桂北地區(qū)柑桔全爪螨對6種藥劑的抗藥性測定

韓 旸，倪 歡，陽廷密，唐明麗，王明召，楊炎昌，門友均

(1 廣西特色作物研究院，廣西桂林，541010；2 中農(nóng)紅太陽(南京)生物科技有限公司，江蘇南京，211100)

柑桔全爪螨Panonychuscitri屬真螨目葉螨科全爪螨屬，是柑桔生產(chǎn)上的重要害蟲之一，每年發(fā)生的代數(shù)與該年氣溫有著密切關(guān)系，年均溫在20 ℃左右時(shí)，1年可發(fā)生20代左右。該害螨一年有兩次發(fā)生高峰期，第一次為4—5月，第二次高峰期是9—10月，夏季高溫時(shí)蟲量有所下降，入秋后溫度下降又達(dá)到柑桔全爪螨生長發(fā)育最適宜溫度，危害秋梢[1]。

柑桔全爪螨主要分布在我國各柑桔產(chǎn)區(qū)，包括廣西、廣東、江西、四川、浙江、江蘇、湖南、湖北等多省[2]。其寄主十分廣泛，可達(dá)112種植物，以蕓香科、薔薇科植物為主，還可為害桂花、黃皮、無花果等經(jīng)濟(jì)作物。

柑桔全爪螨主要危害柑桔的葉片和果實(shí)，以成螨、幼螨、若螨群集葉片、嫩梢、果皮上吸汁危害，引致落葉、落果，尤以葉片受害為重，葉片正反兩面均可以被危害，主要集中在中脈兩側(cè)，以及葉邊緣[3]。被害葉面密生灰白色針頭大小點(diǎn)，甚者全葉灰白，失去光澤，終致脫落，嚴(yán)重影響樹勢和產(chǎn)量[4]。柑桔全爪螨有兩種生殖方式，一般以兩性生殖為主，也可進(jìn)行孤雌生殖，平均16天可以完成一個(gè)世代，因生長發(fā)育周期短，故世代重疊嚴(yán)重。其特殊的生殖方式和世代重疊給柑桔全爪螨的防治帶來了很大的困難[5]。

柑桔全爪螨目前主要依靠化學(xué)藥劑來進(jìn)行防治，但由于其體積小、世代周期短、生殖方式獨(dú)特等特性，給化學(xué)藥劑防治帶來了許多困難。首先柑桔全爪螨成螨、若螨和卵肉眼均不易發(fā)現(xiàn)，因此很容易錯過最佳防治時(shí)期，實(shí)際生產(chǎn)中往往柑桔全爪螨種群數(shù)量已經(jīng)發(fā)展到一定的規(guī)模時(shí)才開始防治。另外，化學(xué)藥劑的長期使用使柑桔全爪螨對多種殺螨劑產(chǎn)生了一定的抗性[6]。

除抗性問題外，化學(xué)防治也會導(dǎo)致再猖獗問題。再猖獗是指使用了某些殺蟲劑后，害蟲的發(fā)生量比不使用殺蟲劑前更大，危害更嚴(yán)重的現(xiàn)象。其根本原因是由于化學(xué)藥劑打破了原本的生態(tài)平衡，對原生態(tài)系統(tǒng)中各有害生物之間產(chǎn)生不均勻的藥效[7]。

綜上，化學(xué)防治仍是控制柑桔全爪螨為害的重要措施。但由于田間長期、頻繁、不科學(xué)的使用化學(xué)藥劑，導(dǎo)致柑桔全爪螨對多種殺螨劑產(chǎn)生了不同程度的抗性[8]。監(jiān)測不同地區(qū)柑桔全爪螨對常用殺螨劑的抗性變化動態(tài)，明確其抗藥性現(xiàn)狀，可為柑桔全爪螨的科學(xué)防控提供理論指導(dǎo)[9]。因此，本研究在采用葉碟浸漬法建立柑桔全爪螨對常用殺螨劑的相對敏感性基線的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了柑桔全爪螨田間種群的抗藥性評價(jià)。

1 材料與方法

1.1 供試柑桔全爪螨柑桔全爪螨敏感種群為南京農(nóng)業(yè)大學(xué)殺蟲劑毒理與抗藥性實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)飼養(yǎng)的柑桔全爪螨敏感品系。2021年9月15日在廣西桂林市臨桂區(qū)采集柑桔全爪螨田間種群(記為LG21種群)，11月10日在廣西桂林市靈川縣采集柑桔全爪螨田間種群(記為LC21種群)，采集蟲態(tài)均包括若螨和成螨，采集蟲量均大于3 000頭。

1.2 供試藥劑43%聯(lián)苯肼酯SC(山東鄒平農(nóng)藥有限公司)、1.8%阿維菌素EC(桂林集琦生化有限公司)、15%噠螨靈SC(江蘇揚(yáng)農(nóng)化工集團(tuán)有限公司)、30%乙唑螨腈(沈陽科創(chuàng)化學(xué)品有限公司生產(chǎn))、110 g/L乙螨唑SC(日本住友化學(xué)株式會社生產(chǎn))、240 g/L螺螨酯SC[拜耳作物科學(xué)(中國)有限公司生產(chǎn)]。

根據(jù)國際殺蟲劑抗性行動委員會(IRAC)的分類，所測6種殺蟲(螨)劑的類別和作用靶標(biāo)如表1所示。

表1 供試6種殺蟲(螨)劑的分類情況

1.3 試驗(yàn)方法葉碟浸漬法[10]。制作葉碟：將海綿剪成長方體(8 cm ×2 cm×1 cm)置于9 cm培養(yǎng)皿中，每皿一塊，采集新鮮柑桔葉片用清水洗凈后晾干，用打孔器(直徑約3 cm)打出柑桔葉碟置于海綿上，每塊海綿上放3個(gè)葉碟。然后用打孔器(直徑約3 cm)制作空心的濾紙(3 cm×3 cm兩層，去掉中間打下的圓形濾紙部分，若太厚則用剪刀剪下)，將空心濾紙圈套在葉碟上，在培養(yǎng)皿中加水浸濕海綿，葉碟制作完成。葉碟是為了給試蟲提供營養(yǎng)。海綿加水一方面是保濕葉碟，另一方面是防止柑桔全爪螨逃逸。接螨：用毛筆將柑桔全爪螨挑到葉碟上，每葉碟20頭，重復(fù)3次，待試蟲在葉片上穩(wěn)定后(約需1h)；用鑷子輕輕夾住濾紙與葉片交界處，在配好的藥液中浸5s，再放置在海綿條上，自然晾至無明水后，置于培養(yǎng)箱[溫度(25±1)℃，相對濕度(70±10)%，光周期為L/D=16 h/8 h]中培養(yǎng)，以清水處理做對照。根據(jù)藥劑作用速度的快慢確定檢查柑桔全爪螨雌成螨死亡情況的時(shí)間，1.8%阿維菌素EC、30%乙唑螨腈SC、43%聯(lián)苯肼酯SC和15%噠螨靈SC于處理后24 h檢查，110 g/L乙螨唑SC和240 g/L螺螨酯SC于處理后48 h檢查。用毛筆尖輕輕觸碰螨體，僅有1只足活動或者完全不動者判為死亡，若有極個(gè)別逃離藥劑空間的螨蟲，則不計(jì)入總數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析采用POLO-Plus軟件計(jì)算b值(毒力回歸方程斜率)及其標(biāo)準(zhǔn)誤，LC50值(致死中濃度)及其95%置信限，卡方值(χ2)和自由度(df)?？剐员稊?shù)(RR)的計(jì)算式為：RR=田間種群的LC50值/敏感品系的LC50值?？顾幮运降脑u價(jià)參照Tang等[11]的標(biāo)準(zhǔn)：RR≤3.0為敏感，3.0100.0為高水平抗性。

2 結(jié)果與分析

2.1 敏感種群的相對敏感性基線敏感種群來自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)殺蟲劑毒理與抗藥性實(shí)驗(yàn)室，一直于室內(nèi)飼養(yǎng)，未接觸過藥劑。從不同殺螨劑對柑桔全爪螨敏感種群的LC50值來看，敏感種群對噠螨靈的敏感性較差，對其他新殺螨劑相對敏感(見表2)。

表2 柑桔全爪螨對6種殺螨劑的相對敏感性基線

2.2 田間種群的抗藥性測定結(jié)果看出，兩個(gè)田間種群對乙唑螨腈、聯(lián)苯肼酯、阿維菌素和乙螨唑均已產(chǎn)生高水平抗性，且對噠螨靈和螺螨酯也產(chǎn)生了中等水平抗性，即兩個(gè)田間種群對這6種不同作用機(jī)制的殺螨劑產(chǎn)生了中等至高水平的抗性。在6種殺螨劑中，兩個(gè)田間種群均對聯(lián)苯肼酯的抗性水平最高，抗性倍數(shù)分別達(dá)到572.0(LG21種群)和262.3(LC21種群)(見表3和表4)。

表3 廣西桂林柑桔全爪螨2個(gè)田間種群的雌成螨對4種殺螨劑的抗性

表4 廣西桂林柑桔全爪螨2個(gè)田間種群的若螨對2種殺螨劑的抗性

3 討論

根據(jù)測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2021年桂林2地柑桔全爪螨田間種群對乙唑螨腈均已表現(xiàn)出高水平抗性，但調(diào)查發(fā)現(xiàn)乙唑螨腈的田間防治效果仍表現(xiàn)良好，這可能與其相對敏感性基線數(shù)值很低有關(guān)。因此，應(yīng)密切關(guān)注田間柑桔全爪螨對乙唑螨腈的抗性動態(tài)變化和發(fā)展趨勢，合理評估乙唑螨腈的田間防治效果。筆者推測，柑桔全爪螨對乙唑螨腈的抗性會快速上升。這有兩方面的理由：一方面是該藥劑在防治抗藥性螨方面效果好，作為主防藥劑在田間被高頻率使用；另一方面是乙唑螨腈的靶標(biāo)基因可能產(chǎn)生突變，導(dǎo)致柑桔全爪螨對乙唑螨腈的抗性，或在乙唑螨腈連續(xù)多代的篩選下導(dǎo)致柑桔全爪螨體內(nèi)的解毒代謝酶活性增強(qiáng)。雖然柑桔全爪螨對乙唑螨腈的抗性機(jī)制尚未報(bào)道，但可以預(yù)見未來幾年柑桔全爪螨對乙唑螨腈的抗性倍數(shù)會繼續(xù)上升。乙唑螨腈做為我國自主研發(fā)的新型殺螨劑，對柑桔全爪螨表現(xiàn)出高毒力，是防治柑桔全爪螨的良藥，生產(chǎn)者應(yīng)該更加科學(xué)合理地使用，以減緩柑桔全爪螨對其抗性的發(fā)展速度，延長其使用壽命。

聯(lián)苯肼酯從2008年在我國獲得登記后，憑借性能穩(wěn)定、持效性好、卵螨兼殺等優(yōu)勢迅速被大量使用。徐淑等[12]測定了聯(lián)苯肼酯(原藥)對柑桔全爪螨(采自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院鐘落潭白云基地柑桔園)的室內(nèi)毒力，結(jié)果表明LC50為95.37 mg/L。劉國瑛等[13]報(bào)道指出，位于線粒體基因組中的細(xì)胞色素b基因在G126S、S141F、D161G三個(gè)區(qū)域的替代點(diǎn)突變是柑桔全爪螨對聯(lián)苯肼酯產(chǎn)生高水平抗性的主要原因。本試驗(yàn)監(jiān)測結(jié)果顯示，廣西桂林的兩個(gè)柑桔全爪螨種群已對聯(lián)苯肼酯產(chǎn)生了高水平抗性。推測，本試驗(yàn)監(jiān)測的柑桔全爪螨種群線粒體基因組中的細(xì)胞色素b基因相關(guān)區(qū)域可能已經(jīng)發(fā)生了替代點(diǎn)突變。應(yīng)密切關(guān)注田間柑桔全爪螨對聯(lián)苯肼酯的抗性變化情況，以決定防治柑桔全爪螨田間用藥是否仍可選擇聯(lián)苯肼酯。

乙螨唑?qū)Ω探廴︱奶镩g防治效果較好，室內(nèi)生測的毒力較低，即田間防治與室內(nèi)生測的結(jié)果有一定差異。這可能是乙螨唑的持效期較長，而室內(nèi)生測只統(tǒng)計(jì)藥劑處理后2 d的結(jié)果，未能全面反映其藥效；也有可能是乙螨唑直接致死效果差，但會影響柑桔全爪螨的交配或產(chǎn)卵，從而減少其種群數(shù)量。

阿維菌素做為殺蟲殺螨劑，近些年在生產(chǎn)中被廣泛使用。王洪濤等[14]測定了山東省11個(gè)地區(qū)的蘋果全爪螨種群對阿維菌素的抗性，結(jié)果顯示有5個(gè)種群對阿維菌素已產(chǎn)生了中等水平抗性。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，廣西桂林的兩個(gè)柑桔全爪螨種群均對阿維菌素產(chǎn)生了高水平抗性。可見，任何一種殺螨劑的長期大量不規(guī)范、不合理使用都有產(chǎn)生抗藥性的可能。柑桔全爪螨對阿維菌素的抗性居高不下，且這種局面在短期內(nèi)不會得到明顯的改變。因此，需要加強(qiáng)監(jiān)測柑桔全爪螨對阿維菌素的抗性發(fā)展動態(tài)。

桂林臨桂和靈川兩地的柑桔全爪螨對噠螨靈和螺螨酯均表現(xiàn)出中等水平抗性。國內(nèi)也有關(guān)于柑桔全爪螨對噠螨靈產(chǎn)生抗性的相關(guān)報(bào)道。如：丁天波等[15]采用葉碟浸漬法監(jiān)測了2011年采自重慶市北碚區(qū)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所柑桔苗圃園內(nèi)的柑桔全爪螨種群對噠螨靈的LC50為25.5 mg/L，張 昆等[16]2012年又采用相同方法對該種群進(jìn)行了監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)其對噠螨靈的LC50降至2.87 mg/L。推測柑桔全爪螨對噠螨靈抗性下降的原因是噠螨靈與其他藥劑輪用，減少了使用頻率，使該柑桔全爪螨種群對噠螨靈的敏感性有所恢復(fù)。比較臨桂和靈川兩地柑桔全爪螨種群的抗藥性，發(fā)現(xiàn)靈川的種群對所測6種常用殺螨劑的抗性低于臨桂的種群。

結(jié)合國際殺蟲劑抗性行動委員會(IRAC)所給建議，可采取如下措施延緩抗性的發(fā)展：⑴交替、順序或者輪換使用具有不同作用機(jī)理的殺蟲劑，可減少靶標(biāo)位點(diǎn)抗性的選擇性產(chǎn)生；⑵基于作物的生長時(shí)期和昆蟲生長發(fā)育期在不同施藥窗口期使用不同作用機(jī)理的殺蟲劑，在一個(gè)用藥窗口期可以使用幾次同一化合物，但在害蟲連續(xù)的世代應(yīng)避免使用相同作用機(jī)理的化合物；⑶在殺蟲劑分類中屬于同一組內(nèi)不同的化合物，如果作用于不同的靶標(biāo)位點(diǎn)，這些化合物則可以進(jìn)行輪換使用，同時(shí)在使用各類化學(xué)藥劑時(shí)應(yīng)注意同一亞組之間的交互抗性風(fēng)險(xiǎn)高于組間產(chǎn)生交互抗性的風(fēng)險(xiǎn)，因此，只有在沒有其他替代產(chǎn)品，并且已知在靶標(biāo)種群中不存在交互抗性的情況下才能考慮選擇不同亞組化合物進(jìn)行輪換施用。

雖然室內(nèi)生測條件不可能匹配田間環(huán)境，所得結(jié)果不能完全反映田間害蟲種群的抗藥性，但對害蟲的田間防控仍具有較高的參考價(jià)值，可為田間用藥提供參考[17]。因此，在科學(xué)合理用藥的同時(shí)，應(yīng)通過抗藥性監(jiān)測，掌握田間防治對象對各藥劑的抗性現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢。

目前桂林臨桂和靈川兩地在柑桔全爪螨的化學(xué)防治中，建議暫停使用阿維菌素、聯(lián)苯肼酯和乙唑螨腈，并密切關(guān)注其抗性發(fā)展變化；減少噠螨靈、螺螨酯和乙螨唑的使用頻率，應(yīng)交替輪換使用其他作用機(jī)制不同的殺蟲劑。未來相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)，化學(xué)防治仍是防治柑桔全爪螨的主要措施，在現(xiàn)有藥劑的基礎(chǔ)上，可增加助劑的使用，起到農(nóng)藥減量增效的作用。在合理選用化學(xué)藥劑的同時(shí)，保證精確的施用劑量和精準(zhǔn)的施用時(shí)期、科學(xué)合理復(fù)配殺蟲劑以及結(jié)合生物防治等其他防治措施進(jìn)行綜合防治，可以實(shí)現(xiàn)對柑桔全爪螨進(jìn)行高效防治。