circ_ZNF609/miR-423-5p軸對(duì)高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞HK2凋亡和氧化應(yīng)激的機(jī)制研究

盧迪 黎瑤 梅希 邱平

糖尿病腎病是糖尿病的常見并發(fā)癥，也是引起終末端腎功能衰竭的主要原因[1]。糖尿病患者長(zhǎng)期處于高血糖狀態(tài)，腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)高糖刺激后可產(chǎn)生過度的氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)，進(jìn)一步引起腎小管上皮細(xì)胞凋亡或壞死，這也是糖尿病腎病發(fā)生的重要原因[2]，因此，抑制高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡對(duì)糖尿病腎病的治療尤為重要。circ_ZNF609是一種環(huán)狀RNA(circRNA)，參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展。研究顯示，circ_ZNF609在膠質(zhì)瘤、宮頸癌、前列腺癌和胃癌等腫瘤中表達(dá)上調(diào)，作為促癌基因促進(jìn)腫瘤發(fā)展進(jìn)程[3-6]。circ_ZNF609可通過靶向miR-22-3p/ENO1軸促進(jìn)慢性縮窄性損傷(CCI)大鼠炎性因子表達(dá)，加重神經(jīng)型疼痛進(jìn)展[7]；circ_ZNF609在視網(wǎng)膜神經(jīng)變性過程中表達(dá)上調(diào)，沉默其表達(dá)可減少視網(wǎng)膜反應(yīng)性神經(jīng)膠質(zhì)增生和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化，其有可能成為視網(wǎng)膜神經(jīng)變性治療的分子靶點(diǎn)[8]。但是，circ_ZNF609能否影響腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡還未知。circRNA可靶向結(jié)合微小RNA(miRNA)分子海綿作用調(diào)控miRNA靶基因的表達(dá)，進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)調(diào)控作用[9]。Starbase靶基因在線軟件預(yù)測(cè)顯示，circ_ZNF609可能靶向結(jié)合miR-423-5p。研究顯示，miR-423-5p在糖尿病腎病患者腎組織中表達(dá)下調(diào)，上調(diào)miR-423-5p可靶向抑制Nox4減少高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡，并抑制足細(xì)胞氧化應(yīng)激和炎性損傷，miR-423-5p可作為糖尿病腎病治療的分子靶標(biāo)[10]。本研究以腎小管上皮細(xì)胞HK2為研究對(duì)象，主要觀察了circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的影響及其能否靶向miR-423-5p發(fā)揮作用，以期為糖尿病腎病的治療提供分子靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與試劑 HK2細(xì)胞系，上海通派生物科技有限公司；胎牛血清(FBS)，浙江天杭生物科技有限公司；RNA抽提試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒，大連寶生物；低糖DMEM培養(yǎng)液、Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡試劑盒、二喹啉甲酸蛋白檢測(cè)試劑盒和雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒，北京索萊寶；circ_ZNF609小干擾RNA(si-circ_ZNF609)、亂序無意義陰性序列(si-NC)、miR-423-5p抑制劑(inhibor)、miR-423-5p 模擬物(mimc)、模擬對(duì)照序列(miR-NC)及PCR引物，上海生工；LipofectamineTM 2000試劑盒，美國(guó)Invitrogen公司；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒，南京建成；兔抗人Cleaved-caspase3和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)抗體，中國(guó)Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)：從液氮罐中取出HK2細(xì)胞，在超凈工作臺(tái)內(nèi)復(fù)蘇。加含10% FBS的低糖DMEM培養(yǎng)液，置于37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、濕度97%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞密度生長(zhǎng)至90%時(shí)，0.25%胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng)。

1.2.2 RT-qPCR檢測(cè)circ_ZNF609和miR-423-5p表達(dá)：取6孔板中，接種HK2細(xì)胞(5.0×105個(gè)/孔)。培養(yǎng)12 h后，棄培養(yǎng)液，分組處理。分為對(duì)照(NC)組和高糖(HG)組，其中HG組細(xì)胞用含25 mmol/L[11]葡萄糖培養(yǎng)液培養(yǎng)，NC組細(xì)胞用含等滲透壓25 mmol/L甘露醇的培養(yǎng)液培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，收集細(xì)胞。用RNA抽提試劑盒提取細(xì)胞中總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后，行PCR擴(kuò)增。引物序列：circ_ZNF609上游5’-CAGCGCTCAATCCTTTGGGA-3’，下游5’-GACCTGCCACATTGGTCAGTA-3’；miR-423-5p上游5’-GTACGACAGCTCGCGTAGC-3’，下游5’-CGTCGCGCTAGGCGA-3’；GAPDH上游5’-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3’，下游5’-AGTCCTTCCA CGATACCA AAGT-3’；U6上游5’-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3’，下游5’-CCAGTGCAGGGTCCG AGGT-3’。2-△△Ct法計(jì)算circ_ZNF609 相對(duì)GAPDH、miR-423-5p相對(duì)U6的表達(dá)量。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染：取6孔板中，接種HK2細(xì)胞(5.0×105個(gè)/孔)。培養(yǎng)12 h后，棄培養(yǎng)液，換為不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液。用LipofectamineTM 2000脂質(zhì)體法，分別轉(zhuǎn)染si-NC、si-circ_ZNF609、miR-NC、miR-423-5p mimics、共轉(zhuǎn)染si-circ_ZNF609與miR-423-5p inhibor。轉(zhuǎn)染12 h后，更換為常規(guī)培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24 h，RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞中circ_ZNF609或miR-423-5p表達(dá)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果，并收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性：取96孔板中，接種HK2細(xì)胞或轉(zhuǎn)染后的HK2細(xì)胞(2.5×104個(gè)/孔)，培養(yǎng)12 h后，棄培養(yǎng)液，分組處理。HK2細(xì)胞分為NC組和HG組，處理同上述1.2.2。轉(zhuǎn)染si-NC、si-circ_ZNF609、miR-NC、miR-423-5p mimics、共轉(zhuǎn)染si-circ_ZNF609與miR-423-5p inhibor的HK2細(xì)胞均用含25 mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)液培養(yǎng)，并分別記為HG+si-NC、HG+si-circ_ZNF609、HG+miR-NC、HG+miR-423-5p mimic、HG+si-circ_ZNF609+miR-423-5p inhibor。培養(yǎng)24 h后，每孔加10 μl CCK-8試劑。孵育2 h后，酶標(biāo)儀(450 nm)檢測(cè)各孔光密度(OD)值。以NC組細(xì)胞存活率為100%。細(xì)胞存活率(%)=OD實(shí)驗(yàn)組/ODNC組×100%。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：取6孔板中，接種HK2細(xì)胞或轉(zhuǎn)染后的HK2細(xì)胞(1.0×105個(gè)/孔)，培養(yǎng)12 h后，棄培養(yǎng)液，分組處理，同上述1.2.4。培養(yǎng)24 h后，收集各組細(xì)胞。用磷酸鹽緩沖液清洗2次，加500 μl結(jié)合緩沖液，重懸細(xì)胞。利用10 μl Annexin V-FITC/PI試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡。凋亡率(%)=(早期凋亡數(shù)+晚期凋亡數(shù))/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.2.6 蛋白印跡法檢測(cè)Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)：細(xì)胞接種和分組處理同上述1.2.5，培養(yǎng)24 h后，用RIPA試劑提取各組細(xì)胞中總蛋白。用二喹啉甲酸法檢測(cè)蛋白含量，行10% SDS-PAGE電泳，并將分離蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜，于5%脫脂奶粉中封閉2 h。然后于4℃冰箱中分別用Cleaved-caspase3(1∶500)、GAPDH(1∶1 000)一抗孵育液孵育12 h，洗膜后，再于7℃搖床中用山羊抗兔二抗(1∶2 000)孵育1 h。加化學(xué)發(fā)光試劑，避光顯影，曝光拍照，Image J 軟件分析Cleaved-caspase3相對(duì)GAPDH的表達(dá)量。

1.2.7 試劑盒檢測(cè)細(xì)胞中SOD活性和MDA含量：細(xì)胞接種和分組處理同上述1.2.5，培養(yǎng)24 h后，棄培養(yǎng)液。加細(xì)胞裂解液充分裂解細(xì)胞，收集裂解液離心(3 500 r/min、5 min)，取上清液，分別按照SOD和MDA試劑盒說明書，檢測(cè)上清中SOD活性和MDA含量。

1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增含miR-423-5p結(jié)合位點(diǎn)的circ_ZNF609核苷酸序列，插入pGL3載體，構(gòu)建circ_ZNF609野生型熒光素酶載體(WT-circ_ZNF609)。利用基因突變技術(shù)將結(jié)合位點(diǎn)突變，插入pGL3載體，構(gòu)建circ_ZNF609突變型熒光素酶載體(MUT-circ_ZNF609)，該過程由上海生工生物工程股份有限公司完成。取6孔板中，接種HK2細(xì)胞(5.0×105個(gè)/孔)。培養(yǎng)12 h后，棄培養(yǎng)液，換為不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液。用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體法，分別共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-circ_ZNF609與miR-NC或miR-423-5p mimic、MUT-circ_ZNF609與miR-NC或miR-423-5p mimic。轉(zhuǎn)染12 h后，更換為常規(guī)培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24 h，棄培養(yǎng)液，充分裂解細(xì)胞。將細(xì)胞裂解液離心(3 500 r/min、5 min)，取上清液，檢測(cè)細(xì)胞熒光素酶活性，結(jié)果以螢火蟲與海腎的熒光強(qiáng)度的比值表示。

2 結(jié)果

2.1 高糖對(duì)HK2細(xì)胞中circ_ZNF609和miR-423-5p表達(dá)的影響 與NG組比較，HG組HK2細(xì)胞中circ_ZNF609表達(dá)量增加(P<0.05)，miR-423-5p表達(dá)量減少(P<0.05)。見表1。

表1 高糖對(duì)HK2細(xì)胞中circ_ZNF609和miR-423-5p表達(dá)的影響

2.2 下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞活性和凋亡的影響 轉(zhuǎn)染si-circ_ZNF609的HK2細(xì)胞中circ_ZNF609表達(dá)量明顯低于轉(zhuǎn)染si-NC的細(xì)胞(0.19±0.07比 1.00±0.00，t=20.042，P<0.05)，說明下調(diào)circ_ZNF609的HK2細(xì)胞構(gòu)建成功。與NG組比較，HG組HK2細(xì)胞增殖活性降低(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-caspase3的表達(dá)升高(P<0.05)。與HG組或HG+si-NC組比較，HG+si-circ_ZNF609組HK2細(xì)胞增殖活性升高(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-caspase3的表達(dá)降低(P<0.05)。HG組與HG+si-NC組各檢測(cè)指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1，表2。

圖1 下調(diào)circ_ZNF609對(duì)HK2細(xì)胞凋亡的影響；A 下調(diào)circ_ZNF609抑制高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞中Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)；B 下調(diào)circ_ZNF609抑制高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡

表2 下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡的影響

2.3 下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響 與NG組比較，HG組HK2細(xì)胞中SOD活性降低(P<0.05)，MDA含量升高(P<0.05)。與HG組或HG+si-NC組比較，HG+si-circ_ZNF609組HK2細(xì)胞中SOD活性升高(P<0.05)，MDA含量降低(P<0.05)。HG組與HG+si-NC組各檢測(cè)指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2細(xì)胞氧化應(yīng)激的檢測(cè)

2.4 circ_ZNF609靶向結(jié)合miR-423-5p Starbase靶基因在線軟件預(yù)測(cè)顯示circ_ZNF609與miR-423-5p的結(jié)合位點(diǎn)。與共轉(zhuǎn)染 WT-circ_ZNF609與miR-NC的HK2細(xì)胞比較，共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-circ_ZNF609與miR-423-5p的HK2細(xì)胞熒光素酶活性顯著降低(P<0.05)；與共轉(zhuǎn)染MUT-circ_ZNF609與miR-NC的HK2細(xì)胞比較，共轉(zhuǎn)染MUT-circ_ZNF609與miR-423-5p的HK2細(xì)胞熒光素酶活性無明顯變化(P>0.05)。同時(shí)，轉(zhuǎn)染si-circ_ZNF609的HK2細(xì)胞中miR-423-5p表達(dá)量明顯高于轉(zhuǎn)染si-NC的細(xì)胞(2.81±0.27比1.00±0.00，t=11.611，P<0.05)，說明下調(diào)circ_ZNF609促進(jìn)HK2細(xì)胞中miR-423-5p的表達(dá)。見表4，圖2。

表4 雙熒光素酶報(bào)告活性檢測(cè)

圖2 circ_ZNF609和miR-423-5p的互補(bǔ)序列

2.5 上調(diào)miR-423-5p對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的影響 轉(zhuǎn)染miR-423-5p mimic的HK2細(xì)胞中miR-423-5p表達(dá)量明顯高于轉(zhuǎn)染miR-NC的細(xì)胞(2.59±0.24比1.00±0.00，t=11.475，P<0.05)，說明上調(diào)miR-423-5p的HK2細(xì)胞構(gòu)建成功。與HG+miR-NC組比較，HG+miR-423-5p mimic組HK2細(xì)胞增殖活性升高(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞中Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，細(xì)胞中SOD活性升高(P<0.05)，MDA含量降低(P<0.05)。見表5，圖3。

表5 上調(diào)miR-423-5p對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的影響

圖3 上調(diào)miR-423-5p對(duì)HK2細(xì)胞凋亡及Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)的影響；A 上調(diào)miR-423-5p抑制高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡；B 上調(diào)miR-423-5p抑制高糖誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞中Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)

2.6 下調(diào)miR-423-5p逆轉(zhuǎn)下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的影響 共轉(zhuǎn)染si-circ_ZNF609與miR-423-5p inhibor的HK2細(xì)胞中miR-423-5p 表達(dá)量明顯低于轉(zhuǎn)染si-circ_ZNF609的細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.16±0.09比2.79±0.25，t=10.625，P<0.05)，說明HK2細(xì)胞miR-423-5p下調(diào)構(gòu)建成功。與HG組比較，HG+si-circ-ZNF609組細(xì)胞和SOD活性升高(P<0.05)。凋亡率、Cleaved-caspase3、MDA降低(P<0.05)，與HG+si-circ_ZNF609組比較，HG+si-circ_ZNF609+miR-423-5p inhibor組HK2細(xì)胞增殖活性降低(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞中Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)升高(P<0.05)，細(xì)胞中SOD活性降低(P<0.05)，MDA含量升高(P<0.05)。見表6,圖4。

表6 下調(diào)miR-423-5p逆轉(zhuǎn)下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的影響

圖4 下調(diào)miR-423-5p逆轉(zhuǎn)下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2細(xì)胞凋亡和Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)的影響；A 下調(diào)miR-423-5p可減弱下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2凋亡的抑制作用；B 下調(diào)miR-423-5p可減弱下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)HK2細(xì)胞中Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)的抑制作用

3 討論

腎小管上皮細(xì)胞損傷是糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的主要原因，探究影響腎小管上皮細(xì)胞損傷的分子機(jī)制可為其治療提供分子靶點(diǎn)。高糖是引起腎小管上皮細(xì)胞損傷的主要誘因，其可引起腎小管上皮細(xì)胞過度氧化應(yīng)激，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。本研究結(jié)果顯示，腎小管上皮細(xì)胞HK2經(jīng)高糖處理后，細(xì)胞凋亡加劇，細(xì)胞中氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA含量增加，而SOD活性降低，與Wang等[13]報(bào)道結(jié)果一致，說明高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞HK2產(chǎn)生了氧化應(yīng)激和凋亡。

circRNA是一類結(jié)構(gòu)呈閉合環(huán)狀的非編碼RNA，性質(zhì)穩(wěn)定，在真核生物中廣泛存在。作為一種circRNA，目前circ_ZNF609對(duì)腎小管上皮細(xì)胞損傷的影響還未知。本研究結(jié)果顯示，高糖可促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞HK2中circ_ZNF609的表達(dá)，提示circ_ZNF609可能促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷；通過下調(diào)腎小管上皮細(xì)胞HK2中circ_ZNF609的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)circ_ZNF609可降低高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡率及凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-caspase3的表達(dá)，說明下調(diào)circ_ZNF609可減少高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡，減輕了細(xì)胞損傷，其可能成為糖尿病腎病治療的分子靶點(diǎn)。腎小管上皮細(xì)胞損傷與炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激等密切相關(guān)。高糖刺激下，腎小管上皮細(xì)胞分泌并釋放大量炎性因子，這些炎性因子進(jìn)一步刺激腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生過度氧化應(yīng)激反應(yīng)，引起細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化，生成大量MDA[14]。SOD是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化應(yīng)酶，其可清除氧自由基減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)[15]。本研究結(jié)果顯示，下調(diào)circ_ZNF609可明顯降低高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞中MDA含量，并提高SOD活性，說明下調(diào)circ_ZNF609可能通過降低細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平減輕高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷。

circRNA可發(fā)揮miRNA分子海綿作用，調(diào)控miRNA靶基因的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激等生理或病理過程[16]。為了進(jìn)一步探究下調(diào)circ_ZNF609抑制高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的分子機(jī)制，本研究證實(shí)了circ_ZNF609可靶向結(jié)合并負(fù)調(diào)控miR-423-5p，這與本文HK2細(xì)胞經(jīng)高糖處理后circ_ZNF609表達(dá)上調(diào)而miR-423-5p表達(dá)下調(diào)的結(jié)果一致。miR-423-5p屬于miRNA家族成員，參與調(diào)控細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激及炎性反應(yīng)，在多種疾病中發(fā)揮調(diào)控作用。研究顯示，芹菜素可能通過上調(diào)miR-423-5p并抑制USF2的表達(dá)減輕鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠腎組織炎癥和腎纖維化[17]；上調(diào)miR-423-5p可減輕LPS誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)大鼠肺損傷、炎癥和纖維化[18]；過表達(dá)miR-423-5p可通過下調(diào)KCTD20減輕MPP誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞SK-N-SH損傷[19]。本研究結(jié)果顯示，上調(diào)miR-423-5p可減少高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡，并抑制細(xì)胞氧化應(yīng)激水平，提示miR-423-5p也可作為減輕高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷的分子靶點(diǎn)。此外，本研究結(jié)果表明，下調(diào)miR-423-5p逆轉(zhuǎn)了下調(diào)circ_ZNF609對(duì)高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的抑制作用，進(jìn)一步提示下調(diào)circ_ZNF609通過靶向上調(diào)miR-423-5p來阻礙高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激。

綜上，高糖促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞中circ_ZNF609的表達(dá)，而抑制miR-423-5p表達(dá)；下調(diào)circ_ZNF609可有效阻礙高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激，其作用機(jī)制可能與其靶向結(jié)合并上調(diào)miR-423-5p表達(dá)有關(guān)，circ_ZNF609/miR-423-5p軸可能為糖尿病腎病的治療提供了潛在分子靶點(diǎn)，但尚需進(jìn)一步在體內(nèi)進(jìn)行驗(yàn)證，且miR-423-5p下游靶基因和信號(hào)通路對(duì)高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷的影響也還有待進(jìn)一步探究。