山東桃褐腐病病原菌種群鑒定及致病性分析

關(guān)鍵詞：桃褐腐病；山東；種群；rDNA-ITS；致病力

中圖分類(lèi)號(hào)：S662.1 S436.621 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980（2023）02-0327-13

我國(guó)桃種植面積和產(chǎn)量分別為89.0 萬(wàn)hm2 和1 599.3 萬(wàn)t，均居世界第1 位，我國(guó)有20 個(gè)省份的桃種植面積超過(guò)1 萬(wàn)hm2，山東省位居首位，其中蒙陰縣4.33 萬(wàn)hm2，為中國(guó)桃第一大種植縣[1]。桃褐腐病又名菌核病、果腐病、實(shí)腐病，是由子囊菌鏈核盤(pán)菌Monilinia spp. （無(wú)性態(tài)為Monilia）引起的一種重要桃病害，世界產(chǎn)桃區(qū)均可發(fā)生[2]。桃褐腐病主要危害果實(shí)，也可危害花、葉和枝梢。果實(shí)自幼果期至成熟期均可受害，若生長(zhǎng)后期多雨常流行成災(zāi)，發(fā)病率超過(guò)80%甚至絕收[3]，還可在運(yùn)輸、貯藏期發(fā)生，使果實(shí)喪失商品價(jià)值[4]。

在世界范圍內(nèi)，對(duì)核果和仁果類(lèi)果樹(shù)造成褐腐病的病原主要有6 種[5]，分別為核果鏈核盤(pán)菌Monilinialaxa、果生鏈核盤(pán)菌Monilinia fructigena[6]、美澳型核果鏈核盤(pán)菌Monilinia fructicola[7]、梅生鏈核盤(pán)菌Monilinia mumecola （synonymy： Monilia mumecola）[8]、多子座鏈核盤(pán)菌Monilinia polystroma（synonymy： Monilia polystroma） [9]和云南鏈核盤(pán)菌Monilinia yunnanensis （synonymy： Monilia yunnanensis）[10]。目前，造成中國(guó)桃褐腐病病原菌的種主要為Monilinia fructicola、Monilia yunnanensis 和Moniliamumecola，其中Monilinia fructicola 是優(yōu)勢(shì)種[3，10-11]，對(duì)中國(guó)經(jīng)濟(jì)危害最大、地理分布最廣，在中國(guó)各桃產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生[12-16]。Monilia yunnanensis 目前僅在中國(guó)有報(bào)道，為云南省的優(yōu)勢(shì)種，此外在陜西、北京、河北、甘肅及遼寧有分布[10-11，17]。

不同桃褐腐病病原菌在菌落形態(tài)上存在較大差異，可從菌落顏色、生長(zhǎng)速率、孢子形態(tài)及產(chǎn)孢量等形態(tài)學(xué)進(jìn)行初步鑒定[18-19]。但對(duì)一些種間形態(tài)差異較小、培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)性狀變異等不典型菌株的鑒定，傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定就會(huì)受到限制。近年來(lái)形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合分子生物學(xué)鑒定的方法被廣泛應(yīng)用于菌種的鑒定分類(lèi)[20-22]。談彬[23]采用形態(tài)學(xué)觀察與分子生物學(xué)鑒定方法將12 個(gè)省市23 株桃褐腐病病原菌確定為Monilinia fructicola 和Monilia yunnanensis。紀(jì)兆林等[24]的研究表明，山東、遼寧等桃主產(chǎn)區(qū)的桃褐腐病病原菌菌落形態(tài)存在明顯差異，并將桃褐腐病病原菌鑒定為Monilinia fructicola 和Monilia yunnanensis[2]。周芳[25]通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定明確了山西省81株桃褐腐病病原菌的分類(lèi)地位，其中75 株為Monilinia fructigena，15 株為Monilinia laxa，3 株為Monilinia fructicola。另外，致病力方面也存在較大差異，談彬[23]證實(shí)桃褐腐病病原菌致病力差異與多聚半乳糖醛酸酶基因PG1 相關(guān)。

山東省作為全國(guó)產(chǎn)桃大省，對(duì)桃褐腐病的研究報(bào)道主要集中在病害防治、桃褐腐病病原菌發(fā)病規(guī)律等方面，未見(jiàn)關(guān)于褐腐病病原菌種群鑒定及致病力分化方面的研究報(bào)道。為此，筆者在本研究中采集了山東省主要桃產(chǎn)區(qū)典型果實(shí)褐腐病樣本，并通過(guò)對(duì)其進(jìn)行形態(tài)觀察及rDNA-ITS 序列鑒定，對(duì)其種群結(jié)構(gòu)進(jìn)行聚類(lèi)分析，并對(duì)其在葉片上的致病力進(jìn)行比較分析，為明確山東省各桃主產(chǎn)區(qū)桃褐腐病病原菌種類(lèi)、深入研究其致病機(jī)制、制定適合不同產(chǎn)區(qū)的褐腐病防治技術(shù)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

自山東省臨沂、煙臺(tái)、威海等8 市不同地區(qū)采集具有桃褐腐病典型癥狀的發(fā)病果實(shí)、葉片、枝條，將發(fā)病樣品用紙袋分裝帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離純化，4 ℃保存?zhèn)溆?；致病力測(cè)定所用桃樹(shù)葉片品種為金秋紅蜜，采集自煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)內(nèi)。

1.2 試劑及儀器

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基，生工生物工程（上海）股份有限公司；真菌基因組DNA提取試劑盒，天根生化科技（北京）有限公司；BioPhotometer Plus 核酸蛋白測(cè)定儀，Eppendorf中國(guó)有限公司；DM750 顯微鏡，德國(guó)萊卡公司；SPX-250 生化培養(yǎng)箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；RXZ智能型人工氣候箱，寧波江南儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 桃褐腐病病原菌的分離純化 采用單孢分離法進(jìn)行分離。用滅菌挑針挑取發(fā)病部位外緣較新鮮的孢子堆，轉(zhuǎn)接至新鮮PDA平板上培養(yǎng)，并經(jīng)科赫氏法則驗(yàn)證，最后將純化好的菌落切小塊保存于滅菌的25%甘油中，于4 ℃下保存?zhèn)溆茫ū?）。

1.3.2 桃褐腐病病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定 將單孢分離純化后的菌株分別接種到PDA 平板上，置于25 ℃全黑暗生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d 后，觀察菌落形態(tài)和色澤，測(cè)量菌落直徑，并在顯微鏡下觀察分生孢子、分生孢子梗形態(tài)特征，觀察10 個(gè)以上視野，每個(gè)視野觀察50個(gè)孢子，對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.3.3 桃褐腐病病原菌的分子生物學(xué)鑒定 PDA平板上活化菌株5 d 后，將菌絲刮下置于滅菌研缽中加液氮研磨，采用基因組DNA提取試劑盒提取病原菌基因組，于-20 ℃冰箱中保存，備用。委托生工生物工程（上海）股份有限公司利用rDNA-ITS序列引物ITS1（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）/ITS4（5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）進(jìn)行菌株ITS 序列測(cè)定。測(cè)序所得序列與NCBI 中已知的基因序列進(jìn)行BLAST同源性檢索，從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中下載與待測(cè)菌株相似度99%以上的部分桃褐腐菌株及其序列，采用最大似然法和鄰接法，運(yùn)用MEGA 6.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3.4 桃褐腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)速率測(cè)定及產(chǎn)孢量測(cè)定 將各桃褐腐病病原菌菌株于PDA平板上25 ℃培養(yǎng)5 d，采用十字交叉法測(cè)量菌落的直徑，按照如下公式計(jì)算菌絲的平均生長(zhǎng)速率：菌絲平均生長(zhǎng)速率=（菌落直徑-0.5 cm）/5 d；利用DPS 18.10 高級(jí)版，采用DMRT法進(jìn)行顯著性分析，采用歐氏距離中的非加權(quán)組平均法（UPGMA）對(duì)不同菌株生長(zhǎng)速率進(jìn)行聚類(lèi)分析，將菌株按照生長(zhǎng)速率分為不同等級(jí)。

測(cè)量產(chǎn)孢量時(shí)，于菌落邊緣打取5 mm菌餅，接種于PDA培養(yǎng)基上，每菌株3 次重復(fù)，于25 ℃暗培養(yǎng)7 d。用10 mL滅菌水將所有孢子洗下，搜集孢子懸浮液，加入10 顆小玻璃珠，振蕩器振蕩1 min，使孢子分散均勻。各菌株孢子懸浮液濃度用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。每個(gè)菌株3 次重復(fù)，取平均值計(jì)算產(chǎn)孢量。

1.3.5 桃褐腐病病原菌致病力測(cè)定及聚類(lèi)分析 將4 ℃下保存的菌種接種于PDA 平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)5 d 后，用0.5 cm 的打孔器在菌落邊緣打孔制備菌餅。用75%乙醇進(jìn)行桃葉片表面消毒后用無(wú)菌水沖洗3 次，待葉片表皮自然風(fēng)干進(jìn)行有傷接種，用三號(hào)昆蟲(chóng)針刺傷葉片背面表皮，每個(gè)菌株接種3 枚葉片，每枚葉片3 個(gè)接種點(diǎn)，將上述菌餅帶菌絲一面緊貼刺傷部位，空白PDA菌餅為對(duì)照。用無(wú)菌水浸濕的脫脂棉包裹葉柄保鮮葉片，在葉片表面噴無(wú)菌水保濕，放置于溫度為25 ℃、相對(duì)濕度為70%、光照條件為16 h 光照/8 h 黑暗的人工氣候箱中培養(yǎng)，觀察并記錄發(fā)病情況。采用十字交叉法測(cè)量病斑直徑，利用DPS 18.10 高級(jí)版對(duì)發(fā)病程度進(jìn)行差異顯著性及聚類(lèi)分析。

1.3.6 桃褐腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)速率及致病力相關(guān)性分析 利用Excel 對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率及致病力相關(guān)性進(jìn)行分析，0lt;|r|≤0.3，無(wú)相關(guān)性；0.3lt;|r|lt;0.8，弱相關(guān)性；|r|≥0.8，強(qiáng)相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 桃褐腐病田間發(fā)病癥狀

褐腐病病原菌可侵染核果及仁果植物的葉片、枝梢和果實(shí)等多個(gè)部位。葉片受害后，自葉邊緣開(kāi)始變褐枯萎，干枯的病葉殘留枝上久不脫落（圖1-A）；枝條受害后，產(chǎn)生菱形、不規(guī)則形的潰瘍病斑，初為黃褐色，后變?yōu)樯詈稚“甙枷?、界限明顯，不斷向上下擴(kuò)展蔓延，病斑處易形成流膠，可造成病部以上枝條干枯死亡甚至整個(gè)大枝枯死（圖1-B）。果實(shí)受害后，果面最初形成褐色圓形水潰狀小斑點(diǎn)，后迅速擴(kuò)大造成全果腐爛，當(dāng)分生孢子梗突破病斑表層后，呈現(xiàn)成叢的同心輪紋狀的病癥，即分生孢子梗和分生孢子（圖1-C）。部分果實(shí)失水、干縮形成僵果，僵果落到地上，或懸掛枝上經(jīng)久不落。

2.2 山東省不同地區(qū)桃褐腐病病原菌的分離鑒定

2.2.1 桃褐腐病病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定 對(duì)典型桃褐腐病樣本經(jīng)單孢分離純化后共獲得41 株菌株，從菌落形態(tài)觀察主要分為三大類(lèi)。以THF-01 為代表的菌株：菌落邊緣較整齊，顏色呈灰黃色，產(chǎn)孢量豐富，為（14.49-20.11）×10⁴個(gè)·cm^-2（表2），孢子堆可形成同心圓環(huán)結(jié)構(gòu)（圖2-A1）；菌落背面呈圓形邊緣淺灰色，中間顏色較深，邊緣及中心灰色菌圈間夾有白色菌圈（圖2-B1）；分生孢子梗成串珠狀，不分枝或二叉狀分枝，分枝呈銳角形，產(chǎn)孢梗較短（圖2-C1）；分生孢子無(wú)色單孢，串珠狀排列，卵圓形或檸檬形，分生孢子大小范圍為（15.3～18.9）μm×（13.4～14.8）μm，平均孢子大小為16.2～13.5 μm（圖2-D1）。

以THF-06 為代表的菌株：菌落邊緣較整齊，菌絲呈暗灰色，氣生菌絲貼近培養(yǎng)皿（圖2-A2），產(chǎn)孢量稀少，為（0.36～0.43）×104個(gè)·cm^-2（ 表2）；菌落背面黑褐色，邊緣呈灰白色，無(wú)明顯同心輪紋狀結(jié)構(gòu)（圖2-B2）；分生孢子梗成串珠狀，不分枝或二叉狀分枝，分枝呈銳角形，產(chǎn)孢梗長(zhǎng)短不一（圖2-C2）；分生孢子無(wú)色單孢，串珠狀排列，卵圓形或檸檬形，分生孢子大小范圍為（14.9～18.0）μm×（13.6～14.9）μm，平均孢子大小為16.6～13.4 μm（圖2-D2）。

以THF-14 為代表的菌株：菌落邊緣不整齊，呈不規(guī)則形或圓形，邊緣有明顯裂缺，菌絲灰白色，氣生菌絲較發(fā)達(dá)（圖2-A3），產(chǎn)孢量較少，為（8.43～9.47）×104個(gè)·cm^-2（表2）；菌落背面邊緣灰白色，中間深灰色及淺灰色交替呈同心輪紋狀（圖2-B3）；分生孢子梗成串珠狀，不分枝或二叉狀分枝，分枝呈銳角形，產(chǎn)孢梗較長(zhǎng)（圖2-C3）；分生孢子無(wú)色單孢，串珠狀排列，卵圓形或檸檬形，分生孢子大小范圍為（15.6～18.2）μm×（14.4～15.8）μm，平均孢子大小為17.2～14.9 μm（圖2-D3）。

2.2.2 桃褐腐病病原菌的分子生物學(xué)鑒定 從NCBIGenBank 下載相似性最高的同種和近似種褐腐病病原菌菌株以及桃樹(shù)黑斑病菌（Alternaria alter-nata，GenBank 登錄號(hào)為AF404664.1、OL958426.1）及炭疽病菌（Colletrichum gloeosporioides，GenBank登錄號(hào)為JX010152.1，AY423476.1）序列，用MEGA6.0 軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。采用最大似然法和鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，自展值設(shè)為1000，基于rDNA-ITS 序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)結(jié)果表明，桃褐腐病病原菌菌株共分為三大類(lèi)，第Ⅰ類(lèi)包括THF-01 等菌株，共33 株，該類(lèi)與Monilinia fructicola（GenBank登錄號(hào)為MZ047241.1，EF207419.1）聚在一個(gè)分支上，相似性高達(dá)99%，將其鑒定為Monilinia fructicola；第Ⅱ類(lèi)包括THF-06 等菌株，共4 株，該類(lèi)與Moniliayunnanensis（GenBank 登錄號(hào)為MW355895.1）聚在一起，相似性高達(dá)100%，將其鑒定為Moniliayunnanensis；第Ⅲ類(lèi)包括THF-14 等菌株，共4 株，該類(lèi)與Monilinia polystroma（GenBank 登錄號(hào)為L(zhǎng)T615178.1、LT615192.1）聚在一個(gè)分支上，相似性為99%，將其鑒定為Monilinia polystroma（圖3）。

2.2.3 山東省不同地區(qū)桃褐腐病病原菌的分布 經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定，確定山東省桃褐腐病病原菌為Monilinia fructicola、Monilia yunnanensis 和Monilinia polystroma，分別有33 株、4 株和4 株，其分離頻率分別為80.48%、9.76%和9.76%，具體分布如表1 所示。Monilinia fructicola 廣泛分布于山東省煙臺(tái)、青島等沿海及臨沂、濟(jì)南等內(nèi)陸大部分地區(qū)，Monilia yunnanensis 僅存在于煙臺(tái)市，Moniliniapolystroma分布于煙臺(tái)市及青島市（表3）。

2.3 山東省不同地區(qū)桃褐腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)速率分析

對(duì)桃褐腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)速度進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示生長(zhǎng)速率在0.47～1.09 cm?d^-1之間（表2）。采用UPGMA對(duì)不同菌株生長(zhǎng)速率進(jìn)行聚類(lèi)分析（圖4），當(dāng)歐式距離取0.7時(shí)，41個(gè)供試菌株的生長(zhǎng)速率被劃分為快速、中速和慢速3種類(lèi)型。生長(zhǎng)速率為快速類(lèi)型的菌株有17株，占測(cè)定菌株的41.46%，菌株生長(zhǎng)速率為0.95～1.09 cm?d^-1，平均生長(zhǎng)速率為1.00 cm?d^-1；生長(zhǎng)速率為中速類(lèi)型的菌株為9 株，占測(cè)定菌株的21.95%，菌株生長(zhǎng)速率為0.79～0.94 cm?d^-1，平均生長(zhǎng)速率為0.87 cm?d^-1；生長(zhǎng)速率為慢速類(lèi)型的菌株有15株，占測(cè)定菌株的36.59%，菌株生長(zhǎng)速率為0.47～0.75 cm?d^-1，平均生長(zhǎng)速率為0.62 cm?d^-1。結(jié)果表明，山東省桃褐腐病病原菌以快、慢生長(zhǎng)速率類(lèi)型為主。

2.4 山東省不同地區(qū)桃褐腐病病原菌致病力分析

將桃褐腐病病原菌有傷接種到離體桃葉片，測(cè)量其病斑大小，結(jié)果顯示不同菌株對(duì)桃葉片的致病力存在明顯差異（表2）。采用UPGMA對(duì)不同桃褐腐病病原菌菌株的致病力進(jìn)行了聚類(lèi)分析（圖5-B），當(dāng)歐式距離取0.4 時(shí)，41 個(gè)供試菌株被劃分為強(qiáng)致病力、中等致病力、弱致病力三種類(lèi)型。強(qiáng)致病力的菌株共14 株，占測(cè)定菌株的34.15%，病斑長(zhǎng)度為1.11～2.43 cm；中等致病力的菌株共25 株，占測(cè)定菌株的60.97%，病斑長(zhǎng)度為0.75～1.02 cm；弱致病力的菌株共2 株，占測(cè)定菌株的4.88%，無(wú)病斑產(chǎn)生（表2，圖5-A）。對(duì)接種發(fā)病的病斑進(jìn)行再次分離，經(jīng)柯赫氏法則及分子生物學(xué)鑒定確定為原病菌菌株。

2.5 桃褐腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)速率及產(chǎn)孢量與致病力相關(guān)性分析

對(duì)桃褐腐病病原菌菌株的生長(zhǎng)速率與致病力進(jìn)行相關(guān)性分析（圖6），其相關(guān)系數(shù)r為0.297 5，0＜|r|≤0.3，顯示菌絲生長(zhǎng)速率與致病力之間無(wú)相關(guān)性；對(duì)桃褐腐病病原菌菌株的產(chǎn)孢量與致病力進(jìn)行相關(guān)性分析（圖7），其相關(guān)系數(shù)r 為0.030 0，0＜|r|≤0.3，顯示產(chǎn)孢量與致病力之間無(wú)相關(guān)性。

3 討論

山東省桃種植面積和產(chǎn)量均為中國(guó)第一，桃已成為山東省主導(dǎo)的水果產(chǎn)業(yè)，是全國(guó)第一產(chǎn)桃大省。桃褐腐病病原菌可在花期至收獲貯藏期造成嚴(yán)重危害，嚴(yán)重威脅桃產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[3-4，26]。而不同產(chǎn)區(qū)的桃褐腐病病原菌在形態(tài)及致病力方面均存在較大差異[2，23]，因此針對(duì)不同桃褐腐病病原菌種類(lèi)制定適合不同產(chǎn)區(qū)的防治技術(shù)對(duì)于桃褐腐病病原菌的防控至關(guān)重要。

筆者在本研究中對(duì)山東桃褐腐病病原菌進(jìn)行菌落形態(tài)觀察及ITS 序列比對(duì)分析，確定了山東省桃褐腐病病原菌主要為Monilinia fructicola，而Moniliayunnanensis 和Monilinia polystroma 占比較低。在形態(tài)學(xué)觀察鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)，3 種桃褐腐病病原菌在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)存在較大差異，分生孢子梗長(zhǎng)短不一，存在顯著差異，分生孢子形態(tài)無(wú)明顯差異，但產(chǎn)孢量存在顯著差異：Monilinia fructicola產(chǎn)孢量最多，Monilinia polystroma 產(chǎn)孢量次之，Moniliayunnanensis 產(chǎn)孢量最少。其中Monilinia fructicola形態(tài)與周芳[25]、Hu等[10]及尹良芬[3]對(duì)Monilinia fructicola的菌落形態(tài)描述一致，且該菌種在山東省占比最大，這與紀(jì)兆林等[24]對(duì)中國(guó)桃產(chǎn)區(qū)桃褐腐病病原菌的鑒定結(jié)果一致，在山東省青島及泰安地區(qū)分離到的桃褐腐病病原菌均鑒定為Monilinia fructicola，且占比最大，而周芳[25]對(duì)山西省桃褐腐病病原菌調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)Monilinia fructigena 在山西省桃褐腐病病原菌中為優(yōu)勢(shì)菌群，這也證實(shí)了不同地區(qū)桃褐腐病病原菌菌群結(jié)構(gòu)差異較大，進(jìn)行廣泛深入的菌群結(jié)構(gòu)調(diào)查是有效防治桃褐腐病病原菌的重要研究基礎(chǔ)。

Monilia yunnanensis 和Monilinia polystroma 占比較低可能與寄主選擇性及針對(duì)不同病原菌抗病性差異有關(guān)。僅在煙臺(tái)地區(qū)采集的Monilia yunnanensis為Hu 等[10]首次在蘋(píng)果和梨上發(fā)現(xiàn)的1 個(gè)新記錄種，其菌落形態(tài)特征與Hu等[10]及紀(jì)兆林等[24]的描述一致，產(chǎn)孢稀少，氣生菌絲緊貼培養(yǎng)基表面，難與培養(yǎng)基表面分離。Monilia yunnanensis 最早發(fā)現(xiàn)于云南，為云南的優(yōu)勢(shì)種，后來(lái)在北京、陜西及遼寧沈陽(yáng)等部分地區(qū)也采集到[10-11，17]，而筆者在本研究中首次發(fā)現(xiàn)證實(shí)在山東省桃果實(shí)上也分離得到了Moniliayunnanensis，這也暗示Monilia yunnanensis 傳播范圍在逐步擴(kuò)大，山東省乃至全國(guó)桃種植區(qū)褐腐病病原菌的種類(lèi)日趨多樣化，對(duì)桃主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行褐腐病病原菌的全面分離鑒定對(duì)其防控是十分必要的。

41 株桃褐腐病病原菌菌株的菌絲生長(zhǎng)速率也存在較大差異，菌絲生長(zhǎng)速率從0.47～1.09 cm?d^-1不等，聚類(lèi)分析證實(shí)，生長(zhǎng)速率可被劃分為慢、中、快三大類(lèi)，即使同一菌種不同菌株間菌絲生長(zhǎng)速率也存在差異，這些差異或與地理氣候特點(diǎn)有關(guān)，或是菌株適應(yīng)了當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件被賦予了一定的生物學(xué)特性。這暗示褐腐病病原菌存在豐富的生理生化多樣性，而這也為該病的防控帶來(lái)了一定的困難[24]。同時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速率的差異暗示可能在侵染寄主時(shí)存在致病力的差異，在對(duì)致病力進(jìn)行測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)41 株桃褐腐病病原菌確實(shí)在致病力方面存在較大差異，而致病力差異與菌絲生長(zhǎng)速率差異類(lèi)似，在不同菌種間不存在特異性。對(duì)其菌絲生長(zhǎng)速率及致病力進(jìn)行相關(guān)性分析后證實(shí)二者無(wú)相關(guān)性，這也暗示在實(shí)際侵染寄主時(shí)菌絲擴(kuò)展速率并不能與致病力及危害性直接相關(guān)。41 株桃褐腐病病原菌的產(chǎn)孢量也存在較大差異，研究證實(shí)真菌的致病毒素在桃樹(shù)發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用[27]，而毒素可由孢子萌發(fā)產(chǎn)生，產(chǎn)孢量多意味著產(chǎn)生毒素多，對(duì)寄主植物的致病力越強(qiáng)[28]，但本研究中證實(shí)不同桃褐腐病病原菌的產(chǎn)孢量與致病力無(wú)相關(guān)性。致病力差異還與多種因素有關(guān)，例如細(xì)胞壁降解酶活性及主要致病因子多聚半乳糖醛酸酶基因PG1 與桃褐腐病病原菌致病性密切相關(guān)[23]。因此，在不同桃褐腐病病原菌致病力差異機(jī)制方面應(yīng)進(jìn)行更深入全面的研究。

筆者在本研究中對(duì)山東桃褐腐病病原菌種類(lèi)進(jìn)行了較全面的鑒定及抗病性分析，初步確定了桃褐腐病病原菌的種類(lèi)及占比。但仍存在部分地區(qū)菌株數(shù)較少的限制，今后有必要擴(kuò)大和增加不同產(chǎn)區(qū)褐腐病病原菌菌株數(shù)量，進(jìn)行更多地區(qū)桃褐腐病病原菌的生物學(xué)特性研究，并結(jié)合分子生物學(xué)研究，對(duì)其致病力機(jī)制進(jìn)行深入探索，完善不同產(chǎn)區(qū)病菌群體的多樣性分析，為不同產(chǎn)區(qū)桃褐腐病病原菌的有效防控提供理論基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

引起山東省桃褐腐病病原菌有美澳型核果鏈核盤(pán)菌（Monilinia fructicola）、云南鏈核盤(pán)菌（Moniliayunnanensis）及多子座鏈核盤(pán)菌（Monilia polystroma），三者占比分別為80.48%、9.76%、9.76%，其中美澳型核果鏈核盤(pán)菌為優(yōu)勢(shì)種。3種桃褐腐病病原菌的菌絲生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量均與致病力無(wú)相關(guān)性。