皮膚基底細胞癌和鱗狀細胞癌中CD34與CK15蛋白表達的對比研究

袁燕平 汪亮亮 胡佳莉

非黑色素瘤是人類最常見的皮膚惡性腫瘤，主要包括基底細胞癌（BCC）和鱗狀細胞癌（SCC）兩個類型，在美國SCC約占非黑色素瘤性皮膚腫瘤的20%[1，2]。而國內(nèi)的研究則發(fā)現(xiàn)，SCC約占所有皮膚惡性腫瘤的29.4%，幾乎與BCC的28.0%相當[3]。BCC和SCC的病因及發(fā)病機制尚未完全清楚，但大量研究表明可能與以下幾種因素有關(guān)，包括紫外線照射、電離輻射、人乳頭瘤病毒、化學(xué)致癌物、器官移植和免疫抑制等。過去的研究表明二者發(fā)生與皮膚干細胞關(guān)系密切，而CD34和CK15則是公認的皮膚干細胞標志物[4]，因此，本研究借助于免疫組化染色法，觀察二者在非黑色素瘤中的表達情況，闡明二者在腫瘤發(fā)生發(fā)展和鑒別診斷中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料收集2021年1～12月于我院病理科檢驗的35例BCC標本作為實驗組Ⅰ，并選取同期39例SCC標本作為實驗組Ⅱ。實驗組Ⅰ樣本來源為男16例，女19例，年齡39～84歲，平均71歲；實驗組Ⅱ樣本來源為男14例，女25例，年齡35～71歲，平均61歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所獲得的樣本均經(jīng)過患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 實驗方法使用SP法進行檢測，操作流程為：所有標本均經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，以4μm厚連續(xù)切片，微波修復(fù)，3%雙氧水封閉內(nèi)源性過氧化物酶，之后進行血清封閉。依次加入一抗、二抗及鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶，DAB顯色，蘇木精對比染色，常規(guī)脫水、透明、中性樹膠封固。磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。免疫組化染色所用抗體與試劑均購自福州邁新公司，包括CD34（MAB-0034，克隆號QBEnd/10），CK15（MAB-0325，克隆號LHK15），Ultra SensitiveTM SP（鼠/兔）IHC Kit（KIT-9720）和DAB顯色劑。

1.3 結(jié)果判定所有切片均隨機選取5個高倍視野（×40），所有視野均計數(shù)100個病變細胞，計5個視野陽性病變細胞所占百分比和平均值，陽性信號表現(xiàn)為細胞核、細胞質(zhì)或細胞膜呈現(xiàn)為棕黃色或棕褐色；依據(jù)顯色強度與陽性細胞數(shù)評判陽性等級，陽性病變細胞數(shù)＜10%為-，10%～50%為+，50%～75%為++，＞75%為+++；陽性率=陽性表達例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD34在BCC和 SCC中的表達CD34在BCC和SCC中的陽性率分別為54.29%、100.00%。病理表現(xiàn)為腫瘤細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒，CD34在SCC腫瘤細胞核和細胞漿中均有表達。見表1、圖1。

表1 CD34在BCC和SCC中的表達

圖1 CD34在BCC和SCC中的表達

2.2 CK15在BCC和SCC 中的表達CK15在BCC和SCC的陽性率分別為62.86%、17.95%，主要表達在胞漿，部分伴胞核表達，強度不同。見表2、圖2。

表2 CK15在BCC和SCC中的表達

圖2 CK15在BCC和SCC中的表達

3 討論

毛囊隆突部區(qū)域細胞有極高的增殖潛能，此處細胞具有再生為毛囊和皮脂腺組織中所有細胞系的能力，包括毛球部、毛發(fā)纖維、皮脂腺以及毛囊表皮，同時它們還能夠促進損傷皮膚組織的修復(fù)和再生，因此人們普遍認為毛囊隆突部就是毛囊干細胞所在地。通過免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，毛囊隆突區(qū)域處可見CD34+細胞與CK15+細胞，由此CD34和CK15開始被公認為是毛囊干細胞或者皮膚干細胞的主要標志物[4，5]。

對于非黑色素瘤來說最重要的致病因素是紫外線照射，Parisi等[6]選取了澳大利亞昆士蘭地區(qū)部分人群進行了紫外線暴露量的研究，他們選擇教師和其他學(xué)校職員作為第一組代表性樣本，讓其頸部接受（64±22）×10J/m2劑量的紫外線照射，另一組室內(nèi)工作者（包括銀行職員和律師等）接受比第一組少2%劑量的紫外線照射，而最后一組戶外工作者（包括木匠、磚工等）則接受比第一組多10%劑量的紫外線照射，結(jié)果發(fā)現(xiàn)戶外工作者組的BCC和SCC的發(fā)病率明顯高于其他兩組，說明紫外線與皮膚腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。

SCC起源于表皮或附屬器的角質(zhì)形成細胞，是一種侵襲性癌，通常比BCC發(fā)展更加迅速，且更容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，鏡下可見癌組織向下生長，突破基底膜并侵入真皮，呈不規(guī)則團塊狀或條索狀，癌巢通常由正常鱗狀細胞和非典型鱗狀細胞組成。BCC通常生長緩慢，對局部組織具備較強的侵襲性，但是遠處轉(zhuǎn)移現(xiàn)象少見，好發(fā)于頭、面、頸及手背等處，尤其是面部較突出的部位。

BCC和SCC的形態(tài)通常很容易區(qū)分，但在一些特殊情況下，如切片顯示形態(tài)相對模糊時，則會導(dǎo)致無法依據(jù)HE染色來區(qū)分BCC和SCC[7]。使用免疫組織化學(xué)染色有助于鑒別皮膚腫瘤，Shafaei等[8]檢測了CD10在兩種腫瘤中的表達，發(fā)現(xiàn)在20例SCC腫瘤細胞中均未見CD10表達，而有18例（90%）標本的基質(zhì)細胞存在CD10表達。有報道稱在BCC標本中，有25個（59.5%）樣本的腫瘤細胞可見CD10表達，32個（76.2%）樣本的基質(zhì)細胞中可見CD10表達，結(jié)果提示CD10是鑒別BCC和SCC有效的免疫組化標志物[9]，該研究還認為當腫瘤細胞出現(xiàn)CD10陽性表達時，將傾向于BCC的診斷。Abbas等[10]發(fā)現(xiàn)30%的BCC病例中存在CK15表達，而只有1例（5%）SCC病例CK15表達呈陽性，與此同時有60%的BCC和30%的SCC病例存在CK19表達。

BCC和SCC均為皮膚好發(fā)腫瘤，都屬于非黑色素瘤，但是對于二者的細胞起源似乎沒有統(tǒng)一的結(jié)論，Jih等[11]發(fā)現(xiàn)毛發(fā)上皮瘤（TE）和BCC均會表達CK15，毛囊隆突部細胞均表達CK15，而SCC則全部為陰性，Abbas等則發(fā)現(xiàn)CK15在30%BCC中表達，而在SCC中的表達率則低至5%，這些研究似乎都說明BCC和毛囊干細胞的關(guān)系密切，而SCC則可能起源于其他部位。有報道觀察7種細胞角蛋白（Cytokeratin，CK）在皮膚SCC和BCC中的表達[12]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SCC中CK8、10、14、17、18表達陽性，CK7、19陰性，BCC中CK7、10、18陰性，CK8、14、17、19陽性，兩者不同的CK蛋白表型也表明他們的細胞起源不同，在臨床病理的鑒別診斷時可以聯(lián)合檢測多種CK蛋白來準確鑒別腫瘤。本次實驗中發(fā)現(xiàn)CK15在BCC中表達更加廣泛，在腫瘤細胞區(qū)域均有廣泛表達，而在SCC中CK15的表達陽性率則較低，僅有個別呈現(xiàn)弱陽性，這一結(jié)果與之前的研究報道一致。大量的研究均證實，BCC和SCC的發(fā)生可能起源于皮膚或毛囊的干細胞的異常突變，只是二者各自最初的細胞系來源不同，所以會呈現(xiàn)出不同的免疫表型[13，14]，綜合來看CK15可以作為鑒別SCC和BCC的良好標志物。

CD34于1984年被美國科學(xué)家Civin發(fā)現(xiàn)[15]，分子量為110kDa，是高度糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白，其結(jié)構(gòu)包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞漿區(qū)3部分，CD34選擇性地表達于人類及其他哺乳動物造血干/祖細胞（Hemopoietic stem/Progenitor cell，HSC/HPC）表面，并隨細胞的成熟逐漸減弱至消失，因此CD34抗原常作為篩選HSC/HPC的獨特標志物。Trempus等[16]使用CD34特異性抗體對毛囊隆突部角質(zhì)細胞進行檢測，發(fā)現(xiàn)小鼠毛囊隆突區(qū)角質(zhì)細胞呈現(xiàn)強烈的胞膜染色，同時發(fā)現(xiàn)CD34和CK15在該區(qū)存在共表達現(xiàn)象。沈宏等[17]研究檢測了CD34在BCC和毛發(fā)上皮瘤（TE）中的表達情況，發(fā)現(xiàn)在所有BCC中幾乎未見CD34表達，而TE中存在陽性表達，說明大部分BCC不是來源于CD34+細胞，或者說不是來源于毛囊隆突部CD34+細胞。以往研究未見報道CD34在SCC中的表達情況[18]，本研究顯示CD34在SCC中呈廣泛性強表達，且胞漿胞核均可呈現(xiàn)陽性，不過陽性表達還是限于腫瘤癌巢區(qū)，并未擴散到癌巢外面，由此我們推測SCC是起源于毛囊隆突部的CD34+細胞，其細胞起源不同于BCC，利用CD34將有助于對兩種腫瘤進行鑒別診斷。

綜上，CD34和CK15在BCC與SCC中表達存在極大差異，通過免疫組化同時檢測CD34與CK15，可作為鑒別BCC及SCC的重要手段。