肝細胞癌患者血清SPINK1、SEMA-3B表達及其預后的相關性研究*

古乾權 程 財 王 波 楊 春

1.重慶醫(yī)藥高等?？茖W校附屬第一醫(yī)院普外科 (重慶， 400000) 2.重慶市第十三人民醫(yī)院肝膽乳甲外科

原發(fā)性肝癌是起源于肝臟上皮或間葉組織的腫瘤，是消化道常見的惡性腫瘤之一。肝癌患者早期癥狀不明顯，隨著疾病進展，患者可出現(xiàn)肝區(qū)疼痛、腹脹、消瘦乏力等癥狀，若疾病發(fā)展到晚期，患者可出現(xiàn)腹水、黃疸和惡病質等表現(xiàn)，甚至危及生命[1]。據(jù)報道稱，肝癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，每年大約有38萬人死亡[2]。絲氨酸蛋白酶抑制劑Kazal1(SPINK1)是一類具有 Kazal 結構域的絲氨酸蛋白酶抑制劑，其可通過MAPK信號通路，磷酸化 EGF 受體蛋白來刺激細胞的生長，并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮自分泌生長因子的作用[3]。王宗艷等[4]發(fā)現(xiàn)胃癌組織中SPINK1高水平表達可促進患者的病程進展，也是預測患者不良預后的危險因素。信號素-3B(SEMA-3B)屬于信號素家族成員之一，在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[5]。目前，關于聯(lián)合檢測SPINK1、SEMA-3B評估與肝癌患者預后狀況的報告較少。因此，本研究通過檢測肝癌患者血清SPINK1、SEMA-3B表達水平，分析其與肝癌患者預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2016年12月重慶醫(yī)藥學等?？茖W校附屬第一醫(yī)院普外科收治的原發(fā)性肝癌患者120例(觀察組)，其中男77例，女43例；年齡40～78歲，平均(56.89±7.21)歲。選取同期體檢健康者100例為對照組，其中男52例，女48例；年齡40～75歲，平均(55.13±9.42)歲。兩組受試者的年齡、性別一般資料相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已通過我院醫(yī)學倫理委員會審批。

1.2 納入及排除標準 納入標準：①均符合原發(fā)性肝癌的診斷標準[6]，均行肝癌根治性切除術，并經病理確診為肝細胞癌；②均未行放療、化療等抗腫瘤治療；③均為首次治療；④臨床病理資料完整；⑤患者及其家屬均簽署知情同意書。排除標準：①轉移性肝癌者；②合并其他器官惡性腫瘤者；③嚴重心肝腎等器官功能不全者；④存在自身免疫性疾病或血液系統(tǒng)疾病者；⑤嚴重精神疾病，不能配合者。

1.3 臨床資料收集 收集肝癌患者的臨床病理資料，包括腫瘤直徑、病灶數(shù)目、TNM分期、組織分化程度、門靜脈癌栓、淋巴結轉移等。

1.4 血清SPINK1、SEMA-3B檢測 患者入院24 h內及術后1周空腹狀態(tài)下抽取外周靜脈血5 ml，3 500 r/min 離心10 min，分離上層血清，置于-70℃冰箱保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清SPINK1、SEMA-3B水平。血清SPINK1試劑盒購自美國R&D公司，血清SEMA-3B試劑盒購自上海恒斐生物科技有限公司。所有操作均按照試劑盒說明書嚴格進行。

1.5 隨訪 通過電話或門診等方式對肝癌術后患者急性為期3年隨訪，術后第1年每2個月隨訪1 次，術后第2～3年每3個月隨訪1次，記錄患者術后生存情況，隨訪期間患者出現(xiàn)死亡即隨訪終止。根據(jù)患者隨訪期間預后狀況，分為預后良好組(n=78)和預后不良組(n=42)。

2 結果

2.1 受試人群血清SPINK1、SEMA-3B水平比較 見表1。

表1 受試人群血清SPINK1、SEMA-3B水平比較

2.2 不同預后的肝癌患者臨床臨床資料比較 見表2。

表2 不同預后的肝癌患者臨床資料比較

2.4 影響肝癌患者不良預后的多因素分析 多因素Logistic回歸分析結果顯示，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴結轉移、血清SPINK1升高和SEMA-3B降低是影響肝癌患者不良預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響肝癌患者不良預后的多因素分析

2.5 血清SPINK1、SEMA-3B對肝癌患者不良預后的評估價值 ROC曲線結果顯示，血清SPINK1預測肝癌患者不良預后的AUC為0.830(95%CI=0.760～0.917，P<0.001)，截斷值為53.89 mg/L，敏感度和特異度為0.785、0.764；血清SEMA-3B預測肝癌患者不良預后的AUC為0.842(95%CI=0.762～0.922，P<0.001)，截斷值為141.26 ng/ml，敏感度和特異度為0.800、0.706；二者聯(lián)合檢測預測肝癌患者不良預后的AUC為0.901(95%CI=0.831～0.967，P<0.001)，敏感度和特異度為0.692、0.912。見圖1。

圖1 血清SPINK1、SEMA-3B預測肝癌患者不良預后的ROC曲線

3 討論

肝癌的發(fā)病率逐年升高，已成為嚴重危害人們生命健康安全的惡性腫瘤之一[7]。近年來，隨著醫(yī)療技術的快速發(fā)展，肝癌的治療也較為成熟，但患者仍存在高復發(fā)率和高死亡率，嚴重影響患者的生存預后。因此，準確地評估肝癌患者預后狀況，并對患者盡早采取合理干預措施，對提高患者的生存率具有重要的臨床意義。

SPINK1也稱為腫瘤相關胰蛋白酶抑制劑(TATI)或胰分泌胰蛋白酶抑制劑(PSTI)，位于5q32染色體上，約7.5 kb長，包含四個外顯子，是由56個氨基酸組成的分泌肽，其主要作用是抑制多種胰腺絲氨酸蛋白酶的活性，與炎癥、細胞增殖以及癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關。SPINK1與EGF結構相似，可與EGF受體相結合，激活EGFR/PI3K/Akt 信號轉導通路來參與EMT的發(fā)生[8]。同時，SPINK1與EGFR協(xié)同通過p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)-ERK-c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路促進大鼠正常肝細胞株的增殖或癌細胞株的增殖、遷移和侵襲，并調控甘氨酸、絲氨酸等代謝通路；也可通過MEK-ERK通路下調上皮鈣黏蛋白，導致EMT，進而促進惡性腫瘤轉移[9]。既往研究證實，敲除SPINK1蛋白可降低惡性腫瘤浸潤及轉移[10]。研究發(fā)現(xiàn)，SPINK1可促進人肺腺癌細胞的增殖，且SPINK1表達升高與患者預后不良有關[11]。本次研究顯示，肝癌患者血清SPINK1水平明顯高于健康對照組，肝癌治療后血清SPINK1水平低于治療前，差異有統(tǒng)計學意義，提示SPINK1與肝癌的發(fā)生密切相關，與Zhu等[12]報道相一致。SEMA-3B是一種分泌型蛋白質及腫瘤抑制基因，是在氨基末端含有高度保守的Sema結構域的分泌分子，其可與多種細胞表面受體如神經纖毛蛋白、叢狀蛋白相結合，參與神經元軸突導向的負向調控，并促進細胞遷移、腫瘤生長，也可競爭性地抑制VEGF促進腫瘤血管生成的功能。同時，SEMA3B作為一種腫瘤生長抑制劑，在致癌過程中，SEMA3B功能喪失可導致腫瘤發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境細胞以及腫瘤細胞本身中SEMA-3B表達的降低可能會增加惡性腫瘤的侵襲性[13]。研究表明，SEMA-3B作為抑癌基因，可通過抑制細胞增殖和誘導細胞凋亡等方式抑制胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的生長[14]。Dziobek等[15]報道稱，SEMA-3B在子宮內膜癌組織中呈現(xiàn)低表達，與子宮內膜癌變密切相關。Li等[16]報道稱，肝癌患者血清SEMA-3B水平明顯低于健康對照組，與本次研究相一致。

本次研究結果顯示，肝癌患者預后不良組血清SPINK1水平高于預后良好組，血清SEMA-3B水平低于預后良好組，差異有統(tǒng)計學意義，提示血清SPINK1、SEMA-3B水平變化與肝癌患者的預后不良密切相關。嚴榮榮等[17]報道稱，肝癌患者血清SPINK1水平明顯升高，并對肝癌患者的短期不良預后有較高預測價值。多因素Logistic回歸分析示，血清SPINK1升高和SEMA-3B降低是肝癌患者不良預后的重要危險因素，說明入院時患者血清SPINK1值越高、SEMA-3B值越低，患者死亡風險越大。淋巴結轉移及TNM分期較高的患者通常腫瘤惡性程度較高、侵襲性強、容易發(fā)生轉移，患者預后越差[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結轉移是肝癌患者預后不良的危險因素。ROC曲線示聯(lián)合檢測血清SPINK1、SEMA-3B預測肝癌患者不良預后的AUC為0.901，均高于單獨檢測，提示聯(lián)合檢測血清SPINK1、SEMA-3B對評估肝癌患者的預后狀態(tài)有較高臨床價值。

綜上所述，肝癌患者的血清SPINK1水平升高和血清SEMA-3B水平降低，血清SPINK1升高、 SEMA-3B降低是肝癌患者預后不良的重要危險因素，而二者聯(lián)合檢測對預測患者的不良預后有較高臨床價值，可以作為肝癌患者術前評估的參考指標。但是，本研究也存在一定的局限性，樣本量較少，且為單中心研究，隨訪時間也較短，研究結果可能存在一定的偏倚，后續(xù)還需擴大樣本量進行多中心、前瞻性的數(shù)據(jù)加以研究論證。