一例朗德鵝禽巴氏桿菌感染的診治體會(huì)

許兆君，曹 輝，周樹雯，俞慶紅，王鉅華，葉正琴

（1.江蘇省泰州市姜堰區(qū)白米鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇泰州 225300；2.揚(yáng)州優(yōu)邦生物藥品有限公司，江蘇揚(yáng)州 225000）

隨著我國畜牧業(yè)進(jìn)入集約化規(guī)?；B(yǎng)殖發(fā)展階段，禽巴氏桿菌病也叫禽出血性敗血癥，病禽常常發(fā)生劇烈的腹瀉癥狀，所以又稱禽霍亂，一旦爆發(fā)該病，易導(dǎo)致鵝群大批死亡、生產(chǎn)性能低下，給養(yǎng)鵝業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，是危害現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的疾病之一。它通常表現(xiàn)為鵝的急性、敗血性、高度接觸性傳染病，有時(shí)也呈慢性病型，該病的傳播途徑廣泛，發(fā)病率和死亡率都很高[1]。禽霍亂主要侵害對象為成年禽類，以性成熟后的禽類最為易感，暴發(fā)季節(jié)主要在夏季、秋季和冬季，這種季節(jié)性的流行主要是由于環(huán)境因素影響造成的[2]。該病在發(fā)病禽舍舍飼時(shí)很難完全清除，可以在同一場地連續(xù)發(fā)生[3]。本文旨在通過鵝巴氏桿菌的一次診療，為該病的臨床診斷和防治提供指導(dǎo)。

1 發(fā)病經(jīng)過

2022 年2 月，江蘇某養(yǎng)鵝場引進(jìn)一批70 日齡朗德鵝，已連續(xù)填飼10 d，1 周內(nèi)死亡200 多只，剛開始幾只突然死亡，隨后陸陸續(xù)續(xù)每天有30 來只死亡。鵝群使用過新霉素、金剛烷胺、恩諾沙星等藥物，均無好轉(zhuǎn)。查閱免疫檔案獲悉鵝群免疫過黃病毒活疫苗、小鵝瘟滅活疫苗、禽流感H5、H7三價(jià)滅活疫苗、新流腺滅活疫苗。

2 臨床癥狀

經(jīng)觀察，發(fā)病鵝的主要癥狀為精神沉郁、發(fā)呆瞌睡、不愿走動(dòng)；羽毛松亂、兩翅下垂、縮頭彎頸；食欲減少，不愿吃食；口鼻有粘液流出，呼吸困難、常張口呼吸、常常搖頭將喉部粘液排出來；病禽發(fā)生劇烈腹瀉，排出綠色或白色稀糞，有惡臭。病禽通常病程持續(xù)1～3 d 后死亡。

3 病理學(xué)變化解剖

本次解剖3 只癥狀明顯的朗德鵝（見圖1），逐步觀察病理學(xué)變化，腹膜及皮下組織有小點(diǎn)出血，腸黏膜充血、出血，布滿小出血點(diǎn)，內(nèi)容物中有血，十二指腸的病變最嚴(yán)重。其他內(nèi)臟主要表現(xiàn)出肝臟腫大、質(zhì)脆，有嚴(yán)重的出斑點(diǎn)，上面散布著許多灰白色、針頭大的壞死點(diǎn)；心包膜渾濁增厚，有不同程度的出血，心包囊內(nèi)積有多量淡黃色液體；腹膜被覆黃色纖維素性炎癥產(chǎn)物；脾臟充血腫大；胰腺散在壞死灶等變化，其他未可見肉眼病理變化。

4 實(shí)驗(yàn)室檢查與診斷

4.1 細(xì)菌分離純化

用接種棒無菌操作取病變典型的鵝肝、心血、腦劃線接種于TSA、10%胎牛血清瓊脂平板、麥康凱平板上于37℃、5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)18～24 h，挑取單個(gè)菌落，再進(jìn)行純培養(yǎng)。結(jié)果于次日TSA 板上長出一種呈細(xì)小、半透明、圓整、淡灰色、光滑、直徑1 mm 左右的菌落，麥康凱上均無細(xì)菌生長。并對分離的細(xì)菌挑取單菌落接種于TSA 板純培養(yǎng)，菌落形狀與分離前一致。

4.2 涂片染色鏡檢

被檢病料作觸片或涂片，待自然干燥后用火焰固定，然后進(jìn)行革蘭氏染色和亞甲藍(lán)染色，鏡檢。結(jié)果在光學(xué)顯微鏡下能看到革蘭氏染色陰性、大小一致、兩端鈍圓的球桿狀或短桿菌，以單個(gè)和成雙排列為主。涂片用亞甲藍(lán)染色時(shí)可見典型的兩極著色。

4.3 細(xì)菌生化實(shí)驗(yàn)

無菌操作將純化好的疑似巴氏桿菌挑出接種于液體TSB 培養(yǎng)基（含10%血清）混勻后，把菌株分別接種到不同的生化培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果，同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行比較。結(jié)果如表1，由生化特性鑒定結(jié)果可以看出分離菌株符合巴氏桿菌特征，可確診為禽巴氏桿菌感染。

表1 疑似巴氏桿菌菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果

4.4 藥敏試驗(yàn)

無菌操作將疑似巴氏桿菌挑出接種于液體TSB培養(yǎng)基（含10%血清）混勻后，過夜培養(yǎng)，純化后進(jìn)行細(xì)菌混懸液的常用抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)，記錄抑菌圈直徑，抑菌圈越大，藥物效果會(huì)越好。觀察結(jié)果，結(jié)果表明，該株巴氏桿菌僅對多西環(huán)素、米諾環(huán)素、大觀霉素、阿莫西林、硫酸安普霉素、哌拉西林6 種抗生素敏感，其中對米諾環(huán)素最敏感，阿莫西林和哌拉西林次之。

5 防治措施

5.1 疑似發(fā)病鵝處理

本著采取“預(yù)防為主，綜合防治”措施原則，對疑似發(fā)病鵝采取嚴(yán)格隔離，參照藥物敏感性試驗(yàn)，該株巴氏桿菌僅對多西環(huán)素、米諾環(huán)素、大觀霉素、阿莫西林、硫酸安普霉素、哌拉西林6 種抗生素敏感，其中對米諾環(huán)素最敏感，阿莫西林和哌拉西林次之。綜合鵝場的用藥習(xí)慣選取了阿莫西林作為治療藥品。隨即用阿莫西林對發(fā)病鵝進(jìn)行飲水及拌料治療，每升飲水中添加100mg 的阿莫西林藥粉，每日2 次作集中飲水；每公斤全價(jià)飼料中添加0.3 g的阿莫西林藥粉。對病重鵝必要時(shí)采用腿部肌肉注射阿莫西林注射液和禽巴氏桿菌高免血清。經(jīng)過3 d治療，剩余朗德鵝基本會(huì)主動(dòng)吃食，恢復(fù)精神狀態(tài)，約7 d 后痊愈，至出欄未再發(fā)作，該場病情得到了有效控制。

5.2 未發(fā)病鵝的處理

對鵝群的活動(dòng)場所、鵝舍、食槽、飲水槽進(jìn)行徹底清洗消毒。每天及時(shí)將鵝舍殘余飼料及糞便清理走并進(jìn)行無害化處理，并采用三氯異氰尿酸（500 mg/L）或者聚維酮碘（1:500 稀釋度）等消毒藥輪換進(jìn)行噴灑禽舍消毒。未發(fā)病鵝盡量轉(zhuǎn)移至干燥整潔消毒過的飼養(yǎng)環(huán)境中，保持適當(dāng)?shù)耐L(fēng)換氣，避免過度擁擠，減少應(yīng)激。用阿莫西林對全群未發(fā)病朗德鵝進(jìn)行飲水及拌料治療及預(yù)防，每升飲水中添加50 mg 的阿莫西林藥粉，前2 日4 次作集中飲水，后五日作自由飲水處理；每千克全價(jià)飼料中添加0.2 g 的阿莫西林藥粉。經(jīng)過治療7 d 預(yù)防治療后，未發(fā)病鵝也未出現(xiàn)相關(guān)癥狀。因?yàn)樵撆铒曺Z的飼養(yǎng)周期限制，故未進(jìn)行疫苗免疫。

5.3 無害化處理

病死鵝也是該病的主要傳染源之一，因此要根據(jù)國家環(huán)保要求以及動(dòng)物防疫要求進(jìn)行徹底的處理，對病死朗德鵝全部作無害化處理，防止病原擴(kuò)散。在涉及病死鵝的地方均需用高濃度的消毒藥進(jìn)行噴灑消毒，防止運(yùn)輸過程中造成污染，做好生物安全防護(hù)。

5.4 加強(qiáng)對朗德鵝的飼養(yǎng)與管理

首先要加強(qiáng)朗德鵝的體質(zhì)健康，朗德鵝在填飼的短時(shí)間內(nèi)填入大量的高能量飼料，經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化快速沉積于體內(nèi)，體重迅速增加，血糖濃度也迅速增高，此時(shí)應(yīng)激很大。因此杜絕感染源后，加強(qiáng)對養(yǎng)殖的管理與飼養(yǎng)顯得格外的重要，在剩余填飼期，養(yǎng)殖戶仍需要做好日常生活的管理和飼養(yǎng)。驅(qū)蟲、添加復(fù)合維生素、礦物質(zhì)以及微量元素，增加青綠飼料預(yù)飼，增大鵝的消化道容量，從而鍛煉鵝的消化能力。

喂食優(yōu)質(zhì)、新鮮、高效的全價(jià)飼料，以便于為朗德鵝提供全面均衡的營養(yǎng)，提升朗德鵝的抵抗力，從而滿足填飼期的生長需要。每日喂養(yǎng)要定點(diǎn)定量，還要給予干凈、充足的飲水。填飼量應(yīng)逐漸增加，避免突然增加飼量，導(dǎo)致朗德鵝不適應(yīng)。填飼時(shí)若更換飼料，必須堅(jiān)持逐漸改變，不能突然之間完全性的改變，這樣容易使朗德鵝的腸胃遭受損傷。同時(shí)也需要保持朗德鵝鵝舍的通風(fēng)以及適宜的飼養(yǎng)密度，尤其是在寒冷的冬天，要注重防寒保暖的措施；在炎熱的夏季，也要注重防暑降溫。本病通常的多發(fā)季節(jié)是冬春交替季節(jié)，在這個(gè)時(shí)候尤其做好早期的投藥預(yù)防以及提前給予巴氏桿菌疫苗接種。

5.5 常見細(xì)菌病的監(jiān)測及終末消毒

可采取血清學(xué)或細(xì)菌學(xué)方法檢驗(yàn)巴氏桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌等細(xì)菌性病原微生物，樣品可以利用隨機(jī)抽樣的方法，采集血液樣品、糞便樣品以及墻壁樣、水槽樣、料槽樣、廢料等環(huán)境樣品，采樣比例可以采取鵝場的疾病發(fā)作時(shí)間及時(shí)更新。待朗德鵝全群出欄后，采取終末消毒，對養(yǎng)殖場進(jìn)行一次全面徹底的大消毒[4]。空舍至少1 周，杜絕細(xì)菌傳染病的繼代循環(huán)感染。

6 討論

通過病原分離、涂片鏡檢、生化鑒定，初步確定所分離的細(xì)菌為禽巴氏桿菌，試驗(yàn)結(jié)果為該鵝場朗德鵝進(jìn)行疾病治療奠定了病原學(xué)基礎(chǔ)。治療禽巴氏桿菌病的藥物很多，效果較好的有喹諾酮類、磺胺類、抗生素類，但是在使用抗菌藥物時(shí)，必須注意一個(gè)禽場如果長時(shí)間使用一種藥物，有些菌株對這些藥物可能產(chǎn)生耐藥性，造成療效降低或者完全無效。通常會(huì)根據(jù)分離病菌、做藥物敏感試驗(yàn)（又稱抑菌試驗(yàn)）結(jié)果從敏感藥物中選擇經(jīng)濟(jì)藥物來輪換治療。本次的藥敏試驗(yàn)結(jié)果對28 種抗生素其中6種敏感，說明該病的治療可以通過抗生素治療，但是細(xì)菌耐藥性較為嚴(yán)重，敏感率僅為21.4%。本次選用了阿莫西林對全群朗德鵝進(jìn)行飲水拌料治療及預(yù)防，獲得了較好的治療效果。

鑒于細(xì)菌耐藥性較嚴(yán)重，也可以選用中藥來治療，馬驛等[5]發(fā)現(xiàn)五倍子和訶子對巴氏桿菌有較強(qiáng)抑菌活性，五倍子、訶子、五味子、烏梅、山茱萸、石榴皮、梔子和虎杖分別作為主藥與其他中藥組成復(fù)方抗菌作用增強(qiáng)。楊雪貞等[6]發(fā)現(xiàn)白頭翁湯對禽巴氏桿菌體外最小抑菌濃度為3.91 mg/ml，表明禽巴氏桿菌對白頭翁湯中藥方劑高度敏感。魏小娟[7]通過一系列體外觀察驗(yàn)證了板黃口服液對禽巴氏桿菌、雞葡萄球菌、雞白痢沙門桿菌、肺炎克雷伯菌、牛巴氏桿菌、牛大腸桿菌有很好的抑制作用。這些中藥制劑為預(yù)防禽巴氏桿菌病提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

隨著巴氏桿菌抗生素耐藥和反復(fù)發(fā)作等問題，疫苗成為防控該病的主要手段。目前應(yīng)用于我國家禽產(chǎn)業(yè)疫苗包括傳統(tǒng)的滅活苗和弱毒苗，王學(xué)理采用分離的禽多殺性巴氏桿菌作為菌種加入佐劑制成油乳劑滅活疫苗，免疫20 日齡雛鵝（0.5 ml/只）。一次免疫后保護(hù)率達(dá)73.3%，二次免疫后保護(hù)率達(dá)96.7%[8]。凌明亮從病死鵝體內(nèi)分離出多殺性巴氏桿菌，制成油乳劑滅活疫苗，免疫后180 d 都保持100%的保護(hù)率；臨床應(yīng)用于緊急接種，配合蒽諾沙星飲水，仔鵝成活率達(dá)88%，成年鵝成活率達(dá)96.1%[9]。這些傳統(tǒng)疫苗具有一定的優(yōu)勢以及缺陷，如油乳滅活苗使用普遍，但交叉保護(hù)差；自然弱毒株效果好，但遺傳背景不明，毒力時(shí)而返強(qiáng)等，因此研制安全、高效、制備方便的新型疫苗是迫切需求[10]。

禽巴氏桿菌平時(shí)會(huì)存于鵝體的呼吸道和消化道內(nèi)，正常情況下能與機(jī)體保持平衡，不致發(fā)病。當(dāng)環(huán)境改變、機(jī)體抵抗力降低時(shí)，可爆發(fā)該病。作為細(xì)菌性傳染病，帶菌的家禽是傳播本病的主要來源，平時(shí)仍然需要加強(qiáng)禽場的飼養(yǎng)管理工作，嚴(yán)格執(zhí)行消毒衛(wèi)生制度，盡量做到自繁自養(yǎng)。引進(jìn)種禽或者苗禽時(shí)，必須要注意檢查無病才能引進(jìn)，才能早發(fā)現(xiàn)就可以早避免，減少損失。新引進(jìn)的家禽必須實(shí)行至少2 周的隔離飼養(yǎng)，防止帶菌入群，造成更大的損失，隔離期間做好全面的消毒，使引進(jìn)的種禽、幼禽等在消毒的環(huán)境中管理與飼養(yǎng)，同時(shí)還逐漸改變飲食和生活習(xí)性，以便于盡快適應(yīng)當(dāng)?shù)氐牧?xí)性，在確保了種禽、幼禽等是健康的狀態(tài)下才能將其與本養(yǎng)殖場的健康家禽合養(yǎng)。