基于新處方工藝的尿素乳膏長期穩(wěn)定性考察*

朱欣然 ，閆 希 ，沈佩亞 ，胡恩實(shí) ，程 鋼 △

（1. 中國藥科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 211198； 2. 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科·國家中醫(yī)藥管理局中藥化學(xué)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230022； 3. 中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198）

尿素乳膏是皮膚科常用非處方藥，主要成分為尿素，可使角質(zhì)蛋白溶解變性，增進(jìn)角質(zhì)層的水合作用，從而使皮膚柔軟，防止干裂，同時(shí)具有抗菌和止癢作用［1］。目前，主藥含量為15%的制劑市場無銷售，仍依靠醫(yī)院自制制劑滿足市場需求。安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院自制尿素乳膏的最早處方來源于《安徽省醫(yī)院制劑規(guī)范：1999 年版》［2］140，處方為油包水（W/O）型乳膏，但有效期短，隨存放時(shí)間的延長外觀性狀易改變，涂布延展性差等。20世紀(jì)80年代改基質(zhì)為水包油（O/W）型，采用混合共融法配制，即取制備乳膏基質(zhì)的所有成分置同一容器中，加熱熔化至80～90 ℃，然后加入尿素，攪拌成型，油相、水相無需分開配制，步驟簡單，但成品在貯存期的穩(wěn)定性差，易失水變粗，析出結(jié)晶和干粉，有效期僅為6個(gè)月。參考文獻(xiàn)并結(jié)合多次試驗(yàn)結(jié)果，最終確定參照《安徽省醫(yī)院制劑規(guī)范：1999 版》中復(fù)方二氧化鈦乳膏處方［2］151，以 O/ W 型為乳膏基質(zhì)，采用混合乳化劑，并增加單硬脂酸甘油酯為穩(wěn)定劑，擬提高制劑的穩(wěn)定性。本研究中考察了新舊處方制劑的外觀性狀和物理穩(wěn)定性，以及新處方留樣制劑12 個(gè)月的穩(wěn)定性，為處方、配制工藝和產(chǎn)品有效期的確立提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司），包括 G1310A 型四元泵、G1314BVWD 型紫外檢測器、手動(dòng)進(jìn)樣器、Agilent1200 色譜工作站、DT-230A 型柱溫箱；BT25S 型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器< 北京>有限公司，精度為十萬分之一）；FA2004 型電子天平（上海精科天平公司，精度為萬分之一）；BiosaferSB-3200 DT-6L 型超聲清洗儀（南京賽飛生物科技有限公司，功率為180 W，頻率為40 kHz）；SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）；XL-3型霉菌培養(yǎng)箱（上海虹浦儀器廠）；DM6B 型正置雙目生物顯微鏡（德國Leica公司）。

1.2 試藥

尿素乳膏（醫(yī)院制劑，新處方制劑批號(hào)分別為20201104，20201109，20201112；舊處方制劑批號(hào)為20201125）；尿素對照品（北京盛世康普化工技術(shù)研究院，批號(hào)為#S14A8134007，純度100%）；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)為20181221 - 00），沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)為20180129 - 00），胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（批號(hào)為20181218-00），甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)20180122 - 00），十六烷三甲基溴化銨培養(yǎng)基（批號(hào)為20180415 - 00），均購自杭州微生物試劑有限公司；乙腈（美國Tedia 公司，批號(hào)為20125104）；滅菌注射用水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為M21011101A，規(guī)格為每支500 mL）。

2 方法與結(jié)果

2.1 尿素乳膏制備

取白凡士林30 g、單甘酯50 g、液體石蠟65 g、硬脂酸150 g 作為油相，取純化水400 g、甘油100 g、十二烷基硫酸鈉2 g、三乙醇胺2 g、羥苯乙酯1 g 作為水相，分別加熱至85 ℃，在攪拌過程中將油相緩緩加入水相中，形成初乳，繼續(xù)攪拌，使溫度降至70～75 ℃，同時(shí)取約100 g 純化水，加熱至 70 ℃，加入尿素 150 g 使溶解，繼續(xù)加熱至70 ℃，將尿素溶液緩緩加入初乳中，邊加邊攪拌，持續(xù)攪拌至冷凝，即得。按以上處方和配制工藝制備3 批（批號(hào)分別為20201104，20201109，20201112）尿素乳膏，每批200盒，每盒裝量50 g。

2.2 尿素含量測定

2.2.1 色譜條件［3］

色譜柱：Zorbax NH2柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈 - 水（90∶10，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：190 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

取尿素對照品30.7 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.614 mg/mL 的對照品貯備液；取 5 mL，置 10 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋并定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.307 mg/ mL 的對照品溶液。取樣品（批號(hào)20201104）0.5 g，精密稱定，置50 mL 燒杯中，加流動(dòng)相20 mL，水浴加熱使溶解，放至室溫，冰浴30 min，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至50 mL 棕色容量瓶中，放至室溫，用流動(dòng)相稀釋并定容，搖勻；精密吸取2 mL，置10 mL 容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋并定容，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例制備不含尿素的空白基質(zhì)乳膏，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：精密吸取2.2.2 項(xiàng)下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜圖中尿素的保留時(shí)間約為7.04 min，色譜峰峰形良好，陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2.2項(xiàng)下對照品貯備液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置5 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋并定容，搖勻，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。以質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y = 6.328 6X+84.936（r=0.999 7，n=7）。結(jié)果表明，對照品溶液質(zhì)量濃度在61.4～614.0 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

檢測限與定量限確定：精密吸取2.2.2項(xiàng)下對照品貯備液適量，加流動(dòng)相逐級(jí)稀釋，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以3 倍信噪比（S/N）的質(zhì)量濃度為檢測限，10 倍S/N的質(zhì)量濃度為定量限。結(jié)果檢測限為8.94 μg/mL，定量限為29.80 μg/mL。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2.2 項(xiàng)下對照品溶液（質(zhì)量濃度為0.307 mg/mL）10 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定3 d，每天重復(fù)測定6 次，記錄峰面積。結(jié)果日內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果的RSD為0.61%（n= 6），日間精密度試驗(yàn)結(jié)果的RSD為1.42%（n=18），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取2.2.2 項(xiàng)下同一批（批號(hào)20201104）供試品溶液10 μL，配制完成后分別于室溫放置 0，2，4，6，8，10，12 h 時(shí)進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積的RSD為0.51%（n=7），表明供試品溶液室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20201104）適量，按2.2.2 項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6 份，分別進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法計(jì)算尿素的標(biāo)示百分含量。結(jié)果平均含量為100.33%，RSD為0.75%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)20201104）0.5 g，精密稱定，置燒杯中，加20 mL 流動(dòng)相，水浴加熱至溶解，冰浴30 min，抽濾，定容至50 mL 棕色容量瓶中，搖勻。精密吸取1 mL，置10 mL 容量瓶中，共9份，分別精密加入對照品貯備液2.0，2.5，3.0 mL，各3 份，分別稀釋并定容，搖勻，進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.2.4 樣品含量測定

取3批（批號(hào)分別為20201104，20201109，20201112）樣品各適量，精密稱定，按2.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法計(jì)算尿素的標(biāo)示百分含量。結(jié)果3批樣品的尿素含量分別為99.66%，97.71%，97.53%。

2.3 長期穩(wěn)定性考察

長期穩(wěn)定性考察在接近藥品實(shí)際貯存條件下進(jìn)行，為藥品的最佳貯存條件、制訂藥品有效期提供依據(jù)。根據(jù)2020 年版《中國藥典（四部）》通則9001 規(guī)定，設(shè)計(jì)常溫（25±2）℃鋁塑膜封口加蓋、常溫未封口直接加蓋、冷藏（5±3）℃鋁塑膜封口加蓋、冷藏未封口直接加蓋4 組，每組取 3 批采用市售包裝，于制備后 0，3，6，9，12 個(gè)月末取樣，重點(diǎn)考察其性狀、粒度、裝量、含量、微生物限度［4］457的變化。

性狀：新處方樣品質(zhì)地均勻、細(xì)膩，稠度適宜，易于涂布，在皮膚上具有良好的涂布延展性和滯留性，無變色、酸敗、變硬、油水分離等變質(zhì)現(xiàn)象。12 個(gè)月觀察期內(nèi)，各組均未出現(xiàn)酸敗、異臭、變色、分層等現(xiàn)象，但常溫未封口組出現(xiàn)了較明顯的發(fā)粗干燥現(xiàn)象，涂布延展性下降，部分留樣旋蓋附近有少量結(jié)晶粉末析出。

粒度：取樣品少許，置載玻片上，加少許注射用水拌勻［5］，涂抹薄層面積等同于蓋玻片面積，共3片，覆上蓋玻片，輕壓使顆粒分布均勻，按2020 年版《中國藥典（四部）》通則0982粒度與粒度分布測定法第一法（顯微鏡法）檢視［4］145，應(yīng)無凝聚現(xiàn)象，并不得檢出50 μm 及以上的粒子。結(jié)果各組樣品12 個(gè)月觀察期內(nèi)均未出現(xiàn)粒徑超過50 μm及以上的粒子。

裝量：灌裝前，分別稱量空包裝盒質(zhì)量、灌裝后稱量總質(zhì)量，二者之差即為樣品的初始裝量（0 個(gè)月），按規(guī)定條件貯存，分別于制備后0，3，6，9，12 個(gè)月末稱量總質(zhì)量，并與初始總質(zhì)量比較，求得裝量變化。結(jié)果見表2。可見，12個(gè)月觀察期內(nèi)，各組尿素乳膏的裝量在各考察時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的減少，按減少量由高到低排序?yàn)槌匚捶饪?冷藏未封口>常溫封口>冷藏封口，常溫未封口組批間和批內(nèi)差異均較大，其他各組批間和批內(nèi)差異小。其中，常溫未封口組樣品（批號(hào)為20201112）12 個(gè)月末裝量減少接近5%，達(dá)到不合格臨界值［4］138，而冷藏封口組各批號(hào)樣品在整個(gè)觀察期內(nèi)裝量基本不變。表明是否經(jīng)鋁塑膜封口是影響尿素乳膏裝量變化的關(guān)鍵因素，尿素乳膏裝量減少的主要原因?yàn)樗謸]發(fā)，鋁塑膜具有良好的水汽阻隔性，能有效減少因藥品水分揮發(fā)和/或空氣中水分侵入導(dǎo)致的裝量變化?？紤]到在實(shí)際使用中鋁塑膜均為撕開狀態(tài)，密封性能下降，為有效延長藥品的有效期，推薦貯存方式為拆封前常溫貯存，無需冷藏，拆封后冷藏貯存。

表2 不同貯存條件下尿素乳膏12個(gè)月裝量變化（，g，n=6）Tab.2 Changes of deliverable volume of urea cream prepara?tions under the different conditions for 12 months（，g，n=6）

表2 不同貯存條件下尿素乳膏12個(gè)月裝量變化（，g，n=6）Tab.2 Changes of deliverable volume of urea cream prepara?tions under the different conditions for 12 months（，g，n=6）

裝量變化貯存條件 批號(hào) 初始裝量常溫封口常溫未封口冷藏封口冷藏未封口20201104 20201109 20201112 20201104 20201109 20201112 20201104 20201109 20201112 20201104 20201109 20201112 55.16±3.17 54.79±1.18 50.70±2.15 54.01±2.10 55.44±4.18 55.10±1.06 55.89±3.84 55.60±3.97 51.47±3.01 56.00±2.28 54.16±4.58 54.58±1.01 3個(gè)月末-0.03±0.01-0.03±0.01-0.02±0.01-0.43±0.23-0.64±0.32-0.95±0.78 0.00±0.02 0.00±0.01-0.01±0.01-0.08±0.03-0.10±0.09-0.13±0.05 6個(gè)月末-0.04±0.01-0.04±0.01-0.03±0.01-0.69±0.36-1.07±0.53-1.48±1.13 0.02±0.03 0.01±0.01-0.01±0.02-0.16±0.03-0.22±0.17-0.18±0.07 9個(gè)月末-0.01±0.01-0.01±0.01 0.00±0.01-0.92±0.42-1.46±0.65-2.11±1.68-0.01±0.02-0.01±0.02-0.02±0.03-0.38±0.17-0.39±0.26-0.29±0.11 12個(gè)月末-0.06±0.01-0.07±0.01-0.05±0.01-1.20±0.43-1.69±0.62-2.55±1.74-0.02±0.01-0.01±0.02-0.01±0.02-0.41±0.10-0.46±0.28-0.33±0.12

含量：依據(jù)尿素乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本制劑含尿素（H2NCONH2）應(yīng)為標(biāo)示量（g/g）的90.0%～110.0%［6］。分別于0，3，6，9，12 個(gè)月末按 2.2.1 項(xiàng)下色譜條件測定以上4 組尿素乳膏制劑中尿素的含量。結(jié)果見表3。可見，12 個(gè)月觀察期內(nèi)，各批樣品有效成分含量均呈增加趨勢，按增加程度由高到低排序?yàn)槌匚捶饪? 冷藏未封口>常溫封口>冷藏封口，批間差異較小。增加程度與裝量變化相對應(yīng)，即裝量減少越多，含量增加越多，同樣由水分揮發(fā)所致。盡管4 組各批次尿素乳膏有效成分含量均在90.0%～110.0%之間，符合藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但水分揮發(fā)可導(dǎo)致膏體變性，影響涂布延展性等。故推薦的存方式仍為拆封前常溫貯存，無需冷藏，拆封后冷藏貯存。

表3 不同貯存條件下尿素乳膏12個(gè)月含量測定結(jié)果（，%，n=3）Tab.3 Results of the content determination of urea in urea cream preparations under different conditions for 12 months（，%，n=3）

表3 不同貯存條件下尿素乳膏12個(gè)月含量測定結(jié)果（，%，n=3）Tab.3 Results of the content determination of urea in urea cream preparations under different conditions for 12 months（，%，n=3）

含量貯存條件 批號(hào)常溫封口常溫未封口冷藏封口冷藏未封口20201104 20201109 20201112 20201104 20201109 20201112 20201104 20201109 20201112 20201104 20201109 20201112 0個(gè)月末99.66±0.70 97.71±0.54 97.53±0.75 99.65±0.70 97.73±0.54 97.52±0.75 99.61±0.70 97.71±0.54 97.50±0.75 99.62±0.70 97.76±0.54 97.52±0.75 3個(gè)月末99.40±0.62 99.00±0.91 99.78±0.30 99.22±0.16 99.16±0.14 99.92±0.62 96.96±1.04 97.65±0.08 97.35±1.83 98.60±1.62 97.40±0.18 97.98±0.16 6個(gè)月末99.39±0.07 99.24±0.57 100.24±0.29 100.32±0.06 100.29±0.24 100.98±0.43 97.82±0.86 97.94±0.56 97.42±0.22 98.71±0.16 97.73±0.17 98.11±0.14 9個(gè)月末99.12±0.55 99.64±0.84 98.85±0.57 101.20±1.48 101.27±2.27 101.44±0.69 98.80±0.47 98.06±0.43 97.33±0.59 98.43±0.46 97.51±0.68 97.79±0.39 12個(gè)月末99.83±0.53 98.17±0.47 98.79±1.40 102.60±0.44 101.93±0.37 100.99±0.86 99.31±0.92 99.20±0.37 99.70±0.92 100.41±1.13 99.96±0.49 100.29±0.12

微生物限度：取樣品10 g，加無菌5%聚山梨酯80溶液（45 ℃保溫）至100 mL，混勻，制成1∶10 供試液。取1∶10 供試液按平皿法進(jìn)行需氧菌、霉菌和酵母菌總數(shù)的計(jì)數(shù)，采用常規(guī)法分別進(jìn)行金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的檢查，按2020 年版《中國藥典》四部通則1105與通則 1106［4］161檢查應(yīng)符合規(guī)定。分別于 0，3，6，12 個(gè)月末取樣進(jìn)行微生物限度檢查，結(jié)果3 批（批號(hào)分別為20201104，20201109，20201112）樣品的需氧菌、霉菌和酵母菌菌落計(jì)數(shù)均低于10 cfu/g，均未檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌?？梢?，3 批常溫未封口組乳膏劑在12個(gè)月內(nèi)微生物限度合格，因該貯存方式相對其他3種方式更易染菌，進(jìn)而可推斷4 種貯存方式在12 個(gè)月考察期內(nèi)均可滿足制劑微生物限度要求。

2.4 新處方工藝與原處方制劑穩(wěn)定性比較

2.4.1 處方與配制工藝

原處方與新處方成分組成見表4。

表4 尿素乳膏處方（g）Tab.4 Prescriptions of the urea cream preparations（g）

原處方采用混合共融法配制，步驟簡單，但加入尿素后會(huì)使膏體變粗，必須放置20 h 以上再攪拌，才能使膏體細(xì)膩。究其原因，一是使用單一乳化劑（三乙醇胺與硬脂酸反應(yīng)生成的一價(jià)皂硬脂酸三乙醇胺）乳化效果差，加入尿素時(shí)必須快速攪拌，而攪拌過快又會(huì)將尿素溶解時(shí)產(chǎn)生的氣泡帶入膏體，使乳膏失去細(xì)膩光澤感［7］；二是尿素占比較大，其溶解時(shí)大量吸熱會(huì)使體系溫度快速降低，導(dǎo)致乳膏凝固、膏體變粗。

新處方采用油相加入水相法，使用混合乳化劑（十二烷基硫酸鈉和三乙醇胺與硬脂酸反應(yīng)生成一價(jià)皂，提高了乳膏劑的穩(wěn)定性［8］；處方中增加了單硬脂酸甘油酯作為穩(wěn)定劑和增稠劑，兼有一定乳化作用。初乳形成后加入溫度（70 ℃）與之相近的尿素溶液，不需加大攪拌速度，膏體一次成型，避免了因溫度驟降而使膏體變粗。此外，按新處方制備的乳膏劑降溫后即可灌裝，縮短了配制時(shí)間，同時(shí)也減少了放置過程中微生物污染的可能性。故新處方成品優(yōu)于原處方。

2.4.2 穩(wěn)定性比較

性狀：觀察原處方（批號(hào)為20201125）與新處方樣品（批號(hào)為20201104）0，3，6，12個(gè)月末的性狀。結(jié)果0個(gè)月末時(shí)，二者性狀差異不明顯；3 個(gè)月末時(shí)，原處方乳膏可見增粗；6 個(gè)月末時(shí)，原處方乳膏已有尿素結(jié)晶和基質(zhì)細(xì)粉析出，顏色由亮白變?yōu)榘蛋祝饣?、?xì)膩度均下降，但新處方乳膏仍保持細(xì)膩、光滑、易涂布的性狀。

粒度：取常溫未封口組的原處方樣品（批號(hào)為20201125）與新處方樣品（批號(hào)為20201104），按2020年版《中國藥典（四部）》通則0982粒度與粒度分布測定法第一法（顯微鏡法）檢視［4］145，于顯微鏡下觀察，每個(gè)樣品量取并記錄乳粒粒徑各100 個(gè)，求得各樣品乳粒粒度［7，9］。結(jié)果顯示，原處方乳膏的乳粒粒徑大小不穩(wěn)定，隨著時(shí)間的延長，乳粒粒徑呈增大趨勢（3～6 μm）；而新處方乳膏的乳粒粒徑小于原處方，且大小均一穩(wěn)定（1.8～1.9 μm），粒徑在12 個(gè)月觀察期內(nèi)變化不大?？梢?，新處方乳膏更加細(xì)膩，儲(chǔ)存穩(wěn)定性明顯提高。

含量與裝量：取常溫未封口組的原處方樣品（批號(hào)為20201125），分別于0，6，12 個(gè)月末測定含量和裝量，結(jié)果含量分別為101.22%，104.64%，109.20%，裝量分別為50.44，46.91，43.22 g，雖未超出上限（110%），但12個(gè)月末的裝量已不合格，故原處方樣品穩(wěn)定性差，有效期僅為6 個(gè)月。新處方樣品在12 個(gè)月考察期內(nèi)均合格，穩(wěn)定性好。

3 討論

3.1 含量測定方法選擇

尿素乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)源自2020年版《中國藥典（四部）》［4］138，含量測定采用的是顯色后紫外 -可見分光光度法，即對二甲氨基苯甲醛與尿素反應(yīng)生成黃色的對二甲氨基苯縮脲衍生物后，于420 nm 波長處測定衍生物吸光度，計(jì)算出尿素含量。屬間接測定，易受溫度、避光時(shí)間、操作人員熟練程度的影響，且顯色劑二甲氨基苯甲醛溶液于420 nm 波長處有較大吸收，導(dǎo)致樣品測定誤差增大［10］。檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該方法重復(fù)性差，準(zhǔn)確度低，不能準(zhǔn)確反映乳膏劑的真實(shí)含量。故本試驗(yàn)中參考文獻(xiàn)［3，11］，采用高效液相色譜法測定尿素乳膏的含量。

尿素含有2 個(gè)氨基，是小分子極性化合物，采用普通C18柱的保留較弱，尿素出峰快，混雜在溶劑峰中，難以分離。有研究報(bào)道，尿素含量測定采用的色譜柱有氨基柱［3，11］、親水色譜柱Xbridge Amide［12］、陽離子交換色譜柱Zorbax 300SCX［13］等，其中氨基柱最常見、使用較多，其氨基鍵合相為極性固定相，可有效地延長尿素的保留時(shí)間。故本試驗(yàn)中采用氨基柱。

預(yù)試驗(yàn)中，比較了多種流動(dòng)相，包括乙腈-水（90∶10，V/V），乙腈 -0.1%磷酸溶液（90∶10，V/V），乙腈 - 甲醇 - 水（89∶10∶1，V/V/V），發(fā)現(xiàn)乙腈 - 水（90∶10，V/V）已可滿足較好的峰形、分離度和理論板數(shù)，不必采用更復(fù)雜的流動(dòng)相，故以此為流動(dòng)相。曾比較190 nm和200 nm測定波長，發(fā)現(xiàn)190 nm 波長處較200 nm 波長處的響應(yīng)值高，故選擇190 nm 為檢測波長。曾比較甲醇、乙醇、水和乙腈-水（90∶10，V/V）分別加熱溶解提取，發(fā)現(xiàn)甲醇溶解會(huì)產(chǎn)生較大溶劑峰，造成基線不平；乙醇溶解會(huì)導(dǎo)致尿素峰拖尾；水溶解會(huì)造成油性基質(zhì)無法除去，過濾時(shí)吸附尿素使測定值減??；采用流動(dòng)相溶解最好，乳膏基質(zhì)干擾小，沒有溶劑峰，基線平穩(wěn)。故選擇乙腈- 水（90∶10，V/V）為提取溶劑。

3.2 新處方乳膏穩(wěn)定性考察結(jié)果分析

文獻(xiàn)［14］研究表明，導(dǎo)致乳膏性質(zhì)改變的主要因素是水分的散失。12 個(gè)月觀察期內(nèi)，從性狀上看，常溫未封口組出現(xiàn)較明顯的發(fā)粗、干燥現(xiàn)象，部分留樣旋蓋附近有少量結(jié)晶粉末析出；裝量減失按由高到低排序?yàn)槌匚捶饪? 冷藏未封口> 常溫封口> 冷藏封口，含量增加按由高到低排序?yàn)槌匚捶饪? 冷藏未封口> 常溫封口> 冷藏封口，增加程度與裝量變化相對應(yīng)，即裝量減少越多，含量增加越多。

依據(jù)2020年版《中國藥典》最低裝量檢查法“20～50 g固體、半固體每個(gè)容器的裝量不得少于標(biāo)示裝量的95%，即不得減少標(biāo)示量的5%”。常溫未封口組樣品（批號(hào)為20201112）第12 個(gè)月裝量減少接近5%，為不合格品，而冷藏封口組各批號(hào)樣品在整個(gè)觀察期內(nèi)裝量基本不變?？梢姡欠窠?jīng)鋁塑膜封口是影響尿素乳膏穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素，而封口狀態(tài)下是否冷藏對尿素乳膏穩(wěn)定性的影響不大。為延長其有效期，應(yīng)盡量減少水分散失，推薦貯存方式為拆封前常溫貯存，無需冷藏，拆封后冷藏貯存。

新處方為混合乳化劑，采用分別加熱配制的方法，配制方法為將內(nèi)相加入外相的逆相轉(zhuǎn)型法［15］，不需轉(zhuǎn)相，轉(zhuǎn)型后細(xì)膩度佳，無顆粒感。本研究中性狀對比、粒度檢查、耐熱試驗(yàn)、耐寒試驗(yàn)、離心試驗(yàn)等物理穩(wěn)定性研究結(jié)果表明，新處方乳膏穩(wěn)定性好，乳粒的粒徑明顯小于原處方，膏體潔白細(xì)膩，有光澤，無粗糙感，具有適宜的黏稠度和涂布延展性，久置不分層，無結(jié)晶析出。綜合考察試驗(yàn)結(jié)果和臨床治療需求，最終選擇新處方工藝投入生產(chǎn)。醫(yī)院制劑的特點(diǎn)是批量小、批次多、周轉(zhuǎn)快、有效期一般在1 年內(nèi)，故本試驗(yàn)中暫考察了12 個(gè)月的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，新處方制劑的有效期可延長至12 個(gè)月，為使結(jié)論更可靠，還需進(jìn)一步考察18～24 個(gè)月的穩(wěn)定性。目前，本試驗(yàn)中采用的尿素乳膏市售包裝為聚乙烯塑料盒，未來可更換為鋁塑復(fù)合管、鋁制軟管等再進(jìn)行試驗(yàn)，以尋找最佳包裝方式和貯藏條件。