非干燥綜合征干眼動(dòng)物模型研究進(jìn)展

盧云瓊，郭瀟聰，楊延婷，劉 婕，洪 玨，楊 光，張 丹，孔諧和，趙 越，馬曉芃，

0 引言

干眼(dry eye，DE)是一種多因素疾病，淚膜不穩(wěn)定、淚液高滲透壓、眼表炎癥都可導(dǎo)致不適和視覺障礙等干眼表現(xiàn)[1]。根據(jù)病因?qū)W分類干眼可以被分為水液缺乏型干眼(aqueous deficient dry eye, ADDE)、蒸發(fā)過強(qiáng)型干眼(evaporative dry eye, EDE)及混合型干眼。其中ADDE和EDE是主要但并非互相排斥的類別，流行病學(xué)和臨床證據(jù)表明二者在干眼的發(fā)展過程中可能同時(shí)存在。

需要注意的是，自2007年起淚膜和眼表協(xié)會發(fā)布的國際專家共識中就將ADDE分為Sj?gren綜合征干眼(Sj?gren syndrome dry eye，SSDE)和非Sj?gren 綜合征干眼(non-Sj?gren syndrome dry eye, NSDE)[2]。二者癥狀、體征相似，但后者發(fā)病年齡較早，病情進(jìn)展也較快。與人Sj?gren綜合征干眼相似，診斷SSDE動(dòng)物模型需要確切的組織學(xué)損傷和免疫失調(diào)表現(xiàn)，包括淋巴細(xì)胞浸潤、自身抗體產(chǎn)生、繼發(fā)于上皮凋亡的腺體丟失等[3]。結(jié)合此專家共識中的分類方法，非Sj?gren 綜合征干眼的定義有廣義和狹義之分。廣義的NSDE包括除Sj?gren 綜合征干眼之外的所有干眼類型，狹義NSDE為非Sj?gren綜合征水液缺乏型干眼。本綜述對廣義概念的非Sj?gren綜合征干眼動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯楷F(xiàn)狀進(jìn)行綜述，以期為非Sj?gren綜合征干眼的實(shí)驗(yàn)研究及機(jī)制研究提供思路。

1 藥物造模

1.1全身用藥副交感神經(jīng)系統(tǒng)通過激活淚腺中的毒蕈堿乙酰膽堿受體參與淚液分泌，目前已開發(fā)了各種靶向副交感神經(jīng)通路的干眼動(dòng)物模型，這些模型多數(shù)通過透皮應(yīng)用、皮下注射等方式持續(xù)遞送毒蕈堿受體阻滯劑。氫溴酸東莨菪堿(scopolamine hydrobromide，SCO)是毒蕈堿乙酰膽堿受體的非選擇性拮抗劑，通過阻斷毒蕈堿ACh受體(mAChR)抑制乙酰膽堿(acetylcholine, ACh)介導(dǎo)的淚腺刺激。

國外研究者最早通過滲透泵對出生6wk的雌性Lewis大鼠進(jìn)行全身性的持續(xù)輸入莨菪堿誘發(fā)干眼，大鼠在17d后均出現(xiàn)了單側(cè)或雙側(cè)角膜炎，結(jié)膜和淚腺中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表達(dá)均有所增加[4-5]。還有研究采用皮下注射東莨菪堿氫溴酸鹽造模，每天4次，連續(xù)注射28d，檢查結(jié)果顯示大鼠基礎(chǔ)淚液分泌試驗(yàn)(Schirmer Ⅰ test, SⅠt)測試值降低，淚腺分泌包含水電解質(zhì)和蛋白質(zhì)的淚液顯著減少，嚴(yán)重降低淚膜穩(wěn)定性，導(dǎo)致淚膜破裂時(shí)間(tear break-up time, BUT)明顯縮短[6]。該團(tuán)隊(duì)近期使用該模型評估了包含羧甲基纖維素和α-促黑素細(xì)胞激素藥物治療可以改善眼表功能[7]。這種全身性、持續(xù)東莨菪堿誘導(dǎo)的大鼠干眼模型已成為研究干眼的重要工具。以上研究中乙酰膽堿受體阻滯劑的應(yīng)用均減少了模型動(dòng)物的淚液分泌，部分研究結(jié)果該造模方法亦影響淚液中炎癥因子含量及淚膜穩(wěn)定性。

1.2局部用藥干眼是具有神經(jīng)免疫病理表現(xiàn)的眼表疾病，淚液高滲被認(rèn)為是干眼發(fā)病機(jī)制中的重要因素。在干眼患者中常檢測到淚液高滲，與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)。在小鼠雙眼局部施用不同濃度的鹽水及藥物建立高滲眼表模型，可以發(fā)現(xiàn)淚液高滲破壞小鼠眼表黏膜免疫穩(wěn)態(tài)，改變眼表免疫微環(huán)境，降低角膜上皮內(nèi)神經(jīng)末梢密度[8]。淚液高滲模型可表現(xiàn)出干眼的病理特點(diǎn)，且該模型可更好地模擬干眼患者在惡劣環(huán)境中的間歇性暴露。

有研究每天4次在雄性 Sprague-Dawley大鼠右眼局部施用10%N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)溶液，處理后大鼠淚液分泌量、MUC5AC淚液濃度和結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著減少，因此認(rèn)為局部10% NAC給藥會引起眼表損傷和淚膜不穩(wěn)定，該動(dòng)物模型可用于干眼研究，尤其是黏蛋白缺乏癥亞型[9]。伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A, Con A)是一種植物來源的凝集素，已被用于干眼實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷恼T導(dǎo)。淚腺注射Con A可誘發(fā)急性干眼模型，大約1wk后誘導(dǎo)的癥狀消退。有研究采用了在超聲引導(dǎo)下、7～10d重復(fù)多點(diǎn)注射的方法提高模型成功率，此造模方法的改進(jìn)盡可能地規(guī)避了代償、將急性模型轉(zhuǎn)變?yōu)槁阅Ｐ蚚10]，具有借鑒意義。局部滴用濃度由0.1%～0.5%不等的苯扎氯銨(benzalkonium chloride, BAC)的方法已被廣泛應(yīng)用于干眼動(dòng)物造模。研究發(fā)現(xiàn)BAC處理的大鼠呈現(xiàn)眼表損傷顯著增加、角膜厚度降低、促炎細(xì)胞因子表達(dá)升高的表現(xiàn)[11]。為了優(yōu)化局部滴注苯扎氯銨造成的兔干眼模型，研究者將苯扎氯銨的濃度從0.1%提高為0.2%以減少原始模型的滴注天數(shù)，結(jié)果證明該給藥濃度和劑量可成功誘導(dǎo)兔干眼模型，且比原用方案節(jié)省了2d時(shí)間[12]。還有研究在雌性新西蘭白兔淚腺中注射A型肉毒桿菌毒素，觀察到了1wk內(nèi)淚液分泌量的減少[13]。以上研究說明，局部藥物的應(yīng)用可有效建立干眼動(dòng)物模型。

2 手術(shù)造模

2.1淚腺切除術(shù)有研究通過淚腺切除術(shù)(lacrimal gland excision，LGE)建立小鼠水液缺乏性干眼模型，結(jié)果提示LGE可有效誘導(dǎo)小鼠淚液缺乏型干眼，具體表現(xiàn)為淚液分泌減少、角膜上皮病變并伴有眼表炎癥[14]。另一個(gè)切除小鼠淚腺的研究發(fā)現(xiàn)該造模方法形成的干燥壓力引發(fā)了異常的T細(xì)胞應(yīng)答[15]。

另有研究通過單側(cè)切除成年雌性C57BL/6小鼠的淚腺和哈德氏腺建立模型，結(jié)果顯示小鼠淚液量和角膜神經(jīng)末梢密度均減少，且出現(xiàn)了時(shí)間依賴性的機(jī)械性角膜超敏反應(yīng)，并伴有自發(fā)性睫狀神經(jīng)纖維電活動(dòng)的增加，研究者認(rèn)為該模型可能有助于干眼相關(guān)性疼痛治療藥物的開發(fā)[16]。

還有研究對正常成年新西蘭白兔包括下淚腺、眶上淚腺、瞼上淚腺在內(nèi)的所有淚腺進(jìn)行了完整的手術(shù)切除，證實(shí)此種造模方法可以造出嚴(yán)重的兔干眼模型，且通過持續(xù)8wk的觀察驗(yàn)證了該模型為慢性干眼模型[17]。

2.2淚腺導(dǎo)管結(jié)扎有研究通過結(jié)扎淚腺的主要導(dǎo)管建立干眼模型，在麻醉后使用硅膠管將淚腺主要導(dǎo)管和伴行的動(dòng)脈結(jié)扎在一起造成缺血性變化、阻塞淚液的輸布。造模后模型動(dòng)物的淚液分泌量下降，淚腺組織萎縮性變化、質(zhì)量減輕，腺泡數(shù)量顯著下降，導(dǎo)管數(shù)量上升，提示該模型可以誘導(dǎo)干眼的炎癥和增殖過程[18]。

2.3性激素缺乏模型以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)對象，雄性大鼠予口服非那雄胺[1.16mg/(kg·d)]、雌性大鼠行雙側(cè)卵巢切除術(shù)建立大鼠干眼模型，結(jié)果顯示去卵巢誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)了顯著的淚液缺乏，淚膜穩(wěn)定性降低，該模型常用于外用藥物的藥理學(xué)篩選，且該模型有助于了解絕經(jīng)后和雄激素缺乏性干眼的疾病過程[19]。

3 外源性損害造模

3.1干燥環(huán)境應(yīng)激模型現(xiàn)有的干燥應(yīng)激環(huán)境模型涵蓋了干眼的若干特征，包括角膜著染、結(jié)膜杯狀細(xì)胞缺失、CD4+T細(xì)胞浸潤結(jié)膜、淚液中細(xì)胞因子增多和眼表上皮凋亡。

研究發(fā)現(xiàn)，BALB/c小鼠[20]與C57BL/6J雌性小鼠[21]暴露在相對濕度為13.1%±3.5%、氣流為2.2±0.2m/s、溫度為22℃±2℃的智能控制環(huán)境系統(tǒng)(intelligently controlled environmental system，ICES)中，會產(chǎn)生干燥壓力。小鼠眼睛會顯示出與人類干眼相似的表現(xiàn)：淚液分泌減少，角膜熒光素染色增加，結(jié)膜上皮鱗狀化生等。且針對這一模型的后續(xù)研究提示ROS-NLRP3-IL-1β信號通路可能在環(huán)境誘導(dǎo)的干眼進(jìn)程中起主要作用[22]。

研究人員開發(fā)了可控環(huán)境室(controlled-environment chamber，CEC)，調(diào)節(jié)和監(jiān)測相對濕度、溫度及氣流(濕度18.5%±5.1%，氣流15L/min，溫度21℃～23℃)，將正常小鼠暴露于CEC中的低濕度、高氣流環(huán)境會導(dǎo)致淚液分泌、杯狀細(xì)胞密度和干眼相關(guān)眼表體征的顯著改變[23]。

在此基礎(chǔ)上，有研究將C57BL/6小鼠暴露于CEC(濕度20%，氣流15L/min，溫度21℃～23℃)誘導(dǎo)干眼模型，并將造模成功的干眼小鼠角膜移植給BALB/c小鼠。該研究發(fā)現(xiàn)，干眼小鼠的角膜組織增加了宿主中T細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的炎癥，阻礙了移植物的存活，揭示了角膜供體干眼可能作為角膜移植預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素之一[24]。另一研究將CD11c YFP×Thy1 YFP小鼠放置于CEC中，亦誘導(dǎo)出了干眼癥狀，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示眼表神經(jīng)可能在介導(dǎo)干眼的免疫反應(yīng)中起直接作用[25]。

3.2輻照模型電離輻射會對位于輻射場的正常組織造成損傷，引起包括淚腺在內(nèi)的腺體組織功能和形態(tài)變化[26]。

研究者將兔子全身麻醉后行眼眶區(qū)域15Gy單劑量輻照，以驗(yàn)證放射性淚腺損傷干眼模型建立法，結(jié)果顯示輻照后兔淚腺分泌功能顯著降低[27]。另一研究以雄性Sprague-Dawley大鼠為實(shí)驗(yàn)對象，每只大鼠的頭部和頸部接受18Gy單劑量輻射，結(jié)果顯示輻射組大鼠淚腺損傷、角膜上皮明顯變薄，角膜熒光素染色增加[28]。

3.3藍(lán)光照射模型發(fā)光二極管(light emitting diode，LED)因具有節(jié)能持久的優(yōu)點(diǎn)，已被開發(fā)為電視、電腦、智能手機(jī)等各種電器中的顯示組件，但存在會發(fā)出大量藍(lán)光的缺點(diǎn)。眼表是抵御輻射的第一道屏障，極易受到藍(lán)光影響。有研究使用不同波長的LED以50J/cm2的能量劑量照射C57BL/6小鼠，每天2次，連續(xù)10d。經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，短波藍(lán)光照射組的小鼠TBUT顯著下降，角膜熒光素染色增加，角膜中IL-1β和IL-6的水平顯著增加[29]。藍(lán)光照射可在動(dòng)物模型中誘導(dǎo)干眼體征，誘導(dǎo)的最低照射劑量和強(qiáng)度仍需進(jìn)一步研究。藍(lán)光危害眼表的機(jī)制涉及氧化應(yīng)激損傷、眼表炎癥和細(xì)胞凋亡[30]。

3.4環(huán)境污染相關(guān)有害化學(xué)物質(zhì)和顆粒物(particulate matter，PM)釋放到大氣中引起的空氣污染對人類健康構(gòu)成了較大威脅，眼睛容易直接受到PM影響。PM暴露可通過降低淚膜穩(wěn)定性、炎癥和氧化應(yīng)激等多種因素對角膜上皮細(xì)胞造成損傷。

基于空氣污染可能對眼表造成的影響，有研究者設(shè)計(jì)了一種氣溶膠暴露系統(tǒng)，將大鼠暴露于城市可吸入顆粒物(urban particulate matter，UPM)中，持續(xù)5d，每天持續(xù)5h，結(jié)果表明使用該系統(tǒng)可作為干眼造模的有效方法之一[31]。

有研究同樣基于污染物對眼表的影響制備干眼模型，從環(huán)境監(jiān)測站獲得PM2.5樣本，制備成5mg/mL濃度的PM2.5滴眼液，每天滴眼4次，建立了用于干眼研究的新型動(dòng)物模型[32]。另一研究以5周齡雄性Sprague-Dawley大鼠為觀察對象，將UPM溶解在磷酸鹽緩沖鹽水中制備滴眼液滴眼，動(dòng)態(tài)觀察不同造模時(shí)間點(diǎn)眼表的損傷及修復(fù)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)短期應(yīng)用UPM后動(dòng)物模型角膜表面損傷、淚膜穩(wěn)定性下降，且PM暴露持續(xù)加重角膜損傷，在一定時(shí)間后無法自發(fā)恢復(fù)[33]。

4 相關(guān)疾病造模

臨床流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)干眼經(jīng)常發(fā)生在患有抑郁癥和/或焦慮癥的患者身上。為了證實(shí)抑郁癥在干眼中的作用，有研究建立了大鼠抑郁癥模型并觀察到抑郁組大鼠淚液分泌顯著減少，角膜組織及淚液中IL-1β、TNF-α 的水平升高。因此研究者認(rèn)為抑郁癥可通過減少淚液分泌和誘發(fā)眼表炎癥而導(dǎo)致干眼[34]。

糖尿病也是干眼患病的相關(guān)因素，患有糖尿病的個(gè)體通常在感覺減退(神經(jīng)營養(yǎng)性角膜炎)的情況下出現(xiàn)上皮病變[35]。GK(Goto-Kakizaki)大鼠是2型糖尿病 Wistar大鼠的自發(fā)模型。GK大鼠表現(xiàn)出淚液分泌減少、角膜感覺降低和角膜上皮傷口愈合速度延遲的特征[36]。

5 行為模式造模

2007年DEWS報(bào)告中的干眼病分類中將“眨眼頻率低”列為干眼內(nèi)環(huán)境的影響因素之一，眨眼對淚膜及眼表完整性具有重要意義。研究證明，在每日完成視覺任務(wù)期間(如視頻顯示終端工作、凝視閱讀、操作顯示器、手持視頻游戲等)記錄到眨眼頻率下降[4]。結(jié)合現(xiàn)代社會視頻終端對干眼發(fā)病的影響，有研究通過誘導(dǎo)淚液動(dòng)力學(xué)、眨眼頻率的變化建立了角膜上皮疾病的大鼠干眼模型，誘發(fā)了與人類相似的異常淚液動(dòng)力學(xué)和淺表點(diǎn)狀角膜病變[37]。

睡眠是所有動(dòng)物普遍存在的基本生理需求，睡眠不足與干眼發(fā)病的關(guān)系已受到重視。研究者通過自制裝置建立睡眠剝奪(sleep deprivation，SD)的小鼠模型，隨著SD時(shí)間延長，角膜熒光素染色評分逐漸增加，呈現(xiàn)進(jìn)展性的角膜上皮損傷；伴隨角膜敏感性增加、淚液分泌量下降，結(jié)膜杯狀細(xì)胞密度降低；淚液成分分析顯示兩種乙酰膽堿和多巴胺在SD期間顯著降低。研究還發(fā)現(xiàn)在終止造模后14d內(nèi)，SD 造模10d引起的眼表和淚腺變化可以恢復(fù)到相對正常的狀態(tài)[38]。通過人為干預(yù)動(dòng)物模型的行為模式，可建立干眼動(dòng)物模型。

6 飲食結(jié)構(gòu)造模

當(dāng)前飲食結(jié)構(gòu)改變對預(yù)防和治療干眼的作用已越來越受重視，而飲食結(jié)構(gòu)失衡作為干眼發(fā)病危險(xiǎn)因素也得到了很多關(guān)注。眾所周知，高脂飲食可導(dǎo)致身體多系統(tǒng)功能障礙。因此，有研究用小鼠模型研究了高脂飲食(high-fat diet，HFD)對眼表的影響，證實(shí)了HFD 通過激活氧化應(yīng)激和誘導(dǎo)眼表細(xì)胞凋亡引發(fā)小鼠干眼樣眼表損傷，包括角膜上皮屏障功能障礙與角結(jié)膜上皮鱗狀上皮化生等[39]。對高脂飲食實(shí)驗(yàn)小鼠模型的進(jìn)一步病理研究表明，HFD會引起淚腺的病理生理變化和功能失代償[40]。

7 年齡相關(guān)性模型

年齡與干眼患病率之間的強(qiáng)相關(guān)性已被證實(shí)[41]。有研究評估了三個(gè)不同年齡組的C57BL/6 小鼠，結(jié)果表明衰老有誘發(fā)小鼠干眼的跡象，其特征是角膜不規(guī)則性增加、角膜屏障破壞和結(jié)膜杯狀細(xì)胞的密度降低。將衰老小鼠的CD4+T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移給RAG1敲除小鼠后使其出現(xiàn)干眼癥狀，說明衰老小鼠會自發(fā)形成自身反應(yīng)性T細(xì)胞[42]。

8 組合模型

很多研究采用兩種或兩種以上的方法組合造模，其中包括通過東莨菪堿(scopolamine，SCP)抑制全身毒蕈堿乙酰膽堿受體的全身阻斷作用抑制淚液的產(chǎn)生，同時(shí)加大環(huán)境氣流量增加淚液蒸發(fā)，這是一種被廣泛采用的模型[43]。該模型干眼程度較重，具備淚腺萎縮和幾乎無淚腺分泌等特征。

為了比較淚液缺乏型干眼的不同模型，有研究同時(shí)實(shí)施了SCP注射、CEC暴露、和淚腺切除等幾種不同的造模方法。結(jié)果表明CEC與SCP皆可有效地誘導(dǎo)有明顯癥狀的干眼。相比之下，SCP抑制外分泌功能導(dǎo)致的淚液缺乏更顯著，而CEC對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能損害更明顯[44]。

9 總結(jié)與展望

流行病學(xué)調(diào)查顯示，干眼嚴(yán)重影響患病人群的視覺相關(guān)生活質(zhì)量，造成的負(fù)擔(dān)高于常見的影響視力的眼部疾病[45]。2017年國際淚膜與眼表協(xié)會國際干眼工作組(TFOSDEWS)發(fā)布的報(bào)告指出，50歲以上人群的干眼患病率為5%～30%[46]。且隨著視頻終端使用的增加，將有越來越多的人受其影響，目前尚缺乏可穩(wěn)定控制癥狀的治療手段。因此，不但要更新對干眼致病危險(xiǎn)因素、病因和病理機(jī)制的認(rèn)知，更需要不斷革新治療策略，而現(xiàn)階段這些任務(wù)都需要借助動(dòng)物模型才能完成。

動(dòng)物模型可以模擬在任何體外模型中都難以實(shí)現(xiàn)的人體復(fù)雜性，不僅有助于更深入地了解人類疾病的致病機(jī)制，且有助于探索候選治療方法與藥物，在人類疾病研究中發(fā)揮的重要作用是不可替代的。鼠、兔模型在干眼研究中應(yīng)用最為廣泛，前者有培育成本相對較低、能夠創(chuàng)建基因敲除模型的優(yōu)點(diǎn)，且相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑市場化程度較高，方便實(shí)驗(yàn)人員研究信號通路傳導(dǎo)相關(guān)因子。后者的平均壽命更長且眼體積更大，其淚腺的組織結(jié)構(gòu)特征與人類更為相似[47]，都具備圓形或卵圓形、間質(zhì)疏松、漿細(xì)胞豐富的腺泡腔[48]。因此對淚腺組織形態(tài)變化較為敏感的干眼研究，兔模型可能是更好地選擇。兔的眨眼頻率較低，外用藥物在角膜前的停留時(shí)間較長，因此在進(jìn)行藥物暴露量評估的時(shí)候需要考慮該因素[49]。犬眼體積較大，故可以便捷地直接使用人類臨床研究中的診斷方法，如淚液滲透壓測量法、Schirmer測試、結(jié)膜印跡細(xì)胞學(xué)檢測法等[50]。因此在具體實(shí)驗(yàn)操作過程中，可考慮上述動(dòng)物模型特性結(jié)合實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。

自第一個(gè)干眼模型問世以來，干眼模型的造模方法不斷發(fā)展，包括藥物的使用、神經(jīng)阻斷、淚腺切除術(shù)等，還有降低、削弱淚腺功能的淚腺導(dǎo)管結(jié)扎、輻照等方法。

藥物的使用方式包括全身給藥以及眼表局部用藥等，不僅涉及具體藥物的藥理作用，也關(guān)乎給藥方式引發(fā)的藥物代謝、淚膜動(dòng)力學(xué)作用差異。全身給藥模型中，應(yīng)用最廣泛的是東莨菪堿阻斷毒蕈堿ACh受體模型，該模型與水液缺乏型干眼的臨床表現(xiàn)和發(fā)病機(jī)制較為相似。局部給藥使用較多的藥物是BAC，通過制成0.1%～0.2%濃度不等的滴眼液局部滴用，造成大鼠、小鼠、兔等動(dòng)物模型的眼表炎癥及損害，因其具備侵入性、傷害性較小的優(yōu)點(diǎn)，也已被廣泛用于干眼造模[11-12, 51-52]。

手術(shù)造模以淚腺切除為主，對淚腺部分或完全切除，或?qū)I腺的主要導(dǎo)管進(jìn)行結(jié)扎。亦有對動(dòng)物進(jìn)行去勢手術(shù)造成激素的變化，誘發(fā)激素相關(guān)性干眼的造模方法。前者直接造成淚液分泌的減少，形成以水液缺乏為主的干眼。后者與內(nèi)分泌系統(tǒng)在眼表與生理性別相關(guān)差異中發(fā)揮的作用有關(guān)。DEWS Ⅱ的生理性別、社會性別和激素報(bào)告指出，雄激素缺乏與水液缺乏和蒸發(fā)過強(qiáng)型干眼均有關(guān)[53]，因此針對激素水平變化開發(fā)的干眼模型具有混合型干眼的特點(diǎn)。

外源性損害造模方法與流行病學(xué)因素結(jié)合較為緊密，探索例如低空氣濕度、高氣流量、輻射、藍(lán)光照射、香煙煙霧環(huán)境[54]等干眼危險(xiǎn)因素對眼表的影響。低濕度、高氣流量的受控環(huán)境室加快了淚液的蒸發(fā)，與睡眠剝奪模型、視頻顯示終端工作模型等行為模式造模方法相似，較符合蒸發(fā)過強(qiáng)型干眼的特點(diǎn)。目前研究可明確高脂飲食干眼模型淚腺功能的損害，符合水液不足型干眼的特點(diǎn)。

年齡相關(guān)性干眼小鼠模型表現(xiàn)出的干眼改變很難局限性地歸結(jié)于水液不足或蒸發(fā)過強(qiáng)，因此混合型干眼可能是該模型較為合理的歸類。組合模型一般采取淚腺功能破壞加上環(huán)境和個(gè)體行為促成眼表高滲性，包括諸如環(huán)境濕度、溫度、風(fēng)速在內(nèi)的外在因素和諸如眨眼頻率、瞼裂大小、注視位置、全身性藥物對淚液分泌的影響等個(gè)體因素。

2017年DEWS的定義與分類報(bào)告中指出，水液缺乏型干眼主要與影響淚腺的疾病有關(guān)，而蒸發(fā)過強(qiáng)型干眼則與影響眼瞼(如瞼板腺功能障礙和眨眼異常)或眼表(如黏蛋白缺乏相關(guān)或配戴角膜接觸鏡)的疾病有關(guān)[1]。“炎癥惡性循環(huán)”是干眼發(fā)病過程中的核心驅(qū)動(dòng)因素，包括淚膜不穩(wěn)定、淚液滲透壓過高、角膜/結(jié)膜細(xì)胞凋亡和眼表炎癥。內(nèi)在和外在因素都會對眼表造成壓力，從而加速循環(huán)，進(jìn)而加劇干眼[55]。正因?yàn)楦裳壑芏鴱?fù)始、自我持續(xù)的特性，淚液量和質(zhì)的缺陷并存并不罕見。一旦進(jìn)入惡性循環(huán)，繼之而來的淚膜不穩(wěn)定、高滲透壓和炎癥便會帶來更多的不良改變。且隨著干眼的進(jìn)展，任一形式的干眼均可能出現(xiàn)蒸發(fā)過強(qiáng)的特征。這常常使水液缺乏和蒸發(fā)過強(qiáng)的發(fā)病機(jī)制之間不易區(qū)分，呈現(xiàn)混合型干眼的表現(xiàn)。

基于我們對動(dòng)物模型的認(rèn)知，并不存在可以囊括全部干眼特征的完美動(dòng)物模型。無論何種病因?qū)е拢裳鄣陌l(fā)聲發(fā)展都會使淚膜完整性及穩(wěn)定性喪失，促使眼表炎癥和角膜上皮損傷。因此，眼表上皮細(xì)胞的凋亡損傷、結(jié)膜杯狀細(xì)胞的缺失、眼表炎癥的發(fā)生，以及淚液分泌量、角膜熒光素染色、角結(jié)膜知覺、角膜規(guī)則性等檢查的陽性評估結(jié)果，可以作為非Sj?gren綜合征干眼模型鑒定的參考標(biāo)準(zhǔn)。

現(xiàn)有的干眼動(dòng)物模型，推動(dòng)了對干眼發(fā)病機(jī)制和治療方法的深入研究。干眼發(fā)病機(jī)制的不斷進(jìn)展，又能指導(dǎo)干眼模型的開發(fā)和建立，促進(jìn)對干眼認(rèn)識與治療。但目前的干眼動(dòng)物模型仍存在一些問題：(1)現(xiàn)有的干眼模型多是在急性處理?xiàng)l件下構(gòu)建的，而臨床上的干眼大多是慢性病程，這要求我們對模型的穩(wěn)定性和急/慢性進(jìn)一步研究和規(guī)范；(2)與造模方式和造模時(shí)間有關(guān)，各種干眼模型的嚴(yán)重程度不一，目前尚無針對動(dòng)物模型干眼嚴(yán)重程度分級的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。因此，需要對干眼模型的建立和驗(yàn)證進(jìn)行更加系統(tǒng)的研究，不斷探索、改進(jìn)檢測方法。發(fā)揮動(dòng)物模型優(yōu)勢，指導(dǎo)干眼的臨床診療，建立標(biāo)準(zhǔn)、避免不必要的重復(fù)和浪費(fèi)是未來干眼動(dòng)物模型研究的目標(biāo)之一。