2021年秋季銅仁市家畜口蹄疫免疫抗體檢測(cè)分析

王明周， 賴 婧， 陶沿竹， 龍立書， 敖芳芳， 白 明， 洪 猛， 陸安法

(貴州省銅仁市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 銅仁 554300)

重大動(dòng)物疫病的發(fā)生不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，還會(huì)嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全?？茖W(xué)制定重大動(dòng)物疫病免疫程序并切實(shí)開展免疫接種，是防控重大動(dòng)物疫病最有效的措施之一。及時(shí)對(duì)接種動(dòng)物進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)，了解免疫抗體水平，評(píng)估免疫效果，為當(dāng)?shù)卣峁┛茖W(xué)防疫決策具有重要意義[1，2]。口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床特征為口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰，易感動(dòng)物主要有牛、豬、駱駝、羊、鹿等，我國(guó)列為一類動(dòng)物疫病[3]。根據(jù)《2021年銅仁市動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫方案》的規(guī)定，我市口蹄疫等重大動(dòng)物疫病的群體免疫密度應(yīng)常年保持在100%，免疫抗體合格率常年保持在70%以上。銅仁市秋季動(dòng)物疫病強(qiáng)制集中免疫在每年的9月初開始，至11月中旬結(jié)束，主要對(duì)高致病性禽流感、口蹄疫、小反芻獸疫、豬瘟、狂犬病進(jìn)行1次強(qiáng)制免疫。為了評(píng)估2021年秋季銅仁市口蹄疫強(qiáng)制集中免疫的效果，特進(jìn)行此次檢測(cè)，為科學(xué)防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集采用《獸醫(yī)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測(cè)抽樣技術(shù)手冊(cè)》[4]方法，預(yù)設(shè)95%置信水平、試驗(yàn)敏感性100%、預(yù)定流行率10%，根據(jù)不同畜群分類采樣。2021年秋季防疫結(jié)束后，于11月中旬在銅仁市10個(gè)縣(區(qū))進(jìn)行采樣，每個(gè)縣(區(qū))以規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)為抽檢對(duì)象，隨機(jī)分類采樣豬、牛、羊養(yǎng)殖場(chǎng)各 1個(gè)，由各縣(區(qū))動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心完成本轄區(qū)內(nèi)樣品采集和送樣工作，市級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心工作人員負(fù)責(zé)采樣工作的監(jiān)督指導(dǎo)。本次監(jiān)測(cè)共采集10個(gè)縣(區(qū))31個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的血清樣品920份，其中豬血清330份、牛血清260份、羊血清330份。

1.2 主要儀器與試劑口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒(武漢科前生物股份有限公司，批號(hào)：20211207)、酶標(biāo)儀(美國(guó)佰騰儀器有限公司，型號(hào)：800TS)、恒溫箱(上海喬躍電子有限公司，型號(hào)：DHP-90328)。

1.3 檢測(cè)方法按照《口蹄疫診斷技術(shù)》(GB/T 18935—2018)，采用固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法進(jìn)行O型口蹄疫抗體檢測(cè)。檢測(cè)方法嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行：取抗原包被板(根據(jù)樣品多少可拆開分次使用)，加入稀釋好的洗滌液300 μL，無(wú)需靜置，甩掉孔中洗滌液，重復(fù)洗板2次，最后1次在吸水材料上拍干。將稀釋好的待檢血清、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各取50 μL加入到抗原包被板孔中，待檢血清設(shè)1孔，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各設(shè)2孔，然后加入酶標(biāo)記物50 μL至各反應(yīng)孔中，置37 ℃溫育30 min。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液300 μL，無(wú)需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗板5次，最后1次在吸水材料上拍干。每孔加入底物顯色液100 μL，置室溫(20～25 ℃)避光顯色15 min。每孔加入終止液50 μL，10 min內(nèi)在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔的D450 nm值。

1.4 結(jié)果判定及統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)成立條件：陰性對(duì)照D450 nm平均值與陽(yáng)性對(duì)照D450 nm平均值之差≥0.5。 判定標(biāo)準(zhǔn)：S為樣品孔D450 nm值，N為陰性對(duì)照D450 nm平均值，計(jì)算樣品S/N值。如果S/N≤0.5，樣品判為陽(yáng)性；如果S/N>0.5，樣品判為陰性。檢測(cè)數(shù)據(jù)運(yùn)用軟件SPSS 25.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，卡方檢驗(yàn)差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 家禽O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果由表1可見：2021年秋季銅仁市家畜O型口蹄疫免疫抗體樣品平均合格率為89.35%，其中豬為75.76%，牛為93.08%，羊?yàn)?00%。不同畜種之間的免疫抗體水平存在顯著差異(P<0.05)，羊的抗體合格率顯著高于牛和豬，牛的抗體合格率顯著高于豬。場(chǎng)群平均合格率為90.32%，其中豬場(chǎng)81.82%、牛場(chǎng)88.89%、羊場(chǎng)100%。

表1 2021年秋季銅仁市家畜O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)統(tǒng)計(jì)

2.2 各縣(區(qū))O型口蹄疫免疫抗體比較由表2可見：碧江區(qū)、萬(wàn)山區(qū)、印江自治縣、德江縣、沿河自治縣、思南縣的O型口蹄疫免疫抗體合格率均顯著高于石阡縣、江口縣、松桃自治縣、玉屏自治縣(P<0.05)；石阡縣的免疫抗體合格率最低(65.56%)，未達(dá)到國(guó)家規(guī)定≥70%的免疫標(biāo)準(zhǔn)。豬O型口蹄疫樣品檢測(cè)中，江口縣抗體合格率為45%，石阡縣為0%，均低于標(biāo)準(zhǔn)要求。全市羊O型口蹄疫免疫抗體合格率最高，均為100%。

表2 不同縣(區(qū))家畜O型口蹄疫免疫抗體統(tǒng)計(jì)

3 結(jié)論

2021年秋季銅仁市家畜O型口蹄疫的平均免疫抗體合格率達(dá)到國(guó)家規(guī)定≥70%的標(biāo)準(zhǔn)要求，其中豬為75.76%，牛為93.08%，羊?yàn)?00%，基本達(dá)到預(yù)期的免疫效果。但江口縣和石阡縣的豬、松桃自治縣的牛免疫抗體合格率未達(dá)到規(guī)定要求，需及時(shí)進(jìn)行排查補(bǔ)免。

4 討論

4.1科學(xué)免疫接種是防控重大動(dòng)物疫病、保護(hù)易感動(dòng)物最重要的措施之一，而評(píng)價(jià)免疫效果最常用的方法是進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)。國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定重大動(dòng)物疫病防控“以集中免疫為原則，實(shí)時(shí)免疫為補(bǔ)充，實(shí)行預(yù)防為主，預(yù)防與控制、凈化、消滅相結(jié)合的方針”。在春、秋兩季集中免疫工作中，我市主管部門組織開展大規(guī)模疫苗接種活動(dòng)，力求應(yīng)免盡免，以期總體達(dá)到群體免疫的基礎(chǔ)水平。本次監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示銅仁市家畜口蹄疫免疫效果總體較好，基本達(dá)到了預(yù)期的目標(biāo)。一是動(dòng)物疫病防控主管部門和基層動(dòng)物防疫員均高度重視飼養(yǎng)動(dòng)物的免疫防控，深入穩(wěn)步推進(jìn)“先打后補(bǔ)”免疫工作，調(diào)動(dòng)了養(yǎng)殖主體的免疫積極性；二是每年定期開展《動(dòng)物防疫法》等相關(guān)法律法規(guī)的學(xué)習(xí)培訓(xùn)活動(dòng)，從上到下強(qiáng)化各級(jí)動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)的防疫監(jiān)督意識(shí)及養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的防疫主體意識(shí)；三是我市每年春、秋兩季均要定期組織人員深入養(yǎng)殖地進(jìn)行動(dòng)物疫病防控督查，對(duì)督查中存在問題的相關(guān)養(yǎng)殖場(chǎng)及縣、鄉(xiāng)(鎮(zhèn))動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)進(jìn)行通報(bào)，督促及時(shí)整改；四是近年來(lái)受全國(guó)非洲豬瘟疫情的沖擊，我市廣大養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)明顯提高了動(dòng)物疫病的防控意識(shí)，積極主動(dòng)配合動(dòng)物防疫部門進(jìn)行免疫接種。

4.2本次監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)局部區(qū)域還存在一些問題，如：江口縣豬O型口蹄疫抗體合格率為45%，石阡縣甚至為0%，松桃自治縣牛O型口蹄疫抗體合格率為60%，均低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求。分析原因：一是相關(guān)強(qiáng)制免疫監(jiān)督人員未監(jiān)督到位，有的養(yǎng)殖場(chǎng)沒有接種疫苗；二是疫苗在運(yùn)輸保存過(guò)程中未按規(guī)定保存導(dǎo)致失效；三是在疫苗接種過(guò)程中接種劑量過(guò)小或接種部位不當(dāng)。另外，從總體上看豬O型口蹄疫免疫抗體水平顯著低于牛和羊，且石阡縣、江口縣、松桃自治縣、玉屏自治縣的家畜免疫水平較低，提示各地區(qū)對(duì)O型口蹄疫的防控力度參差不齊，應(yīng)加強(qiáng)排查，對(duì)免疫抗體不合格的場(chǎng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。本次監(jiān)測(cè)由于人力、物力等資源有限，抽樣場(chǎng)數(shù)、樣品量較少，只能在一定程度上反映銅仁市家畜口蹄疫的免疫水平，在后期防控工作中應(yīng)實(shí)行口蹄疫免疫和排查常態(tài)化，結(jié)合實(shí)時(shí)抗體監(jiān)測(cè)，應(yīng)免盡免，不足補(bǔ)免，做到有效防控。