• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    BTG2、ARL2在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及與其臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性

    2022-12-26 12:08:18杜偉鵬汪海霞
    實(shí)用癌癥雜志 2022年12期
    關(guān)鍵詞:生存率肺癌病理

    杜偉鵬 徐 曼 汪海霞 包 孟

    肺癌是全球癌癥死亡的主要原因之一,其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80%以上[1-2]。盡管近年來(lái)在NSCLC的早期診斷和治療方面取得了一些進(jìn)展,但NSCLC患者的預(yù)后仍然很差[3]。當(dāng)前的研究方向是確定新的治療靶點(diǎn)和策略,并將它們納入現(xiàn)有的治療方案,以提高治療效果。ADP的核糖基化樣因子2(ARL2)是ADP核糖基化因子(ARF)家族的成員,是位于11號(hào)染色體(11q13)上的高度保守基因。ARF亞家族在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、重組和修復(fù)中起重要作用[4]。ARL2的過(guò)度表達(dá)能夠?qū)⒔Y(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移、增殖和致瘤性進(jìn)行抑制[5]。在宮頸癌中,ARL2表達(dá)較其癌旁組織更高,且與患者不良預(yù)后相關(guān)[6]。BTG2(B細(xì)胞異位基因2)基因是BTG/TOB家族的重要成員。已知該家族基因的過(guò)度表達(dá)在體外抑制細(xì)胞增殖,BTG蛋白可能在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)或細(xì)胞凋亡中起作用[7]。BTG2 mRNA在胸腺癌組織中表達(dá)丟失,而在小鼠胸腺中高表達(dá),這表明BTG2在胸腺癌變過(guò)程中具有潛在作用[8]。此外,與非致瘤性乳腺上皮細(xì)胞相比,BTG2在人乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯降低[9]。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn),ARL2、BTG2均是急性髓系白血病的促凋亡基因,二者與急性髓系白血病的化療耐藥有關(guān)[10]。但是目前尚無(wú)關(guān)于ARL2、BTG2表達(dá)與NSCLC關(guān)系的研究報(bào)道,因此本研究擬探討ARL2、BTG2蛋白在NSCLC患者癌組織中表達(dá)水平及臨床預(yù)后意義,以期為NSCLC的治療提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 臨床資料

    選取2014年10月至2016年9月間本院收治的非小細(xì)胞肺患者126例為研究對(duì)象,收集相應(yīng)的原發(fā)NSCLC組織及相應(yīng)的癌旁正常組織。標(biāo)本用10%福爾馬林固定并包埋在石蠟中進(jìn)行病理檢測(cè)及免疫組化檢測(cè)。該研究獲得本院研究倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。在手術(shù)前獲得患者的知情同意。

    納入標(biāo)準(zhǔn):①病理診斷確認(rèn)為非小細(xì)胞肺癌;②患者術(shù)前未接受化療或放療;③NSCLC疾病組織學(xué)根據(jù)世界衛(wèi)生組織的標(biāo)準(zhǔn)確定;④根據(jù)當(dāng)前國(guó)際抗癌聯(lián)盟腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分類進(jìn)行病理分期。排除標(biāo)準(zhǔn):①年齡、性別、病史和腫瘤信息不完整;②術(shù)后隨訪失敗或死亡原因不明;③存在其他惡性腫瘤或惡性腫瘤因其他突發(fā)疾病(包括心腦血管疾病)死亡;④懷孕或哺乳的患者。

    1.2 研究方法

    1.2.1 免疫組化法測(cè)定ARL2、BTG2表達(dá)及判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)所有126個(gè)組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析。切片在二甲苯中脫蠟,并使用分級(jí)酒精系列脫水,然后用甲醇中的0.5% H2O2封閉內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶活性10 min。在室溫條件將切片和10%正常山羊血清于磷酸鹽的緩沖鹽水 (PBS) 內(nèi)孵育1 h把非特異性抗原阻斷。在不洗滌的情況下,將切片與抗ARL2、BTG2(1∶1000,1∶2000;中國(guó)碧云天生物科技)在PBS中于4 ℃下孵育過(guò)夜。生物素化山羊抗兔免疫球蛋白 G(1∶400;Sigma,St Louis MO,USA)與切片在室溫下孵育1 h,并用鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物檢測(cè)。通過(guò)將切片與0.1% 3,3-二氨基聯(lián)苯胺(Sigma)在含有0.05% H2O2的PBS中室溫孵育5 min。組織標(biāo)本由兩名病理學(xué)家在雙盲條件下分別查看,其事先不了解標(biāo)本的臨床病理狀態(tài)。ARL2、BTG2在NSCLC標(biāo)本中的表達(dá)通過(guò)在低倍(×40)下掃描整個(gè)組織標(biāo)本進(jìn)行評(píng)估,然后在高倍(×200和×400)下進(jìn)行確認(rèn)。陽(yáng)性細(xì)胞的百分比被記為“0”(<5%,陰性)、“1”(5%~25%,弱陽(yáng)性)、“2”(25%~50%,中陽(yáng)性)和“3”(>50%,強(qiáng)陽(yáng)性),分別染色強(qiáng)度分別記為“0”(無(wú)染色)、“1”(弱染色)、“2”(中等染色)和“3”(強(qiáng)染色)。陽(yáng)性細(xì)胞百分比和細(xì)胞染色強(qiáng)度均以雙盲方式確定。最終ARL2、BTG2免疫染色分?jǐn)?shù)是使用陽(yáng)性細(xì)胞分?jǐn)?shù)的百分比乘以染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)計(jì)算的,范圍為0~9。

    1.2.2 隨訪 術(shù)后的每3個(gè)月利用電話及問(wèn)卷調(diào)查方式將全部的合格患者的信息進(jìn)行更新。從最開(kāi)始的手術(shù)日期直至死亡時(shí)間點(diǎn)計(jì)算總生存期。通過(guò)家庭報(bào)告確定參與者的死亡,并通過(guò)查閱公共記錄進(jìn)行核實(shí)。所有患者出院后均電話隨訪5年,隨訪率為100%。

    1.3 統(tǒng)計(jì)分析

    應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS 21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)分析ARL2、BTG2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系,使用log-rank檢驗(yàn)分析生存率差異,多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型探討預(yù)后相關(guān)因素,P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。

    2 結(jié)果

    2.1 ARL2、BTG2在癌旁組織、非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)比較

    由表1可見(jiàn),非小細(xì)胞肺癌組中ARL2蛋白陽(yáng)性率高于癌旁組(66.7% vs 25.4%),BTG2蛋白陽(yáng)性率低于癌旁組(20.6% vs 71.4%)(P<0.05)。

    表1 ARL2、BTG2在癌旁組、非小細(xì)胞肺癌組中表達(dá)比較(例,%)

    2.2 ARL2、BTG2蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

    由表2可見(jiàn),ARL2、BTG2蛋白表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)關(guān)(P>0.05);與腫瘤最大直徑、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)、復(fù)發(fā)相關(guān),且腫瘤最大直徑至少5 cm、浸潤(rùn)深度越深、TNM分期越高、病理級(jí)別越高、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌患者ARL2陽(yáng)性表達(dá)率更高,BTG2陽(yáng)性表達(dá)率更低(P<0.05)。

    2.3 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后生存情況

    126例非小細(xì)胞肺癌患者中,自出院后至隨訪結(jié)束存活4~60個(gè)月,5年生存率為47.6%(60/126);其中ARL2陽(yáng)性和陰性5年總生存率分別為26/84(31.0%)和34/42(81.0%),而B(niǎo)TG2陽(yáng)性和陰性5年總生存率分別為25/26(96.1%)和35/100(35.0%);ARL2陰性、BTG2陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌患者5年生存率均顯著增高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.254、18.205,P<0.001)。

    表2 ARL2、BTG2蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

    2.4 影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的單因素分析

    單因素分析得出:腫瘤最大直徑至少3 cm、TNM分期為Ⅲ~Ⅳ期、浸潤(rùn)深度至少為1 cm、出現(xiàn)了淋巴血管浸潤(rùn)、有復(fù)發(fā)、高病理級(jí)別、ARL2陽(yáng)性、BTG2陰性的非小細(xì)胞肺癌患者5年內(nèi)生存率下降明顯(P<0.05),見(jiàn)表 3。

    表3 影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的單因素分析(例,%)

    2.5 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后影響因素多因素Cox回歸分析

    Cox回歸分析顯示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、病理級(jí)別高、ARL2陽(yáng)性、BTG2陰性是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),見(jiàn)表4。

    3 討論

    NSCLC是最常見(jiàn)的肺癌類型,其5年總生存率僅為39%[11]。最近,腫瘤的分子靶向治療已被引入臨床治療,靶向癌癥治療的出現(xiàn)顯著增加了患者生存期,同時(shí)最大限度地減少治療毒性。然而,內(nèi)在或獲得性耐藥機(jī)制限制了它們的臨床療效。因此,更好地了解NSCLC的分子機(jī)制有助于確定新的治療靶點(diǎn)或開(kāi)發(fā)新的NSCLC治療方式。

    ARL2是一種核和細(xì)胞外蛋白,參與多種生理和病理狀況,包括免疫反應(yīng)、炎癥和癌癥。比較源自卵巢癌的高侵襲性和低侵襲性亞克隆的基因表達(dá)譜的cDNA微陣列分析表明,高ARL2表達(dá)與較差的臨床病理特征相關(guān)[12]。根據(jù)細(xì)胞定位,ARL2表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞外間隙,與食管鱗狀細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)。ARL2過(guò)表達(dá)與腫瘤分級(jí)、分期、較短的無(wú)病生存期和顯著相關(guān)。從功能上講,ARL2是成年生物體中自噬、線粒體質(zhì)量控制、基因表達(dá)調(diào)節(jié)和器官功能所必需的[13]。敲除ARL2通過(guò)VEGF-C和NF-KB通路抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,而ARL2的異位表達(dá)通過(guò)抑制BTB誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移來(lái)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖、侵襲;此外ARL2通過(guò)信號(hào)素3A的表觀遺傳沉默,降低Bax和p53表達(dá),并通過(guò)激活FAK/PI3K/mTOR通路增強(qiáng)Bcl-xL、Bcl-2、CyclinD1和NFKB的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[14]。此外,細(xì)胞外ARL2增強(qiáng)了對(duì)P-gp相關(guān)藥物(阿霉素和長(zhǎng)春新堿)的抗性,而敲除ARL2可恢復(fù)化學(xué)敏感性[15]。在本研究中,我們通過(guò)免疫組化法測(cè)定出ARL2表達(dá)在NSCLC組織中顯著高于相鄰非腫瘤組織中的表達(dá)。這些觀察結(jié)果支持ARL2可能作為NSCLC中的致癌基因的假設(shè),也表明ARL2可能在NSCLC的腫瘤發(fā)生中起重要作用。此外,為了研究ARL2表達(dá)是否與NSCLC的進(jìn)展有關(guān),通過(guò)免疫組織化學(xué)比較了126例NSCLC患者的ARL2表達(dá)水平和臨床病理特征。我們發(fā)現(xiàn)ARL2高表達(dá)與腫瘤分級(jí)、腫瘤大小、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析顯示ARL2高表達(dá)與NSCLC患者的總生存率呈負(fù)相關(guān)。更重要的是,使用Cox回歸模型的進(jìn)一步分析證實(shí),ARL2表達(dá)是預(yù)測(cè)NSCLC患者總生存時(shí)間的獨(dú)立因素。這些發(fā)現(xiàn)提供了證據(jù)表明ARL2可被視為預(yù)測(cè)NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。

    BTG2是早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因,在多種器官和組織中高度表達(dá),包括肺、腸、胰腺和前列腺。BTG2的過(guò)表達(dá)可抑制某些腫瘤(包括腎癌細(xì)胞)的細(xì)胞增殖和侵襲,并與PRMT1協(xié)同發(fā)揮抗增殖基因的作用[16];BTG2參與癌細(xì)胞的發(fā)育和分化,可以促進(jìn)視黃酸誘導(dǎo)的造血細(xì)胞分化;BTG2能夠促進(jìn)或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞侵襲;BTG2是p53靶基因之一,參與DNA損傷修復(fù)過(guò)程。它通過(guò)依賴于p53的Ras信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑起作用,并在DNA受損時(shí)顯著增加表達(dá),BTG2在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用[17-18]。近期研究發(fā)現(xiàn),BTG2是p53依賴性Ras途徑中的主要下游抗活性效應(yīng)物,與人類腫瘤發(fā)生中的p53途徑相關(guān)。BTG2通過(guò)抑制PI3K/AKT通路來(lái)抑制癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[19]。此外,BTG2過(guò)表達(dá)通過(guò)下調(diào)STAT3通路抑制白細(xì)胞介素6(IL-6)表達(dá),并抑制JAK2-STAT3信號(hào)通路中活性氧(ROS)的產(chǎn)生,對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)有負(fù)面影響。BTG2表達(dá)也被氧化應(yīng)激通過(guò)ROS蛋白激酶C-ΝFκΒ途徑上調(diào),該途徑與p53狀態(tài)無(wú)關(guān)。因此,BTG2參與了一些對(duì)癌癥發(fā)展和進(jìn)展至關(guān)重要的途徑。本研究中非小細(xì)胞肺癌組BTG2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率低于癌旁組;BTG2蛋白表達(dá)與腫瘤最大徑、TNM分期、浸潤(rùn)深度、病理級(jí)別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)相關(guān)性明顯,且腫瘤最大腫瘤直徑至少3 cm、TNM的分期為Ⅲ~Ⅳ期、浸潤(rùn)深度至少為1 cm、出現(xiàn)了淋巴血管的浸潤(rùn)、有復(fù)發(fā)、高病理級(jí)別、ARL2陽(yáng)性、BTG2陰性的非小細(xì)胞肺癌患者5年內(nèi)的生存率縮短明顯(P<0.05)。TNM的分期為Ⅲ~Ⅳ期、高病理級(jí)別、ARL2陽(yáng)性、BTG2陰性是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。這提示,BTG2蛋白在非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中低表達(dá),BTG2低表達(dá)是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

    表4 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后影響因素多因素Cox回歸分析

    綜上所述,非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中ARL2表達(dá)升高,BTG2蛋白表達(dá)降低;ARL2高表達(dá)、BTG2低表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

    猜你喜歡
    生存率肺癌病理
    中醫(yī)防治肺癌術(shù)后并發(fā)癥
    對(duì)比增強(qiáng)磁敏感加權(quán)成像對(duì)肺癌腦轉(zhuǎn)移瘤檢出的研究
    病理診斷是精準(zhǔn)診斷和治療的“定海神針”
    開(kāi)展臨床病理“一對(duì)一”教學(xué)培養(yǎng)獨(dú)立行醫(yī)的病理醫(yī)生
    “五年生存率”不等于只能活五年
    人工智能助力卵巢癌生存率預(yù)測(cè)
    “五年生存率”≠只能活五年
    不一致性淋巴瘤1例及病理分析
    HER2 表達(dá)強(qiáng)度對(duì)三陰性乳腺癌無(wú)病生存率的影響
    microRNA-205在人非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義
    日韩视频在线欧美| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲不卡免费看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 免费看不卡的av| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品一二三区在线看| av不卡在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲四区av| 我的老师免费观看完整版| 大香蕉97超碰在线| 国产免费福利视频在线观看| 一本大道久久a久久精品| 欧美日韩综合久久久久久| 人妻人人澡人人爽人人| 人体艺术视频欧美日本| 性色avwww在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 国产在视频线精品| 国产高清不卡午夜福利| 一区二区三区免费毛片| av福利片在线观看| 99九九在线精品视频 | 免费高清在线观看视频在线观看| 国产成人aa在线观看| 男人舔奶头视频| 国产亚洲一区二区精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美丝袜亚洲另类| 美女主播在线视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲怡红院男人天堂| 在线观看人妻少妇| 国产成人精品婷婷| 国产又色又爽无遮挡免| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久久久久久成人| 天美传媒精品一区二区| 成人免费观看视频高清| 好男人视频免费观看在线| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品久久久久久av不卡| av福利片在线观看| av不卡在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产成人aa在线观看| 街头女战士在线观看网站| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲怡红院男人天堂| 乱码一卡2卡4卡精品| av免费在线看不卡| 国产高清三级在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 夜夜爽夜夜爽视频| 精品一区二区免费观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 免费观看的影片在线观看| 久久热精品热| 色视频www国产| 精品一区二区免费观看| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 天天操日日干夜夜撸| 久久精品夜色国产| 国产精品无大码| 内地一区二区视频在线| 各种免费的搞黄视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费观看性生交大片5| 国产高清不卡午夜福利| 黄色视频在线播放观看不卡| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产乱人偷精品视频| 777米奇影视久久| 大话2 男鬼变身卡| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲成人av在线免费| 中文资源天堂在线| 久久久国产欧美日韩av| 超碰97精品在线观看| 国产91av在线免费观看| 国产成人精品婷婷| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 成年人午夜在线观看视频| 2022亚洲国产成人精品| 久久久久久久久久久丰满| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久久国产网址| 在线 av 中文字幕| 日本午夜av视频| 97超碰精品成人国产| 国产精品不卡视频一区二区| .国产精品久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人一区二区在线| 又爽又黄a免费视频| 欧美日韩av久久| 久久午夜福利片| 亚洲va在线va天堂va国产| 男女边摸边吃奶| 一个人免费看片子| 国产高清有码在线观看视频| 欧美精品一区二区大全| 99久久人妻综合| 视频中文字幕在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲成人一二三区av| 国产男人的电影天堂91| 国产精品.久久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久久久伊人网av| 国产毛片在线视频| 下体分泌物呈黄色| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产毛片在线视频| 乱系列少妇在线播放| 视频区图区小说| 人人妻人人看人人澡| 人妻人人澡人人爽人人| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 十八禁高潮呻吟视频 | 人妻系列 视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 精品久久久久久电影网| 精品视频人人做人人爽| 一区二区三区乱码不卡18| 在线观看免费日韩欧美大片 | 91久久精品国产一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 97在线视频观看| 一级av片app| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲精品乱久久久久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产在线视频一区二区| 少妇熟女欧美另类| 国产精品免费大片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 一级av片app| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品一区二区性色av| 老熟女久久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| h视频一区二区三区| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲国产精品专区欧美| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产乱来视频区| 国产精品免费大片| 在线看a的网站| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品少妇内射三级| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美激情国产日韩精品一区| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品国产成人久久av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲色图综合在线观看| 国产一区二区三区av在线| 91精品一卡2卡3卡4卡| a级毛色黄片| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品视频女| 蜜桃在线观看..| 久久精品夜色国产| 日韩强制内射视频| 日韩人妻高清精品专区| av在线观看视频网站免费| 日本av免费视频播放| 日日啪夜夜撸| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美区成人在线视频| 黄色欧美视频在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 免费av中文字幕在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一级毛片aaaaaa免费看小| 最近的中文字幕免费完整| 国产男女内射视频| 日本黄大片高清| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品一区www在线观看| 国产视频首页在线观看| 黄色毛片三级朝国网站 | 国产探花极品一区二区| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产免费又黄又爽又色| 久热久热在线精品观看| 水蜜桃什么品种好| 国内精品宾馆在线| 久久久久久久久大av| 久久久久久久久久人人人人人人| 一级爰片在线观看| 国产 精品1| 久久精品久久精品一区二区三区| 一区二区av电影网| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 99久久精品一区二区三区| 一级黄片播放器| 久久97久久精品| 少妇人妻久久综合中文| 成人免费观看视频高清| 激情五月婷婷亚洲| 日本午夜av视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产午夜精品一二区理论片| 麻豆乱淫一区二区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜av观看不卡| 岛国毛片在线播放| 丁香六月天网| 男人爽女人下面视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 天天操日日干夜夜撸| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品伦人一区二区| 国产成人免费无遮挡视频| 少妇人妻久久综合中文| 22中文网久久字幕| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 777米奇影视久久| 国产精品国产三级专区第一集| 一个人看视频在线观看www免费| 99热这里只有是精品在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产一区二区三区av在线| 久久鲁丝午夜福利片| 久久精品国产亚洲av天美| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 多毛熟女@视频| 久久久久久久久久久久大奶| 久久毛片免费看一区二区三区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 男女边吃奶边做爰视频| 国产一区二区三区av在线| 久久国产精品大桥未久av | 最新中文字幕久久久久| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲成人手机| 亚洲综合色惰| 亚洲av欧美aⅴ国产| 伊人久久精品亚洲午夜| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久精品夜色国产| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产亚洲最大av| 99热网站在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 在线观看免费视频网站a站| 久久久久久久国产电影| 大香蕉97超碰在线| 亚洲情色 制服丝袜| 极品人妻少妇av视频| 欧美三级亚洲精品| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 男人和女人高潮做爰伦理| 夫妻午夜视频| 国产一区二区在线观看日韩| 最近中文字幕2019免费版| 在线播放无遮挡| 97在线人人人人妻| 免费看日本二区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品视频女| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 9色porny在线观看| 99久久精品热视频| 只有这里有精品99| 欧美精品一区二区大全| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 少妇精品久久久久久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲情色 制服丝袜| 国产男女内射视频| 免费大片18禁| 黄色毛片三级朝国网站 | 九九爱精品视频在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲国产日韩一区二区| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜福利,免费看| 国产精品人妻久久久久久| 国产色爽女视频免费观看| 内地一区二区视频在线| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久99热6这里只有精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av国产久精品久网站免费入址| 一二三四中文在线观看免费高清| 丰满乱子伦码专区| 日韩av免费高清视频| 亚洲成人手机| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久精品免费免费高清| 蜜桃在线观看..| 天堂中文最新版在线下载| 美女主播在线视频| 精品久久国产蜜桃| 成人无遮挡网站| 国产精品久久久久成人av| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲av在线观看美女高潮| 三上悠亚av全集在线观看 | 国产高清不卡午夜福利| .国产精品久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美最新免费一区二区三区| 三级经典国产精品| 精品酒店卫生间| 亚洲经典国产精华液单| 看十八女毛片水多多多| 国产黄片美女视频| 波野结衣二区三区在线| 久久国产精品大桥未久av | 噜噜噜噜噜久久久久久91| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一级毛片电影观看| av免费在线看不卡| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲av.av天堂| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 日本wwww免费看| 精品久久久久久电影网| 国产成人91sexporn| 少妇人妻久久综合中文| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品色激情综合| 国产男人的电影天堂91| 国产精品三级大全| av天堂久久9| 观看美女的网站| 视频中文字幕在线观看| 精品一区在线观看国产| 一级二级三级毛片免费看| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久ye,这里只有精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 午夜福利影视在线免费观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 毛片一级片免费看久久久久| 国产亚洲精品久久久com| 少妇 在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 丁香六月天网| 午夜免费男女啪啪视频观看| 黄色一级大片看看| 天堂中文最新版在线下载| freevideosex欧美| 又大又黄又爽视频免费| 五月玫瑰六月丁香| av天堂久久9| 99久久综合免费| 免费观看的影片在线观看| 乱系列少妇在线播放| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 嫩草影院新地址| 中文字幕久久专区| h日本视频在线播放| 男女免费视频国产| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜激情久久久久久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜91福利影院| 亚洲精品第二区| 高清在线视频一区二区三区| 两个人免费观看高清视频 | 午夜激情久久久久久久| 日韩成人av中文字幕在线观看| 最近手机中文字幕大全| 国产精品一二三区在线看| av黄色大香蕉| 日韩成人伦理影院| 国产亚洲欧美精品永久| av天堂久久9| 亚洲va在线va天堂va国产| 韩国av在线不卡| 国产日韩欧美亚洲二区| 美女中出高潮动态图| 精品酒店卫生间| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美另类一区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产老妇伦熟女老妇高清| 美女视频免费永久观看网站| 国产色婷婷99| 看免费成人av毛片| 男女边摸边吃奶| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久网色| 免费黄网站久久成人精品| 久久久精品免费免费高清| 亚洲成人av在线免费| 国产精品国产三级专区第一集| 国产黄频视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 少妇丰满av| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产极品天堂在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费大片18禁| 大片免费播放器 马上看| 国产69精品久久久久777片| 91成人精品电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 99久久人妻综合| 免费看光身美女| 两个人的视频大全免费| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 婷婷色av中文字幕| 两个人免费观看高清视频 | 色吧在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 最近手机中文字幕大全| 国产一级毛片在线| 少妇精品久久久久久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产成人精品福利久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久青草综合色| 51国产日韩欧美| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日本与韩国留学比较| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲精品国产成人久久av| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美丝袜亚洲另类| 黄色怎么调成土黄色| 丰满迷人的少妇在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 韩国高清视频一区二区三区| 乱码一卡2卡4卡精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产一区二区在线观看av| 一区二区三区四区激情视频| 9色porny在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 18禁动态无遮挡网站| 日韩一区二区视频免费看| 大话2 男鬼变身卡| 看非洲黑人一级黄片| 久久久国产一区二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成人二区视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 18+在线观看网站| 欧美三级亚洲精品| 日本vs欧美在线观看视频 | 观看av在线不卡| 视频中文字幕在线观看| 简卡轻食公司| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美区成人在线视频| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 久久久久久久久久人人人人人人| 最新中文字幕久久久久| 久久影院123| 大香蕉97超碰在线| 亚洲第一av免费看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 我要看日韩黄色一级片| 99热这里只有是精品在线观看| 国产成人91sexporn| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 日日啪夜夜爽| 精品视频人人做人人爽| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美日韩在线观看h| 亚洲精品国产色婷婷电影| 我要看黄色一级片免费的| 免费在线观看成人毛片| 日韩视频在线欧美| 熟女电影av网| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 最新的欧美精品一区二区| 看非洲黑人一级黄片| 最近中文字幕高清免费大全6| 极品教师在线视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 精品一区二区免费观看| 最近手机中文字幕大全| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产在线视频一区二区| 只有这里有精品99| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 十分钟在线观看高清视频www | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲国产精品国产精品| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲美女视频黄频| 一本大道久久a久久精品| 久久久a久久爽久久v久久| 我的老师免费观看完整版| 国产一区二区在线观看av| 欧美bdsm另类| 成人漫画全彩无遮挡| 久久久久久久国产电影| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲中文av在线| .国产精品久久| 一级片'在线观看视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 乱人伦中国视频| 看十八女毛片水多多多| 国产一区二区在线观看日韩| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 如何舔出高潮| 熟女av电影| 午夜av观看不卡| 18禁在线播放成人免费| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久毛片免费看一区二区三区| 大香蕉久久网| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久人人爽人人片av| 人妻一区二区av| 亚洲av国产av综合av卡| 日韩av免费高清视频| 香蕉精品网在线| 欧美日本中文国产一区发布| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 丝瓜视频免费看黄片| 欧美精品一区二区大全| 搡女人真爽免费视频火全软件| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 成年av动漫网址| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国模一区二区三区四区视频| 国产av一区二区精品久久| 国产免费一级a男人的天堂| 嫩草影院入口| 久久久久久久久久成人| 综合色丁香网| 国产又色又爽无遮挡免| 精华霜和精华液先用哪个| 2021少妇久久久久久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一二三四中文在线观看免费高清| 一级爰片在线观看| 黄色一级大片看看| 欧美日韩在线观看h| 亚洲精品日本国产第一区| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 国产成人精品一,二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲av二区三区四区| 少妇人妻久久综合中文| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美+日韩+精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费av不卡在线播放| av在线播放精品| 看十八女毛片水多多多| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一本大道久久a久久精品| 插逼视频在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 一个人看视频在线观看www免费| 视频区图区小说| 九色成人免费人妻av| 久久av网站| 亚洲经典国产精华液单| 少妇熟女欧美另类| 精品视频人人做人人爽| 午夜激情福利司机影院| 丰满饥渴人妻一区二区三| 天堂中文最新版在线下载| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲国产精品999| 亚洲综合色惰| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产伦在线观看视频一区| 深夜a级毛片| 久久青草综合色| av在线老鸭窝| 欧美日韩在线观看h|