胡錦 ，王小云，張艷軍 ，劉紅梅，王慧，張宏斌 ，鄭霞林*

（1.廣西農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室/廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南寧市 530004；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所 天津市 300191；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部產(chǎn)地環(huán)境污染防控重點實驗室/天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室 天津市 300191；4.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)業(yè)生態(tài)與資源保護總站 北京市 100125）

木瓜秀粉蚧Paracoccus marginatus（Williams&Granara de Willink），隸屬于半翅目（Hemiptera）粉蚧科（Pseudococcidae）秀粉蚧屬（Paracoccus），又稱木瓜粉蚧，原產(chǎn)于墨西哥和中美洲[1]，現(xiàn)已擴散至全球53 個國家[2]。其寄主范圍廣、繁殖速率快、適應(yīng)性強、適生地廣[3]，正逐步成為世界危險性入侵性農(nóng)林害蟲。該蟲雜食性，寄主達(dá)51 科158 屬260 余種，包括果樹、糧食（經(jīng)濟）作物、園林綠化（觀賞）植物等[2]。受該蟲為害后，作物嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收，常給農(nóng)民造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失[4-6]。例如，該蟲于2008年入侵危害斯里蘭卡的科倫坡和加姆珀哈，危害損失高達(dá)60%～100%，平均危害損失達(dá)85.9%[7]；此危害也造成孟加拉國番木瓜約700美元/ha·a的經(jīng)濟損失[6]。

我國于2010 年首次在臺灣省發(fā)現(xiàn)并報道了木瓜秀粉蚧的危害及寄主植物[8]，隨后相繼在云南[9-10]、廣東[11]、海南[12]、福建[13]和江西[14]發(fā)現(xiàn)該蟲在不同寄主上為害。為避免該蟲在我國進(jìn)一步擴散和危害，我國學(xué)者提出了預(yù)警[15-16]，并針對其生物學(xué)特性[17-19]、適生性及風(fēng)險分析[20-22]、與寄主間的相互作用關(guān)系[22-25]、生物防治[26]、化學(xué)防治[27-29]等方面展開了大量研究，為遏制該蟲的進(jìn)一步擴散及制定綜合防控策略提供了基礎(chǔ)資料。

2021 年5 月，筆者在廣西東興的番木瓜Carica papayaL.和茄瓜Solanum melongenaL.上采集到一種粉蚧，經(jīng)形態(tài)和分子鑒定，確定該蟲為木瓜秀粉蚧。這是廣西首次發(fā)現(xiàn)該世界危險性入侵害蟲，其形態(tài)和分子鑒定結(jié)果如下文所述。

1 材料與方法

1.1 材料

2021年5月28日至30日，廣西東興市在開展外來入侵物種踏查中，于馬路鎮(zhèn)竹圍村村路旁的番木瓜（108.041174 °E，21.642753 °N）和馬路村菜地中的茄（107.955600 °E，21.654637 °N）上均發(fā)現(xiàn)一種粉蚧，且發(fā)生嚴(yán)重。記錄其為害狀后，采集帶蟲的植物枝葉置于圓形塑料盒中（高=13.5 cm，底部直徑=12.5 cm，頂部直徑=17.2 cm），采集部分蟲體置于裝有90%酒精的50 mL離心管中，帶回廣西大學(xué)實驗室待用。

1.2 形態(tài)鑒定

參考前人資料[10-11，30]，根據(jù)樣本形態(tài)特征進(jìn)行種類鑒定。

1.3 分子鑒定

1.3.1 基因組DNA提取

將單頭木瓜秀粉蚧置于1.5 mL離心管中，用全自動研磨儀（JXFSTPRP-24，上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司，中國）磨碎蟲體，參照DNeasy Blood&Tissue Ki（t69506，QIAGENE，德國）DNA 提取試劑盒（離心柱型）的方法提取木瓜秀粉蚧DNA備用。

1.3.2 28S rDNA基因序列的擴增、電泳檢測及膠回收

以所得木瓜秀粉蚧DNA 為模板，使用文獻(xiàn)報道的28S rDNA基因引物進(jìn)行PCR擴增[13]。其中上游引物為28S-parF:5′-CGGAATTCAGAATTTGTGGCGTTTAC-3′，下游引物為 28S-marR: 5′-CGGCCATATTACAAGAAT-3′。該引物委托南寧擎科生物公司合成。

PCR 反應(yīng)體系（25 μL 體系）為：Premix Taq ?（Ex Taq ? Version 2.0 plus dye）（RR902A，TaKaRa，中國）12.5 μL，上游引物、下游引物各1 μL，模板DNA 0.5 μL，ddH2O 10 μL；PCR 反應(yīng)參數(shù)為：98℃變性 10s，55℃退火 30s，72℃延伸1 min，運行 30 個循環(huán)。取PCR 產(chǎn)物于1%（w）的瓊脂糖凝膠上，在120 V電壓下電泳40 min后在紫外凝膠成像系統(tǒng)中分析電泳結(jié)果。將電泳所得條帶用Easy-Pure?Quick Gel Extraction Kit（EG101，TransGene，中國）進(jìn)行膠回收。

1.3.3 序列測定與分析

膠回收產(chǎn)物委托南寧擎科生物公司進(jìn)行序列測通測序。將所得的28S rDNA 序列在NCBI 的BLAST 進(jìn)行檢索；下載相似度達(dá)到90%以上的序列，通過DNAMAN軟件進(jìn)行多重序列比對，確定序列檢測結(jié)果。利用MEGA（v7.0）軟件及鄰接法（Neighbor-joining Method，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并對各分支進(jìn)行1 000次Bootstrap檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)鑒定

自然條件下，該粉蚧以若蟲和雌成蟲形態(tài)聚集于番木瓜（圖1A）和茄（圖1B）的嫩梢、嫩葉、枝干和葉背刺吸為害，造成葉片畸形（圖1C）。室內(nèi)鏡檢發(fā)現(xiàn)，雌成蟲體橢圓形，無翅，體背被有較薄白色蠟粉，隱約可見淡黃色體壁（圖1D）；體長1.67～2.65 mm，體緣具16 對較短蠟絲；背腹均具蕈狀腺，分布于體緣近刺孔群處，后足基節(jié)具透明孔，脛節(jié)無腺孔；刺孔群16～17 對；卵囊發(fā)達(dá)，由蠟絲組成（圖1E），卵300～500 余粒；卵長橢圓形，淡黃色（圖1F），鑒定該蟲為木瓜秀粉蚧。

圖1 木瓜秀粉蚧的為害狀及形態(tài)特征

2.2 分子鑒定

2.2.1 木瓜秀粉蚧28S rDNA基因的PCR擴增

通過使用木瓜秀粉蚧28S rDNA 的引物28S parF/marR 對采自廣西東興的番木瓜和茄2 種寄主植物上的粉蚧進(jìn)行PCR擴增，分別得到約428 bp和425 bp的條帶（見圖2）。

圖2 28S rDNA引物28S-parF/marR對2種寄主植物上木瓜秀粉蚧的擴增結(jié)果電泳檢測

將測通后的序列放入NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對分析后發(fā)現(xiàn)，2種寄主植物上的粉蚧與數(shù)據(jù)庫中Paracoccus marginatusisolate S3-668，KP692333 的相似度為100%，確定這2種寄主植物上的粉蚧均為木瓜秀粉蚧。分別將其提交至NCBI 數(shù)據(jù)庫，分配得到登錄號為MZ407948和MZ407949。

2.2.2 系統(tǒng)發(fā)育分析

選擇NCBI數(shù)據(jù)庫比對分析相似度在90%以上物種與試驗測序所得2種不同寄主植物上木瓜秀粉蚧的28S rDNA 基因片段序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。運用MEGA（v7.0）軟件，使用鄰接法且選擇Kimura-2-Parameter 遺傳距離模型構(gòu)建木瓜秀粉蚧的系統(tǒng)發(fā)育樹，并對每個分支進(jìn)行1 000次Bootstrap檢驗。結(jié)果表明，采自廣西東興番木瓜和茄瓜上的木瓜秀粉蚧與Paracoccus marginatus聚為一支，分支支持率為100%。表明目標(biāo)樣本與Paracoccus marginatus為同一物種（見圖3）。

圖3 基于木瓜秀粉蚧28S rDNA基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹

3 討論

木瓜秀粉蚧是全球重要的入侵性物種，超過20多個國家將其列為檢疫對象。我國海關(guān)也曾從進(jìn)境的多種植物上發(fā)現(xiàn)該蟲[15，31]。為此，中華人民共和國海關(guān)總署多次發(fā)文要求針對包括木瓜秀粉蚧在內(nèi)的進(jìn)境植物和水果等加強植物檢疫。目前，該蟲在我國5 個省已有分布和危害的報道，本文首次報道了該蟲在廣西的分布和寄主，使得其在國內(nèi)的分布省份增加至6個。由于此次在廣西調(diào)查時間和地點的局限性，目前該蟲在廣西的分布及寄主與前人報道的結(jié)果[2，10，14]相比略少。然而，風(fēng)險評估分析結(jié)果表明，廣西是木瓜秀粉蚧的高適生區(qū)[3，16]。因此，筆者推測該蟲在廣西實際的地理分布和寄主范圍更加廣泛，需要加強監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)疫情，及時上報和處理，避免其進(jìn)一步擴散和危害。

雖然，本文明確了木瓜秀粉蚧在廣西的地理分布。然而，關(guān)于該蟲的來源還不明確。前人報道了該蟲在越南廣泛分布[32]，在河內(nèi)周年均可發(fā)生，一年中有兩個明顯的發(fā)生高峰期（6月上旬至7月上旬，9月下旬至10 月中下旬），且第二個高峰期的種群密度往往高于第一個高峰期[33]。廣西東興與越南河內(nèi)接壤，筆者推測該蟲可能由越南經(jīng)自然擴散進(jìn)入東興。此外，也不排除廣西境內(nèi)的木瓜秀粉蚧是由國內(nèi)已有該蟲發(fā)生的地區(qū)苗木或果品等調(diào)運傳入廣西，但均需進(jìn)一步研究證實。