燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)對外源H2O2引發(fā)的響應(yīng)

摘要：本研究探討了外源H₂O₂引發(fā)后，燕麥（Avena sativa）種胚細(xì)胞和線粒體抗壞血酸（Ascorbic acid，AsA）-谷胱甘肽（Glutathione，GSH）循環(huán)的抗氧化性能的變化規(guī)律，以期為植物種子的長期貯藏技術(shù)研究提供理論依據(jù)。試驗以燕麥種子為材料，用濃度為0，0.96，1.92，3.84和7.68 mol·L^-1的H₂O₂引發(fā)12 h后，分析其種胚細(xì)胞和線粒體脂質(zhì)過氧化水平、AsA-GSH循環(huán)中酶促和非酶促抗氧化物質(zhì)的變化規(guī)律。結(jié)果表明：燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)AsA和GSH含量會隨外源H₂O₂濃度的增加而顯著降低（Plt;0.05），其AsA-GSH循環(huán)的酶活性、脫氫抗壞血酸和氧化型谷胱甘肽含量均呈先升后降的趨勢，其H₂O₂和丙二醛含量顯著升高（Plt;0.05），燕麥種子發(fā)芽率則顯著降低（Plt;0.05）。燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)的抗氧化功能變化對H₂O₂濃度升高的響應(yīng)具有協(xié)同性，其抗氧化能力下降導(dǎo)致高濃度（≥1.92 mol·L^-1）外源H₂O₂引發(fā)下燕麥種子發(fā)芽率降低，而其AsA含量及再生能力的降低是造成這一現(xiàn)象的主要原因。

關(guān)鍵詞：抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)；線粒體；過氧化氫；燕麥；種子引發(fā)

中圖分類號：S512.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1007-0435（2023）04-1064-07

Response of AsA-GSH Cycles to Exogenous H₂O₂ Priming in the Embryonic

Cells and Mitochondria of Oat Seeds

LI Hong-yu， WANG Ya-cong， XIA Fang-shan WANG Bo， LI Yin-lin， ZHANG Jie-min

（College of Grassland Science， Shanxi Agricultural University， Taigu， Shanxi Province 030801， China）

Abstract：In this study，the changes in the antioxidant properties of ascorbic acid （AsA）-glutathione （GSH） cycles were explored as a response to exogenous H₂O₂ priming in the embryonic cells and mitochondria of oat （Avena sativa） seeds，which provided a theoretical basis for the long-term storage of plant seeds. Oat seeds were primed with 0，0.96，1.92，3.84 and 7.68 mol·L^-1 H₂O₂ for 12 h as the experimental materials，and the changes in lipid peroxidation and enzymatic and non-enzymatic antioxidants in AsA-GSH cycles were analyzed in both their embryonic cells and mitochondria. The results showed that the AsA and GSH contents were significantly decreased in the embryonic cells and mitochondria （Plt;0.05），and enzymatic activities of AsA-GSH cycles and contents of dehydroascorbate and oxidized glutathione were all with a pattern of increasing firstly and then decreasing. H₂O₂ and malondialdehyde contents were also significantly increased （Plt;0.05），and thus the germination percentage of oat seeds was reduced significantly （Plt;0.05）. Embryonic cells and mitochondria showed similar results of changes of AsA-GSH cycles in response to the increase of H₂O₂ concentration，and the damage on their antioxidant capacity resulted in the decrease of seed germination under priming with high concentration （≥1.92 mol·L^-1） of exogenous H₂O₂. It might be caused largely by the decrease of AsA content and its continuous production.

Key words：Ascorbic acid-glutathione cycles;Mitochondria;Hydrogen peroxide;Oat;Seed priming

種業(yè)是決定國家穩(wěn)定發(fā)展的基礎(chǔ)性和戰(zhàn)略性核心產(chǎn)業(yè)，已成為推動我國農(nóng)牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的重要引擎［1］。種子活力水平是直接決定著民族種業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的關(guān)鍵因素，其在儲藏中會因為活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的不斷積累而逐步降低［2］。H₂O₂的產(chǎn)生與清除是植物維持細(xì)胞內(nèi)ROS動態(tài)平衡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其過量積累成為引起貯藏種子活力不斷下降的關(guān)鍵原因［3-4］。線粒體是種胚細(xì)胞內(nèi)最主要的細(xì)胞器，其既是種胚細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的最主要來源，又是種胚細(xì)胞內(nèi)ROS攻擊的首要目標(biāo)，因而是對種子劣變最敏感的細(xì)胞器［5］?？箟难幔ˋscorbic acid，AsA）-谷胱甘肽（Glutathione，GSH）循環(huán)是種子內(nèi)維持其壽命的諸多系統(tǒng)中最為活躍的核心環(huán)節(jié)，因而是種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)維持ROS穩(wěn)態(tài)的重要渠道［6-7］。研究發(fā)現(xiàn)，輕度老化會誘導(dǎo)植物種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)AsA-GSH循環(huán)中抗壞血酸過氧化物酶（Ascorbate peroxidase，APX），谷胱甘肽還原酶（Glutathione reductase，GR），超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD），脫氫抗壞血酸還原酶（Dehydroascorbate reductase，DHAR）和單脫氫抗壞血酸還原酶（Monodehydroasorbate reductase，MDHAR）活性升高，其H₂O₂和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量維持一個相對較低的水平，因而其種子活力也基本未降低，但重度老化時則出現(xiàn)完全相反的現(xiàn)象［8-11］。外源H₂O₂引發(fā)下燕麥種胚細(xì)胞和線粒體中也發(fā)現(xiàn)了相似的變化規(guī)律［12-13］。老化燕麥種子的種胚細(xì)胞與線粒體在引發(fā)過程中會協(xié)同發(fā)揮作用，且線粒體是其發(fā)揮清除ROS作用的最主要部位［14］。然而，植物種胚細(xì)胞及線粒體AsA-GSH循環(huán)如何協(xié)同響應(yīng)外源H₂O₂引發(fā)處理尚未見報道，其是否與老化種子的引發(fā)處理具有相同的規(guī)律也仍然不清楚。所以本試驗旨在探討燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)對不同濃度外源H₂O₂引發(fā)的響應(yīng)，以驗證內(nèi)源H₂O₂含量變化與種子活力水平的內(nèi)在關(guān)系，從而為精確揭示種子老化的內(nèi)在抗氧化機制提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1H₂O₂引發(fā)處理

將均勻飽滿的‘太陽神’燕麥種子（具體來源及詳細(xì)信息見文獻(xiàn)［12-13］）分為約10 g每份，并參照文獻(xiàn)［15］的方法將其含水量調(diào)整至鮮重基礎(chǔ)約10%，然后用200 mL濃度分別為0，0.96，1.92，3.84和7.68 mol·L^-1的H₂O₂在室溫黑暗條件下浸泡12 h后，快速用蒸餾水沖洗3次，用濾紙吸掉其表層水分后，于室溫黑暗環(huán)境中風(fēng)干至含水量10%（鮮重基礎(chǔ)）左右時進(jìn)行密封，并于4℃下保存?zhèn)溆?。以未引發(fā)處理的燕麥種子作為對照（CK）。每個處理重復(fù)4次。

1.2發(fā)芽試驗

按照國際種子檢驗協(xié)會發(fā)布的種子檢驗規(guī)程（2017）［16］規(guī)定的條件進(jìn)行，具體操作方法參照文獻(xiàn)［17］進(jìn)行，并按照公式Gp=（G₁₀/N）×100%來計算其發(fā)芽率，式中Gp代表種子發(fā)芽率，G₁₀代表末次計數(shù)第10天時的正常發(fā)芽種子數(shù)，N代表供試發(fā)芽種子的總數(shù)［16］。

1.3生理指標(biāo)的測定

提取種胚細(xì)胞粗酶液參考Kibinza等［18］的方法，具體操作參照文獻(xiàn)［12］進(jìn)行；提取與純化種胚線粒體則參照Yin等［19］的方法，具體操作參照文獻(xiàn)［13］進(jìn)行。測定可溶性蛋白和H₂O₂含量采用了建成生物工程研究所的試劑盒，測定MDA含量參考Bailly等［20］的方法，測定SOD活性參考Rao等［21］的方法，測定APX和DHAR活性參考Nakano等［22］的方法，測定MDHAR活性參考Arrigoni等［23］的方法，測定GR活性參考Esterbauer等［24］的方法，測定AsA和脫氫抗壞血酸（Dehydroascorbic acid，DHA）含量參照Kampfenkel等［25］的方法，測定GSH和氧化型谷胱甘肽（Oxidized glutathione，GSSG）含量參照Griffith［26］的方法。

1.4數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 21.0和Excel 2010統(tǒng)計軟件整理試驗數(shù)據(jù)，并進(jìn)行方差分析，多重比較則用Duncans法（P＜0.05），以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示最后結(jié)果。

2結(jié)果與分析

2.1燕麥種子發(fā)芽率的變化

由圖1可知，燕麥種子的發(fā)芽率在H₂O₂濃度為0 mol·L^-1時與CK無顯著性差異，但在H₂O₂濃度≥0.96 mol·L^-1時顯著低于CK（Plt;0.05），且在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時為0。

2.2燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)H2O2和MDA含量變化

燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)MDA和H₂O₂含量隨H₂O₂濃度的增大呈不斷上升趨勢（圖2）。0 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)MDA，H₂O₂含量均與CK無顯著性差異，但0.96～7.68 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)MDA和H₂O₂含量呈顯著升高趨勢（Plt;0.05），且均顯著高于CK（Plt;0.05）。H₂O₂濃度為0～1.92 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞內(nèi)H₂O₂含量低于線粒體內(nèi)，但H₂O₂濃度為3.84 mol·L^-1和7.68 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞內(nèi)H₂O₂含量則高于線粒體內(nèi)；H₂O₂濃度為0和0.96 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞內(nèi)MDA含量低于線粒體內(nèi)，但H₂O₂濃度為1.92～7.68 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞內(nèi)MDA含量則高于線粒體內(nèi)。

2.3燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)抗氧化酶活性變化

燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)SOD，APX，GR，MDHAR和DHAR活性隨H₂O₂濃度的增大呈先升后降趨勢（圖3）。H₂O₂濃度為0 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)SOD，APX，GR，MDHAR和DHAR活性都與CK無顯著性差異。種胚細(xì)胞SOD和GR活性在H₂O₂濃度為1.92 mol·L^-1時顯著高于其他濃度時（Plt;0.05），但其種胚線粒體SOD和GR活性在0.96 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時顯著高于其他濃度時（Plt;0.05）；種胚細(xì)胞及線粒體SOD活性在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時仍均顯著高于CK（Plt;0.05），種胚細(xì)胞GR活性在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時也仍顯著高于CK（Plt;0.05），但其種胚線粒體GR活性在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時則顯著低于CK（Plt;0.05）。種胚細(xì)胞APX活性在H₂O₂濃度為0.96 mol·L^-1時顯著高于其他濃度時（Plt;0.05），其種胚線粒體APX活性在1.92 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時顯著高于其他濃度時（Plt;0.05）；種胚細(xì)胞APX活性在H₂O₂濃度為3.84 mol·L^-1時已顯著低于CK（Plt;0.05），但其種胚線粒體APX活性在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時才顯著低于CK（Plt;0.05）。種胚細(xì)胞和線粒體MDHAR和DHAR活性在0.96 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時均顯著高于其他濃度時（Plt;0.05）；種胚細(xì)胞MDHAR和DHAR活性在H₂O₂濃度為3.84 mol·L^-1時均已顯著低于CK（Plt;0.05），其種胚線粒體MDHAR活性則在H₂O₂濃度為1.92 mol·L^-1時就已顯著低于CK（Plt;0.05），而種胚線粒體DHAR活性則在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時才顯著低于CK（Plt;0.05）。

2.4燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)AsA含量變化

隨著H₂O₂引發(fā)濃度的增加，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)AsA含量均呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，而兩者DHA含量則均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢（圖4）。H₂O₂濃度為0 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞內(nèi)AsA含量顯著高于CK（Plt;0.05），但其種胚線粒體內(nèi)AsA含量則與CK無顯著性差異，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)DHA含量均與CK無顯著性差異。燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA含量均在H₂O₂濃度為0.96 mol·L^-1時就顯著低于CK（Plt;0.05），在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時顯著低于其他濃度（Plt;0.05）；燕麥種胚細(xì)胞DHA含量在H₂O₂濃度為0.96 mol·L^-1時快速上升，并顯著高于其他濃度時（Plt;0.05），而其種胚線粒體DHA含量在1.92 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時仍顯著高于其他濃度時（Plt;0.05），且其種胚細(xì)胞和線粒體DHA含量均在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時仍顯著高于CK（Plt;0.05）。

2.5燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)GSH含量變化

隨著H₂O₂引發(fā)濃度的增加，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)GSH含量均呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，而其種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)GSSG含量則均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢（圖5）。H₂O₂濃度為0 mol·L^-1時，燕麥種胚細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量均與CK無顯著差異。燕麥種胚細(xì)胞和線粒體GSH含量均在H₂O₂濃度為0.96 mol·L^-1時已顯著低于CK（Plt;0.05），在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時顯著低于其他濃度（Plt;0.05）；燕麥種胚細(xì)胞和線粒體GSSG含量在H₂O₂濃度為0.96 mol·L^-1時均顯著高于其他濃度時（Plt;0.05），而在7.68 mol·L^-1 H₂O₂引發(fā)時均顯著低于其他濃度時（Plt;0.05）；但燕麥種胚細(xì)胞GSSG含量在H₂O₂濃度為3.84 mol·L^-1時已顯著低于CK（Plt;0.05），而其種胚線粒體GSSG含量則在H₂O₂濃度為7.68 mol·L^-1時才顯著低于CK（Plt;0.05）。

3討論

H₂O₂在植物體內(nèi)所發(fā)揮的生理生化作用具有明顯的濃度效應(yīng)，低濃度時是植物細(xì)胞內(nèi)抵御各種非生物脅迫的小分子信號物質(zhì)，但高濃度時則會引起植物細(xì)胞的程序性死亡［27-28］。因此，外源H2O2引發(fā)處理對種子萌發(fā)的影響與其濃度具有密切關(guān)系［17］。本試驗發(fā)現(xiàn)，低濃度（0.96 mol·L^-1）H₂O₂引發(fā)處理時，燕麥種子發(fā)芽率與濃度為0 mol·L^-1及CK間無顯著性差異，說明低濃度的H₂O₂引發(fā)能使高活力（發(fā)芽率可達(dá)100%）燕麥種子的發(fā)芽率保持較高水平，這與前人在水稻（Oryza sativa）［29］、臭椿（Ailanthus altissima）［30］及莖瘤芥（Brassica juncea）［31］等植物種子的研究中存在差異，主要是因為前人所有種子的發(fā)芽率幾乎都不高于80%，而低活力種子需要一定的H₂O₂誘導(dǎo)才能激活其萌發(fā)代謝及相關(guān)免疫反應(yīng)［17］。高濃度（≥1.92 mol·L^-1）H₂O₂引發(fā)處理時，燕麥種子發(fā)芽率顯著降低（Plt;0.05），濃度為7.68 mol·L^-1時已基本喪失活力，這與在水稻［29］、臭椿［30］及莖瘤芥［31］等植物種子中的研究結(jié)論相似。這可能是高濃度H₂O₂處理使其在植物種子內(nèi)迅速積累而導(dǎo)致了細(xì)胞膜系統(tǒng)的損傷，從而造成種子內(nèi)電解質(zhì)和大量代謝物質(zhì)的外滲，最終表現(xiàn)為種子喪失活力［32］。

燕麥種子內(nèi)H₂O₂的過量積累會使其抗氧化酶活性大幅度降低，并導(dǎo)致其種胚細(xì)胞和線粒體發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，表現(xiàn)為兩者M(jìn)DA含量大量增加［9-10］。因此，高濃度H₂O₂引發(fā)處理引起的脂質(zhì)過氧化損傷可能是導(dǎo)致燕麥種子活力逐漸喪失的主要原因［17］。試驗中，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體SOD，APX，GR，MDHAR和DHAR活性，以及兩者內(nèi)MDA，H₂O₂，AsA，GSH，DHA和GSSG含量變化均具有相同的規(guī)律，說明燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)對于外源H₂O₂引發(fā)的響應(yīng)具有協(xié)同性，這與PEG引發(fā)下老化燕麥種子的響應(yīng)一致［14］。低濃度（0.96 mol·L^-1）H₂O₂引發(fā)處理時，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)H₂O₂含量已均顯著高于濃度為0 mol·L^-1及CK（Plt;0.05），這說明已經(jīng)造成了燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)H₂O₂積累，因而其MDA含量也顯著高于CK（Plt;0.05），表明發(fā)生了脂質(zhì)過氧化損傷。此時，燕麥種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)SOD，APX，GR，MDHAR和DHAR活性也均顯著高于濃度為0 mol·L^-1及CK（Plt;0.05），這說明此時燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)的關(guān)鍵酶仍具有較高的清除ROS的能力，因而其AsA和GSH含量會顯著低于濃度為0 mol·L^-1及CK（Plt;0.05），且其DHA和GSSG含量則均顯著高于濃度為0 mol·L^-1及CK（Plt;0.05），這說明AsA和GSH被作為AsA-GSH循環(huán)的底物而大量用于清除種胚細(xì)胞及線粒體內(nèi)ROS［33］。然而H₂O₂濃度為1.92 mol·L^-1時，盡管燕麥種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)的關(guān)鍵酶的活性仍保持較高水平，但其抗氧化能力已經(jīng)開始逐漸減弱，表現(xiàn)為其種胚細(xì)胞和線粒體MDHAR和DHAR活性顯著低于H₂O₂濃度為0.96 mol·L^-1時（Plt;0.05），其AsA和GSH含量也繼續(xù)顯著降低（Plt;0.05），因而其H₂O₂和MDA含量也繼續(xù)顯著增加（Plt;0.05），燕麥種子的發(fā)芽率也顯著降低（Plt;0.05）。種子內(nèi)AsA-GSH循環(huán)中MDHAR，DHAR及GSH的主要功能是使循環(huán)中AsA能夠再生［33］，因而高濃度H₂O₂造成AsA含量及其再生功能降低是導(dǎo)致燕麥種子活力喪失的主要原因，這是因為燕麥種子內(nèi)MDHAR和DHAR對于AsA的再生具有更重要的催化作用［15，34］。

4結(jié)論

燕麥種子發(fā)芽率在高濃度外源H₂O₂引發(fā)下降低是其種胚細(xì)胞和線粒體AsA-GSH循環(huán)的抗氧化功能降低造成的，二者對H₂O₂濃度升高的響應(yīng)具有協(xié)同性，而種胚細(xì)胞和線粒體內(nèi)AsA含量及其再生功能降低是高濃度H₂O₂造成燕麥種子活力逐漸喪失的主要原因。

參考文獻(xiàn)

［1］鄭懷國，趙靜娟，秦曉婧，等. 全球作物種業(yè)發(fā)展概況及對我國種業(yè)發(fā)展的戰(zhàn)略思考［J］. 中國工程科學(xué)，2021，23（4）：45-55

［2］EBONE L A，CAVERZAN A，CHAVARRIA G. Physiologic alterations in orthodox seeds due to deterioration processes ［J］. Plant Physiology and Biochemistry，2019（145）：34-42

［3］LI Y，WANG Y，XUE H，et al. Changes in the mitochondrial protein profile due to ROS eruption during ageing of elm （Ulmus pumila L.） seeds ［J］. Plant Physiology and Biochemistry，2017（114）：72-87

［4］XIA F S，CHENG H，CHEN L L，et al. Influence of exogenous ascorbic acid and glutathione priming on mitochondrial structural and functional systems to alleviate aging damage in oat seeds ［J］. BMC Plant Biology，2020（20）：104

［5］LIBERATORE K L，DUKOWIC-SCHULZE S，MILLER M E，et al. The role of mitochondria in plant development and stress tolerance ［J］. Free Radical Biology and Medicine，2016（100）：238-256

［6］MARTíA M C，F(xiàn)LOREZ-SARASA I，CAMEJOA D，et al. Response of mitochondrial antioxidant system and respiratory pathways to reactive nitrogen species in pea leaves ［J］. Physiologia Plantarum，2013，147（2）：194-206

［7］WANG Y，LI Y，XUE H，et al. Reactive oxygen species-provoked mitochondria-dependent cell death during ageing of elm （Ulmus pumila L.） seeds ［J］. The Plant Journal，2015，81（3）：438-452

［8］XIN X，TIAN Q，YIN G K，et al. Reduced mitochondrial and ascorbate-glutathione activity after artificial ageing in soybean seed ［J］. Journal of Plant Physiology，2014，171（2）：140-147

［9］XIA F，CHEN L，SUN Y，et al. Relationships between ultrastructure of embryo cells and biochemical variations during ageing of oat （Avena sativa L.） seeds with different moisture content ［J］. Acta Physiologiae Plantarum，2015（37）：1-11

［10］XIA F，WANG X，LI M，et al. Mitochondrial structural and antioxidant system responses to aging in oat （Avena sativa L.） seeds with different moisture contents ［J］. Plant Physiology and Biochemistry，2015，94：122-129

［11］唐嘉，毛培勝，毛春力，等. 不同活力水平老芒麥種胚線粒體的抗氧化生理變化［J］. 中國草地學(xué)報，2021，43（5）：1-7

［12］李紅玉，王雅聰，曾佳，等. 外源H₂O₂引發(fā)對燕麥種胚細(xì)胞AsA-GSH循環(huán)的影響［J］. 草地學(xué)報，2022，30（7）：1668-1674

［13］李紅玉，王雅聰，夏方山，等. 外源H₂O₂引發(fā)對燕麥種胚線粒體AsA-GSH循環(huán)的影響［J］. 草地學(xué)報，2022，30（9）：86-94

［14］夏方山，董秋麗，毛培勝，等. PEG引發(fā)對老化燕麥種胚細(xì)胞與線粒體結(jié)構(gòu)及抗氧化性能的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報，2018，27（5）：170-177

［15］夏方山. 不同老化處理對燕麥種子線粒體結(jié)構(gòu)及抗氧化系統(tǒng)的影響［D］. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015：20-21

［16］ANON. International rules for seed testing：The germination test ［M］. Zurich：International Seed Testing Association，2017：25

［17］夏方山，王婷婷，董秋麗，等. 外源H₂O₂處理對燕麥種子活力的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報，2018，27（3）：201-207

［18］KIBINZA S，VINEL D，C?ME D，et al. Sunflower seed deterioration as related to moisture content during ageing，energy metabolism and active oxygen species scavenging ［J］. Physiology and Plant，2006，128（3）：496-506

［19］YIN G，SUN H，XIN X，et al. Mitochondrial damage in the soybean seed axis during imbibition at chilling temperatures ［J］. Plant and Cell Physiology，2009，50（7）：1305-1318

［20］BAILLY C，BENAMAR A，CORBINEAU F，et al. Changes in malondialdehyde content and superoxide dismutase，catalase and glutathione reductase activities in sunflower seeds as related to deterioration during accelerated aging ［J］. Physiologia Plantarum，1996（97）：104-111

［21］RAO K V，SRESTY T V S. Antioxidative parameters in the seedlings of pigeon pea （Cajanus cajan （L.） Millspaugh） in response to Zn and Ni stresses ［J］. Plant Science，2000，157（1）：11328

［22］NAKANO Y，ASADA K. Hydrogen peroxide scavenged by ascorbate-specific peroxidase in spinach chloroplast ［J］. Plant and Cell Physiology，1981，22（5）：867-880

［23］ARRIGONI O，DIPIERO S，BORRACINO G. Ascorbate free radical reductase：a key enzyme of the ascorbic acid system ［J］. FEBS Letters，1981，125（2）：242-244

［24］ESTERBAUER H，GRILL D. Seasonal variation of glutathione and glutathione reductase in needles of Picea abies ［J］. Plant Physiology，1978，61（1）：11921

［25］KAMPFENKEL K，VANMONTAGU M，INZE D. Extraction and determination of ascorbate and dehydroascorbate from plant tissue ［J］. Analytical Biochemistry，1995，225（1）：165-167

［26］GRIFFITH O W. Determination of glutathione and glutathione disulfide using glutathione reductase and 2-vinylpyridine ［J］. Analytical Biochemistry，1980，106（1）：207-212

［27］任艷芳，何俊瑜，楊軍，等. 外源H₂O₂對鹽脅迫下小白菜種子萌發(fā)和幼苗生理特性的影響［J］. 生態(tài)學(xué)報，2019，39（20）：7745-7756

［28］李俊周，李夢琪，劉磊，等. 水稻種子H₂O₂流速和種子活力的關(guān)系研究［J］. 華北農(nóng)學(xué)報，2017，32（4）：189-194

［29］譚志軍，黃逸強，王桂元，等. 過氧化氫對多胚水稻種子萌發(fā)和生長的影響［J］. 中國水稻科學(xué)，1991，5（1）：41-44

［30］宋麗華，陶利剛，許揚. 雙氧水對臭椿、刺槐種子發(fā)芽的影響［J］. 寧夏農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2004，25（1）：40-42

［31］何士敏，李昌滿，于文博. 過氧化氫浸種對莖瘤芥種子萌發(fā)的影響［J］. 長江蔬菜，2012（1）：22-26

［32］PASQUINI S，MIZZAU M，PETRUSSA E，et al. Seed storage in polyethylene bags of a recalcitrant species （Quercus ilex）：analysis of some bio-energetic and oxidative parameters ［J］. Acta Physiologiae Plantarum，2012（34）：1963-1974

［33］TULLIO M C D，ARRIGONI O. The ascorbic acid system in seeds：to protect and to serve ［J］. Seed Science Research，2003（13）：249-260

［34］劉備，宋玉梅，孫銘，等. 燕麥劣變種子吸脹過程中線粒體AsA-GSH循環(huán)的生理響應(yīng)［J］. 草地學(xué)報，2021，29（2）：211-219

（責(zé)任編輯 閔芝智）