IVF-ET中卵裂球多核胚胎發(fā)育潛力的分析

滕文頂，鮮 紅，王 芳，杜昊軒，孟祥黔，張小建，單旭東

(1.成都市婦女兒童中心醫(yī)院 生殖健康與不孕癥科，四川 成都 610091； 2.成都西囡婦科醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)科，四川 成都 610023； 3.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，四川 成都 610000；4.四川大學(xué) 華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610041； 5.成都中醫(yī)藥附屬生殖婦幼醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)中心，四川 成都 610041； 6.成都中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 611137)

0 引 言

在體外受精和胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer,IVF-ET)的胚胎培養(yǎng)過程中，第2天(D2)或第3天(D3)的胚胎卵裂球中部分卵裂球含有多于一個(gè)細(xì)胞核的卵裂球稱為多核卵裂球(Multi Nucleated Blastomere，MNB)，含有多核卵裂球的胚胎稱之為多核胚胎[1].多核現(xiàn)象在IVF周期中較為常見，約20%～40%的胚胎和多于70%的周期存在多核現(xiàn)象[2-5].一般認(rèn)為，多核現(xiàn)象產(chǎn)生的主要原因：培養(yǎng)液準(zhǔn)備不充分；在低溫下對卵子進(jìn)行操作引起細(xì)胞骨架的變化[6-8].除此之外，體外操作時(shí)對卵子紡錘體的影響[9]，促排卵過程中對卵巢的刺激[10]等，也被認(rèn)為可能造成多核現(xiàn)象.陳磊等[11]研究報(bào)道 2、4細(xì)胞卵裂球多核均可影響胚胎發(fā)育及移植后妊娠結(jié)局.Ambroggio等[12]報(bào)道D2和D3存在多核的胚胎大多會發(fā)生染色體隨機(jī)易位等異?，F(xiàn)象，MNB胚胎植入前遺傳學(xué)篩查(PGS)多倍體的幾率增加.MNB胚胎與低著床率、高染色體異常率和高流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[10]，甚至有報(bào)道多核胚胎產(chǎn)生連體嬰兒[13].相反，Ramirez等[14]報(bào)道2細(xì)胞時(shí)存在多核的胚胎在4細(xì)胞階段多核消失，并在冷凍解凍后移植并成功妊娠.Elif等[15]報(bào)道2-，4-，6-細(xì)胞階段的多核胚胎發(fā)育時(shí)間長于非多核胚胎，但妊娠結(jié)局沒有差異.王志強(qiáng)等[16]研究認(rèn)為隨著胚胎的不斷分裂，細(xì)胞核狀態(tài)也在不斷發(fā)生著改變，伴隨著胚胎有絲分裂的不斷進(jìn)行，胚胎相應(yīng)的自我修復(fù)程序也在持續(xù)進(jìn)行，這種修復(fù)程序可以使本次分裂過程中的多核卵裂球在下次分裂過程中得以恢復(fù)，多核可能是一種暫時(shí)和可逆轉(zhuǎn)的現(xiàn)象.Aguilar等[17]報(bào)道認(rèn)為早期卵裂球多核胚胎與低著床率沒有聯(lián)系，另外有研究證明MNB胚胎同樣具有良好的發(fā)育潛力和臨床結(jié)局[18-20].同時(shí)，本研究也發(fā)現(xiàn)國內(nèi)有關(guān)MNB胚胎發(fā)育潛能的研究很少.顯然，在IVF-ET中MNB胚胎的發(fā)育潛力和妊娠結(jié)局還存在爭論.

在IVF-ET中，D3移植胚胎選擇原則是優(yōu)先選擇優(yōu)質(zhì)胚胎移植，若無優(yōu)質(zhì)胚胎可選擇情況下，也可選擇非優(yōu)質(zhì)胚胎移植，多個(gè)研究[21-25]和我們中心[26]的數(shù)據(jù)顯示非優(yōu)質(zhì)胚胎具有發(fā)育到囊胚的潛能，且移植后有30%以上的臨床妊娠率.因此，本研究將胚胎分成優(yōu)質(zhì)胚胎和非優(yōu)質(zhì)胚胎兩種亞組，再根據(jù)D2出現(xiàn)多核的卵裂球數(shù)目進(jìn)行分組，分析比較不同組胚胎的囊胚形成率、可用囊胚形成率、囊胚染色體整倍體率及解凍囊胚周期的臨床結(jié)局，以期探討不同質(zhì)量和不同MNB胚胎的發(fā)育潛力，為IVF-ET中多核胚胎的合理使用提供參考依據(jù).

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

2014年6月至2022年6月，在成都市婦女兒童中心醫(yī)院、成都西囡婦科醫(yī)院和成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬生殖婦幼醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心進(jìn)行IVF-ET治療的患者及其臨床資料.

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

夫婦染色體正常，女性年齡<35歲，控制性促排卵采用黃體中期長方案，并排除內(nèi)分泌疾病(高泌乳素血癥、甲狀腺功能異常、糖尿病等)、傳染病及吸煙、酗酒、吸毒等不良嗜好的患者.

1.3 分組

根據(jù)正常受精胚胎(受精卵有兩個(gè)原核，2PN)D2和D3的形態(tài)學(xué)序貫評分將胚胎分為優(yōu)質(zhì)胚胎和非優(yōu)質(zhì)胚胎兩個(gè)亞組，每個(gè)亞組根據(jù)胚胎D2出現(xiàn)多核的卵裂球數(shù)目(一個(gè)或多個(gè))又分為兩組，每個(gè)亞組設(shè)一個(gè)對照組.組1(對照組)，D2卵裂球未見多核胚胎，即非多核胚胎；組2，D2單卵裂球多核胚胎；組3，D2多卵裂球多核胚胎.各組的典型現(xiàn)象如圖1所示.在胚胎植入前遺傳學(xué)診斷/篩查(PGD/PGS)周期中，囊胚培養(yǎng)一般采用集體培養(yǎng)，即將3～5枚卵裂期胚胎共同放在一個(gè)微滴里培養(yǎng)，張靜雯等[27]研究證實(shí)了胚胎集合微滴培養(yǎng)囊胚較單胚胎微滴培養(yǎng)有明顯優(yōu)勢，但集體培養(yǎng)會導(dǎo)致形成的囊胚與卵裂期胚胎不能一一對應(yīng).由于PGD/PGS周期中均對每枚可利用囊胚進(jìn)行遺傳學(xué)檢測，染色體正常與否是我們選擇胚胎的主要參考依據(jù)，因此,未對樣本進(jìn)行優(yōu)質(zhì)胚胎和非優(yōu)質(zhì)胚胎亞分組.另外，D2多卵裂球多核胚胎的囊胚形成率和可用囊胚形成率較低，獲得的可利用囊胚數(shù)較少，因此,未對D2多卵裂球多核胚胎形成的囊胚進(jìn)行染色體整倍體率和臨床結(jié)局分析.

(A)D2胚胎卵裂未見多核 (B)D2胚胎單卵裂球多核 (C)D2胚胎多卵裂球多核圖1 三組不同多核情況胚胎Fig.1 Three groups of embryos with different multinucleated conditions

1.4 治療方案

1.4.1 促排卵和授精

患者均采用GnRH (GnRH,r-FSH 75 IU,Merck Serono or Livzon)常規(guī)降調(diào)節(jié)長方案促排卵，通過雌激素(E2)水平和經(jīng)陰道B超檢測卵泡.當(dāng)優(yōu)勢卵泡達(dá)到 18 mm 時(shí)注射人絨毛膜促性腺激素(hCG，250 μg,Merck Serono)，注射hCG后36～38 h 取卵，卵子取出后轉(zhuǎn)入含 1 mL 人輸卵管液(Quinn’s Advantage?Fertilization HTF,SAGE 1020)的井皿中(BD Falcon 353037),置于 37 ℃，5.5% CO2， 5% O2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng).HTF提前加10%人蛋白替代品(Quinn’s Advantage?,SPS Serum Protein Substitute,SAGE 3010)，蓋油(oil for tissue culture,SAGE 4008)過夜平衡.常規(guī)IVF周期中，授精在注射hCG 39～40 h 后進(jìn)行.ICSI周期中，獲卵后2～3 h 去顆粒細(xì)胞，注射hCG 40～41 h 后對成熟卵子行ICSI.

1.4.2 胚胎培養(yǎng)和觀察

胚胎采用微滴法進(jìn)行培養(yǎng)，受精后卵子轉(zhuǎn)移到卵裂液(Quinns Advantage?Cleavage Medium SAGE 1026)中繼續(xù)培養(yǎng)，卵裂液提前加10%SPS，在 35 mm 皿中制成25 μL微滴蓋油,置于 37 ℃，5.5% CO2，5% O2的培養(yǎng)箱中過夜平衡.授精后16～18 h 觀察原核，受精卵2PN為正常受精，D2和D3繼續(xù)觀察胚胎發(fā)育情況.根據(jù)Racowsky等[28]等的標(biāo)準(zhǔn)對胚胎進(jìn)行評分.胚胎移植在取卵后 72 h 進(jìn)行.D3移植或冷凍胚胎不超過4枚，剩余胚胎繼續(xù)囊胚培養(yǎng).囊胚液(Quinns Advantage?Blastocyst Medium,SAGE 1029)提前加10%SPS，在 35 mm 皿中制成 25 μL 微滴蓋油,在 37 ℃，5.5% CO2,5% O2的培養(yǎng)箱中過夜平衡.

1.4.3 胚胎冷凍與解凍

在細(xì)胞培養(yǎng)的第5/6天(D5/D6),使用SAGE冷凍試劑盒(SAGE 8025,SAGE 8030)對可利用囊胚進(jìn)行封閉載體冷凍，冷凍和解凍都按照說明書進(jìn)行.

1.4.4 胚胎染色體整倍性篩查(PGS)

取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞5～10個(gè)，利用單細(xì)胞全基因擴(kuò)增技術(shù)對取樣細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，使用蘇州貝康醫(yī)療器械公司生產(chǎn)的檢測試劑盒和基因測序儀DA8600，采用半導(dǎo)體高通量測序技術(shù)對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行全基因測序，通過生物信息軟件對測序結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，判斷胚胎是否存在染色體非整倍體異常.

1.5 分析指標(biāo)

1.5.1 卵裂期胚胎評級標(biāo)準(zhǔn)

卵裂期胚胎形態(tài)學(xué)評分參考Racowsky等[28]的方法，在胚胎發(fā)育速度正常的前提下,將細(xì)胞數(shù)、碎片、卵裂球均一度三個(gè)指標(biāo)整合在一起進(jìn)行評級(見表1).然后，再結(jié)合細(xì)胞數(shù)目對胚胎進(jìn)行評級，D2細(xì)胞數(shù)為3～6個(gè),且D3細(xì)胞數(shù)為7～9個(gè)的Ⅰ級與Ⅱ級胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎，D3細(xì)胞數(shù)≥5個(gè)的Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級胚胎為可利用胚胎.

表1 卵裂期胚胎評級標(biāo)準(zhǔn)[28]Tab.1 The grading criteria for embryos in cleavage stages

1.5.2 囊胚期胚胎評級標(biāo)準(zhǔn)

囊胚期胚胎觀察、分期和評級參照Gardner[29]分期和評分：D5或D6對3、4、5、6期囊胚進(jìn)行評級，1期和2期不評級.

1)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM))評級

A級為ICM包裹緊密，有很多細(xì)胞；B級為ICM細(xì)胞較分散，僅少數(shù)細(xì)胞；C級為ICM很少細(xì)胞.

2)滋養(yǎng)層評級

A級為很多細(xì)胞形成連續(xù)的上皮；B級為較少的細(xì)胞形成疏松的上皮；C級為僅很少幾個(gè)大細(xì)胞.

D5/D6對發(fā)育到3期或3期以上囊胚，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞評級至少有1個(gè)B或A可利用囊胚.

1.5.3 觀察指標(biāo)

囊胚形成率=2期及2期以上囊胚數(shù)/行囊胚培養(yǎng)的卵裂期胚胎總數(shù)×100%；可用囊胚形成率=可用囊胚數(shù)/行囊胚培養(yǎng)的卵裂期胚胎總數(shù)×100%；臨床妊娠率=臨床妊娠周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%；著床率=孕囊數(shù)/移植胚胎數(shù)×100%；活產(chǎn)率=分娩活胎周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%；流產(chǎn)率=流產(chǎn)周期數(shù)/妊娠周期數(shù)×100%；畸形率=胎兒畸形周期數(shù)/妊娠周期數(shù)×100%.

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

文中樣本數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定量資料組間比較采用t檢驗(yàn)(符合正態(tài)分布且方差齊)或t’檢驗(yàn)(符合正態(tài)分布，方差不齊)，不滿足正態(tài)分布的定量資料組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)；定性資料組間差異比較采用卡方檢驗(yàn).P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著.

2 結(jié)果

2.1 優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚培養(yǎng)結(jié)果

對于優(yōu)質(zhì)胚胎(見表2)，組2和組3的囊胚形成率均小于對照組.然而，χ2檢驗(yàn)表明組2和對照組的分組與囊胚形成及可用囊胚形成均是獨(dú)立事件(P>0.05)，即D2單卵裂球多核現(xiàn)象不影響胚胎的囊胚形成和可用囊胚形成.組3和對照組的分組與囊胚形成及可用囊胚形成均非獨(dú)立事件(分別為P=0.006和P=0.003)，表明D2多卵裂球多核現(xiàn)象影響胚胎的囊胚形成和可用囊胚形成.

表2 MNB優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚培養(yǎng)結(jié)果Tab.2 Results of blastocyst culture of MNB high-quality embryos

2.2 非優(yōu)質(zhì)胚胎培養(yǎng)囊胚結(jié)果比較

對于非優(yōu)質(zhì)胚胎(見表3)，組2和組3的囊胚形成率均低于對照組.然而，組2和對照組的分組與囊胚形成是獨(dú)立事件(P=0.249)，這表明在非優(yōu)質(zhì)胚胎分組中，D2單卵裂球多核現(xiàn)象與對照組相比，囊胚形成率無顯著差異(P>0.05).組3和對照組的分組與囊胚形成不是相互獨(dú)立事件(P<0.05)，即D2多卵裂球多核現(xiàn)象影響胚胎的囊胚形成，顯著降低囊胚形成率.組2、組3的可用囊胚形成率均低于對照組，且與對照組的分組與可用囊胚形成為非獨(dú)立事件(P<0.05)，表明在非優(yōu)質(zhì)胚胎分組中，D2兩種卵裂球多核現(xiàn)象都影響可用囊胚形成，并顯著降低可用囊胚形成率.

表3 MNB非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚培養(yǎng)結(jié)果Tab.3 Results of blastocyst culture of MNB non-high-quality embryos

2.3 囊胚染色體非整倍體篩查結(jié)果

在PGD/PGS周期中，均對每枚可利用囊胚進(jìn)行染色體非整倍體篩查，囊胚培養(yǎng)一般采用集體培養(yǎng)，即3～5枚卵裂期優(yōu)質(zhì)胚胎和非優(yōu)質(zhì)胚胎共同放在一個(gè)微滴里培養(yǎng)，形成的囊胚與卵裂期胚胎不能一一對應(yīng)，因此,未對樣本進(jìn)行優(yōu)質(zhì)胚胎和非優(yōu)質(zhì)胚胎亞分組.目前所開展(PGD/PGS)周期中，有156枚非多核胚胎形成的囊胚，13枚單卵裂球多核胚胎形成的囊胚.非多核胚胎的染色體正常率為48.08%，單卵裂球多核胚胎的染色體正常率為46.15%(見圖2).χ2檢驗(yàn)結(jié)果表明，D2單卵裂球多核組和非多核組的染色體正常率無顯著影響(P>0.05).因此，可認(rèn)為D2單卵裂球多核胚胎經(jīng)過囊胚培養(yǎng)后，其形成的可用囊胚與非多核胚胎形成的可用囊胚的染色體整倍體率無顯著差異.另外，由于D2多卵裂球多核胚胎形成的可用囊胚樣本量較少，未對囊胚染色體整倍體率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.

圖2 胚胎染色體非整倍體篩查結(jié)果Fig.2 Chromosome aneuploidy screening results of embryos

2.4 優(yōu)質(zhì)胚胎臨床結(jié)局

對于優(yōu)質(zhì)胚胎(見表4)，D2單卵裂球多核胚胎組解凍48個(gè)周期，54枚囊胚移植；非多核胚胎組解凍 1 137 個(gè)周期 1 320 枚囊胚移植.兩組患者年齡和平均移植胚胎數(shù)無顯著差異，排除這兩方面對臨床結(jié)局的影響.χ2檢驗(yàn)結(jié)果表明,D2單卵裂球多核組和非多核組的臨床妊娠率、著床率、流產(chǎn)率和活產(chǎn)率均無顯著影響(P>0.05).在兩組中均出現(xiàn)畸形胎兒，但無顯著差異(P=0.455)，并在出生前引產(chǎn).另外,D2多卵裂球多核胚胎形成囊胚的移植周期樣本量較少，因此，未對其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.

表4 MNB優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚解凍周期比較Tab.4 Comparison of thawing cycle of MNB high-quality embryos

2.5 非優(yōu)質(zhì)胚胎臨床結(jié)局比較

對于非優(yōu)質(zhì)胚胎(見表5)，D2單卵裂球多核胚胎組解凍42個(gè)周期，47枚囊胚移植；非多核胚胎組解凍 2 111 個(gè)周期，2 610 枚囊胚移植.兩組在患者年齡和移植胚胎數(shù)上并無顯著差異，可以排除這兩方面對臨床結(jié)局的影響.與對照組相比，D2單卵裂球多核組的臨床妊娠率、著床率、流產(chǎn)率均低于對照組.然而，χ2檢驗(yàn)結(jié)果表明D2單卵裂球多核組和非多核組的臨床妊娠率、著床率、流產(chǎn)率和活產(chǎn)率均無顯著影響(P>0.05).畸形胎兒在對照組出現(xiàn)，而多核組未出現(xiàn).另外，D2多卵裂球多核胚胎形成囊胚的移植周期樣本量較少，因此未對其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.

表5 MNB非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚解凍周期比較Tab.5 Comparison of thawing cycle of MNB non-high-quality embryos

3 討 論

卵裂球多核對胚胎質(zhì)量的影響有多種觀點(diǎn).Elif等[15]報(bào)道妊娠和未妊娠組的卵裂球多核的比例、數(shù)量和觀察到多核的時(shí)間點(diǎn)等均無顯著差異.Aguiar等[19]報(bào)道，單卵裂球多核胚胎的囊胚形成率與對照組無顯著差異，而多卵裂球多核胚胎的囊胚形成率較低，與對照組有顯著差異.本研究對多核胚胎的囊胚發(fā)育情況進(jìn)行了具體分組分析.對于優(yōu)質(zhì)胚胎，D2單卵裂期多核胚胎的囊胚形成率和可用囊胚形成率均與對照組無顯著差異；而D2多卵裂球多核胚胎的囊胚形成率和可用囊胚形成率均與對照組差異顯著(見表2).對于非優(yōu)質(zhì)胚胎，D2多卵裂球多核胚胎的囊胚形成率和可用囊胚形成率均顯著低于對照組；D2單卵裂球多核胚胎的可用囊胚形成率也顯著低于對照組(見表3).本研究結(jié)果與Aguiar等[19]的報(bào)道一致.本研究也發(fā)現(xiàn)，D2單卵裂球多核胚胎，D3大部分卵裂球多核消失，尤其是優(yōu)質(zhì)胚胎；而D2多卵裂球多核胚胎，D3仍有一部分胚胎卵裂球多核，這與Ramirez、王志強(qiáng)等[14,16]研究結(jié)論基本吻合.造成這一現(xiàn)象可能原因是：卵裂球多核胚胎在發(fā)育過程中有自我修復(fù)功能，但多卵裂球多核胚胎的卵裂球異常比例較高，胚胎進(jìn)一步發(fā)育過程中難以得到修復(fù)，導(dǎo)致胚胎凋亡而不能發(fā)育到囊胚；另外，多核優(yōu)質(zhì)胚胎在進(jìn)一步發(fā)育過程中的修復(fù)能力較強(qiáng)，一些多核卵裂球在D2到D3發(fā)育過程得以修復(fù)，多核消失，而非優(yōu)質(zhì)胚胎的修復(fù)能力較差，一些多核卵裂球形成碎片而凋亡，從而影響囊胚形成和囊胚質(zhì)量.綜上，與對照組相比，D2單卵裂球多核優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚形成率和可用囊胚形成率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而D2多卵裂球多核胚胎，無論是優(yōu)質(zhì)胚胎還是非優(yōu)質(zhì)胚胎，其囊胚形成率和可用囊胚形成率均顯著低于對照組.

胚胎低著床率與胚胎高染色體異常率密切相關(guān)[4 ,13].本研究分別對13枚D2單卵裂球多核胚胎形成的囊胚進(jìn)行PGS檢測，染色體正常率為46.15%，與對照組的染色體正常率沒有顯著差異(見圖2)，Balakier、Hashimotos等[30-31]研究支持本研究的結(jié)論，對于D2細(xì)胞期出現(xiàn)多核現(xiàn)象的胚胎，通過對由其發(fā)育而來的囊胚進(jìn)行染色體分析，大約50.0%的囊胚染色體為整倍體，與對照組沒有顯著差異.但部分研究者與本研究的結(jié)果不一致，可能原因是我們的PGS檢測對象是囊胚期胚胎，而其研究的PGS檢測對象是卵裂期胚胎，卵裂球多核胚胎可能通過胚胎自我修復(fù)機(jī)制來進(jìn)行胚胎的早期自我修復(fù)而發(fā)育到囊胚，而不能進(jìn)行自我修復(fù)的胚胎發(fā)育不到囊胚而凋亡.

MNB胚胎移植周期的臨床妊娠結(jié)局有大量研究報(bào)道，但沒有得出統(tǒng)一的結(jié)論.MNB胚胎與低著床率和高流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[10]，F(xiàn)auque等[20]認(rèn)為D2卵裂球多核胚胎移植后種植率沒有顯著變化，但活產(chǎn)率降低.Aguilar等[19]認(rèn)為早期卵裂球多核胚胎與低著床率沒有聯(lián)系.Duke等[18]認(rèn)為卵裂球多核發(fā)育來的優(yōu)質(zhì)囊胚具有較高的種植潛能.Seikkula等[8]對解凍胚胎的研究則認(rèn)為解凍D2多核胚胎移植后種植率沒有顯著變化.本研究將所有的MNB胚胎培養(yǎng)到囊胚進(jìn)行冷凍，解凍囊胚進(jìn)行移植.大量文獻(xiàn)已證實(shí)，囊胚期胚胎的染色體異常率低于卵裂期胚胎，囊胚培養(yǎng)可淘汰掉一部分染色體異常的胚胎，另外囊胚與子宮內(nèi)膜的容受性更好.本研究結(jié)果顯示：無論D3是優(yōu)質(zhì)胚胎還是非優(yōu)質(zhì)胚胎亞組，D2單卵裂球多核胚胎形成囊胚進(jìn)行冷凍解凍移植，其臨床妊娠率、著床率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率、胎兒畸形率與對照組均無顯著差異(表4和表5).我們的結(jié)果與Duke、Seikkula、Aguilar等[8,18,19]研究結(jié)果一致，但與Van Royen、Fauque等[10,20]報(bào)道的結(jié)果不一致，原因可能是不同研究者移植胚胎情況不一樣，有囊胚期胚胎和卵裂期胚胎之分，患者內(nèi)膜條件以及懷孕期間所處環(huán)境等因素均與妊娠結(jié)局相關(guān).有關(guān)移植多核胚胎產(chǎn)生連體胎兒的報(bào)道[13].在本研究中，對照組和D2單卵裂球多核胚胎組均出現(xiàn)流產(chǎn)和胎兒畸形現(xiàn)象，但它們之間差異不顯著(見表4和表5)，產(chǎn)生連體胎兒可能與其他因素有關(guān).

不同研究者和本文作者對MNB胚胎的囊胚形成率、染色體整倍體率及臨床結(jié)局等指標(biāo)研究結(jié)果不一致，分析造成研究結(jié)果差異的原因可能有：不同生殖中心的促排卵方案、胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)及胚胎評分標(biāo)準(zhǔn)不一樣；不同實(shí)驗(yàn)室研究胚胎的發(fā)育階段不一樣，有卵裂期胚胎和囊胚期胚胎之分；另外，不同實(shí)驗(yàn)室研究的胚胎質(zhì)量不一樣.本研究為了排除以上因素造成的影響，采用常規(guī)降調(diào)節(jié)長方案促排卵，實(shí)驗(yàn)室采用統(tǒng)一的培養(yǎng)體系和操作規(guī)程，將多核胚胎分成優(yōu)質(zhì)胚胎和非優(yōu)質(zhì)胚胎兩個(gè)亞組，每個(gè)亞組再根據(jù)出現(xiàn)多核的卵裂球數(shù)目分成三個(gè)組，每個(gè)組培養(yǎng)至囊胚進(jìn)行囊胚移植和對囊胚進(jìn)行染色體分析.本研究的不足之處在于一些組的樣本量較少，如多卵裂球多核胚胎解凍移植周期數(shù)較少，多核胚胎的染色體非整倍體篩查樣本較少，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量去驗(yàn)證.

4 結(jié) 論

經(jīng)過以上分析，得到以下結(jié)論：

1)D2單卵裂球多核胚胎，尤其是單卵裂球多核優(yōu)質(zhì)胚胎具有良好的發(fā)育潛力，其囊胚移植后有良好的臨床結(jié)局.

2)建議在常規(guī)輔助生殖治療中出現(xiàn)的卵裂球多核胚胎繼續(xù)培養(yǎng)至囊胚進(jìn)行囊胚移植，若有條件可進(jìn)行胚胎植入前染色體非整倍體篩查，可以獲得理想的妊娠結(jié)局.