PD-L1、SULT2B1、CD44和CapG在胃癌組織中表達(dá)及臨床意義

李早紅 劉海芳 (義烏市中心醫(yī)院病理科,浙江 義烏 322000)

胃癌早期癥狀較為隱匿,通常確診時(shí)已屬中晚期,導(dǎo)致其錯(cuò)失最佳根治時(shí)機(jī)〔1～4〕。因此,及時(shí)有效地診斷和治療胃癌尤為重要。程序性死亡因子1 及其配體(PD-L1)是機(jī)體免疫系統(tǒng)中的一種抑制性通路,近年來發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)〔5〕。胞質(zhì)磺基轉(zhuǎn)移酶(SULT)2B1 是以羥基類固醇為底物的一種轉(zhuǎn)移酶,在多種腫瘤組織中異常表達(dá)〔6〕。近年來研究發(fā)現(xiàn),CD44 和巨噬細(xì)胞加帽蛋白(CapG)在多種惡性腫瘤中異常表達(dá),且參與腫瘤侵襲和遷移〔7,8〕。本研究旨在探討PD-L1、SULT2B1、CD44 和CapG 在胃癌組織中表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取義烏市中心醫(yī)院2019年9月至2021年9月手術(shù)后胃癌組織及癌旁組織73 例,其中男43 例,女30 例;年齡65～81 歲,平均(74.48±6.39)歲;TNM 分期:Ⅰ期8 例,Ⅱ期19 例,Ⅲ期46 例;分化程度:高、中分化38 例,低分化35 例;腫瘤直徑:＞5 cm 31 例,≤5 cm 42 例;腫瘤位置:胃竇胃體48 例,賁門胃底25 例;伴遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(除胃癌周圍淋巴轉(zhuǎn)移外,如鎖骨、盆腔、腹腔及肝十二指腸韌帶等)47 例。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為胃腺癌,癌旁組織距胃癌組織3～5 cm;②TNM 分期I～Ⅲ期;③臨床資料完整;④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①其他類型胃癌或伴其他惡性腫瘤;②術(shù)前行新輔助治療者;③心、肺、肝、腎功能嚴(yán)重異常者;④合并內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病者;⑤嚴(yán)重精神疾病者。

1.2 主要試劑 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒、兔抗人PD-L1 多克隆抗體、兔抗人SULT2B1 多克隆抗體(上?；蚬綝AKO),CD44 抗體(美國Abcam 公司)和CapG 抗體(美國Abcam 公司)。

1.3 PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)測定 采用免疫組化法測定胃癌組織及癌旁組織 PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá):取確診的原腺癌后的蠟塊組織,石蠟切片4 μm,切片采用二甲苯-梯度乙醇脫蠟至水,洗凈和修復(fù)抗原后,加入過氧化氫阻斷過氧化物酶封閉15 min,再以Ultra V Block 封閉背景,洗凈后加入PD-L1 抗體(1 ∶200)和SULT2B1 抗體(1 ∶100)孵育過夜,再加入二抗孵育,采用DAB 顯色。蘇木素復(fù)染,脫水,透明,封片,鏡下觀察。所有結(jié)果由同一專業(yè)資深的病理主任醫(yī)師完成評(píng)價(jià)。結(jié)果判定:PD-L1 和SULT2B1 陽性判定為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕黃色染色顆粒細(xì)胞,PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)按細(xì)胞染色所占面積和染色強(qiáng)度乘積計(jì)算。染色強(qiáng)度:無染色0 分,淡黃色1 分,黃色2 分,棕黃色3 分;染色面積:染色陽性≤10% 計(jì)1 分,11%～50%計(jì)2 分,51%～80%計(jì)3 分,＞80%計(jì)4 分。由1 名專業(yè)病理科醫(yī)師采用雙盲法,同一患者取2 張片閱片,取其平均數(shù)。

1.4 CD44 和CapG 蛋白測定 采用Western 印跡測定胃癌組織及癌旁組織CD44 和CapG 蛋白表達(dá),采用RIPA 裂解液提取癌組織及癌旁組織,依據(jù)二喹啉甲酸(BCA)法測定蛋白濃度,加入緩沖液后變性蛋白。按每泳道以50 μg 蛋白進(jìn)行12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白,然后將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上,5%脫脂奶粉37℃封閉1 h。加入一抗后4℃孵育過夜。TBST 漂洗3 次后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗,室溫孵育1 h。采用TBST 洗滌3 次,每次洗滌10 min。電化學(xué)發(fā)光(ECL)液暗室發(fā)光顯影,采集圖像并分析,內(nèi)參選β-actin。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS25.0 軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織與癌旁組織PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)比較 癌組織 PD-L1 蛋白陽性率〔54 例(73.92%)〕 和 SULT2B1 蛋白陽性率〔47 例(64.38%)〕均高于癌旁組織〔(14 例(19.18%)、12 例(16.44%)〕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=44.042、34.832,均P＜0.001)。

2.2 癌組織與癌旁組織CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較 癌組織CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值(0.87±0.19、1.26±0.21)均高于癌旁組織(0.34±0.10、0.47±0.15),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.091、26.155,均P＜0.001)。見圖1。

圖1 癌組織與癌旁組織CD44 和CapG 蛋白表達(dá)

2.3 癌組織不同臨床分期PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較Ⅲ～Ⅳ期癌組織PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值高于Ⅰ～Ⅱ期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。見表1。

表1 癌組織不同臨床分期PD-L1 和SULT2B1蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較(±s)

表1 癌組織不同臨床分期PD-L1 和SULT2B1蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較(±s)

臨床分期nPD-L1 蛋白陽性〔n(%)〕SULT2B1 蛋白陽性〔n(%)〕CD44 表達(dá)灰度值CapG 表達(dá)灰度值Ⅰ～Ⅱ期2711(40.74)11(40.74)0.46±0.140.58±0.16Ⅲ期4643(93.48)36(78.26)1.11±0.251.66±0.32 χ2 或t/P 值24.577/＜0.00110.445/＜0.00112.395/＜0.001 16.346/＜0.001

2.4 癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性患者癌組織PD-L1 和SULT2B1蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。見表2。

表2 癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較(±s)

表2 癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況PD-L1 和SULT2B1 蛋白表達(dá)陽性率、CD44 和CapG 蛋白表達(dá)灰度值比較(±s)

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移nPD-L1 蛋白陽性率〔n(%)〕SULT2B1 蛋白陽性率〔n(%)〕CD44 表達(dá)灰度值CapG 表達(dá)灰度值有4745(95.74)37(78.72)1.09±0.231.61±0.28無269(34.62)10(38.46)0.48±0.120.63±0.17 χ2 或t/P 值32.490/＜0.00111.833/＜0.00112.583/＜0.001 16.238/＜0.001

3 討 論

胃癌的發(fā)生是極其復(fù)雜的一個(gè)病理生理過程,主要受多種癌基因及抑癌基因調(diào)控。由于胃癌細(xì)胞惡性程度高,增殖能力強(qiáng),導(dǎo)致我國多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期〔9〕。隨著我國依賴水平的不斷上升,以手術(shù)為主,輔以免疫治療、靶向治療及放化療等綜合治療已明顯提高胃癌患者生存質(zhì)量,但仍存在無法手術(shù),耐受放化療的晚期難治性患者,且這類患者預(yù)后極差〔10～12〕。因此,尋找胃癌相關(guān)的分子靶向標(biāo)志物,為早期發(fā)現(xiàn)及為靶向藥物開發(fā)提供參考依據(jù)。

目前認(rèn)為免疫逃逸是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制,且越來越多發(fā)現(xiàn)通過免疫檢查解釋腫瘤的免疫逃逸尤為關(guān)鍵。PD-L1 是40 kD 大小的一種跨膜蛋白,其功能主要是在自身免疫疾病、同種異體移植組織、妊娠過程及腫瘤組織中抑制免疫系統(tǒng)的功能。PD-L1 廣泛表達(dá)于巨噬細(xì)胞、B 細(xì)胞、活化的T 細(xì)胞及抗原提呈細(xì)胞等,在多種人類腫瘤組織中能夠檢測到PD-L1 的表達(dá)〔13〕。同時(shí),PD-L1 與其T 細(xì)胞上的受體PD1 相互作用,且在免疫應(yīng)答的負(fù)性調(diào)控方面具有重要作用〔14〕。此外,PD-L1 選擇性地高表達(dá)于腫瘤組織,且為腫瘤的免疫治療提供靶點(diǎn)〔15〕。SULT2B1 主要位于19 號(hào)染色體長臂號(hào)染色體長臂13 區(qū),屬SULTs 超家族,其編碼的蛋白質(zhì)是催化類固醇系列硫酸化反應(yīng)的一種關(guān)鍵酶,參與了細(xì)胞的脂質(zhì)代謝、氧化固醇硫酸化及細(xì)胞增殖等過程〔16〕。近年來研究發(fā)現(xiàn),SULT2B1 蛋白在多種惡性腫瘤中異常表達(dá),且呈高表達(dá)〔17,18〕。本研究表明,胃癌組織中PD-L1 蛋白和SULT2B1 表達(dá)可能與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),可能隨著病程的發(fā)展,患者胃癌組織內(nèi)免疫抑制微環(huán)境逐漸形成。CD44 作為細(xì)胞黏附因子,其表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力密切相關(guān)〔19〕。CapG 是肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,主要通過給微絲末端加帽控制微絲運(yùn)動(dòng)而發(fā)揮作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)與功能,從而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲過程〔20〕。本研究表明,胃癌患者CD44 和CapG 蛋白高表達(dá),且與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究不足之處在于選取病例數(shù)偏小,統(tǒng)計(jì)結(jié)果可能出現(xiàn)偏倚,故有待擴(kuò)充病例數(shù)來對(duì)本研究結(jié)論做進(jìn)一步驗(yàn)證,提供可靠臨床參考價(jià)值。

綜上,胃癌組織中PD-L1、SULT2B1、CD44 和CapG 蛋白高表達(dá),且與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。