• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于網(wǎng)絡藥理學與分子對接技術(shù)探討石上柏在治療癌癥中的作用機制

    2022-12-26 12:08:20黃淑娟余騰驊邱宇安方義文劉利艷
    實用癌癥雜志 2022年12期
    關(guān)鍵詞:靶點癌癥通路

    武 樂 黃淑娟 余騰驊 邱宇安 方義文 梁 群 何 芳 劉利艷

    隨著人類生活方式的改變和環(huán)境的日益惡化,癌癥的發(fā)病率越來越高,最新的研究報告[1-4]顯示癌癥的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)成為第二大威脅人類健康的疾病。在我國,癌癥的發(fā)病率和死亡率也是呈逐年上升的趨勢[5]。中醫(yī)認為癌癥屬于多發(fā)病、常見病、難治病,預后一般欠佳。癌癥屬“正虛邪實”,“正氣虧虛、毒瘀互結(jié)”是癌癥發(fā)病的重要因素[6-8],且認為,熱毒內(nèi)蘊可形成腫瘤,即熱灼血凝,凝結(jié)成塊,熱灼津液,久積成塊等。熱邪可以直入,也可諸邪侵入,郁久化熱;七情不舒,郁結(jié)成熱等,同時癌癥自身也可生熱成毒。因此,清熱解毒法在癌癥治療中起著重要的作用[9]。石上柏來源于卷柏科植物深綠卷柏(Selaginella doederleinii Hieron)的干燥全草,具有清熱解毒、祛風除濕、抗癌、止血的功效,對于多種腫瘤生長有抑制作用,常配伍其他中藥用于癌癥的治療,亦可配合放化療,以減輕放化療后患者出現(xiàn)的不適癥狀[10]。有研究顯示石上柏或其提取物能對鼻咽癌、肝癌、肺癌、喉癌、卵巢癌有作用[11-14]。然目前對石上柏治療癌癥的作用機制尚不明確?;诖耍瑸榱诉M一步研究石上柏的抗腫瘤作用機制,以石上柏為研究對象,人類癌癥疾病為靶標進行網(wǎng)絡藥理學研究,探究出石上柏在治療癌癥中的作用及其作用機制。

    1 資料與方法

    1.1 數(shù)據(jù)庫及軟件

    本研究所涉及的數(shù)據(jù)庫有:中藥活性成分查詢數(shù)據(jù)庫TCMSP(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)、化合物查詢數(shù)據(jù)庫PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)、靶點預測數(shù)據(jù)庫swisstargetprediction (http://www.swisstargetprediction.ch/index.php)、疾病靶點數(shù)據(jù)DisGeNET(http://disgenet.org)和Genecards(https://www.genecards.org)、數(shù)據(jù)交集數(shù)據(jù)庫Draw Venn Diagram(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)、蛋白相互作用網(wǎng)絡平臺String(https://string-db.org/cgi/input.pl);通路查詢數(shù)據(jù)庫KEGG(https://www.genome.jp/kegg/pathway.html)、蛋白數(shù)據(jù)庫PDB(http://www.rcsb.org)、swissmodel(https://swissmodel.expasy.org)。所涉及的軟件有:網(wǎng)絡可視化Cytoscape3.7.1,通路富集與分子ClueGo2.5.4和CluePedia、R語言,分子對接軟件DISCOVERY STUDIO軟件等。

    1.2 石上柏活性成分及靶點篩選

    在TCMSP數(shù)據(jù)庫中搜集石上柏所有的活性成分;并根據(jù)化合物的類藥性(drug-likeness,DL)≥0.18、口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)≥20%為篩選條件(若設(shè)為≥30%,活性成分芹菜素未被涵蓋,故設(shè)20%閾值)[15-17]。將納入活性成分分別在PubChem、swisstargetprediction數(shù)據(jù)庫中檢索,篩選物種為“homo sapiens”的靶點,并對各活性成分作用靶點進行篩選(篩選條件為Probability≥0.05),此即為石上柏的預測作用靶點。

    1.3 疾病靶點篩選

    在DisGeNET和Genecards數(shù)據(jù)庫,以關(guān)鍵詞“Cancer”進行檢索,篩選條件分別為:Score_gda≥0.05(DisGeNET),Relevance score≥10(Genecards),并將石上柏活性成分預測靶點與癌癥疾病靶點進行交集,得到共同的靶基因,繪制韋恩圖。

    1.4 藥物-活性成分-靶點網(wǎng)絡的構(gòu)建

    將藥物與活性成分靶點(共同靶基因)數(shù)據(jù)導入Cytoscape中,繪制藥物-成分-靶點網(wǎng)絡圖。

    1.5 PPI網(wǎng)絡的建立

    將交集后的靶基因上傳到String數(shù)據(jù)庫,將研究物種選擇為人類(Homo sapiens),獲取蛋白相互作用數(shù)據(jù),結(jié)果以TSV格式導出,然后導至Cytoscape軟件進行優(yōu)化構(gòu)建和分析蛋白相互作用網(wǎng)絡(PPI),節(jié)點大小和顏色均按“degree”排列,edge粗細和顏色均按“combined_score”排列;根據(jù)R語言篩出核心靶點,并繪制barplot圖。

    1.6 癌癥靶點基因通路與功能分析

    將篩選的核心靶基因輸入ClueGo數(shù)據(jù)庫,選擇物種Homo sapiens,選擇KEGG數(shù)據(jù)庫富集的通路,以具有統(tǒng)計學差異“P<0.05”、“Kappa Score”等于1為篩選條件,對石上柏治療癌癥作用的潛在靶點進行生物學功能和通路分析。并用CluePedia對所得的通路圖進行美化。最后構(gòu)建石上柏-成分-靶基因-信號通路的網(wǎng)絡拓撲圖。

    1.7 活性成分與關(guān)鍵靶點的分子對接驗證

    在上述步驟結(jié)果基礎(chǔ)上,選擇靶點數(shù)目最多的活性成分作為配體,PPI 網(wǎng)絡中“degree”最大的靶點作為受體,進行分子對接。在PDB、swissmodel數(shù)據(jù)庫下載所需蛋白結(jié)構(gòu),與pubchem下載的三維結(jié)構(gòu)配體一一對接,使用Discovery Studio中的“Clean Protein”對蛋白進行初步準備,包括刪除水分子,雜原子,加氫等步驟,再由程序定義蛋白活性位點。使用LibDock對接模式進行對接,Docking Preferences為High Quality,Conformation Methon為FAST,Number of Hotspots默認為100,Docking Tolerance值默認為0.25,與相應分子開始對接,對接完成后選取LibDockScore分值最高的分子-蛋白對接結(jié)構(gòu)(LibDockScore>100,構(gòu)象予以保留)。分析受體與配體相互作用,主要包括配體分子與蛋白間氫鍵,疏水,鹵鍵,Pi-Pi相互作用等,并保存其結(jié)構(gòu)圖。

    2 結(jié)果

    2.1 石上柏活性成分以及靶點篩選

    經(jīng)條件篩選,共篩出10個活性成分。在檢索預測靶點時發(fā)現(xiàn),有2個化合物無相關(guān)作用靶點,余下8個活性成分,再經(jīng)檢索和篩選后,得到194個預測靶點。見表1。

    表1 石上柏的活性成分及對應靶點

    2.2 疾病靶點篩選

    分別從DisGeNET和Genecards數(shù)據(jù)庫中獲取癌癥相關(guān)的疾病靶點4511個和1521個,與194個預測靶基因一起輸入Draw Venn Diagram進行交集后,得到共同靶基因78個,即為石上柏潛在作用靶點。見圖1。

    2.3 藥物-活性成分-靶點網(wǎng)絡的構(gòu)建

    將藥物與活性成分預測靶點(共同靶基因)數(shù)據(jù)導入Cytoscape中,繪制藥物-成分-靶點網(wǎng)絡可視圖(圖2)。圖2所示體現(xiàn)了石上柏治療癌癥具有多成分、多靶點協(xié)同作用的特點。連接度為前3的潛在活性成分分別為MOL007576(6-[5-(5,7-dihydroxy-4-keto-chromen-2-yl)-2-methoxy-phenyl]-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromone)、MOL000008(apigenin)和MOL000359(sitosterol)。

    2.4 PPI網(wǎng)絡的建立

    將石上柏-癌癥78個共同靶基因上傳至String數(shù)據(jù)庫平臺獲取蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系數(shù)據(jù)(TSV格式),然后導至Cytoscape優(yōu)化構(gòu)建和分析蛋白相互作用網(wǎng)絡(PPI):PPI網(wǎng)絡共有78個節(jié)點(共同靶基因)通過622條邊發(fā)生作用,平均節(jié)點Degree為15.9。經(jīng)R語言作出barplot圖(圖3),從圖中清楚可見VEGFA的Degree值為55,AKT1的Degree值為54,EGFR和ESR1的Degree值分別為47。

    2.5 癌癥靶點基因通路與功能分析

    篩選出排名前30的核心基因,共計33個。經(jīng)通路富集,得到42條信號通路,其中涉及癌癥的通路19條,激素類5條,血管生成1條,免疫方面2條,代謝相關(guān)通路3條等(圖4),EGFR、AKT1、MMP3、GSK3B、VEGFA等基因作為cross-talk 基因參與到 2 條及以上通路中,這些通路和基因涉及癌癥發(fā)生發(fā)展如細胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、血管新生等重要生物過程。拓撲圖顯示石上柏治療癌癥具有多成分、多靶點的協(xié)同作用。

    圖1 預測靶點與疾病靶點交集韋恩圖

    2.6 活性成分與關(guān)鍵靶點的分子對接驗證

    經(jīng)分子對接,顯示活性成分(6-[5-(5,7-二羥基-4-酮-色烯-2-基)-2-甲氧基-苯基]-5,7-二羥基-2-(4-羥基苯基)色酮)(MOL007576)、芹菜素(MOL000008)均能與蛋白AKT1、VEGFA穩(wěn)定結(jié)合。見表2。

    注:圈內(nèi)的8個節(jié)點分別代表8個活性成分,圈上和圈外均為作用靶點。

    圖3 各靶點相互作用的Degree分布(排名前50)

    3 討論

    本研究運用網(wǎng)絡藥理學和分子對接的方法對石上柏治療癌癥的作用機制進行研究,從石上柏已知的30個成分中篩選出10個有效成分。通過對化合物靶點網(wǎng)絡進行拓撲分析可以發(fā)現(xiàn),(6-[5-(5,7-二羥基-4-酮-色烯-2-基)-2-甲氧基-苯基]-5,7-二羥基-2-(4-羥基苯基)色酮)(6-[5-(5,7-dihydroxy-4-keto-chromen-2-yl)-2-methoxy-phenyl]-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromone,MOL007576)、芹菜素(apigenin,MOL000008)和谷甾醇(sitosterol,MOL000359)可能是石上柏發(fā)揮作用的重要活性成分。 通過蛋白與蛋白之間的相互作用發(fā)現(xiàn)VEGFA、AKT1、EGFR 、ESR1、SRC、PTGS2、AR、MMP9、MMP2、IGF1R、KDR等蛋白為核心靶點。研究顯示,芹菜素能通過下調(diào)MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表達水平,上調(diào)Caspase-3表達來有效抑制腦膠質(zhì)瘤U87細胞增殖、促進凋亡[18]。通過Wnt/β-catenin信號通路來抑制喉癌細胞的增殖、遷移和侵襲[19];通過m-TOR/PI3K/Akt信號通路來抑制順鉑耐藥的腫瘤的生成[20]。血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA) 是一種能刺激血管內(nèi)皮細胞分裂增殖的糖蛋白,在體內(nèi)廣泛表達,與其受體 VEGFR 結(jié)合后,參與血管新生。研究顯示芹菜素能通過抑制 VEGF(A和B)表達,從而達到抑制血管生成的目的[21]。

    圖4 癌癥核心靶點所涉及通路

    表2 6-[5-(5,7-二羥基-4-酮-色烯-2-基)-2-甲氧基-苯基]-5,7-二羥基-2-(4-羥基苯基)色酮)(MOL007576)、芹菜素(MOL000008)與蛋白分子AKT1和VEGFA對接示意表

    β-谷甾醇通過AKT/GSK-3β信號通路抑制人胰腺癌的增殖、誘導其凋亡,抑制其遷移和侵襲[22],并通過激活線粒體介導的內(nèi)源性凋亡途徑和死亡受體介導的外源性凋亡途徑誘導HepG2細胞凋亡。研究顯示,其亦能抑制調(diào)控血管生成,從而促進腫瘤細胞凋亡[23]。我們研究與上述文獻報道基本一致。

    綜上所述,本研究以網(wǎng)絡藥理學和分子對接技術(shù)初步驗證了石上柏主要活性成分與潛在作用靶點之間的相互作用,闡述了石上柏治療癌癥具有“多成分-多靶點-多通路”的作用機制,為后續(xù)深入研究石上柏治療癌癥的分子機制奠定了理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    靶點癌癥通路
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點
    留意10種癌癥的蛛絲馬跡
    癌癥“偏愛”那些人?
    海峽姐妹(2018年7期)2018-07-27 02:30:36
    對癌癥要恩威并施
    特別健康(2018年4期)2018-07-03 00:38:08
    不如擁抱癌癥
    特別健康(2018年2期)2018-06-29 06:13:42
    Kisspeptin/GPR54信號通路促使性早熟形成的作用觀察
    心力衰竭的分子重構(gòu)機制及其潛在的治療靶點
    proBDNF-p75NTR通路抑制C6細胞增殖
    通路快建林翰:對重模式應有再認識
    午夜激情福利司机影院| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品亚洲美女久久久| 国产精品99久久久久久久久| h日本视频在线播放| 成年女人看的毛片在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲中文字幕日韩| 国产成人精品久久久久久| 国产高清视频在线播放一区| 波多野结衣高清无吗| 精品人妻视频免费看| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费黄网站久久成人精品| 日本在线视频免费播放| aaaaa片日本免费| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品av视频在线免费观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 悠悠久久av| 日本黄色视频三级网站网址| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一级黄色大片毛片| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 2021天堂中文幕一二区在线观| 91在线精品国自产拍蜜月| 两个人视频免费观看高清| 一级毛片我不卡| 最近2019中文字幕mv第一页| 免费在线观看成人毛片| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 麻豆一二三区av精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 美女大奶头视频| 我要看日韩黄色一级片| 老司机午夜福利在线观看视频| 91在线观看av| 国产三级在线视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 99热这里只有是精品在线观看| 麻豆一二三区av精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99久久中文字幕三级久久日本| 成人无遮挡网站| 亚洲人成网站在线播| 一个人看视频在线观看www免费| 蜜臀久久99精品久久宅男| 一级毛片电影观看 | 亚洲精品成人久久久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 高清毛片免费观看视频网站| 日韩制服骚丝袜av| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久成人免费电影| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美在线一区亚洲| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久人人爽人人片av| 亚洲国产精品国产精品| 国内精品久久久久精免费| 亚洲性久久影院| av.在线天堂| 日本与韩国留学比较| 高清日韩中文字幕在线| 有码 亚洲区| av视频在线观看入口| 成人性生交大片免费视频hd| 成人二区视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产一级毛片七仙女欲春2| 美女大奶头视频| 国产黄a三级三级三级人| 一级毛片久久久久久久久女| 日韩欧美精品免费久久| 三级毛片av免费| 国产在视频线在精品| 欧美日本视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本-黄色视频高清免费观看| 色在线成人网| 亚洲18禁久久av| 69人妻影院| 国产成人aa在线观看| 国产久久久一区二区三区| 亚洲三级黄色毛片| 久久久久国产网址| 久久精品人妻少妇| av免费在线看不卡| 一本久久中文字幕| 在线国产一区二区在线| 最新中文字幕久久久久| 日本欧美国产在线视频| 免费av观看视频| 波多野结衣高清无吗| 日韩强制内射视频| 国产精品伦人一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 乱人视频在线观看| 亚洲第一电影网av| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 天天一区二区日本电影三级| 欧美bdsm另类| 男人和女人高潮做爰伦理| 99热精品在线国产| av国产免费在线观看| 岛国在线免费视频观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品一区二区三区人妻视频| 日韩强制内射视频| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲专区国产一区二区| 日韩三级伦理在线观看| 在线免费十八禁| 真人做人爱边吃奶动态| 在线天堂最新版资源| 国产精品无大码| 一级毛片电影观看 | 成年版毛片免费区| 看非洲黑人一级黄片| 日韩强制内射视频| 国产淫片久久久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频| 国产单亲对白刺激| 老女人水多毛片| 久久久久久久久久成人| 国产精品综合久久久久久久免费| 黄片wwwwww| 久久久久久大精品| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日本在线视频免费播放| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 熟女电影av网| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 欧美成人一区二区免费高清观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 一本久久中文字幕| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲av免费在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 97超碰精品成人国产| 少妇人妻一区二区三区视频| 最近手机中文字幕大全| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲av中文av极速乱| 欧美一区二区亚洲| 真实男女啪啪啪动态图| 久久久午夜欧美精品| 两个人视频免费观看高清| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 我要搜黄色片| 久久久久久久亚洲中文字幕| 又粗又爽又猛毛片免费看| 日韩欧美免费精品| 亚洲天堂国产精品一区在线| av在线观看视频网站免费| 久久6这里有精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 老司机午夜福利在线观看视频| 黄色日韩在线| 有码 亚洲区| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| АⅤ资源中文在线天堂| 精品久久久久久久末码| 中文字幕免费在线视频6| 乱码一卡2卡4卡精品| 少妇高潮的动态图| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 天天一区二区日本电影三级| av中文乱码字幕在线| 国产成人福利小说| 国产精华一区二区三区| 内地一区二区视频在线| 一个人看视频在线观看www免费| 久久精品人妻少妇| АⅤ资源中文在线天堂| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产av一区在线观看免费| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产一区二区在线av高清观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品不卡国产一区二区三区| or卡值多少钱| 久久精品国产亚洲av天美| 国产爱豆传媒在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 国内精品久久久久精免费| 日韩欧美精品v在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品久久久久久久久久免费视频| 搡老岳熟女国产| 日本一二三区视频观看| 内射极品少妇av片p| 男女下面进入的视频免费午夜| 天天躁日日操中文字幕| 久久精品国产亚洲网站| 欧美zozozo另类| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品亚洲一级av第二区| 成人三级黄色视频| a级毛片a级免费在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲第一电影网av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 中文亚洲av片在线观看爽| 久久这里只有精品中国| 日韩高清综合在线| 亚洲在线自拍视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| av免费在线看不卡| 嫩草影院入口| 亚洲图色成人| 一个人看的www免费观看视频| 日韩中字成人| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲最大成人中文| 在线观看一区二区三区| 欧美成人a在线观看| 国产综合懂色| 一进一出抽搐gif免费好疼| a级毛片a级免费在线| 国产精品久久久久久久久免| 欧美最新免费一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 免费无遮挡裸体视频| 久久精品国产自在天天线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品一区二区免费欧美| 少妇高潮的动态图| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品人妻久久久久久| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产伦精品一区二区三区视频9| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美色视频一区免费| 久久草成人影院| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美xxxx性猛交bbbb| 中文在线观看免费www的网站| h日本视频在线播放| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费在线观看成人毛片| 亚洲无线观看免费| 欧美+亚洲+日韩+国产| 内射极品少妇av片p| 日本色播在线视频| 成人午夜高清在线视频| 国产久久久一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 久久精品国产清高在天天线| 久久九九热精品免费| 国产探花在线观看一区二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99在线人妻在线中文字幕| 国产淫片久久久久久久久| 成人欧美大片| 日韩av不卡免费在线播放| 黄色视频,在线免费观看| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久大精品| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜福利18| 亚洲综合色惰| 亚洲国产精品成人久久小说 | 成人亚洲精品av一区二区| 不卡视频在线观看欧美| 午夜福利18| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美+日韩+精品| 91av网一区二区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 欧美3d第一页| 麻豆久久精品国产亚洲av| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲自拍偷在线| 99在线视频只有这里精品首页| .国产精品久久| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 欧美成人一区二区免费高清观看| 特级一级黄色大片| 99九九线精品视频在线观看视频| 青春草视频在线免费观看| 99久久精品热视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 搡老岳熟女国产| 国产中年淑女户外野战色| 国产成人精品久久久久久| 久久久久国内视频| 三级经典国产精品| 亚洲国产精品成人综合色| 伦精品一区二区三区| 亚洲国产欧美人成| 国产精品野战在线观看| 九色成人免费人妻av| 又爽又黄a免费视频| 久久亚洲精品不卡| 亚洲欧美精品综合久久99| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产真实乱freesex| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美激情久久久久久爽电影| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲丝袜综合中文字幕| 97在线视频观看| 国产色婷婷99| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 日本一本二区三区精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 久久精品人妻少妇| 最近2019中文字幕mv第一页| 悠悠久久av| 美女cb高潮喷水在线观看| av福利片在线观看| 久久午夜福利片| 大香蕉久久网| 久久韩国三级中文字幕| av福利片在线观看| 97热精品久久久久久| 大香蕉久久网| 夜夜爽天天搞| 小说图片视频综合网站| 成人无遮挡网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一级毛片久久久久久久久女| 国产免费男女视频| 日韩欧美免费精品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 91在线精品国自产拍蜜月| 一个人看视频在线观看www免费| 黄色视频,在线免费观看| 少妇的逼水好多| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产在线男女| 黄色视频,在线免费观看| 久久久久久久久中文| 精品久久国产蜜桃| 国产在线男女| 嫩草影院精品99| 亚洲欧美成人精品一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 欧美日本视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 国产成人福利小说| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲内射少妇av| 国内精品久久久久精免费| 免费高清视频大片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久精品影院6| 黄色欧美视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 亚洲丝袜综合中文字幕| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品亚洲美女久久久| 床上黄色一级片| 精品日产1卡2卡| 婷婷亚洲欧美| 亚洲在线观看片| 日韩精品中文字幕看吧| 婷婷六月久久综合丁香| 免费观看的影片在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲国产精品成人久久小说 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 久久精品国产自在天天线| 国产真实乱freesex| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 九九热线精品视视频播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| ponron亚洲| 国产欧美日韩一区二区精品| 中文字幕av成人在线电影| 午夜激情欧美在线| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 级片在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产探花极品一区二区| 夜夜爽天天搞| 亚洲欧美精品自产自拍| 在线免费十八禁| 亚洲av中文av极速乱| 在线看三级毛片| 午夜福利18| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久久久久伊人网av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲国产欧美人成| 国产精品99久久久久久久久| 久久韩国三级中文字幕| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲欧美清纯卡通| 国产高清视频在线播放一区| 日本黄色片子视频| 在线观看一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成人永久免费在线观看视频| 一夜夜www| 免费无遮挡裸体视频| 久久久久国内视频| 国产爱豆传媒在线观看| 美女高潮的动态| 一级a爱片免费观看的视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 婷婷六月久久综合丁香| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 色哟哟·www| 色5月婷婷丁香| 日日干狠狠操夜夜爽| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲欧美清纯卡通| 日韩人妻高清精品专区| 成年免费大片在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲18禁久久av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩欧美免费精品| 网址你懂的国产日韩在线| 禁无遮挡网站| 国产三级中文精品| 久久久国产成人精品二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产高清三级在线| 欧美性猛交黑人性爽| 日本熟妇午夜| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一进一出抽搐gif免费好疼| aaaaa片日本免费| 在线观看一区二区三区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 天堂√8在线中文| av在线亚洲专区| 91久久精品国产一区二区成人| 小说图片视频综合网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲自拍偷在线| 老司机福利观看| 亚洲av.av天堂| 国内精品久久久久精免费| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日本熟妇午夜| 国内精品宾馆在线| 国产乱人视频| 精品日产1卡2卡| 亚洲av.av天堂| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲av第一区精品v没综合| av福利片在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 深夜a级毛片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲内射少妇av| 伦精品一区二区三区| 国产精品久久久久久av不卡| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 美女高潮的动态| 久久久久久伊人网av| 欧美潮喷喷水| 欧美激情在线99| 亚洲成人av在线免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久久久久久久成人| 精品久久久久久久末码| 成人毛片a级毛片在线播放| 性欧美人与动物交配| www.色视频.com| 国产欧美日韩精品一区二区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 国产一区二区激情短视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 99久久无色码亚洲精品果冻| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 深爱激情五月婷婷| 国产黄片美女视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 成年免费大片在线观看| 日日撸夜夜添| a级一级毛片免费在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产黄片美女视频| 能在线免费观看的黄片| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 成人漫画全彩无遮挡| h日本视频在线播放| 乱系列少妇在线播放| 国产精品无大码| 真实男女啪啪啪动态图| 91久久精品国产一区二区三区| 精品福利观看| 最近的中文字幕免费完整| 男人舔女人下体高潮全视频| 黄色欧美视频在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 美女高潮的动态| 美女黄网站色视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 日本与韩国留学比较| 免费黄网站久久成人精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 在现免费观看毛片| 国产 一区精品| 国内精品久久久久精免费| 午夜亚洲福利在线播放| 三级国产精品欧美在线观看| 性欧美人与动物交配| 五月玫瑰六月丁香| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 1024手机看黄色片| 国产 一区精品| 国内精品久久久久精免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲中文字幕日韩| 一级av片app| 国产精品人妻久久久影院| 欧美人与善性xxx| 国产精华一区二区三区| 搡老岳熟女国产| 国内精品久久久久精免费| av视频在线观看入口| 亚洲成人久久性| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品1区2区在线观看.| 午夜激情欧美在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 中文资源天堂在线| 久久久久国内视频| 欧美日韩在线观看h| 精品一区二区三区av网在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 国产精品三级大全| 精品福利观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产av在哪里看| av在线老鸭窝| 成人午夜高清在线视频| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品永久免费网站| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美三级亚洲精品| 99久国产av精品| 国产成人福利小说| 网址你懂的国产日韩在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 天天一区二区日本电影三级| 国产成人aa在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 少妇的逼水好多| 美女内射精品一级片tv| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产成人a区在线观看| 中国国产av一级| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品456在线播放app| АⅤ资源中文在线天堂| av天堂中文字幕网| 久久久久性生活片| 国产精品人妻久久久影院| 欧美激情久久久久久爽电影| 少妇熟女欧美另类| 亚洲美女视频黄频| 国产午夜精品论理片| 亚洲av免费高清在线观看| 国产高清激情床上av| 欧美日本视频|