硒化猴頭菇多糖的制備、結(jié)構(gòu)表征及抗增殖活性

古佩嫻，尹惠雙，胡 坤，吳小勇，鐘南京，郭 娟，黃 超，胡 勇，陳 云，王 穎，伍芳芳,*

（1.廣東藥科大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，廣東 中山 528458；2.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510641）

猴頭菇（Hericium erinaceus），屬于擔(dān)子菌綱、多孔菌目、齒菌科、猴頭屬，又名猴頭、猴頭菌、猴頭蘑等，是我國(guó)傳統(tǒng)的食藥兩用真菌[1-2]。猴頭菇與魚(yú)翅并稱(chēng)“山珍猴頭、海味燕窩”，不僅味道鮮美可口，還含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，如多糖、蛋白質(zhì)、低聚糖、維生素、糖蛋白等[3-4]。作為猴頭菇的主要功能成分之一，多糖具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗病毒、調(diào)節(jié)腸道菌群、降血糖、抗衰老、抗氧化、保護(hù)胃黏膜等生物活性[5-10]，目前已成為國(guó)內(nèi)外眾多領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[11]。

本課題組前期以猴頭菇子實(shí)體為原料，采用水提醇沉、Sevag去蛋白、柱層析、透析、真空冷凍干燥等工藝得到了純化多糖組分（猴頭菇純化多糖（Hericium erinaceuspolysaccharide，HEPS），總糖含量＞92%），對(duì)其單糖組成、平均分子質(zhì)量、單糖殘基類(lèi)型、糖苷鍵連接方式等進(jìn)行了測(cè)定，初步得到了HEPS的結(jié)構(gòu)特征，同時(shí)對(duì)其免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行了研究[12]。前期研究表明HEPS具有毒副作用小、安全性高等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)能有效促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，與脂多糖、伴刀豆球蛋白對(duì)B淋巴細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同刺激作用，并能顯著增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的免疫功能[12]。大量研究證實(shí)，絕大多數(shù)真菌多糖并不是直接殺傷腫瘤細(xì)胞，而是通過(guò)激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)患者的免疫防御系統(tǒng)而達(dá)到抗癌的效果[13]。同時(shí)，由于組成多糖的糖鏈上存在大量的羥基，這使多糖很容易與金屬離子形成共價(jià)配合物，呈現(xiàn)出更多的功能特性[13]。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明硒化改性可顯著提高活性多糖對(duì)癌細(xì)胞的直接殺傷作用[14]。

硒（Se）是維持人體正常生命活動(dòng)的必需微量元素之一，參與維持機(jī)體的健康與生長(zhǎng)發(fā)育，在日常膳食中缺乏硒會(huì)增加機(jī)體心血管疾病、糖尿病等的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，硒還具有“抗癌之王”之稱(chēng)，對(duì)多種癌細(xì)胞均具有明顯的殺傷作用[13]。但無(wú)機(jī)硒的使用劑量比較難控制，容易引起機(jī)體中毒或者遺傳毒性，這大大限制了其應(yīng)用。相關(guān)研究利用抗環(huán)血酸（VC）還原亞硒酸鈉制備出紅色的單質(zhì)硒（納米硒），因其具有較高的生物活性及低毒性迅速成為硒補(bǔ)充領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[15]。但由于這種紅色的單質(zhì)硒具有很高的表面能，非常不穩(wěn)定，極易轉(zhuǎn)變成黑色或灰色的單質(zhì)硒而失活。多年來(lái)，為構(gòu)建高穩(wěn)定且高生物活性的納米硒，研究者一直在嘗試尋找合適的生物分子模板（穩(wěn)定劑、分散劑）[16]。大量研究表明，天然多糖具有高穩(wěn)定性、低毒性、結(jié)構(gòu)可控、生物可降解等優(yōu)點(diǎn)，是一種極具潛力的生物分子模板[13-14,17]。

因此，本實(shí)驗(yàn)以HEPS為研究對(duì)象，在含有VC和亞硒酸鈉的氧化還原體系中，制備得到猴頭菇多糖納米硒顆粒（HEPS-Se）。采用原子吸收分光光譜儀、傅里葉變換紅外光譜儀、X射線衍射儀、掃描電子顯微鏡、EDX元素分析儀、X射線光電子能譜、納米粒度儀對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征；并研究HEPS-Se對(duì)人肺癌細(xì)胞A549、人前列腺癌細(xì)胞DU145的抗增殖作用。為猴頭菇多糖的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

猴頭菇子實(shí)體原料來(lái)自于福建省屏南縣。人肺癌細(xì)胞A549、人前列腺癌細(xì)胞DU145、人正常肝細(xì)胞LO2中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院；亞硒酸鈉（＞97%） 天津市化學(xué)試劑公司；VC、二甲基亞砜（均為分析純） 美國(guó)Sigma公司；溴化鉀（色譜純）、硝酸（分析純） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）、胰蛋白酶（Trypsin）、青霉素與鏈霉素混合液（×100）、胎牛血清美國(guó)Gibco公司；CCK-8試劑盒 日本同仁化學(xué)研究所。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

LGJ-10冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；HJ-6A磁力加熱攪拌器、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州普天儀器制造有限公司；JW-3021HR高速冷凍離心機(jī)安徽嘉文儀器裝備有限公司；Affinify-1傅里葉紅外光譜儀、UV-1800紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、AA-7000原子吸收分光光度計(jì) 日本島津公司；DHG-9070電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；D8 ADVANCE X射線多晶衍射儀 德國(guó)Bruker公司；Nano-ZS激光粒度分析儀英國(guó)Malvern儀器有限公司；EVO-18掃描電子電鏡德國(guó)Zeiss公司；Axis Ultra DLD X射線光電子能譜儀英國(guó)Kratos公司。

1.3 方法

1.3.1 HEPS-Se的制備

HEPS按照Wu Fangfang等[12]方法：即采用水提醇沉、Sevag去蛋白、DEAE Sepharose fast flow柱層析及Sephadex G-100柱層析、透析、冷凍干燥等工藝所制得。HEPS的總糖含量大于92%。

HEPS-Se的制備參照Liao Wenzhen等[13]的方法并稍作改動(dòng)。將新鮮配制的20 mL，3 mg/mL的HEPS溶液與20 mL，0.1 mol/L亞硒酸鈉溶液旋渦混勻后，置于25 ℃環(huán)境中磁力攪拌10 min后，在保持磁力攪拌的情況下，用注射針慢慢加入5 mL，0.4 mol/L VC溶液。置于25 ℃環(huán)境中磁力攪拌24 h。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至3.5 kDa透析袋中透析，每3 h換一次蒸餾水。通過(guò)VC檢測(cè)透析液直至無(wú)紅色時(shí)停止透析，收集截留液，經(jīng)濃縮、冷凍干燥即為硒化純化多糖HEPS-Se樣品。

1.3.2 Se含量的測(cè)定

采用原子吸收分光光度計(jì)對(duì)樣品中的硒離子含量進(jìn)行測(cè)定，稱(chēng)取適量的HEPS-Se樣品，加入5 mL硝酸溶液并進(jìn)行消化處理，酸趕凈后轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中定容后進(jìn)行分析，采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定復(fù)合物中的硒含量，以HEPS為樣品空白對(duì)照。

1.3.3 HEPS-Se的粒徑分布和Zeta電位

準(zhǔn)確配制10 mL、1 mg/mL的硒化多糖溶液，充分溶解后，采用馬爾文納米粒度儀測(cè)定其粒度分布和Zeta電位分析，以HEPS為樣品空白對(duì)照。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

1.3.4 傅里葉變換紅外光譜測(cè)定

分別取少量樣品與適量的KBr干燥粉末混合，在瑪瑙研缽中充分研磨后，在油壓機(jī)上壓成透明薄片，將薄片放入紅外光譜儀中進(jìn)行掃描，掃描范圍為4 000～400 cm-1，分辨率為4 cm-1[18]。

1.3.5 X射線衍射測(cè)定

HEPS、HEPS-Se的晶體結(jié)構(gòu)由X射線多晶衍射儀測(cè)得，測(cè)定參數(shù)為：Cukα輻射、2θ掃描范圍4°～50°、管流40 mA、管壓40 kV、掃描速率4 °/min[19]。

1.3.6 掃描電子顯微鏡觀察

采用掃描電子顯微鏡觀測(cè)猴頭菇多糖HEPS、HEPS-Se的形貌。分別取冷凍干燥后的HEPS、HEPS-Se樣品，取少量樣品將其均勻地分散在導(dǎo)電雙面膠上，使其固定在樣品臺(tái)上，將其放入離子濺射鍍膜儀中，在真空環(huán)境中將其表面噴金以屏蔽離子的干擾，設(shè)置掃描電子顯微鏡的鍍金條件為10 kV、15 mA，分別使用不同的放大倍數(shù)觀察猴頭菇多糖HEPS、HEPS-Se的形貌。

1.3.7 EDX元素測(cè)定

將真空冷凍干燥后的樣品用導(dǎo)電雙面膠均勻粘在載物臺(tái)上，用X射線分析裝置進(jìn)行分析。

1.3.8 X射線光電子能譜測(cè)定

將真空冷凍干燥后的樣品用導(dǎo)電雙面膠均勻粘在樣品臺(tái)上，設(shè)置檢測(cè)條件為：激發(fā)源Al Kα射線，束斑400 μm，對(duì)樣品表面進(jìn)行X射線光電子能譜掃描。采用Thermo ScientificTMAvantage軟件對(duì)全譜圖進(jìn)行分析及分峰擬合，以C 1s=284.80 eV結(jié)合能為能量校正標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.9 HEPS-Se對(duì)A549、DU145、LO2細(xì)胞存活率的影響

選用人肺癌細(xì)胞A549、人前列腺癌細(xì)胞DU145、人正常肝細(xì)胞LO2均置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，A549與LO2所用的培養(yǎng)基為含有10%胎牛血清，100 U/mL青霉素與100 μg/mL鏈霉素的DMEM高糖完全培養(yǎng)基。DU145所用的培養(yǎng)基為含有10%胎牛血清，100 U/mL青霉素與100 μg/mL鏈霉素的MEM培養(yǎng)基。

本實(shí)驗(yàn)采用cck-8法考察不同質(zhì)量濃度的HEPS及HEPS-Se對(duì)A549、DU145、LO2細(xì)胞增殖能力的影響[20-21]。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各細(xì)胞系用胰蛋白酶消化后，以每孔3×103個(gè)的密度接種于96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)使細(xì)胞重新貼壁。24 h后棄去培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組加入100 μL不同質(zhì)量濃度（125、250、500、1 000 μg/mL）的HEPS-Se懸液，空白對(duì)照組分別加入100 μL DMEM培養(yǎng)基（A549、LO2細(xì)胞）或MEM培養(yǎng)基（DU145細(xì)胞），每組設(shè)3個(gè)平行孔。置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，往每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔加入10 μL cck-8溶液，輕輕混勻后置于CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)1 h，置于酶標(biāo)儀中測(cè)定450 nm處的OD值。設(shè)實(shí)驗(yàn)組的OD值為A，空白對(duì)照組OD值為B，細(xì)胞存活率/%=A/B×100。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 Se元素含量

通過(guò)火焰原子吸收光譜法測(cè)得HEPS-Se中Se元素的含量為481.79 μg/g，而HEPS無(wú)Se元素檢出，說(shuō)明HEPS在VC和亞硒酸鈉的氧化還原體系中，成功制備出HEPS-Se。

2.2 粒徑與電位分析

表1 HEPS和HEPS-Se的粒徑與電位分析Table 1 Particle sizes and zeta potentials of HEPS and HEPS-Se

如表1所示，在相同濃度下，HEPS-Se的粒徑比HEPS降低了49.01%。有研究表明，粒徑越小越容易被機(jī)體吸收并發(fā)揮生物活性。為了進(jìn)一步考察HEPS-Se的穩(wěn)定性，測(cè)定復(fù)合物粒子表面的Zeta電位。HEPS的Zeta電位為-13.00 mV，而HEPS-Se的Zeta電位為-42.10 mV，電位絕對(duì)值提高了69.12%，此結(jié)果與Liao Wenzhen等[13]的研究結(jié)果一致，表明復(fù)合物形成后，HEPS表面的羥基發(fā)生電離，使HEPS-Se表面帶的負(fù)電荷大大增加，穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。上述結(jié)果也表明HEPS-Se制備成功。

2.3 傅里葉變換紅外光譜分析

如圖1b所示，3 400.39 cm-1附近比較寬的強(qiáng)吸收峰是由于HEPS-Se上的O—H伸縮振動(dòng)引起的，2 913.38 cm-1以及1 727.19 cm-1處的弱吸收峰分別為C—H伸縮振動(dòng)峰以及C＝O伸縮振動(dòng)峰[22-23]。1 620.15 cm-1處吸收峰是由于C—H伸縮振動(dòng)以及結(jié)合水引起的[13]。綜合來(lái)看，HEPS-Se中大部分的吸收峰與HEPS無(wú)明顯變化，表明HEPS的基本骨架沒(méi)有發(fā)生變化。然而，與HEPS相比，多糖納米硒表面的OH伸縮振動(dòng)峰發(fā)生藍(lán)移現(xiàn)象（從3 326.12 cm-1移位至3 400.39 cm-1），并且C＝O伸縮振動(dòng)峰從1 641.36 cm-1移位至1 620.15 cm-1，提示猴頭菇多糖的—OH、—C＝O等基團(tuán)與被還原后的納米硒相結(jié)合，從而有效地阻止納米硒進(jìn)一步的結(jié)合與聚集，最終形成穩(wěn)定的多糖納米硒顆粒[13,24-25]。

圖1 HEPS（a）、HEPS-Se（b）的紅外光譜圖Fig. 1 FTIR spectra of HEPS (a) and HEPS-Se (b)

2.4 X射線衍射分析

由圖2可知，在2θ為10°～90°范圍內(nèi)，HEPS與HEPS-Se復(fù)合物的X射線衍射強(qiáng)度曲線相似，均只有一個(gè)峰形圓頓、峰強(qiáng)度較低的衍射峰，最高峰分別出現(xiàn)在2θ為19.68°與22.23°附近，說(shuō)明HEPS與HEPS-Se復(fù)合物的結(jié)晶度均較低，不能形成單晶，而是以無(wú)定型形態(tài)存在，也說(shuō)明兩者的分子剛性較差，這與其他真菌多糖的研究結(jié)果一致[24]。

圖2 HEPS（a）、HEPS-Se（b）的X射線衍射圖Fig. 2 XRD spectra of HEPS (a) and HEPS-Se (b)

2.5 掃描電子顯微鏡分析

圖3 HEPS（A）、HEPS-Se（B）的掃描電鏡圖（×10 000）Fig. 3 SEM images of HEPS (A) and HEPS-Se (B) (× 10 000)

從圖3A可以看出，經(jīng)過(guò)一系列純化工藝得到的HEPS多糖鏈相互扭轉(zhuǎn)、纏繞成團(tuán)，并交織彎曲成形成連續(xù)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這與猴頭菇水洗多糖組分的鏈構(gòu)象相一致[26]，表明HEPS在溶液中以柔性鏈構(gòu)象存在，分子整體不具有剛性，此結(jié)果與X射線衍射的結(jié)果一致，這可能與多糖結(jié)構(gòu)中存在的α-(1→3,4)-、α-(1→6)-、β-(1→2)-糖苷鍵有關(guān)[27]。然而，硒化改性后，HEPS-Se的形貌特征發(fā)生較大的變化，如圖3B所示，HEPS-Se為形貌規(guī)則、球體均一，粒徑之間大小相近，粒子在溶液中呈分散狀態(tài)使其不容易凝結(jié)和聚集，說(shuō)明HEPS-Se體系的穩(wěn)定性有所增強(qiáng)。

2.6 EDX表面元素分析

圖4 HEPS（A）和HEPS-Se（B）的元素分析Fig. 4 EDX spectra of HEPS (A) and HEPS-Se (B)

通過(guò)對(duì)HEPS和HEPS-Se的元素進(jìn)行分析可知（圖4），HEPS的元素組成比例為C∶O∶Na∶Cl∶Pt=41.50∶37.91∶4.94∶8.57∶7.08，其中少量的Na元素和Cl元素是由于洗脫過(guò)程中使用了大量的0.05 mol/L NaCl洗脫液，有少量殘留。而低劑量的Pt元素是由于掃描電子顯微鏡-EDX操作時(shí)，會(huì)在真空環(huán)境下將其表面噴金而殘留少量的Pt，C元素和O元素均來(lái)自于HEPS。而HEPS-Se的元素組成比例為C∶O∶Se∶Pt＝32.92∶24.74∶30.46∶11.87，同樣地，其中的C元素和O元素來(lái)自于HEPS，除了制備樣品噴金造成少量的Pt元素殘留，并無(wú)其他雜質(zhì)元素出現(xiàn)，說(shuō)明HEPS-Se制備成功，純度很高。

2.7 X射線光電子能譜分析

圖5 HEPS和HEPS-Se的X射線光電子能譜全譜圖（A）以及HEPS-Se的Se 3d分峰擬合圖（B）Fig. 5 Wide-range XPS spectra of HEPS and HEPS-Se (A) and Se 3d spectra of HEPS-Se (B)

為了判斷樣品中Se元素的結(jié)合價(jià)態(tài)，采用X射線光電子能譜對(duì)HEPS及HEPS-Se樣品進(jìn)行全譜掃描，結(jié)果如圖5所示。HEPS的X射線光電子能譜圖中最強(qiáng)光電子線主要有C 1s和O 1s峰，這與EDX的測(cè)試結(jié)果一致，HEPS-Se的X射線光電子能譜圖中除了C 1s和O 1s譜峰外，還在結(jié)合能約為55.08 eV處存在Se 3d譜峰，而代表高價(jià)態(tài)硒的Se 2p，2s和1s軌道均沒(méi)有檢測(cè)到光強(qiáng)值（圖5A）。通過(guò)比對(duì)參考文獻(xiàn)[28]及Avantage數(shù)據(jù)庫(kù)中硒的價(jià)態(tài)，零價(jià)硒（納米硒）的電子結(jié)合能位于54.6～57.5 eV范圍內(nèi)，由此可推斷樣品中的硒元素是以零價(jià)硒（納米硒）的形式存在。通過(guò)對(duì)50～62 eV的譜圖進(jìn)行分峰擬合，發(fā)現(xiàn)Se 3d的2個(gè)擬合峰分別在54.90、55.69 eV處（圖5B），進(jìn)一步說(shuō)明HEPS-Se樣品不存在無(wú)機(jī)硒，該結(jié)果與其他多糖納米硒的研究結(jié)果一致[24,29]。

2.8 抗腫瘤細(xì)胞增殖活性

HEPS具有毒副作用小、安全性高等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)能有效促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，并能顯著增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的免疫功能[12]。然而，前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示HEPS在所測(cè)定的質(zhì)量濃度梯度（100～5 000 μg/mL）范圍內(nèi)對(duì)幾種常見(jiàn)的癌細(xì)胞（人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人肝癌細(xì)胞HepG2、人前列腺癌細(xì)胞PC3、人宮頸癌細(xì)胞Hela等）并未出現(xiàn)顯著的抑制作用。為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)硒化前后猴頭菇純化多糖樣品對(duì)癌細(xì)胞的增值抑制作用，本實(shí)驗(yàn)采用cck-8法考察不同質(zhì)量濃度的HEPS及HEPS-Se對(duì)人肺癌細(xì)胞A549、人前列腺癌細(xì)胞DU145、人正常肝細(xì)胞LO2增殖能力的影響[30]。

圖6 HEPS（A）、HEPS-Se（B）對(duì)DU145、A549、LO2細(xì)胞的增值抑制作用Fig. 6 Anti-proliferation effects of HEPS (A) and HEPS-Se (B) on DU145, A549 and LO2 cells

從圖6A可以看出，與空白對(duì)照組相比，HEPS在所測(cè)定的質(zhì)量濃度梯度（125～1 000 μg/mL）范圍內(nèi)對(duì)LO2細(xì)胞基本無(wú)細(xì)胞毒性，對(duì)DU145細(xì)胞和A549細(xì)胞的增殖作用均較弱，當(dāng)HEPS的質(zhì)量濃度達(dá)到最大劑量1 000 μg/mL時(shí)，2種癌細(xì)胞的存活率分別為88.10%與104.45%。然而，當(dāng)HEPS硒化處理生成HEPS-Se后，HEPS-Se對(duì)2種癌細(xì)胞增殖的抑制能力顯著提高，并呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)相關(guān)性（圖6B）。與空白對(duì)照組相比，當(dāng)HEPS-Se質(zhì)量濃度達(dá)到500 μg/mL時(shí)，DU145細(xì)胞和A549細(xì)胞的存活率分別為52.73%、30.46%。當(dāng)其質(zhì)量濃度由125 μg/mL增加至500 μg/mL，DU145細(xì)胞和A549細(xì)胞的細(xì)胞存活率分別下降了19.84%和22.28%。雖然HEPS-Se對(duì)人正常肝細(xì)胞LO2的增值也有一定的抑制作用，但是這種作用要比2種癌細(xì)胞弱（特別是高濃度時(shí)）。該結(jié)果表明HEPS-Se對(duì)癌細(xì)胞具有較顯著的抑制能力。研究表明，硒化多糖能夠促進(jìn)死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白FADD的表達(dá)，增強(qiáng)Caspase-3、-8和-9的活性，通過(guò)死亡受體介導(dǎo)的外源性細(xì)胞凋亡通路和線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路兩條途徑介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡[13]。結(jié)果表明，HEPS-Se對(duì)腫瘤的化學(xué)預(yù)防和治療方面具有一定的應(yīng)用潛力，但其作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。

3 結(jié) 論

以HEPS為研究對(duì)象，在含有VC和亞硒酸鈉的氧化還原體系中，成功制備出HEPS-Se。所制備出的HEPS-Se為形貌規(guī)則、均一的球體，其元素組成比例為C∶O∶Se∶Pt=32.92∶24.74∶30.46∶11.87；其中Se元素的含量高達(dá)481.79 μg/g，傅里葉變換紅外光譜表明猴頭菇多糖的—OH、—C＝O等基團(tuán)與被還原后的納米硒相結(jié)合，從而有效地阻止納米硒間的相互結(jié)合與聚集，最終形成穩(wěn)定的多糖納米硒顆粒。與HEPS相比，HEPS-Se的粒徑顯著降低，電位絕對(duì)值提高了69.12%。同時(shí)，體外抗增殖活性結(jié)果表明，HEPS-Se能顯著抑制人前列腺癌細(xì)胞DU145、人肺癌細(xì)胞A549的增值活性，并呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)。