腦膜瘤組織中H3K27me3的表達(dá)及臨床意義

司昊天 任虹宇 王曉斌 張小廣 馬建功 何 承

腦膜瘤為中樞神經(jīng)系統(tǒng)多發(fā)腫瘤，多數(shù)為良性，約占全部腦腫瘤的19.2%～30.0%[1]。組蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)是一類重要的轉(zhuǎn)錄抑制性翻譯后修飾，在基因表達(dá)和染色質(zhì)功能調(diào)節(jié)中具有重要功效[2]。臨床有關(guān)研究說明，H3K27me3在平常的腦膜上皮不表達(dá)，而在腦膜瘤組織內(nèi)表達(dá)，少數(shù)腦膜瘤組織內(nèi)的H3K27me3表達(dá)還會(huì)丟失，而該物質(zhì)表達(dá)丟失的腦膜瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高[3]。基于此，為更深入的了解H3K27me3能夠當(dāng)成早期評判腦膜瘤級別與預(yù)后的重要指標(biāo)，本研究以2018月2月至2019年2月本院診治的75例腦膜瘤患者為研究對象，探究其在腦膜瘤組織中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018月2月至2019年2月該院收治的75例腦膜瘤患者為對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均經(jīng)病理檢查證實(shí)為腦膜瘤；患者的病歷有關(guān)資料齊全；患者納入遵照自愿原則，簽署知情同意書，且依從性較高。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在心肝腎等臟器功能不全者；存在全身性感染者；存有意識(shí)障礙、精神障礙或難以進(jìn)行正常交流者；存有免疫系統(tǒng)病癥者；合并嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者；合并血液系統(tǒng)疾病者。所有患者中男性43例，女性32例；年齡35～69歲，平均年齡(53.26±2.49)歲；體重指數(shù)19.6～27.7 kg/m2，平均體重指數(shù)(24.28±1.67)kg/m2；腦膜瘤WHO分級：36例Ⅰ級，25例Ⅱ級，14例Ⅲ級；WHOⅠ級腦膜瘤組織學(xué)亞型：12例腦膜上皮細(xì)胞型，10例纖維型，9例過度細(xì)胞(混合型)，5例血管瘤型；WHOⅡ級腦膜瘤組織學(xué)亞型：4例脊索樣型，18例非典型性腦膜瘤，3例透明細(xì)胞型；WHOⅢ級腦膜瘤組織學(xué)亞型：3例乳頭型，9例間變型腦膜瘤，2例橫紋肌樣型。

1.2 方法

所有患者均在行手術(shù)時(shí)取其腦膜瘤組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法檢測H3K27me3蛋白表達(dá)。檢測方法：全部標(biāo)本均由10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，切成4 μm切片，然后施行脫蠟處理，滴加3%的過氧化氫，在室溫環(huán)境之下進(jìn)行30 min的孵育，然后用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌3次；把切片放到含有枸櫞酸鹽抗原的修復(fù)盒，在高壓鍋中進(jìn)行20 min的高壓處理，等到冷卻之后再次用PBS沖洗3次；之后滴加10%兔血清后再次行30 min的孵育，丟棄血清，滴加H3K27me3單克隆體，空白對照滴加PBS代替一抗，把切片放于4 ℃的冰箱中保存；于次日清晨取出，滴加生物素化二抗施以30 min的孵育，PBS沖洗3次；然后滴加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液孵育10 min，PBS洗滌3次，最后進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色7 min，蘇木精復(fù)染30 s，自來水沖洗返藍(lán)，封片鏡檢。結(jié)果判定：按照著色強(qiáng)度以及數(shù)目評判H3K27me3蛋白表達(dá)。著色強(qiáng)度：0分：未染色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：深褐色。著色數(shù)量：0分：著色細(xì)胞數(shù)<5%；1分：5%≤著色細(xì)胞數(shù)<25%；2分：25%≤著色細(xì)胞數(shù)<50%；3分：著色細(xì)胞數(shù)≥50%。按照著色強(qiáng)度評分與著色數(shù)量評分乘積判斷，0～2分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)不同WHO分級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白表達(dá)對比。(2)H3K27me3蛋白表達(dá)與腦膜瘤患者臨床病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同WHO分級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白表達(dá)

WHO Ⅰ級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白陽性表達(dá)率高于WHO Ⅱ級與WHO Ⅲ級，且WHO Ⅱ級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白陽性表達(dá)率高于WHO Ⅲ級，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表1。

表1 不同WHO分級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白表達(dá)情況比較(例，%)

2.2 H3K27me3蛋白表達(dá)與腦膜瘤患者臨床病理特征的關(guān)系

H3K27me3蛋白表達(dá)與腦膜瘤患者的年齡、性別、WHOⅠ級腦膜瘤組織學(xué)亞型、WHOⅡ級腦膜瘤組織學(xué)亞型以及WHOⅢ級腦膜瘤組織學(xué)亞型均無關(guān)(P>0.05)，見表2。

表2 H3K27me3蛋白表達(dá)與腦膜瘤患者臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

腦膜瘤屬較為常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤之一，手術(shù)是主要治療手段，可通過切除病灶減輕相關(guān)遵照[4]。根據(jù)WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)及組織學(xué)特征，可將腦膜瘤劃分成Ⅰ～Ⅲ級，腦膜瘤手術(shù)之后的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)、術(shù)后是否需聯(lián)同放療以及患者的預(yù)后全部與該病的級別聯(lián)系緊密[5-6]。但該病的組織學(xué)亞型具有多樣性，加之臨床分級較為繁復(fù)，因此尋求可幫助臨床進(jìn)行腦膜瘤分級的分子標(biāo)志物成為目前臨床診斷的關(guān)注重點(diǎn)。

臨床研究提示，腫瘤的發(fā)生發(fā)展是由表現(xiàn)遺傳不正常，導(dǎo)致基因的DNA序列不出現(xiàn)轉(zhuǎn)變的前提下，基因的能力發(fā)生可遺傳的變化，進(jìn)而誘發(fā)表達(dá)異常而引發(fā)，往往以組蛋白修飾、DNA甲基化等為主要表現(xiàn)[7-8]。核心組蛋白在翻譯結(jié)束過后，其N端尾部發(fā)生甲基化、乙?；冉M蛋白修飾，此種修飾將造成染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)出現(xiàn)變化，從而對復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等重要的生理過程構(gòu)成較多影響，最終對其下游基因的表達(dá)予以調(diào)控[9-10]。H3K27me3的修飾為表現(xiàn)遺傳內(nèi)關(guān)鍵的基因沉默標(biāo)志，參與調(diào)控細(xì)胞分化與增殖間的平穩(wěn)，其表達(dá)異常將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖分化失去控制，最終導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。多梳抑制復(fù)合物2(EZH2)可產(chǎn)生H3K27me3，EZH2，在多種腫瘤內(nèi)呈高表達(dá)，其表達(dá)異?；蚬δ墚a(chǎn)生轉(zhuǎn)變?nèi)繒?huì)導(dǎo)致H3K27me3的表達(dá)紊亂。臨床較多的研究顯示，H3K27me3在乳腺癌等癌癥內(nèi)均存在異常表達(dá)，也是進(jìn)行獨(dú)立預(yù)后評判的關(guān)鍵指標(biāo)，H3K27me3在神經(jīng)鞘瘤中較高表達(dá)，而在惡性外周神經(jīng)鞘膜瘤內(nèi)表達(dá)丟失[11-12]。本研究結(jié)果顯示，WHO Ⅰ級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白陽性表達(dá)率[88.89%(32/36)]高于WHO Ⅱ級[48.00%(12/25)]與WHO Ⅲ級[21.43%(3/14)]，且WHO Ⅱ級腦膜瘤組織中H3K27me3蛋白陽性表達(dá)率[48.00%(12/25)]高于WHO Ⅲ級[21.43%(3/14)]。提示H3K27me3蛋白在腦膜瘤組織中呈高表達(dá)，且伴隨腦膜瘤WHO級別的上升，其表達(dá)會(huì)逐步的減低。本研究結(jié)果還顯示：H3K27me3蛋白表達(dá)與腦膜瘤患者的年齡、性別無關(guān)；與WHO不同級別腦膜瘤組織學(xué)亞型有關(guān)，提示H3K27me3能夠當(dāng)成腦膜瘤WHO分級的一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)，為臨床評估該病行手術(shù)過后是否行放療提供可靠依據(jù)。隨著臨床對H3K27me3研究的持續(xù)深入，其有望發(fā)展成腦膜瘤靶向治療的關(guān)鍵。但仍需值得注意的是，本次研究尚存在納入樣本量較少等不足，可能會(huì)對本次試驗(yàn)結(jié)果的可信度與準(zhǔn)確性構(gòu)成一定干擾。因此，后續(xù)臨床還需不斷完善試驗(yàn)設(shè)計(jì)，繼續(xù)擴(kuò)大樣本量的納入，以進(jìn)行更深層次的研究，從而更為深入的了解H3K27me3在腦膜瘤組織內(nèi)的表達(dá)與其臨床意義，旨在為腦膜瘤臨床早期診斷及治療提供可靠參考。

綜上所述，H3K27me3在腦膜瘤組織內(nèi)呈異常表達(dá)，且伴隨WHO級別的上升，其表達(dá)逐步降低，及時(shí)檢測腦膜瘤組織內(nèi)的H3K27me3蛋白表達(dá)水平可為腦膜瘤分級提供參考，臨床可大力推行。