北五味子藥材多農(nóng)藥殘留量檢測分析

盛艷華，王瑞，王一凱，黃鑫※，張麗鵬，白靜，劉芳馨，馬偉，陳長寶※

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省人參科學(xué)研究院，吉林 長春 130117；2.吉林省吉測檢測技術(shù)有限公司，吉林 長春 130117；3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

中藥是中華文明的瑰寶，是我國傳統(tǒng)文化的精華。中藥的應(yīng)用是中華民族歷經(jīng)千年累積和沉淀的智慧結(jié)晶。中藥材以其源自天然、具有較高的有效性和安全性等優(yōu)勢而逐漸走向世界的舞臺，被人們接受與認(rèn)可，并且成為我國具有自主知識產(chǎn)權(quán)優(yōu)勢的現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)之一。近年來，由于市場對于中藥材需求的不斷增加和野生中藥材的稀缺，使得人工種植中藥材成為主流，為了避免中藥材種植過程中發(fā)生病蟲害，保證中藥產(chǎn)量，導(dǎo)致農(nóng)藥的使用量增加。雖然農(nóng)藥對中藥材生長過程中具有保護(hù)作用，但是農(nóng)藥殘留量超標(biāo)會對生態(tài)環(huán)境和人類健康帶來危害。例如農(nóng)藥殘留會誘發(fā)長期慢性病癥；引起肝臟病變；能導(dǎo)致癌癥、畸形和基因突變等[1-3]。農(nóng)藥殘留超標(biāo)是影響中藥材品質(zhì)的主要因素，同時(shí)也是制約中藥走向國際市場的關(guān)鍵問題之一。

作為一種滋補(bǔ)性中藥，北五味子來源于五味子屬多年生落葉木質(zhì)藤本植物五味子的干燥成熟果實(shí)[4]，擁有酸、苦、甘、辛、咸五味，故名五味子，也稱山花椒、玄及等。其具有收斂固澀、益氣生津和補(bǔ)腎寧心等功效，用于久嗽虛喘、夢遺滑精、遺尿尿頻、久瀉不止、自汗盜汗、津傷口渴、內(nèi)熱消渴和心悸失眠[5-7]。近年來由于北五味子的保健和藥用價(jià)值被不斷開發(fā)，所以提高其品質(zhì)、減少污染成為最關(guān)鍵的問題。關(guān)于中藥材農(nóng)藥殘留方面，Junheon Kim 等[8]對五味子藥材中農(nóng)藥殘留成分進(jìn)行監(jiān)測，同時(shí)對其進(jìn)行了風(fēng)險(xiǎn)評估。MuhammadM.Issa等[9]采用LC-MS/MS 法和GC-MS/MS 法分析蜂蠟中373 種農(nóng)藥殘留，且LC-MS/MS 和GC-MS/MS 的定量下限為20g/kg 的農(nóng)藥分別有265 種和139 種。徐宜宏等[10]以有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類及其他類共117 種農(nóng)藥為研究對象，采用GC-MS/MS 的方法同時(shí)檢測了五味子中117 種農(nóng)藥殘留，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，檢出限低。李娜等[11]采用了UPLC-MS/MS 法測定了包括五味子在內(nèi)共6種中藥材中的110 種農(nóng)藥殘留，結(jié)果顯示該方法操作簡單、凈化效果好及靈敏度高，準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥多殘留分析的要求。

針對北五味子藥材中多農(nóng)藥殘留尚無可參考的限量標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)以東北三省不同產(chǎn)區(qū)的五味子為研究對象，運(yùn)用GC-MS/MS 法對北五味子藥材中的農(nóng)藥殘留成分進(jìn)行了定性和定量分析，比較東北地區(qū)北五味子藥材中農(nóng)藥污染的實(shí)際情況，以期為北五味子的質(zhì)量控制和安全性提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS-TQ8040NX 氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司）。

1.2 材料

采集東北三省不同產(chǎn)區(qū)共310 批次北五味子藥材進(jìn)行檢測。具體產(chǎn)區(qū)信息見表1，每個(gè)樣品編號對應(yīng)產(chǎn)區(qū)各采集10批藥材。置于60 ℃恒溫烘箱中進(jìn)行干燥。

表1 北五味子藥材產(chǎn)區(qū)信息Table 1 Information on producing areas of Schisandrae chinensis fructus

1.3 不同產(chǎn)區(qū)北五味子藥材農(nóng)藥殘留檢測

1.3.1 供試品溶液的制備 取供試品粉末（過3 號篩，50 目）5g，精密稱定，加氯化鈉1g，立即攪拌均勻，再加入乙腈50mL，勻漿處理2min（轉(zhuǎn)速不低于12 000 r/min），離心（4 000 r/min），分取上清液，沉淀再加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心，合并兩次提取的上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10 mL，搖勻，即得。量取直接提取法制備的供試品溶液3～5 mL，置于裝有分散型凈化材料的凈化管（無水硫酸鎂1 200 mg，N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷鍵合硅膠100mg）中，渦旋使充分混勻，再置振蕩器上劇烈振蕩（500 次/min）5 min 使凈化完全，離心，取上清液，即得。

1.3.2 GC-MS/MS檢測條件 色譜條件：SHIMADZU SH-Rxi-5Sil MS 色譜柱（30 m 0.25 mm，0.25m）。升溫程序：初始溫度50 ℃，保持1 min，以25 ℃/min 升至125 ℃，以10 ℃/min 升至300 ℃，保持15 min。流速：1.92 mL/min；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣量：1L；進(jìn)樣方式：無分流進(jìn)樣，1.5 min 后開閥；載氣：氦氣。

質(zhì)譜條件：電離方式：EI；電離能量：70 eV；質(zhì)譜儀接口溫度：250 ℃；四極桿溫度：150 ℃；離子源溫度：230 ℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 GC-MS/MS 定性檢測北五味子藥材中農(nóng)藥殘留成分

本實(shí)驗(yàn)首先對北五味子藥材中所包含的農(nóng)藥殘留的種類進(jìn)行了定性分析，通過與GC-MS/MS 聯(lián)用農(nóng)藥殘留的譜庫進(jìn)行對比，從980 種農(nóng)藥成分中進(jìn)行篩選，最終在所檢測的310 批北五味子樣品中測出了4種農(nóng)藥殘留成分，分別是異丙威、毒死蜱、腐霉利和聯(lián)苯菊酯，定性篩選結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)區(qū)北五味子藥材農(nóng)藥殘留成分定性篩選結(jié)果Table 2 Qualitative screening results of pesticide residues in Schisandrae chinensis fructus from different producing areas

2.2 方法學(xué)考察

運(yùn)用GC-MS/MS 法從310 批北五味子藥材中檢測出4 種農(nóng)藥殘留成分，分別為異丙威、毒死蜱、腐霉利和聯(lián)苯菊酯，以這4 種成分濃度為橫坐標(biāo)，信號強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性關(guān)系良好。檢出限、回收率和精密度結(jié)果見表3。

表3 GC-MS/MS 法檢測北五味子藥材中4 種農(nóng)殘成分方法學(xué)考察結(jié)果Table 3 Results of the GC-MS/MS method for determination of four pesticide residues in Schisandrae chinensis fructus

2.3 不同產(chǎn)區(qū)北五味子中農(nóng)藥殘留的定量檢測結(jié)果

將每一產(chǎn)區(qū)的10 批藥材作為平行檢測樣品，以上述檢測出的農(nóng)藥殘留成分為指標(biāo)進(jìn)行定量分析，求其平均值，結(jié)果見表4。

表4 不同產(chǎn)區(qū)北五味子藥材中農(nóng)藥殘留的定量檢測結(jié)果（n=10）Table 4 Quantitative detection results of pesticide residues in Schisandrae chinensis fructus from different producing areas (n=10)

本實(shí)驗(yàn)共從310 批北五味子樣品中檢測出4 種農(nóng)藥殘留成分，分別為異丙威、毒死蜱、腐霉利和聯(lián)苯菊酯。如表4所示，在檢測出具有農(nóng)藥殘留的樣品中，異丙威的含量范圍為0.49～0.62 mg/kg；毒死蜱的含量范圍為0.02～0.22 mg/kg；腐霉利的含量范圍為0.005～1.86mg/kg；聯(lián)苯菊酯的含量范圍為0.0002～0.07mg/kg。異丙威屬中等毒性殺蟲劑，毒死蜱是一種非內(nèi)吸性廣譜殺蟲、殺螨劑，腐霉利屬于低毒性殺菌劑，聯(lián)苯菊酯則是擬除蟲菊類農(nóng)用殺蟲劑。在310 批檢測樣品中，20 批樣品中含有異丙威成分，80 批樣品中含有毒死蜱成分，220 批樣品中含有腐霉利成分，20 批樣品中含有聯(lián)苯菊酯成分。異丙威的檢出率為6.5%，其中以黑龍江省齊齊哈爾市茂林村第2 批采集樣品中異丙威含量最高；毒死蜱的檢出率為25.8%，以遼寧省鳳城市第1 批采集樣品中毒死蜱含量最高；腐霉利的檢出率為71.0%，以吉林省白山市第1 批采集樣品中含量最高；聯(lián)苯菊酯的檢出率為6.5%，以吉林省舒蘭市第1 批采集樣品的含量最高；在遼寧省撫順市新賓縣第2 批、遼寧省本溪市恒仁縣、黑龍江省齊齊哈爾市茂林村第1 批和黑龍江省牡丹江市五七村采集樣品中并未發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥殘留的存在，說明這些產(chǎn)區(qū)的五味子藥材生長環(huán)境良好，土壤并未受到農(nóng)殘污染或者在生長過程中并未使用農(nóng)藥，所以無農(nóng)藥殘留現(xiàn)象。食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中農(nóng)藥最大殘留限量（GB2763-2021）[12]規(guī)定異丙威在部分谷物和蔬菜中的最大殘留限量為0.2mg/kg和0.5 mg/kg；腐霉利在部分谷物、蔬菜和水果中的限量要求分別為5 mg/kg、0.2～30 mg/kg 和5～10 mg/kg；聯(lián)苯菊酯在部分谷物、蔬菜和水果中的限量要求則分別為0.05～1 mg/kg、0.05～4 mg/kg 和0.05～3 mg/kg。歐盟標(biāo)準(zhǔn)（EU）1085/2020 號條例里規(guī)定毒死蜱在水果中的限量要求范圍是0.01～1 mg/kg[13]。參照以上食品標(biāo)準(zhǔn)，北五味子樣品中檢測出的4 種農(nóng)藥殘留量均分布在安全范圍內(nèi)?！吨袊幍洹罚?020 版）四部0212 藥材和飲片檢定通則中對藥材33 種禁用農(nóng)藥進(jìn)行了規(guī)定，但是針對北五味子藥材還缺乏其他非禁用農(nóng)藥殘留成分的限量標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論

對藥材中的有毒有害殘留物質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)測是提高中藥材的整體品質(zhì)至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。農(nóng)藥種類的選擇、土壤環(huán)境中的農(nóng)藥污染程度及水質(zhì)等都是關(guān)鍵性影響因素。本研究采用GC-MS/MS 法，通過與譜庫中980 種農(nóng)藥成分篩選，對東北三省不同產(chǎn)區(qū)的310批北五味子藥材中的農(nóng)藥殘留成分進(jìn)行定性與定量分析，最終檢出異丙威、毒死蜱、腐霉利和聯(lián)苯菊酯4 種農(nóng)藥殘留成分，并將其含量與現(xiàn)行食品標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行比對，可以看出低毒性的腐霉利是使用最為普遍的農(nóng)藥，其次是毒死蜱，且殘留量符合現(xiàn)行食品安全標(biāo)準(zhǔn)要求。