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    QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素

    2022-12-24 06:04:24肖英平呂文濤王小驪吉小鳳
    浙江農(nóng)業(yè)學報 2022年12期
    關(guān)鍵詞:孢霉鏈格提取液

    鄧 濤,楊 華,肖英平,汪 雯,呂文濤,王小驪,吳 振,*,吉小鳳,*

    (1.寧波大學 食品與藥學學院,浙江 寧波 315000;2.浙江省農(nóng)業(yè)科學院 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與營養(yǎng)研究所,浙江 杭州 310021)

    在嬰兒階段,母乳是嬰兒理想的食品,但隨著嬰兒長大,單一食用母乳或者嬰兒配方乳粉無法滿足嬰兒的營養(yǎng)需求。嬰兒成長到6個月后,在母乳或嬰幼兒配方乳粉基礎(chǔ)上逐步添加嬰幼兒輔助食品。除了谷類和肉類輔助食品,果泥輔食是必不可少的[1]。市場上嬰幼兒果泥種類有蜜桃泥、蘋果泥、紅棗泥、香蕉泥等。果品在收貯運過程中易發(fā)生真菌性病害,從而引起腐爛或腐敗,部分霉菌產(chǎn)生真菌毒素,對人體健康產(chǎn)生潛在風險[2]。因為嬰幼兒本身生理特點,如代謝率低,體重小,而食物攝入量大(相對同等體重)等,對于食物中真菌毒素污染膳食攝入風險,嬰幼兒屬于敏感群體。

    真菌毒素是一類由絲狀真菌在適宜條件下產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物。果品中引起質(zhì)量安全隱患的真菌毒素主要有展青霉素、黃曲霉毒素、鏈格孢霉毒素和赭曲霉毒素A等[2]。鏈格孢霉毒素是鏈格孢霉菌分泌的次級代謝產(chǎn)物。目前研究較多的5種代謝產(chǎn)物為細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)、騰毒素(tentoxin,TEN)、交鏈孢酚單甲醚(aletrnariol monomethyl ether,AME)、交鏈孢酚(alternariol,AOH)和交鏈孢烯(altenuene,ALT)等[3-6]。相關(guān)研究表明[7-13],鏈格孢霉菌分泌的代謝產(chǎn)物大都具有致癌性、致突變性、細胞毒性、胚胎毒性、基因毒性、急性毒性等毒性,對人類的身體健康造成一定的危害。

    真菌毒素常用的前處理方法有固相萃取技術(shù)[14-16]、液液萃取技術(shù)[17-19]、QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe)方法[20-24]、加速溶劑萃取技術(shù)[25-30]等方法。QuEChERS方法具有回收率高、簡單、高效等特點,且適用于大批量樣品的檢測[21]。真菌毒素常用的檢測方法有薄層色譜法[29,31]、氣相色譜法[30,32]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[33-34]、液相色譜法[35]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)[36-39]等方法。LC-MS/MS技術(shù)因具有高靈敏度、高特異性、高準確度、高通量等特點[37],在污染物篩查分析和確證方面應(yīng)用廣泛。本研究建立了QuEChERS前處理方法結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定嬰幼兒輔食果泥中TeA、TEN、AME、AOH、ALT 等5種鏈格孢霉毒素,該方法快速、準確、靈敏、高效,適用于嬰幼兒輔食果泥中鏈格孢霉毒素的確證分析,為政府部門監(jiān)管提供技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料、試劑與儀器

    TeA、TEN、AME、AOH和ALT 標準品,奧地利RomeLab公司;果膠酶(純度95%),美國Sigma Aldrich 公司;分析純氯化鈉、無水硫酸鎂、無水乙酸鈉,山東美正生物科技有限公司;乙酸銨(純度≥99%),華東醫(yī)藥股份有限公司;色譜純甲酸(純度≥98%),美國TEDIA公司;色譜純甲醇和乙腈,美國Merck公司;PSA和C18吸附劑,天津博納艾杰爾科技有限公司。

    LC 30AD超高效液相色譜儀,日本島津公司;AB SCIEX 6500 Qtrap 超高效液相色譜-質(zhì)譜儀,美國AB SCIEX公司;Waters ACQUITY UPLC?HSS T3 色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),美國Waters 公司;230 volt TALBOYS 旋渦混合器,美國Troemner公司;KQ-250B 型超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;BIOFUGE PRIMO R型高速離心機,美國Thermo Fisher Scientific公司;微孔板振蕩器,維根技術(shù)(北京)有限公司;Milli-Q A10 超純水系統(tǒng),美國Millipore 公司;0.22 μm有機濾膜,北京頗賽科技發(fā)展有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 標準溶液的制備

    標準儲備液:用乙腈將TeA、TEN、AME、AOH和ALT標準品分別配制成100 μg·mL-1的標準儲備液。置于-20 ℃ 下,避光保存。

    混合標準儲備液:從100 μg·mL-1的TeA、TEN、AME、AOH和ALT標準儲備液中,分別移取500 μL 至50 mL 的容量瓶中,用乙腈定容至刻度,混勻,配制成1 μg·mL-1的混合標準儲備液。置于-20 ℃ 下,避光保存。

    標準系列工作溶液:用甲醇-水混合液(1∶1,V/V)按比例稀釋混合標準儲備液,配制成濃度為0.1、1、5、10、20、50、100、200 μg·L-1的標準系列工作溶液。置于-20 ℃ 下,避光保存。

    基質(zhì)空白標準系列工作溶液:以嬰幼兒輔食果泥空白樣品為基質(zhì)材料,采用本實驗前處理方法制備空白基質(zhì)溶液??瞻谆|(zhì)溶液按比例稀釋混合標準儲備液,配制成濃度為0.1、1、5、10、20、50、100、200 μg·L-1的基質(zhì)空白標準系列工作溶液。置于-20 ℃ 下,避光保存。

    1.2.2 樣品提取和凈化

    準確稱取嬰幼兒輔食果泥樣品5 g(準確至0.01 g)于50 mL 離心管中,依次加入200 μL果膠酶和25 mL 乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V),常溫超聲提取30 min,渦旋振蕩15 min,加入4 g 無水硫酸鎂,0.5 g 氯化鈉和0.5 g 無水乙酸鈉,劇烈振蕩1 min,8 500 r·min-1離心5 min,吸取上清液1.5 mL于裝有100 mg C18的2 mL 離心管中,12 000 r·min-1離心3 min,吸取上清液1 mL 過0.22 μm 有機濾膜后進UPLC-MS/MS檢測。

    1.2.3 儀器條件

    色譜:Waters ACQUITY UPLC?HSS T3色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm);柱溫40 ℃;流動相A為甲醇,流動相B為5 mmol·L-1乙酸銨水溶液;梯度洗脫程序:0~1.0 min,95% B;1.0~4.0 min,95%~5% B;4.0~8.0 min,5% B;8.0~8.1 min,5%~95% B;8.1~10 min,95% B。進樣體積為5 μL;流速為0.2 mL·min-1。

    質(zhì)譜:離子源為電噴霧離子源,正離子模式(ESI+)和負離子模式(ESI-);質(zhì)譜掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring,MRM);離子源噴霧電壓為+5 500/-4 500 V,離子源溫度為500 ℃,氣體1壓力為50 psi,氣體2壓力為55 psi。離子源氣體為空氣,碰撞氣體為高純度氮氣(純度99.99%),該氣體由Peak Scientific(英國蘇格蘭)氮氣發(fā)生器提供。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    采用Multiquant V3.0.3軟件對UPLC-MS/MS檢測后樣品中目標化合物的峰面積、信噪比進行分析。Microsoft Excel 2007軟件對添加回收率、校正曲線、基質(zhì)效應(yīng)、定量限、檢出限和精密度等進行整理計算。SPSS 21.0 軟件對整理后的數(shù)據(jù)進行方差和顯著性分析。Origin 2018軟件對目標化合物色譜圖進行繪制。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 色譜條件的選擇及優(yōu)化

    2.1.1 色譜條件的優(yōu)化

    本實驗比較了甲醇和2 mmol·L-1乙酸銨水溶液、甲醇和5 mmol·L-1乙酸銨水溶液作為流動相的分離效果,結(jié)果表明當流動相為甲醇和5 mmol·L-1乙酸銨水溶液時,通過梯度洗脫,5種鏈格孢霉毒素在10 min內(nèi)達到良好的分離。5種鏈格孢霉毒素MRM離子色譜圖見圖1。

    圖1 標準溶液中5種鏈格孢霉毒素MRM離子色譜圖

    2.1.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    分別配制濃度為1.0 μg·mL-1的TeA、TEN、AOH、AME和ALT的標準溶液。在ESI模式下,分別通過針泵進樣,采用一級質(zhì)譜掃描(Q1掃描),確定目標化合物的母離子和其質(zhì)荷比(m/z)。然后將掃描模式更改為二級質(zhì)譜掃描(子離子掃描),調(diào)節(jié)碰撞電壓,選擇信號響應(yīng)最強和最穩(wěn)定的子離子為定量離子和定性離子,繼續(xù)在多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)下優(yōu)化最佳去簇電壓(DP)和最佳碰撞能量(CE),以達到最佳的檢測靈敏度。5種鏈格孢霉毒素質(zhì)譜參數(shù)見表1。

    表1 五種鏈格孢霉毒素質(zhì)譜參數(shù)

    2.2 樣品前處理方法優(yōu)化

    2.2.1 提取溶劑

    本實驗以有機溶劑甲醇、乙腈、乙腈-水混合液(80∶20,V/V)、乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)、乙腈-水-乙酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)作為提取溶劑,比較了嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素(TeA,AOH、AME、TEN和ALT)添加回收率的差異。結(jié)果表明,乙腈對TEN、AME、AOH和ALT的提取效果明顯優(yōu)于甲醇,回收率范圍為76.8%~93.9%,而TeA回收率為47.4%(圖2)。根據(jù)文獻報道[23],真菌毒素提取過程中,樣品中加一定量的去離子水,充分浸潤樣品,幫助提高有機溶劑對非水溶性基質(zhì)的滲透性和提取效率;提取液中加入適量的酸,可增加對pH值、極性范圍敏感的真菌毒素提取效果,達到提高目標化合物添加回收率的目的。所以,本實驗比較了乙腈-水混合液(80∶20,V/V)、乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)、乙腈-水-乙酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)為提取溶劑對嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素添加回收效果。結(jié)果表明,以乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)為提取溶劑時,提取效果好于另外兩種提取溶劑,回收率為82.6%~116.9%,其中TeA的回收率達到82.6%,相比乙腈-水混合液(80∶20,V/V)和乙腈-水-乙酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)為提取溶劑,TeA的回收率增加了20.0%和12.7%(圖2)。因此,本實驗確定乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)為提取溶劑。

    圖2 提取液對5種鏈格孢霉毒素回收率的影響(加標濃度20 μg·kg-1)

    2.2.2 提取液體積的選擇

    樣品基質(zhì)中真菌毒素提取時,提取溶液的體積對目標化合物的提取效果也會產(chǎn)生影響。本實驗中,樣品量為5 g,分別比較了15、20和25 mL提取液用量對5種鏈格孢霉毒素添加回收率的影響。結(jié)果表明,提取液體積為25 mL 時,TEN、AME、AOH和ALT的回收率在91.0%~116.9%。提取液體積為15和20 mL 時,TEN、AME、AOH和ALT回收率在75.7%~116.7%。對于TeA,提取液體積為25 mL 時,添加回收率為82.6%,明顯高于提取液體積15 mL 時的回收率64.7%和提取液體積20 mL 時的回收率66.6%(圖3)。因此,本實驗樣品量為5 g,提取液體積為25 mL。

    圖3 提取液體積對5種鏈格孢霉毒素回收率的影響(加標濃度20 μg·kg-1)

    2.2.3 果膠酶用量

    根據(jù)文獻報道,果膠酶能夠分解水果基質(zhì)中果膠,從而消除樣品基質(zhì)中背景干擾,提高提取效果[40]。本實驗,通過加標回收分別測試添加150、200、250 μL果膠酶用量到嬰幼兒輔食果泥樣品中測試5種鏈格孢霉毒素提取效果。實驗結(jié)果表明,3種用量的果膠酶對TeA,AOH和AME的添加回收率影響較小,回收率為82.6%~111.2%;但果膠酶用量為150 μL時,TEN和ALT的添加回收率為122.1%~125.6%;果膠酶用量為200 μL時,TEN和ALT的添加回收率為107.7%~116.9%;果膠酶用量為250 μL時,TEN和ALT的添加回收率分別為106.3%~111.0%(圖4)??紤]到基質(zhì)效應(yīng)、節(jié)省試劑用量等因素的影響,故本實驗選擇果膠酶的用量為200 μL。

    圖4 果膠酶用量對5種鏈格孢霉毒素回收率的影響(加標濃度20 μg·kg-1)

    2.2.4 超聲時間

    超聲時間是食品中真菌毒素提取效果的重要影響因素之一。本實驗分別測試了15、30、60 min 的超聲時間對5種鏈格孢霉毒素添加回收率的影響。結(jié)果表明,隨著超聲時間的增加,5種鏈格孢霉毒素的添加回收率均出現(xiàn)了不同程度的下降;但是對TeA、AME和AOH的影響不顯著,添加回收率為82.6%~110.8%。超聲時間為15 min 時,TEN和ALT的添加回收率為125.6%和128.7%,存在明顯基質(zhì)干擾。但超聲時間為30 min 時,TEN和ALT的添加回收率為116.9%和107.7%,超聲時間為60 min 時,TEN和ALT的添加回收率為110.2%和102.9%,均滿足真菌毒素的檢測需求[41](圖5)。因此,結(jié)合樣品的基質(zhì)效應(yīng)、前處理時間等因素,本實驗采用30 min超聲時間處理樣品。

    圖5 超聲時間對5種鏈格孢霉毒素回收率的影響(加標濃度20 μg·kg-1)

    2.2.5 鹽析劑

    QuEChERS方法通常以無水MgSO4為除水劑,并結(jié)合NaCl的鹽析作用,除去樣品中的水分和雜質(zhì),從而使目標物能夠充分溶解在有機相中[42]。本實驗比較了4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉,4 g 無水硫酸鎂和1 g 無水乙酸鈉,4 g 無水硫酸鎂、0.5 g 無水乙酸鈉和0.5 g 氯化鈉為鹽析劑對樣品中5種鏈格孢霉毒素添加回收率的影響。樣品加標濃度為20 μg·kg-1,實驗結(jié)果表明,三種鹽析劑的添加回收率為79.4%~116.9%,差異不顯著(P>0.05)。但采用4 g 無水硫酸鎂和1 g 氯化鈉為鹽析劑組合時,TEN、AME和AOH的回收率為92.6%~111.7%,基質(zhì)效應(yīng)為39.0%~72.3%,存在明顯的基質(zhì)抑制效應(yīng)。采用4 g 無水硫酸鎂和1 g無水乙酸鈉為鹽析劑組合時,TEN、AME、AOH和ALT的回收率為86.2%~109.1%,基質(zhì)效應(yīng)為40.8%~78.0%,存在明顯的基質(zhì)抑制效應(yīng)。采用4 g 無水硫酸鎂、0.5 g無水乙酸鈉和0.5 g 氯化鈉為鹽析劑組合時,AME和AOH存在基質(zhì)效應(yīng),回收率為91.0%~105.9%,基質(zhì)效應(yīng)為 65.2%~123.8%(圖6)。因此,本實驗選擇4 g 無水硫酸鎂、0.5 g 無水乙酸鈉和0.5 g 氯化鈉為鹽析劑。

    圖6 鹽析劑對嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素回收率的影響(加標濃度20 μg·kg-1)

    2.2.6 凈化劑

    嬰幼兒輔食果泥中存在許多果膠、色素、有機酸和糖等物質(zhì),鹽析后并不能將這些物質(zhì)從樣品基質(zhì)中完全分離,會對目標化合物精準檢測產(chǎn)生一定的干擾。QuEChERS方法通常選用石墨化炭黑(graphitized carbon black,GCB)、碳18(carbon 18,C18)和乙二胺-N-丙基硅烷(primary secondary amine,PSA)等凈化劑清除樣品提取液中雜質(zhì)干擾[24]。食品中真菌毒素污染分析時,多選用C18和PSA作為凈化劑,故預(yù)實驗中比較了C18和PSA對提取液凈化效果的影響[24,42]。預(yù)實驗結(jié)果表明,采用PSA和C18凈化時,TEN、AME、AOH和ALT的回收率為89.3%~116.9%,但兩種凈化劑對TeA的回收率影響差異顯著(P<0.05)。采用PSA凈化時,TeA的回收率只有26.4%;采用C18凈化時,TeA的回收率為74.4%(圖7)。因此,本實驗選用C18對樣品基質(zhì)進行凈化。本實驗中比較了0、50、100、200、300 mg C18用量對嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素回收率的影響。實驗結(jié)果表明,未凈化的樣品中TEN、AME、AOH和ALT的回收率為125.0%~131.5%,存在明顯基質(zhì)干擾。采用50 mg C18凈化提取液時,TEN和AOH的回收率為125.6%和122.1%,存在基質(zhì)增強現(xiàn)象。采用100、200、300 mg C18凈化提取液時,5種鏈格孢霉毒素的回收率為82.3%~117.1%,基質(zhì)干擾可接受。通過對三種C18用量對5種鏈格孢霉毒素的回收率的影響顯著性分析,結(jié)果為差異不顯著(P>0.05)(圖8)。所以,綜合考慮目標化合物回收率,基質(zhì)效應(yīng)影響以及凈化劑材料用量成本等因素后,本實驗采用100 mg C18凈化樣品提取液。

    *表示差異顯著(P<0.05)。

    圖8 C18用量對5種鏈格孢霉毒素回收率的影響(加標濃度20 μg·kg-1)

    2.3 方法學評價

    2.3.1 線性關(guān)系、檢測限和定量限

    配制不同濃度的空白嬰幼兒輔食果泥樣品基質(zhì)標準系列工作溶液。以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,進行線性擬合,繪制基質(zhì)標準溶液校正曲線方程,結(jié)果如表2所示。5種鏈格孢霉毒素在0.1~200 μg·L-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,決定系數(shù)(R2)均大于0.998(表2)。同時將檢測結(jié)果分別以3倍信噪比和10倍信噪比為判斷依據(jù)確定方法的檢測限(limits of detection,LOD)與定量限(limits of quantification,LOQ)。5種鏈格孢霉毒素(TeA、AOH、AME、TEN和ALT)的檢測限為0.1 μg·kg-1,定量限為0.3 μg·kg-1(表2)。

    表2 五種鏈格孢霉毒素的線性關(guān)系、檢出限、定量限

    2.3.2 加標回收率和精密度

    采用優(yōu)化后的前處理方法,空白嬰幼兒輔食果泥樣品中加入5、20、50 μg·kg-1三檔濃度的5種鏈格孢霉毒素(AOH、AME、ALT、TeA和TEN),每個添加濃度做6個平行樣,并在同一天內(nèi)連續(xù)進樣6次,同時對這些樣品進行連續(xù)3 d的測定,得到目標化合物的添加回收率、日內(nèi)精密度和日間精密度,結(jié)果如表3所示。5種鏈格孢霉毒素(TeA、TEN、AME、AOH和ALT)在3個加標濃度下回收率范圍為73.8%~118.0%,日內(nèi)精密度范圍為2.3%~8.2%,日間精密度范圍為2.4%~8.5%(表3),表明該方法的回收率和相對標準偏差(relative standard deviation,RSD)良好,可滿足嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素(AOH、AME、ALT、TeA和TEN)的檢測需求。

    表3 五種鏈格孢霉毒素的回收率和精密度

    2.3.3 基質(zhì)效應(yīng)

    基質(zhì)效應(yīng)是由于基質(zhì)本身或前處理過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)對目標化合物在色譜分離過程中產(chǎn)生干擾。這些雜質(zhì)會嚴重抑制或增強目標化合物的離子化效率。因此,削弱基質(zhì)效應(yīng)的影響可以顯著提高實驗結(jié)果的準確度[41]。通常用基質(zhì)校正曲線線性方程斜率與溶劑校正曲線線性方程斜率的比值評估基質(zhì)效應(yīng)影響。當基質(zhì)效應(yīng)值越接近100%,基質(zhì)效應(yīng)的影響越小,一般來說基質(zhì)效應(yīng)在80%~120%,表示其基質(zhì)效應(yīng)可接受;小于80%,則代表基質(zhì)效應(yīng)以抑制為主;大于120%,代表基質(zhì)效應(yīng)以增強為主[43-44]。選取空白嬰幼兒輔食果泥樣品,按優(yōu)化后的前處理方法進行處理,所得空白基質(zhì)液,配制成濃度為0.1、1、5、10、20、50、100、200 μg·L-1的基質(zhì)標準溶液,同時配制一系列相同濃度的溶劑標準溶液,進行UPLC-MS/MS測定。

    經(jīng)儀器分析,按各化合物保留時間對應(yīng)的峰面積(y)與其濃度(x)進行線性擬合,計算出基質(zhì)效應(yīng)如圖9所示。5種鏈格孢霉毒素中TeA、TEN和ALT的基質(zhì)效應(yīng)為81.7%~96.4%,表明基質(zhì)效應(yīng)對這3種鏈格孢霉毒素的影響較小。AOH和AME的基質(zhì)效應(yīng)分別為123.8%和65.2%,所以樣品基質(zhì)對AOH有基質(zhì)增強效應(yīng),而對AME有基質(zhì)抑制效應(yīng)。因此,本實驗采用基質(zhì)外標法定量分析樣品基質(zhì)中5種鏈格孢霉毒素,從而消除基質(zhì)效應(yīng)對目標化合物定量分析過程中的影響。

    圖9 嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素的基質(zhì)效應(yīng)

    2.4 實際樣品檢測

    本實驗隨機采集了30批次嬰幼兒輔食果泥,采用優(yōu)化后的QuEChERS方法對其進行前處理,結(jié)合UPLC-MS/MS檢測嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素的污染情況。結(jié)果表明,嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素總檢出率為40%。其中ALT檢出率最高為30%,濃度范圍為1.2~5.9 μg·kg-1;其次為TeA和AOH,檢出率分別為26.7%和20%,濃度范圍分別為0.3~31.0 μg·kg-1和0.4~17.2 μg·kg-1;樣品中AME和TEN的檢出率較低,分別為10%和6.7%,濃度范圍分別為1.0~10.9 μg·kg-1和4.1~13.1 μg·kg-1。樣品中檢出的陽性樣品質(zhì)譜圖如圖10所示。

    圖10 嬰幼兒輔食果泥中AME(10.9 μg·kg-1),AOH(17.2 μg·kg-1),TEN(13.1 μg·kg-1),TeA(31.0 μg·kg-1)檢出質(zhì)譜圖

    3 結(jié)論

    本實驗通過對提取溶劑、提取液體積、果膠酶用量、超聲時間,以及鹽析劑、凈化劑等前處理過程的優(yōu)化,采用基質(zhì)外標法定量,建立了QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素。經(jīng)方法驗證,該方法測定嬰幼兒輔食果泥中的5種鏈格孢霉毒素,在0.1~200 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)均大于0.998,檢測限和定量限分別為0.1 μg·kg-1和0.3 μg·kg-1,平均回收率為73.8%~118.0%,相對標準偏差為2.3%~8.5%。該方法具有選擇性好、高效、準確、靈敏等特點,適用于嬰幼兒輔食果泥中5種鏈格孢霉毒素確證檢測。

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