奶牛子宮內(nèi)膜炎的診斷及替抗療法研究進(jìn)展

王亞博

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 071001）

奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛分娩后或流產(chǎn)后的子宮黏膜的炎癥，是常見的一種奶牛生殖器官疾病，也是導(dǎo)致奶牛不孕的重要原因之一。奶牛子宮內(nèi)膜炎已經(jīng)成為一種危害嚴(yán)重的子宮疾病之一，其中河南地區(qū)荷斯坦奶牛子宮內(nèi)膜炎平均發(fā)病率為12.8%[1]，美國盧旺達(dá)農(nóng)場中子宮內(nèi)膜炎患病率為70.2%，其中臨床型子宮內(nèi)膜炎為67.2%，亞臨床型子宮內(nèi)膜炎為31.8%[2]。子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率高，病因復(fù)雜，嚴(yán)重阻礙了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前，該病的臨床診斷技術(shù)比較成熟、應(yīng)用廣泛，但其診斷的準(zhǔn)確性與獸醫(yī)的水平和經(jīng)驗(yàn)密切相關(guān)，難以標(biāo)準(zhǔn)化和普及推廣；操作簡單快捷、靈敏準(zhǔn)確的診斷技術(shù)，如PCR診斷等技術(shù)還有待進(jìn)一步研究和完善。隨著抗生素療法弊端的日益突出，科學(xué)家們從中藥、微生態(tài)制劑等方面進(jìn)行了不懈的探索。

1 發(fā)病原因

引起子宮內(nèi)膜炎的首要原因是病原微生物的入侵感染，其中包括細(xì)菌、真菌、病毒及寄生蟲等。母牛產(chǎn)犢時(shí)和產(chǎn)犢后以及輸精和檢查子宮時(shí)，由于子宮頸口的開張，環(huán)境中病原微生物可通過陰道經(jīng)子宮頸口污染子宮內(nèi)膜。細(xì)菌感染又是病原微生物誘發(fā)子宮內(nèi)膜炎的首要致病因素，各種研究分離出的細(xì)菌雖然差異很大，但大腸桿菌、化膿性鏈球菌、壞死桿菌通常被認(rèn)為是主要的子宮內(nèi)炎病原體[3，4]。一般情況下，奶牛子宮內(nèi)膜炎并不是單純一種細(xì)菌引起的，而是由多種細(xì)菌混合感染引起的，又因各地區(qū)環(huán)境、感染途徑、奶牛的健康狀態(tài)和飼養(yǎng)水平不同所以感染的細(xì)菌和感染得程度均有所不同。

代謝紊亂、維生素缺乏、營養(yǎng)不良等代謝性疾病均可導(dǎo)致奶牛的抗病力降低，誘發(fā)奶牛子宮內(nèi)膜炎。當(dāng)奶?；加刑ヒ虏幌?、陰道脫出、子宮脫出、陰道炎和子宮頸炎等疾病時(shí)，如治療不徹底也可繼發(fā)感染子宮內(nèi)膜炎。

在實(shí)際生產(chǎn)中對(duì)奶牛進(jìn)行人工授精、助產(chǎn)、引產(chǎn)時(shí)動(dòng)作粗暴，易造成生殖道及子宮內(nèi)膜的損傷，從而引發(fā)子宮內(nèi)膜炎。奶牛人工授精時(shí)輸精器械、輸精員手臂和牛外陰部等消毒不嚴(yán)等，這些因素均會(huì)導(dǎo)致病原微生物進(jìn)入子宮引發(fā)子宮內(nèi)膜的感染。

2 分類及其臨床癥狀

依據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，奶牛子宮內(nèi)膜炎可被分為多種類型。按照子宮內(nèi)膜損傷程度與子宮內(nèi)分泌物的性質(zhì)分為4種類型：隱性子宮內(nèi)膜炎、慢性卡他性子宮內(nèi)膜炎、慢性卡他膿性子宮內(nèi)膜炎和慢性膿性子宮內(nèi)膜炎；根據(jù)病因來劃分，分為原發(fā)性和繼發(fā)性子宮內(nèi)膜炎；依據(jù)病程的長短來分，有急性、亞急性和慢性子宮內(nèi)膜炎[5]。由于缺少統(tǒng)一的判斷標(biāo)準(zhǔn)，給正確診斷奶牛子宮內(nèi)膜炎帶來了巨大困難。因此，一個(gè)國際通用的判斷標(biāo)準(zhǔn)被英美加三國奶牛繁殖專家提出，即根據(jù)細(xì)胞學(xué)診斷將奶牛子宮內(nèi)膜炎分為臨床型子宮內(nèi)膜炎和亞臨床型子宮內(nèi)膜炎[6]。

3 診斷

子宮內(nèi)膜炎明確的診斷方法是細(xì)胞學(xué)評(píng)估[7]（顯示產(chǎn)后21～40d多形核中性粒細(xì)胞的百分比），但實(shí)際生產(chǎn)中細(xì)胞學(xué)評(píng)估的方法比較復(fù)雜費(fèi)時(shí)，所以多采用臨床診斷結(jié)合病理組織學(xué)診斷來確診。

3.1 臨床診斷法

患病奶牛臨床表現(xiàn)為拱背、努責(zé)等現(xiàn)象，輕癥患牛從陰門處有化膿性分泌物，重癥患牛分泌物出現(xiàn)棕色和紅褐色，并且分泌物具有惡臭味。母牛釆食量降低，產(chǎn)奶量下降。直腸檢查和陰道檢查是臨床診斷子宮內(nèi)膜炎最常用但靈敏度較低的方法，這種方法需要了解不同時(shí)間子宮的正常狀態(tài)，如子宮大小、質(zhì)地和內(nèi)容物等。檢查過程中，患畜受到刺激表現(xiàn)出弓背、努責(zé)，并且子宮內(nèi)有炎性物質(zhì)排出，可根據(jù)黏液性質(zhì)進(jìn)行初步診斷。直腸檢查、陰道檢查結(jié)合臨床表現(xiàn)常作為診斷子宮內(nèi)膜炎診斷的輔助手段。

3.2 細(xì)胞因子輔助診斷法

子宮內(nèi)膜炎是病原菌在子宮內(nèi)大量繁殖，引起子宮內(nèi)膜發(fā)生的炎性病理變化， Tumnyak Loyi[9]等研究發(fā)現(xiàn)子宮組織中的細(xì)胞因子的含量與子宮炎癥的嚴(yán)重程度和持續(xù)性有關(guān)。子宮組織中炎性細(xì)胞因子基因的更高表達(dá)或血清中這些細(xì)胞因子水平的增加被認(rèn)為可以預(yù)測牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生。Ramanathan K Kasimanickam1[10]等研究表明，患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛血清中脂聯(lián)素、瘦素、TNF-α、IL-1β和IL-6的濃度高于正常奶牛。Kim Ill-Hwa [11]的試驗(yàn)結(jié)果表明，子宮沖洗液中的IL-1β和IL-6水平差異是明顯的，并且臨床子宮內(nèi)膜炎組中IL-1β和IL-6的含量顯著升高，憑此結(jié)果能區(qū)別臨床型子宮內(nèi)膜炎奶牛、亞臨床型子宮內(nèi)膜炎和健康奶牛區(qū)分開來。Kim等還發(fā)現(xiàn)患臨床型子宮內(nèi)膜炎奶牛的血清中TNF-α的含量與亞臨床型子宮內(nèi)膜炎奶牛和健康奶牛的含量相比，TNF-α的含量顯著增多；但劉明超[12]的試驗(yàn)表明亞臨床型子宮內(nèi)膜炎奶牛與健康奶牛血液中TNF-α的變化并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此TNF-α只能用于臨床型子宮內(nèi)膜炎的輔助診斷，并不能用于亞臨床型子宮內(nèi)膜炎的輔助診斷。IL-1β、IL-6、IL-8、脂肪因子、胰島素和IGF-1的含量變化和產(chǎn)后子宮炎癥狀況有顯著相關(guān)性，可以用于輔助診斷，但其診斷標(biāo)準(zhǔn)和診斷方法有待進(jìn)一步驗(yàn)證和探討。

3.3 B型超聲診斷法

B超能夠通過子宮和卵巢的聲像圖，尤其是子宮和子宮腔內(nèi)部炎性物質(zhì)和病灶的聲像圖特點(diǎn)，來輔助診斷子宮內(nèi)膜炎，能夠比較準(zhǔn)確的診斷出奶牛的子宮疾病類型，以便對(duì)癥治療和尋找病因。Mateus et al.發(fā)現(xiàn)，子宮超聲測量對(duì)產(chǎn)后3周子宮腔積液顯示出良好的敏感性和特異性，對(duì)診斷子宮內(nèi)膜炎是可靠的。胡路鋒[14]應(yīng)用B超輔助診斷荷斯坦奶牛臨床子宮常見疾病，分析不同子宮疾病的B超典型聲像圖，建立了奶牛臨床子宮疾病聲像圖譜。N. Salah[16]等人研究表明，當(dāng)B超技術(shù)與子宮液結(jié)合使用時(shí)，超聲方法對(duì)產(chǎn)后4周和5周子宮內(nèi)膜炎的診斷是實(shí)用的，該方法具有60%的敏感性和93.8%的特異性，所以應(yīng)用B超可以提高子宮內(nèi)膜炎診斷的準(zhǔn)確率，縮短診斷時(shí)間。

3.4 PCR技術(shù)診斷法

PCR(polymerase chain reaction)診斷技術(shù)已經(jīng)成為檢驗(yàn)病原微生物的主要技術(shù)，PCR不僅可以克服傳統(tǒng)細(xì)菌鑒定耗時(shí)長、技術(shù)繁瑣的缺點(diǎn)，而且反應(yīng)靈敏度高，檢測成本低，從而提高了檢測結(jié)果的可靠性和時(shí)效性。SM Aghamiri[17]等在2012年建立了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來診斷奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎的四種主要病原體（大腸桿菌、化膿性鏈球菌、壞死鏈球菌和黑色素瘤假單胞菌），還建立了其中三種(大腸桿菌、化膿性鏈球菌和壞死鏈球菌)的多重 PCR。王寧寧[18]建立了一種能同時(shí)快速檢測 6 種致病菌（腸埃希菌、化膿隱秘桿菌、金黃色葡萄球菌、乳房鏈球菌、綠膿桿菌、奇異變形桿菌）的多重 PCR 檢測方法，并在臨床上進(jìn)行了初步檢測，效果良好。因此應(yīng)用PCR技術(shù)有助于快速、準(zhǔn)確地診斷子宮內(nèi)膜炎，應(yīng)用前景非常廣闊。

4 治療

目前，臨床常用的治療方法仍是抗生素療法，但由于耐藥菌株的出現(xiàn)以及抗生素殘留等弊端日益突出，因此尋找療效顯著的中獸醫(yī)療法和微生態(tài)制劑療法是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。

4.1 中獸醫(yī)療法

中草藥具有抗菌消炎、改善血液循環(huán)的作用和毒性低、無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性，以及改善機(jī)體性能和增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力等優(yōu)勢得到廣泛應(yīng)用，目前應(yīng)用較多的中獸醫(yī)療法有子宮灌注液療法和栓劑療法。

4.1.1 子宮灌注劑療法

子宮灌注劑用藥后可直接作用于子宮局部，產(chǎn)生抗菌消炎及對(duì)損傷組織的修復(fù)作用，還可經(jīng)子宮局部吸收后產(chǎn)生全身作用。與消毒劑和抗生素相比，子宮灌注劑具有不易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用小和低殘留的特點(diǎn)。錢峰[19]等人的藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，柏芩提取液能明顯改善實(shí)驗(yàn)性子宮內(nèi)膜炎的臨床癥狀，子宮分泌物涂片鏡檢及子宮分泌物化學(xué)檢查結(jié)果趨于正常，并且能夠減輕子宮充血、炎性細(xì)胞浸潤、上皮細(xì)胞脫落等組織病理學(xué)變化。馬學(xué)禮[20]應(yīng)用魚腥草子宮灌注液治療輕度、中度奶牛子宮內(nèi)膜炎療效顯著，人工授精受孕率高達(dá)98.2%。李健[21]等人應(yīng)用丹蓮花子宮灌注液（主要成分為丹參、黃連、連翹、紅花）治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，可使患病奶牛的臨床癥狀明顯改善。張保軍[22]等人的健宮散（益母草、當(dāng)歸、川芎、五靈脂、桃仁等）通過能減少機(jī)體的氧化損傷并提高抗氧化酶GSH-Px和SOD的活性來治療奶牛子宮內(nèi)膜炎。周健[23]使用雙連益母液來治療子宮內(nèi)膜炎，該方劑不僅有促進(jìn)子宮運(yùn)動(dòng)改善微循環(huán)的作用還有抑菌消炎的作用，各位中藥相輔相成，標(biāo)本兼治，療效顯著，總有效率為97.3%。

4.1.2 泡騰栓劑療法

泡騰栓劑療法的優(yōu)勢在于給藥次數(shù)少，劑量大，逐步釋放藥效，作用時(shí)間長。柳林[24]的龍膽燥濕栓可通過調(diào)節(jié)患病奶牛血清中N0、MDA含量以及NOS、SOD活性來達(dá)到治療的目的。邱建明[25]應(yīng)用宮得健泡騰栓治療奶牛子宮內(nèi)膜炎有效率為90%，比環(huán)丙沙星溶液的療效有所提高。麻延鋒[26]等人使用宮炎消栓治療急、慢性奶牛子宮內(nèi)膜炎的總有效率為90.32%，且藥殘少，耐藥性小，無毒副作用。劉景輝[27]的新型栓劑（中藥與溶菌酶結(jié)合使用）治療效果為70%，這種中空栓制劑不僅實(shí)現(xiàn)了中藥作用時(shí)間和溶菌酶作用時(shí)間的分離，而且避免了溶菌酶對(duì)中藥的破壞。泡騰栓崩解之后，產(chǎn)生大量泡沫，藥物快速釋放，可以使藥物達(dá)到腔道褶皺深處，提高藥物的利用率和作用時(shí)間，而且崩解產(chǎn)生的多為酸性物質(zhì)，可抑制厭氧菌的生長。

4.2 微生態(tài)制劑療法

微生態(tài)制劑療法是將含活菌或死菌包括其組分和代謝產(chǎn)物的細(xì)菌制品，經(jīng)口或其他途徑投入，旨在改善黏膜表面微生物或酶的平衡，或者刺激特異性或非特異性免疫機(jī)制，調(diào)整機(jī)體局部微生態(tài)失調(diào)，建立正常菌群，可通過上調(diào)免疫球蛋白、下調(diào)炎性細(xì)胞因子來提高機(jī)體免疫力[28]，近年來微生態(tài)制劑在奶牛生殖疾病方面的研究和應(yīng)用越來越受到專家和學(xué)者的重視。

張志焱[30]等人利用乳酸菌代謝產(chǎn)物在體外抑制病原菌試驗(yàn)效果良好的基礎(chǔ)上，將其應(yīng)用到奶牛子宮內(nèi)膜炎治療中，治愈率達(dá)75%。Sandra[31]等人用鼠李糖乳桿菌、乳酸片球菌和羅伊乳酸桿菌的乳酸菌益生菌組合雖然無法直接到達(dá)子宮內(nèi)，但通過調(diào)節(jié)陰道內(nèi)的致病環(huán)境，從而減少了到達(dá)子宮內(nèi)膜的病原菌，達(dá)到了治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的效果。宋朋杰[32]研究證明植物乳桿菌、副干酪乳桿菌、鼠李糖桿菌1∶1∶1混合活菌制劑加80mL乳酸菌MRS培養(yǎng)基發(fā)酵上清液，治療臨床型奶牛子宮內(nèi)膜炎的有效率為90%，治愈率為60%。鄭偉萍[33]等人從奶牛子宮中分離出枯草芽孢桿菌，并做了抑菌試驗(yàn)，對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌效果明顯。鄧洪宇[34]將嗜酸性乳桿菌、鼠李糖乳桿菌和枯草芽孢桿菌分別培養(yǎng)后制成微生態(tài)制劑，該制劑對(duì)由奶牛子宮內(nèi)膜炎分離的致病菌引起的家兔模型治療效果顯著，治愈率75%，好轉(zhuǎn)率100%，并發(fā)現(xiàn)該制劑可引起IgM發(fā)生顯著的變化。微生態(tài)制劑使用安全，無毒副作用并且在治療奶牛子宮內(nèi)膜炎效果比較顯著，能夠適應(yīng)當(dāng)前對(duì)綠色無抗奶的要求，提高奶牛養(yǎng)殖的效益。因此臨床篩選抗菌性強(qiáng)，黏附率高，安全性好的益生菌來降低預(yù)防和治療成本、控制耐藥基因產(chǎn)生、開發(fā)綠色全新型微生態(tài)制劑也將是未來研究的主要方向。

5 展望

奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛的常見病，嚴(yán)重影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，因此研究操作簡單、診斷快速、靈敏準(zhǔn)確的子宮內(nèi)膜炎診斷技術(shù)，研究使用方便、療效顯著、毒副作用小的中藥制品和微生態(tài)制劑，是今后研究子宮內(nèi)膜防治技術(shù)的重要方向。