自噬、能量代謝及心臟保護(hù)性蛋白表達(dá)方面發(fā)揮重要作用。Li等[14]研究發(fā)現(xiàn)，Sirt1/AMPK通路活化后能夠發(fā)揮抗凋亡、抗氧化作用，減輕血管緊張素II(Ang II)誘導(dǎo)的心肌肥厚和心功能障礙。值得注意的是，過(guò)表達(dá)Sirt1或應(yīng)用AMPK激動(dòng)劑AICAR可逆轉(zhuǎn)晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞NKA活性降低，提示Sirt1/AMPK通路可調(diào)控NKA活性[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，給予特異性Sirt1抑制劑EX 527、AMPK抑制劑CC后，LRG對(duì)NKA活性、NKA α2 mRNA和蛋白表達(dá)的上調(diào)作用及心肌肥大的保護(hù)作用被阻斷了，同時(shí)伴有自噬囊泡數(shù)量減少及自噬標(biāo)志基因Beclin-1表達(dá)下調(diào)，提示LRG可能通過(guò)激活Sirt1/AMPK/mTOR自噬信號(hào)促進(jìn)NKA活性恢復(fù)，從而逆轉(zhuǎn)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。然而，關(guān)于心肌細(xì)胞中自噬信號(hào)通路調(diào)控NKA分子機(jī)制的研究尚少。目前已有研究指出NKA和AMPK之間存在直接聯(lián)系。Xiong等[16]研究發(fā)現(xiàn)，靶向NKA胞外結(jié)構(gòu)域的抗體DR-Ab通過(guò)上調(diào)NKA活性減輕Ang II誘導(dǎo)的心肌肥厚，該細(xì)胞保護(hù)作用涉及AMPK信號(hào)通路的活化。Pirkmajer等[17-18]在骨骼肌細(xì)胞、腎小管細(xì)胞中也證實(shí)，AMPK的持續(xù)活化促使NKA去磷酸化，從而抑制NKA的內(nèi)吞并保護(hù)其免遭溶酶體降解。此外，糖尿病狀態(tài)下線粒體產(chǎn)生的自由基(ROS)可引起NKA結(jié)構(gòu)改變和氧化損傷，從而影響線粒體氧化磷酸化并降低細(xì)胞內(nèi)ATP的合成，這是導(dǎo)致NKA活性降低的重要因素。增強(qiáng)自噬活性能夠直接清除功能異常的線粒體和ROS，同時(shí)使細(xì)胞內(nèi)ATP含量增加，從而促進(jìn)NKA活性恢復(fù)。以上研究提示，自噬信號(hào)通路可能通過(guò)多種途徑調(diào)控NKA。

綜上，本研究表明，LRG能夠抑制高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，其機(jī)制可能與調(diào)控Sirt1/AMPK/mTOR自噬信號(hào)增強(qiáng)NKA活性有關(guān)。本研究證實(shí)了LRG的體外抗肥大作用，也為將自噬信號(hào)介導(dǎo)的NKA調(diào)控作為防治DCM的分子靶點(diǎn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。不足之處在于，本研究尚未開(kāi)展在體實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證此結(jié)論。今后我們將利用DCM動(dòng)物模型進(jìn)行相關(guān)研究，旨在探索和完善LRG的心臟保護(hù)作用及機(jī)制。