順阿曲庫銨調(diào)控circMYLK/miR-214-3p通路對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及凋亡的影響

楊婉容 李艷 李向前 (甘肅省腫瘤醫(yī)院麻醉手術(shù)科,甘肅 蘭州 730050)

子宮內(nèi)膜癌是威脅女性生命安全的惡性腫瘤之一,內(nèi)分泌失調(diào)、激素水平紊亂及不良生活習(xí)慣等均可能是引起子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的影響因素,目前,已有研究表明環(huán)狀RNA(circRNA)在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)異常,并可充當(dāng)微小RNA(miRNA)的海綿分子而參與基因轉(zhuǎn)錄過程進(jìn)而調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、凋亡等生物學(xué)過程〔1〕。臨床主要采用手術(shù)、放療等方式治療子宮內(nèi)膜癌,但患者預(yù)后較差,研究表明一定劑量的七氟烷等麻醉藥物可抑制腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移〔2〕。此外,丙泊酚也被證明可破壞子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移〔3〕。順阿曲庫銨(Cis)屬于非去極化肌松藥,常被用于麻醉的藥物之一,Cis 能夠抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移〔4〕。環(huán)狀非編碼(circMYLK)在前列腺癌中表達(dá)上調(diào),并可通過調(diào)節(jié)miR-29a 促進(jìn)前列腺癌的進(jìn)展〔5〕。但circMYLK 是否可作為治療子宮內(nèi)膜癌的潛在靶點(diǎn)尚未闡明。StarBase 預(yù)測顯示circMYLK 與miR-214-3p 存在結(jié)合位點(diǎn),miR-214-3p 通過靶向TWIST1 抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移〔6〕。但Cis 是否通過調(diào)控circMYLK/miR-214-3p 的表達(dá)影響子宮內(nèi)膜癌的腫瘤發(fā)生目前還尚未可知。本研究主要探討Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞惡性表型的影響及探索其是否通過circMYLK/miR-214-3p 通路發(fā)揮調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 Cis(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司);子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa(上海酶研生物科技有限公司);DMEM (Hyclon,美國);胎牛血清、胰蛋白酶(Gibco,美國);Trizol 試劑(Invitrogen,美國);Lipofectamine2000、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)試劑、噻唑藍(lán)(MTT)試劑、基質(zhì)膠(北京索萊寶科技有限公司);反轉(zhuǎn)錄與SYBR 熒光定量試劑(大連寶生物工程有限公司);Transwell 小室(Corning,美國);miR-NC、miR-214-3p mimics、si-NC、si-circMYLK、pcDNA(廣州銳博生物科技有限公司);放射免疫沉淀(RIPA)裂解液、二喹啉甲酸(BCA)試劑盒、電化學(xué)發(fā)光(ECL)分析(北京全式金生物技術(shù)有限公司);兔抗人Ki-67、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B 淋巴瘤細(xì)胞(Bcl)-2、Bcl-2 相關(guān)X 蛋白(Bax)抗體(Santa Cruz,美國);辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 采用不同濃度Cis(10、20、40 μmol/L)刺激Ishikawa 細(xì)胞〔7〕,分別記為Cis-L組、Cis-M 組、Cis-H 組,未刺激的細(xì)胞作為Con 組。不含胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液與si-NC、si-circMYLK充分混勻后室溫孵育5 min,隨后與經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋Lipofectamine2000 試劑混合,室溫孵育20 min 將混合液與Ishikawa 細(xì)胞共培養(yǎng),6 h 后將培養(yǎng)基更換為完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h,分別記為si-NC 組、sicircMYLK 組。采用上述轉(zhuǎn)染方法分別將pcDNA、pcDNA-circMYLK 轉(zhuǎn)染入Ishikawa 細(xì)胞后加入含濃度為40 μmol/L Cis 的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h,分別記為Cis+pcDNA 組、Cis+pcDNA-circMYLK 組。

1.2.2 MTT 實(shí)驗(yàn) 將Ishikawa 細(xì)胞以10 000 個(gè)/孔鋪板在96 孔板中,按照“1.2.1”分組處理后繼續(xù)培養(yǎng)24 h。隨后按照每孔20 μl 的密度加入MTT 溶液,在37℃下孵育4 h 后,去除上清液并每孔加入150 μl 二甲基亞砜(DMSO),37℃振蕩孵育5 min。最后通過微孔板分光光度計(jì)測量每個(gè)樣品在490 nm處的吸光度并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。

1.2.3 Transwell 實(shí)驗(yàn) 采用預(yù)冷培養(yǎng)液按照8 ∶1的比例稀釋基質(zhì)膠,將稀釋后的基質(zhì)膠加入小室的上室(40 μl/孔),將其置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育5 h 后再加入各組Ishikawa 細(xì)胞,后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),應(yīng)用顯微鏡觀察侵襲細(xì)胞數(shù)。

Transwell 過濾器用無血清DMEM 洗滌后放入24 孔板中。下室包含600 μl 具有10% 胎牛血清(FBS)的DMEM 培養(yǎng)液。將各組Ishikawa 細(xì)胞(1×105個(gè)/ml)接種于上室(200 μl/孔),5%CO2,37℃孵育24 h 后,用棉簽去除留在上室的細(xì)胞,膜用多聚甲醛固定20 min,然后用4 g/L 結(jié)晶紫染色10 min。最后隨機(jī)捕獲了6 個(gè)視野的圖像,并對遷移的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。對于細(xì)胞侵襲能力的檢測,將40 μl 基質(zhì)膠和DMEM (1 ∶8)的混合物添加到聚碳酸酯transwell 過濾器的上側(cè),干燥5 h 后,后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù) 處理后的各組Ishikawa 細(xì)胞后經(jīng)1 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心5 min,棄培養(yǎng)基,使用PBS洗滌后加入結(jié)合緩沖液制備細(xì)胞懸液(1 ×107個(gè)/ml),取出100 μl 細(xì)胞懸液,將2 μl 的Annexin V-FITC 加入流式管內(nèi),充分混勻后冰上孵育15 min,將其轉(zhuǎn)移至流式管內(nèi),將預(yù)冷PBS 400 μl 加入流式管內(nèi),上機(jī)檢測前每個(gè)樣品均加入1 μl 的PI(50 μg/ml),應(yīng)用FACS Calibur 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡。

1.2.5 qRT-PCR 采用Trizol 法提取各組Ishikawa細(xì)胞總RNA,加入20～40 μl DEPC 水完全溶解RNA 沉淀,吸取2 μl RNA 檢測RNA 濃度,A260/A280 比值處于1.6～1.8 之間RNA 純度較高。檢測RNA 濃度后,根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作合成cDNA。隨后最后采用SYBR 熒光定量試劑進(jìn)行qRT-PCR 檢測circMYLK(內(nèi)參GAPDH)和miR-214-3p(內(nèi)參U6)相對表達(dá)量。用于相對定量的PCR 參數(shù):95℃2 min,95℃15 s,60℃30 s,72℃30 s,共循環(huán)40 次。

1.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) StarBase 預(yù)測顯示circMYLK 與miR-214-3p 存在結(jié)合位點(diǎn),采用pmirGLO 載體構(gòu)建野生型(WT)或突變型(MUT)熒光素酶報(bào)告載體(WT/MUT-circMYLK)。采用Lipofectamine2000 轉(zhuǎn)染試劑分別將miR-NC、miR-214-3p mimics 與WT/MUT-circMYLK 共轉(zhuǎn)染入Ishikawa 細(xì)胞。24 h 后,檢測螢火蟲與海腎(內(nèi)參)熒光值活性。

1.2.7 Western 印跡 使用RIPA 裂解緩沖液提取Ishikawa 細(xì)胞蛋白,通過BCA 定量檢測試劑盒上清液蛋白進(jìn)行定量。接下來,將50 μg 蛋白質(zhì)樣通過10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)分離并轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。在5% 脫脂牛奶中封閉1 h 后,將膜與一抗稀釋液(1 ∶1 000)4℃下孵育過夜,洗滌后與二抗37℃孵育1 h。用ECL 檢測反應(yīng)蛋白條帶,最后應(yīng)用ImageJ 軟件分析各條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0 軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖的影響與Con 組比較,Cis-L 組、Cis-M 組、Cis-H 組Ishikawa細(xì)胞增殖抑制率明顯升高,Ki-67 蛋白水平明顯下降(均P＜0.05),且Cis-L 組、Cis-M 組、Cis-H 組上述指標(biāo)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見圖1、表1。

圖1 Ki-67 蛋白表達(dá)

2.2 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞遷移、侵襲的影響 與Con 組比較,Cis 處理顯著抑制Ishikawa 細(xì)胞的遷移和侵襲,同時(shí)抑制MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)(均P＜0.05),且Cis-L 組、Cis-M 組、Cis-H 組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表1、圖2、圖3。

圖2 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞遷移、侵襲的影響(結(jié)晶紫染色,×200)

圖3 Western 印跡檢測各組遷移、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)

表1 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響(±s,n=9)

表1 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響(±s,n=9)

與Con 組比較:1)P＜0.05;與Cis-L 組比較:2)P＜0.05;與Cis-M 組比較:3)P＜0.05,表2、3 同

組別抑制率(%)Ki-67 蛋白遷移細(xì)胞數(shù)(個(gè))侵襲細(xì)胞數(shù)(個(gè))MMP-2 蛋白MMP-9蛋白Con 組0.00±0.000.83±0.06104.24±7.8092.28±6.720.67±0.050.78±0.04 Cis-L 組19.65±1.541)0.67±0.041)86.18±5.351)77.02±4.721)0.53±0.041)0.62±0.041)Cis-M 組36.34±3.061)2)0.49±0.031)2)66.05±4.751)2)59.11±3.901)2)0.38±0.031)2)0.47±0.031)2)Cis-H 組57.13±5.191)2)3)0.36±0.021)2)3)51.32±3.611)2)3)42.33±3.181)2)3)0.24±0.021)2)3)0.31±0.031)2)3)F/P 值549.717/0.000234.231/0.000154.074/0.000 182.209/0.000230.444/0.000292.080/0.000

2.3 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞凋亡的影響相較于Con 組,Cis 劑量依賴性的抑制細(xì)胞凋亡,同時(shí)抑制Bcl-2 蛋白表達(dá),上調(diào)Bax 蛋白水平(均P＜0.05),見圖4、圖5、表2。

表2 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞凋亡的影響(±s,n=9)

表2 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞凋亡的影響(±s,n=9)

組別凋亡率(%)Bcl-2 蛋白Bax 蛋白Con 組6.81±0.620.58±0.030.21±0.02 Cis-L 組11.97±1.091)0.42±0.031)0.36±0.031)Cis-M 組 18.15±1.251)2)0.28±0.031)2)0.51±0.041)2)Cis-H 組 28.27±2.401)2)3) 0.14±0.021)2)3) 0.63±0.041)2)3)F/P 值344.705/0.000413.032/0.000265.800/0.000

圖4 Western 印跡檢測各組凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

圖5 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞凋亡的影響

2.4 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞circMYLK 和miR-214-3p 表達(dá)的影響 與Con 組比較,Cis 處理顯著降低Ishikawa 細(xì)胞中circMYLK 的表達(dá)含量同時(shí)促進(jìn)miR-214-3p 表達(dá)水平,且Cis-L 組、Cis-M 組、Cis-H 組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表3。

表3 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞circMYLK 和miR-214-3p 表達(dá)的影響(±s,n=9)

表3 Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞circMYLK 和miR-214-3p 表達(dá)的影響(±s,n=9)

組別circMYLKmiR-214-3p Con 組1.00±0.071.00±0.05 Cis-L 組0.83±0.051)1.83±0.131)Cis-M 組0.67±0.041)2)2.73±0.211)2)Cis-H 組0.46±0.041)2)3)3.42±0.281)2)3)F/P 值180.000/0.000282.292/0.000

2.5 circMYLK 靶向調(diào)控miR-214-3p 的表達(dá) Star-Base 預(yù)測顯示miR-214-3p 在circMYLK 上存在結(jié)合位點(diǎn),見圖6。miR-214-3p mimic 的轉(zhuǎn)染顯著抑制WT-circMYLK 熒光素酶活性(P＜0.05),但是不影響MUT-circMYLK 的熒光素酶活性(P＞0.05),見表4。此外,circMYLK 過表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞中miR-214-3p的含量降低pcDNA+circMYLK 組(0.33±0.02 vs pcDNA 組1.00±0.04,P＜0.05);而circMYLK 敲除促進(jìn)miR-214-3p 的表達(dá)(si-circMYLK 組2.68 ±0.23 vs si-NC 組1.02±0.06,P＜0.05)。

圖6 circMYLK 的序列中含有與miR-214-3p 互補(bǔ)的核苷酸序列

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)(±s,n=9)

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)(±s,n=9)

組別WT-circMYLKMUT-circMYLK miR-NC 組1.05±0.071.01±0.07 miR-214-3p 組0.61±0.031.03±0.05 t/P 值17.332/0.0000.697/0.496

2.6 抑制circMYLK 表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的影響 相較于si-NC組,敲除circMYLK 抑制細(xì)胞增殖、遷移及侵襲,促進(jìn)細(xì)胞凋亡率(均P＜0.05),此外,si-circMYLK 組Ki-67、MMP-2、MMP-9、Bcl-2 蛋白水平顯著降低,而Bax蛋白水平顯著升高(均P＜0.05),見圖7、圖8、表5。

表5 抑制circMYLK 表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(±s,n=9)

表5 抑制circMYLK 表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(±s,n=9)

組別circMYLKmiR-214-3p抑制率(%)遷移細(xì)胞數(shù)(個(gè))侵襲細(xì)胞數(shù)(個(gè))凋亡率(%)6.59±5.526.65±0.51 si-circMYLK 組0.31±0.032.41±0.2138.34±3.0560.04±4.5952.06±4.8221.23±2.03 t/P 值30.858/0.00019.787/0.00032.392/0.00018.302/0.00018.230/0.00020.897/0.000組別Ki-67 蛋白MMP-2 蛋白MMP-9 蛋白Bcl-2 蛋白Bax si-NC 組1.00±0.061.00±0.045.14±0.39107.74±6.339蛋白si-NC 組0.84±0.060.69±0.030.79±0.060.59±0.040.2 0±0.02 si-circMYLK 組0.45±0.030.31±0.030.39±0.030.24±0.020.54±0.04 t/P 值17.441/0.00026.870/0.00017.889/0.00023.479/0.00022.808/0.000

圖7 抑制circMYLK 表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞遷移、侵襲(結(jié)晶紫染色,×200)和凋亡的影響

圖8 兩組增殖、遷移、侵襲和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

2.7 circMYLK 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡作用 過表達(dá)circMYLK 可逆轉(zhuǎn)Cis 介導(dǎo)的Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移,抑制侵襲及促進(jìn)凋亡,Ki-67、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平Cis 和circMYLK 共刺激組顯著上調(diào),Bax蛋白水平顯著下調(diào)(P＜0.01),見表6、圖9、圖10。

表6 circMYLK 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的作用(±s,n=9)

表6 circMYLK 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的作用(±s,n=9)

組別circMYLKmiR-214-3p 值抑制率(%)遷移細(xì)胞數(shù)(個(gè)) 侵襲細(xì)胞數(shù)(個(gè))凋亡率(%)9.77±3.0329.68±2.82 Cis+pcDNA-circMYLK 組3.04±0.230.51±0.0420.63±1.9489.84±5.5572.18±5.6412.31±1.19 t/P 值25.456/0.00022.859/0.00024.549/0.00021.486/0.00015.187/0.00017.025/0.000組別Ki-67 蛋白MMP-2 蛋白MMP-9 蛋白Bcl-2 蛋白Bax Cis+pcDNA 組1.00±0.071.00±0.0558.86±4.2550.76±4.023蛋白Cis+pcDNA0.33±0.020.22±0.020.30±0.030.1 3±0.020.65±0.04 Cis+pcDNA-circMYLK0.72±0.050.58±0.040.67±0.040.47±0.030.30±0.03 t/P 值21.726/0.00024.150/0.00022.200/0.00028.290/0.00021.000/0.000

圖9 circMYLK 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了Cis 對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞遷移、侵襲(結(jié)晶紫染色,×200)和凋亡的作用

圖10 兩組增殖、遷移侵襲和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

3 討 論

circRNA 是由3′端與5′端以共價(jià)鍵結(jié)合形成的一類閉合環(huán)狀RNA 分子,可充當(dāng)miRNA 的海綿分子而調(diào)控其靶基因表達(dá)進(jìn)而參與細(xì)胞生物學(xué)過程,既往研究顯示,hsa_circ_0002577 通過激活胰島素樣生長因子1/磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B(IGF1R/PI3K/Akt)途徑加速子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展〔8〕。hsa_circRNA_0001776 通過充當(dāng)miR-182 的海綿分子而下調(diào)富含亮氨酸重復(fù)序列免疫球蛋白樣蛋白(LRIG)2,從而抑制子宮內(nèi)膜癌的增殖并促進(jìn)其凋亡〔9〕。circ_PUM1 通過靶向miR-136/NOTCH3 途徑促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展〔10〕。目前麻醉藥物對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響尚未完全闡明,同時(shí)麻醉藥物是否通過調(diào)控circRNA/miRNA 而影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為尚未闡明。

Cis 通過p53 依賴性內(nèi)在凋亡途徑而誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡及抑制細(xì)胞增殖〔11〕。Cis 通過調(diào)節(jié)miR-3174 的表達(dá)而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲〔12〕。但Cis 對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響尚未可知。本研究結(jié)果顯示,不同劑量的Cis可明顯提高子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖抑制率,且隨著使用劑量的升高而明顯升高。Ki-67 在間期和有絲分裂細(xì)胞中都有作用,已被廣泛用作人類腫瘤細(xì)胞的增殖標(biāo)志〔13〕。Cis 可劑量依賴性的降低Ki-67 的蛋白表達(dá)。MMP-2 和MMP-9 是重要的明膠酶,它們可以通過破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜來參與癌癥的侵襲轉(zhuǎn)移,此外,MMP-2 和MMP-9 表達(dá)含量已被發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中顯著增高從而促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移〔14〕。本研究發(fā)現(xiàn)Cis 可通過抑制MMP-2、MMP-9的表達(dá)破壞子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲和遷移,且呈劑量依賴性。子宮內(nèi)膜癌發(fā)病過程與腫瘤細(xì)胞凋亡異常密切相關(guān),細(xì)胞凋亡主要途徑是線粒體途徑,凋亡相關(guān)蛋白主要為Bcl-2、Bax,其中Bcl-2 是抗凋亡蛋白,而Bax 是促凋亡蛋白,調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax 比值可通過影響線粒體途徑的激活調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡〔15〕。本研究證實(shí)Cis 在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中發(fā)揮抗癌作用,但Cis 調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的分子機(jī)制尚未可知。

本研究結(jié)果提示Cis 銨可能通過下調(diào)circMYLK的表達(dá)而發(fā)揮作用。circMYLK 是一種功能環(huán)狀RNA。circMYLK 通過miR-195/cyclinD1 軸促進(jìn)喉鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展〔16〕。circMYLK 可靶向抑制miR-362-3p 從而提高Rab23 表達(dá),進(jìn)而加速肝細(xì)胞癌的發(fā)展〔17〕。本研究結(jié)果表明敲除circMYLK 可顯著破壞子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖遷移及侵襲,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。此外,本研究還發(fā)現(xiàn)circMYLK 序列上存在miR-214-3p的結(jié)合位點(diǎn),miR-214-3p 是circMYLK 的功能靶標(biāo)。有研究表明miR-214-3p 作為抑癌因子通過靶向降低MELK 阻礙肝細(xì)胞癌細(xì)胞生長〔18〕。miR-214-3p 作為LncRNA DNAJC3-AS1 的靶標(biāo),通過下調(diào)LIVIN 抑制結(jié)腸癌的進(jìn)展〔19〕。miR-214-3p 還可以通過HOXA11-AS/miR-214-3p 軸破壞口腔鱗狀細(xì)胞癌的增殖〔20〕。本研究結(jié)果提示Cis 可能調(diào)控circMYLK/miR-214-3p通路而發(fā)揮抗子宮內(nèi)膜癌的作用。

綜上,Cis 可抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中circMYLK的表達(dá),circMYLK 作為miR-214-3p 的海綿分子又可明顯降低miR-214-3p 的表達(dá),而順阿曲庫銨可提高miR-214-3p 的表達(dá)水平,即順阿曲庫銨可通過調(diào)控circMYLK/miR-214-3p 軸抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長、遷移及侵襲,且呈劑量依賴性。但關(guān)于circ-MYLK/miR-214-3p 通路下游相關(guān)靶基因表達(dá)尚需進(jìn)一步探究。